專利名稱：用于治療或者預(yù)防炎癥性疾病的α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的化合物、其制備方法、包括其的組合物及其在治療或者預(yù)防能夠通過抑制細(xì)胞粘附進(jìn)行調(diào)節(jié)的疾病中的應(yīng)用。更特別地，本發(fā)明涉及新的抑制α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的雜環(huán)化合物并且據(jù)信它們可用于治療或預(yù)防炎癥性疾病。
背景技術(shù)：
在白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的多種粘附互相作用或細(xì)胞外基質(zhì)蛋白在調(diào)節(jié)免疫和炎癥中是關(guān)鍵的因子。白細(xì)胞在炎癥部位從脈管系統(tǒng)移動(dòng)出來的最早期事件包括白細(xì)胞滾動(dòng)(rolling)，隨后是整聯(lián)蛋白親合力改變，這導(dǎo)致隨后的牢固粘附(綜述參見Butcher，Cell 671033-1036(1991)；Harlan，Blood 3513-525(1985)；Hemler，Annu.Rev.Immunol.8365-400(1990)；Osborn，Cell 623-6(1990)；Shimizu等人，Immunol.Rev.114109-143(1990)；Springer，Nature 346425-434(1990)；和Springer，Cell 76301-314(1994))。響應(yīng)趨化因子，白細(xì)胞移動(dòng)通過兩個(gè)相鄰的內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)入組織內(nèi)，所述組織部分地由細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖連蛋白(FN)(參見Wayner等人，J.Cell Biol.1051873-1884(1987))和膠原蛋白(CN)(參見Bornstein等人，Ann.Rev.Biochem.49957-1003(1980)；和Miller，Chemistry of the collages and theirdistribution，于″Extracellular Matrix Biochemistry″，K.A.Piez和A.H.Reddi，編輯，Elsevier，Amsterdam，41-78(1983))組成。參與這些粘附反應(yīng)的重要識(shí)別分子屬于整聯(lián)蛋白基因超家族(綜述參見Hemler，Annu.Rev.Immunol.8365-400(1990)；Hynes，Cell 48549-554(1987)；Shimizu等人，Immunol.Rev.114109-143(1990)；和Springer，Nature346425-434(1990))。
整聯(lián)蛋白是由非共價(jià)結(jié)合的亞單位(稱作α和β亞單位)組成的雜二聚體。目前為止，已經(jīng)識(shí)別了8種整聯(lián)蛋白β亞單位，其可與18種不同的α亞單位結(jié)合形成24種不同的整聯(lián)蛋白(參見Hynes，Cell110673-687(2002))。
α4β1整聯(lián)蛋白，又稱VLA-4(極遲抗原-4)，在白細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)的表面上組成型表達(dá)(參見Hemler等人，J.Bio.Chem.26211478-11485(1987)；和Bochner等人，J.Exp.Med.1731553-1556(1991))。據(jù)報(bào)道，VLA-4存在于膿毒病患者的嗜中性粒細(xì)胞上(參見lbbotson等人，Nature Med.7465-470(2001))。VLA-4與活化的內(nèi)皮細(xì)胞上的血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)結(jié)合，引起白細(xì)胞外滲(Elices等人，Cell 60577-584(1990))。當(dāng)細(xì)胞已到達(dá)血管外空間時(shí)，VLA-4可與連接片段1(CS-1)結(jié)合，所述連接片段1是FN A鏈的可變剪接區(qū)域(Wayne等人，J.Cell Biol 1091321-1330(1989))。另外，已知VLA-4與骨橋蛋白結(jié)合，所述骨橋蛋白是在動(dòng)脈硬化斑塊中經(jīng)過正調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)(參見Bayless等人，J.Cell Science 1111165-1174(1998))。
專利申請(qǐng)PCT/JP03/10119公開了一系列吡啶酮類化合物，它們抑制α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附并且可用于治療慢性炎癥性疾病。

發(fā)明內(nèi)容
目前發(fā)現(xiàn)了也可抑制α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的一系列新的化合物。因此，本發(fā)明在第一方面提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物 其中A、B和D獨(dú)立地為芳基或雜芳基；
R1、R2和R3獨(dú)立地為C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、羥基、氰基、CF3、OCF3、硝基、C1-6烷硫基、氨基、單-或二-C1-6烷基氨基、羧基、C1-6烷?；?、酰胺基、單-或二-C1-6烷基酰胺基、-NHCOR9或-NHSO2R9{其中R9為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或苯基(任選被最多三個(gè)選自以下的基團(tuán)取代C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、氰基、苯基和CF3)}或?yàn)榛鶊F(tuán)-E-(CH2)1-6NRxRy(其中E為單鍵或-OCH2-，Rx和Ry獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或組合在一起形成5-7元雜環(huán))；R4和R4′獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、鹵素或C1-6烷氧基；V為O、S、NH、N-C1-6烷基、NNO2或NCN；W、X、Y和Z獨(dú)立地為C、CH或N，條件是X、Y和Z中的至少一個(gè)為N；L為-(CH2)q-或-(CH2)q′O-，其中q為0、1、2或3，q′為2或3；J為(i)基團(tuán)-CR5＝CR6-，其中R5和R6獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；(ii)基團(tuán)-CHR7-CHR8-，其中R7和R8獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、雜芳基、基團(tuán)-NHCOR9或-NHSO2R9(其中R9的定義同上)、或?yàn)榛鶊F(tuán)-(CH2)1-6NRxRy(其中Rx和Ry的定義同上)；(iii)單鍵；(iv)-CHR6，其中R6的定義同上；或(v)基團(tuán)-O-CHR10-、-NR11-CHR10-或-CR12R13-CHR10-，其中R10和R11獨(dú)立地為氫或C1-6烷基，R12和R13獨(dú)立地為C1-6烷基，或R12和R13組合在一起形成C3-7環(huán)烷基或5-7元雜環(huán)；m、n和p獨(dú)立地為0、1、2或3；和t為0、1或2。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式(I′)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物
其中R1-R4、m、n、p、t、A、B、D、L、J、V、W、X、Y和Z的定義同式(I)。
式(I)化合物的特別優(yōu)選的子類為下式(Ia)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物 其中R1-R4、R4′、L、J、X、Y、Z、m、n、p和t的定義同式(I)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供式(Ia′)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物
其中R1-R4、L、J、X、Y、Z、m、n、p和t的定義同式(I)。
除非另有說明，在本說明書的全文中術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的基團(tuán)；術(shù)語(yǔ)“C1-6烷基”是指包括含1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基的基團(tuán)或部分基團(tuán)；該基團(tuán)的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基或己基；術(shù)語(yǔ)“芳基”是指苯基和萘基(萘-1-基和萘-2-基)；術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指含1-3個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的芳香環(huán)或苯并稠和芳香環(huán)。所述芳香環(huán)的適當(dāng)?shù)睦影ㄠ绶曰⑦秽?、吡咯基、三唑基、咪唑基、唑基、噻唑基、二唑基、異噻唑基、異唑基、噻二唑基、吡啶酮基、吡唑基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、和吡啶基。所述苯并稠和芳香環(huán)的適當(dāng)?shù)睦影ㄠ?、異喹啉基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基和苯并唑基；術(shù)語(yǔ)“5-7元雜環(huán)”是指包括1-3個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子的非芳香雜環(huán)。所述環(huán)的適當(dāng)?shù)睦影ㄟ哙せ⑦哙夯?、吡咯烷基和嗎啉基等。雜環(huán)任選被C1-6烷基取代；術(shù)語(yǔ)“C1-6烷氧基”是指其中氧原子與上述的烷基結(jié)合的基團(tuán)或部分基團(tuán)；該基團(tuán)的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、戊氧基或己氧基；術(shù)語(yǔ)“C1-6烷?；笔侵竿ㄟ^從C1-6羧酸的羧基上除去“OH”基形成的基團(tuán)；該基團(tuán)的例子包括甲?；⒁阴；?、丙?；蚨□；?；
術(shù)語(yǔ)“C3-7環(huán)烷基”是指環(huán)狀C3-7烷基；該基團(tuán)的適當(dāng)?shù)睦影ōh(huán)己基或環(huán)戊基。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式當(dāng)A、B和/或D為芳基時(shí)，優(yōu)選的基團(tuán)為苯基。當(dāng)A、B和/或D為雜芳基時(shí)，優(yōu)選的基團(tuán)為吡啶基。
適當(dāng)?shù)兀珹為苯基或吡啶基。
適當(dāng)?shù)?，B為苯基。
適當(dāng)?shù)?，D為苯基或吡啶基。
適當(dāng)?shù)兀琑1、R2和R3獨(dú)立地為C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、羥基、氰基、CF3、硝基、C1-6烷硫基、氨基、單-或二-C1-6烷基氨基、羧基、C1-6烷?；Ⅴ０坊?、單-或二-C1-6烷基酰胺基、-NHCOR9或-NHSO2R9{其中R9為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或苯基(任選被最多三個(gè)選自以下的基團(tuán)取代C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、氰基、苯基或CF3)}或?yàn)榛鶊F(tuán)-E-(CH2)1-6NRxRy(其中E為單鍵或-OCH2-，Rx和Ry獨(dú)立地為氫、C1-6烷基，或組合在一起形成包括哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基或嗎啉基在內(nèi)的環(huán)，其中該環(huán)任選被C1-6烷基取代)。
優(yōu)選地，R1、R2和R3獨(dú)立地選自C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、氰基和CF3。
當(dāng)m、n或p不是0時(shí)，優(yōu)選的R1、R2和R3基團(tuán)各自包括C1-6烷基(特別是甲基)、鹵素(特別是氟或氯)或C1-6烷氧基(特別是甲氧基或乙氧基)。
當(dāng)m、n或p為2或3時(shí)，基團(tuán)R1、R2和R3各自可相同或不同。
優(yōu)選地，V為O。
優(yōu)選地，含有W、X、Y、Z的環(huán)如下所示
其中與羰基相鄰的環(huán)氮原子與基團(tuán)L連接。
適當(dāng)?shù)兀琑4和R4′獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或鹵素。優(yōu)選地，R4為氫。
適當(dāng)?shù)?，L為-(CH2)q-，其中q為0、1、2或3。優(yōu)選地，L為-CH2-。
適當(dāng)?shù)?，J為(i)基團(tuán)-CR5＝CR6-，其中R5和R6獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；(ii)基團(tuán)-CHR7-CHR8-，其中R7和R8獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、三唑基、咪唑基、唑基、噻唑基、二唑基、異噻唑基、異唑基、噻二唑基、吡啶酮基、吡唑基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并唑基、基團(tuán)-NHCOR9或-NHSO2R9(其中R9的定義同上)或?yàn)榛鶊F(tuán)-(CH2)1-6NRxRy，其中Rx和Ry的定義同上；(iii)單鍵；(iv)-CHR6-，其中R6的定義同上；(v)基團(tuán)-O-CHR10-、-NR11-CHR10-或-CR12R13CHR10-，其中R10和R11獨(dú)立地為氫或C1-6烷基，R12和R13獨(dú)立地為C1-6烷基，或R12和R13組合在一起形成苯基、C3-7環(huán)烷基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基或嗎啉基。
優(yōu)選地，J為(i)基團(tuán)-CR5＝CR6-，其中R5和R6獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；或(ii)基團(tuán)-CHR7-CHR8-，其中R7和R8獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、基團(tuán)-NHCOR9或-NHSO2R9，其中R9的定義同上。
最優(yōu)選地，J選自-CH＝CH-、-(CH2)2-和-CHR7-CH2-，其中R7為C1-6烷基(特別是甲基或乙基)。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物選自E1-E18(如下所述)或其藥學(xué)可接受的衍生物。
可以理解，式(I)的化合物可具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子并因此可作為外消旋物、外消旋混合物和單獨(dú)的對(duì)映體或非對(duì)映體形式存在。所有這些異構(gòu)形式，包括它們的混合物，都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
當(dāng)本發(fā)明的化合物含有烯基或亞烯基時(shí)，還可存在順式(Z)和反式(E)異構(gòu)形式。本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的單獨(dú)的立體異構(gòu)體，并且如果適當(dāng)?shù)脑挘ㄋ鼈兊膯为?dú)的互變異構(gòu)形式，及它們的混合物。
非對(duì)映體或順式和反式異構(gòu)體的分離可通過常規(guī)方法諸如分級(jí)結(jié)晶、色譜法或HPLC完成。單一的立體異構(gòu)形式的化合物還可酌情從相應(yīng)的旋光純的中間體制備，或通過拆分制備，諸如使用適當(dāng)?shù)氖中暂d體對(duì)相應(yīng)的外消旋物進(jìn)行HPLC，或通過對(duì)由相應(yīng)的外消旋物與適當(dāng)?shù)男饣钚缘乃峄驂A反應(yīng)形成的非對(duì)映異構(gòu)鹽進(jìn)行分級(jí)結(jié)晶制備?；蛘?，對(duì)映體的混合物的分離可通過使其與適當(dāng)?shù)氖中曰衔镞M(jìn)行化學(xué)反應(yīng)形成新的共價(jià)結(jié)合物質(zhì)而進(jìn)行分離，例如，外消旋羧酸與手性的胺或醇結(jié)合，得到非對(duì)映體混合物(分別為酰胺或酯的情況)，它們可通過常規(guī)方法如柱色譜法、HPLC或分級(jí)結(jié)晶分離。然后單一的非對(duì)映體可通過適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)法，如新共價(jià)鍵的水解分裂，轉(zhuǎn)變成所需化合物的單一對(duì)映體。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的衍生物”是指本發(fā)明化合物的任何藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物、或前藥如酯，其在對(duì)接受者給用時(shí)能夠提供(直接或間接)本發(fā)明的化合物，或其活性代謝物或殘余物。這種衍生物可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員無需過度試驗(yàn)即可獲得。盡管如此，請(qǐng)參見Burger的Medicinal Chemistry and Drug Discovery，5th Edition，Vol 1Principles and Practice的教導(dǎo)，其被并入本文作為對(duì)所述衍生物的教導(dǎo)的參考文獻(xiàn)。優(yōu)選的藥學(xué)可接受的衍生物為鹽、溶劑合物、酯、氨基甲酸酯和磷酸酯。特別優(yōu)選的藥學(xué)可接受的衍生物為鹽、溶劑合物和酯。最優(yōu)選的藥學(xué)可接受的衍生物為鹽和酯。
有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是，許多有機(jī)化合物可與溶劑形成復(fù)合物，其中有機(jī)化合物與溶劑反應(yīng)，或從溶劑沉淀或結(jié)晶。這些復(fù)合物被稱作“溶劑合物”。例如，與水形成的復(fù)合物被稱作“水合物”。本發(fā)明化合物的溶劑合物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“前藥”是指在體內(nèi)，例如通過在血液中水解，轉(zhuǎn)化為它的具有醫(yī)療效果的活性形式的化合物。藥學(xué)可接受的前藥的描述參見T.Higuchi和V.Stella的Prodrugs as Novel Delivery Systems，Vol.14，A.C.S.Symposium Series，Edward B.Roche，ed.，BioreversibleCarriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association andPergamon Press，1987，和D.Fleisher，S.Ramon和H.Barbra的″Improved oral drug deliverysolubility limitations overcome by the useof prodrugs″，Advanced Drug Delivery Reviews(1996)19(2)115-130，其各自并入本文作為參考。
前藥是任何共價(jià)結(jié)合的載體，它們當(dāng)在對(duì)患者給用時(shí)在體內(nèi)釋放式(I)的化合物。前藥通常通過對(duì)官能團(tuán)進(jìn)行修飾制得，修飾方式為使得該修飾基團(tuán)是可裂解的，通過常規(guī)操作或體內(nèi)方式實(shí)現(xiàn)裂解，得到母體化合物。前藥包括，例如，其中羥基或胺基與任何基團(tuán)結(jié)合的本發(fā)明的化合物，這些任何基團(tuán)當(dāng)對(duì)患者給予前藥時(shí)會(huì)裂解從而形成羥基或胺基。因此，前藥的代表性例子包括(但不限于)式(I)化合物的醇和胺官能團(tuán)的乙酸酯、甲酸酯、和苯甲酸酯的衍生物。另外，在羧酸(-COOH)的情況中，可使用酯，如甲酯、乙酯、雙酯等。酯本身可具有活性和/或在人體體內(nèi)環(huán)境下具有活性。適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的在體內(nèi)可水解的酯基包括那些在人體內(nèi)可容易地?cái)嗔褟亩玫侥阁w酸或其鹽的化合物。
本發(fā)明的化合物可為藥學(xué)可接受的鹽的形式和/或可以藥學(xué)可接受鹽的形式進(jìn)行給用。對(duì)于適當(dāng)?shù)柠}的綜述參見Berge等人的J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。
通常，藥學(xué)可接受的鹽可酌情通過使用所需的酸或堿容易地制得。鹽可以從溶液中沉淀并通過過濾收集，或者可通過蒸發(fā)溶劑獲得。
藥學(xué)可接受的酸鹽從形成無毒鹽的酸類形成，并且該類鹽的例子為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、富馬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、葡糖酸鹽、琥珀酸鹽、丙酮酸鹽(piruvate)、草酸鹽、草酰乙酸鹽、三氟乙酸鹽、糖二酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。
藥學(xué)可接受的堿鹽包括銨鹽；堿金屬鹽如鈉和鉀的鹽；堿土金屬鹽如鈣和鎂的鹽；與有機(jī)堿形成的鹽，該有機(jī)堿包括伯胺、仲胺和叔胺，如異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己基胺、和N-甲基-D-葡糖胺。
在另一方面，本發(fā)明還提供了制備式(I)化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物的方法，該方法包括使式(II)的羧酸酯衍生物水解
其中R1-R4、R4′、m、n、p、t、A、B、D、L、J、V、W、X、Y和Z的定義同式(I)，R是能夠形成羧酸酯并且任選之后形成其藥學(xué)可接受的衍生物的基團(tuán)。
適當(dāng)?shù)腞基團(tuán)的例子為C1-6烷基，諸如甲基或叔丁基。水解可借助酸性或堿性介質(zhì)發(fā)生。這種方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。
式(II)的化合物可通過以下任一種方法制備(a)使式(III)的化合物 其中R2-R4、R4′、n、p、t、A、B、L、J、R、W、X、Y和Z的定義同式(I)或式(II)，與式(IV)的化合物反應(yīng)
其中R1、m和D的定義同式(I)，F(xiàn)G1和FG2含有適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)，它們能夠一起反應(yīng)形成脲部分；或(b)使式(V)的化合物 其中R1、R2、R4、R4′、m、n、t、A、D、V、W、X、Y和Z的定義同式(I)或式(II)，與式(VI)的化合物反應(yīng) 其中p、R、R3、J、B和L的定義同式(I)或式(II)，LG1為離去基團(tuán)。
對(duì)于方法(a)，適當(dāng)?shù)腇G1和FG2基團(tuán)的適當(dāng)?shù)睦影?i)FG1為-N＝C＝O且FG2為NH2；或FG1為NH2且FG2為N＝C＝O；或(ii)FG1為NH2且FG2為NH2，與適當(dāng)?shù)碾逍纬稍噭┮黄稹?br> 在方法(i)中，反應(yīng)通常在惰性溶劑如二氯甲烷或乙腈中在環(huán)境溫度下進(jìn)行。
在方法(ii)中，反應(yīng)通常在適當(dāng)?shù)碾逍纬稍噭┤玺驶溥蚧蚬鈿獾拇嬖谙?，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?為惰性有機(jī)溶劑，如N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃或二氯甲烷)，在環(huán)境溫度或高溫下，任選在堿如三乙胺或吡啶的存在下進(jìn)行。
對(duì)于方法(b)，離去基團(tuán)的適當(dāng)?shù)睦訛辂u素(特別是氯)或甲磺酸酯。反應(yīng)通常在惰性溶劑如四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺或乙腈中，在環(huán)境溫度下進(jìn)行。
據(jù)信式(II)的中間體化合物是新的并構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
式(III)、(IV)、(V)和(VI)的中間體化合物是市售的或可使用本文所述的本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法或這些方法的類似方法制得。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是，在制備本發(fā)明的化合物的過程中，有必要和/或希望保護(hù)分子中的一個(gè)或多個(gè)敏感基團(tuán)，從而防止不希望的副反應(yīng)發(fā)生。用于本發(fā)明的適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的并且可以常規(guī)方式使用。例如，參見“Protective groups in organicsynthesis″，T.W.Greene和P.G.M.Wuts(John Wiley & Sons 1991)或″Protecting Groups″，P.J.Kocienski(Georg Thieme Verlag 1994)。適當(dāng)?shù)陌被Ｗo(hù)基的例子包括?；愋偷谋Ｗo(hù)基(如甲酰基、三氟乙酰基、乙酰基)，芳香氨基甲酸酯類型的保護(hù)基(如芐氧羰基(Cbz)和取代的Cbz)，脂肪族氨基甲酸酯類型的保護(hù)基(如9-芴基甲氧羰基(Fmoc)、叔丁氧羰基(Boc)、異丙氧羰基、環(huán)己氧羰基)和烷基類型的保護(hù)基(如芐基、三苯甲基、氯代三苯甲基)。適當(dāng)?shù)难醣Ｗo(hù)基的例子可包括烷基甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基；烷基醚類如四氫吡喃基或叔丁基醚；或酯，如乙酸酯。
可根據(jù)以下試驗(yàn)測(cè)試本發(fā)明化合物的體外生物活性。
Jurkat J6閃爍親近測(cè)定法(SPA)使用Jurkat J6閃爍親近測(cè)定法測(cè)定在Jurkat J6細(xì)胞膜上表達(dá)的整聯(lián)蛋白VLA-4與試驗(yàn)化合物的相互作用。在含有50mM HEPES、100mM NaCl和1mM MnCl2(用4M NaOH調(diào)節(jié)到pH 7.5)的試驗(yàn)緩沖液中，將J6細(xì)胞(1百萬個(gè)細(xì)胞/孔)涂布到涂有小麥胚凝集素的SPA小珠(Amersham，1毫克/孔)上。將氚化的3H標(biāo)準(zhǔn)化合物A(1-3nM，最終試驗(yàn)濃度)和試驗(yàn)化合物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒃谠囼?yàn)緩沖液中稀釋(最高試驗(yàn)濃度為2.5μm；十點(diǎn)劑量反應(yīng)曲線)?；衔镆砸皇絻煞葸M(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)用了四個(gè)參數(shù)曲線擬合。根據(jù)Cheng & Prusoff(Biochem Pharmacol.，22(23)3099-3108(1973))的方法計(jì)算每種化合物的平衡解離常數(shù)。數(shù)據(jù)以平均pKi表示。
標(biāo)準(zhǔn)化合物A為(2S)-3-[4-({[4-(氨基羰基)-1-哌啶基]羰基}氧基)-苯基]-2-[((2S)-4-甲基-2-{[2-(2-甲基苯氧基)乙?；鵠氨基}戊?；?-氨基]丙酸鉀鹽，其在專利申請(qǐng)WO 00/37444(Glaxo Group Ltd.等人)中有述?？墒褂贸Ｒ?guī)方法制備氚化的3H衍生物。
根據(jù)該過程測(cè)試根據(jù)本發(fā)明制備的所有實(shí)施例并且發(fā)現(xiàn)它們具有的pKi≥8.0。
式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物抑制α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附。據(jù)信α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附牽涉許多病況，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)；哮喘；變應(yīng)性病況，如鼻炎；成人呼吸窘迫綜合征；AIDS-癡呆；阿爾茨海默氏??；心血管疾??；血栓形成或有害的血小板聚集；血栓溶解后的再阻塞；再灌注損傷；皮膚炎癥性疾病，如牛皮癬、濕疹、接觸性皮炎和特應(yīng)性皮炎；糖尿病(如胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性糖尿病)；多發(fā)性硬化；系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)；炎癥性腸病，如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病(局限性回腸炎)和隱窩炎(例如在直腸結(jié)腸切除術(shù)和回腸肛門吻合術(shù)后導(dǎo)致)；與白細(xì)胞浸潤(rùn)到胃腸道有關(guān)的疾病，如乳糜瀉、非熱帶性口炎性腹瀉、與血清反應(yīng)陰性的關(guān)節(jié)病有關(guān)的腸病、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎或膠原性結(jié)腸炎、和嗜酸細(xì)胞性胃腸炎；與白細(xì)胞浸潤(rùn)到其它上皮排列組織有關(guān)的疾病，所述組織如皮膚、尿路、呼吸氣道、和關(guān)節(jié)滑膜；胰腺炎；乳腺炎(乳腺)；肝炎；膽囊炎；膽管炎或膽管周炎(膽管、和肝臟周圍組織)；支氣管炎；竇炎；肺的導(dǎo)致間質(zhì)性纖維化的炎癥性疾病，如超敏性肺炎；膠原病(在SLE和RA中)；結(jié)節(jié)??；骨質(zhì)疏松癥；骨關(guān)節(jié)炎；動(dòng)脈粥樣硬化；腫瘤性疾病，包括腫瘤性或癌性生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)移；傷口愈合增強(qiáng)；某些眼病如視網(wǎng)膜脫離、變應(yīng)性結(jié)膜炎和自身免疫葡萄膜炎；舍格倫綜合征；器官移植后的排斥(慢性和急性的)；宿主抗移植物或移植物抗宿主??；內(nèi)膜過度增生；動(dòng)脈硬化(包括移植后的移植物動(dòng)脈硬化)；術(shù)后如經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)和經(jīng)皮腔內(nèi)動(dòng)脈再疏通后的再梗塞或再狹窄；腎炎；瘤性血管生成；惡性腫瘤；多發(fā)性骨髓瘤和骨髓瘤誘發(fā)的骨吸收；膿毒病；和中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，如中風(fēng)、外傷性腦損傷和脊髓損傷及梅尼埃病。
本發(fā)明的化合物可優(yōu)選用于治療或預(yù)防哮喘，變應(yīng)性病況如鼻炎，炎癥性腸病如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩氏病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，特應(yīng)性皮炎，多發(fā)性硬化和器官移植后的排斥。
本發(fā)明另外提供治療或預(yù)防其中α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的抑制劑是有益的病況的方法，該方法包括對(duì)需要的患者給用安全和有效量的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物。本發(fā)明特別提供了治療或預(yù)防上述病況的方法。
本發(fā)明還提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物在醫(yī)療中，特別是在治療或預(yù)防上述病況中的應(yīng)用。
在另一方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物在制備用于治療或預(yù)防其中α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的抑制劑是有益的病況(特別是上述病況)的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物有可能單獨(dú)給用，優(yōu)選其根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐被配制在藥物組合物中。因此，本發(fā)明還提供了包括治療有效量的式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物與藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。
本發(fā)明另外提供包括式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物以及另一種治療活性劑的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備藥物組合物的方法，該方法包括將至少一種本發(fā)明的化合物與藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑混合。
藥物組合物可用于人和獸醫(yī)學(xué)中的人和動(dòng)物的用途中，并且通常會(huì)包括任一種或多種藥學(xué)可接受的稀釋劑、載體或賦形劑。用于醫(yī)療應(yīng)用的可接受的載體或稀釋劑為藥學(xué)領(lǐng)域所公知的，并且在例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro編輯，1985)中有述?？筛鶕?jù)預(yù)定的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)實(shí)踐選擇藥用載體、賦形劑或稀釋劑。載體或稀釋劑必須在對(duì)其接受者是無害的意義上是可接受的。藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑可以是，例如，粘合劑(如糖漿、阿拉伯樹膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮)，賦形劑(如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鉀、山梨醇、甘氨酸)，潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇、二氧化硅)，崩解劑(如馬鈴薯淀粉)，潤(rùn)濕劑(如十二烷基硫酸鈉)等等。
本發(fā)明組合物的給藥(遞送)途徑包括但不限于以下的一種或多種經(jīng)口服(如作為片劑、膠囊，或作為可攝取的溶液)，局部，經(jīng)粘膜(如作為鼻噴劑或吸入用氣霧劑)，經(jīng)鼻，非腸道(如通過可注射形式)，胃腸道，脊柱內(nèi)，腹膜內(nèi)，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，子宮內(nèi)，眼內(nèi)，皮內(nèi)，顱內(nèi)，氣管內(nèi)，陰道內(nèi)，腦室內(nèi)，腦內(nèi)，皮下，經(jīng)眼(包括玻璃體內(nèi)或房室內(nèi))，透皮，直腸，口頰，硬膜外，舌下。
例如，化合物可以片劑、膠囊、卵形劑(ovules)、酏劑、溶液或懸浮液的形式給用，它們可含有調(diào)味劑或著色劑，用于立即式、延遲式、改變式、持續(xù)式、脈沖式或控制式釋放應(yīng)用。片劑可含有賦形劑，如微晶纖維素、乳糖、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸氫鈣和甘氨酸；崩解劑，如淀粉(優(yōu)選玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸鈉、交聯(lián)羧甲纖維素鈉和某些復(fù)合硅酸鹽；和造粒粘合劑，如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙甲基纖維素(HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、蔗糖、明膠和阿拉伯膠。另外，可包括潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、山俞酸甘油酯和滑石。相似類型的固體組合物還可作為在膠囊中的填充物的形式使用。在這點(diǎn)上，優(yōu)選的賦形劑包括乳糖、淀粉、纖維素、乳糖或高分子量聚乙二醇。對(duì)于水懸浮液和/或酏劑，藥物可與各種甜味劑或調(diào)味劑、色料或染料組合，與乳化劑和/或懸浮劑組合，和與稀釋劑如水、乙醇、丙二醇和甘油組合，或與上述物質(zhì)的組合結(jié)合使用。
本發(fā)明的化合物可使用已知的研磨法如濕法研磨進(jìn)行研磨，從而得到具有適合形成片劑或其它制劑類型的粒子大小。本發(fā)明化合物的精細(xì)粉碎(納米粒子)制劑可通過本領(lǐng)域的公知方法制備，例如參見國(guó)際專利申請(qǐng)WO 02/00196(SmithKline Beecham)。
如果本發(fā)明的化合物以非腸道給藥，則這種給藥途徑的例子包括以下一種或多種靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給予藥物；和/或使用輸注技術(shù)。對(duì)于非腸道給藥，化合物最好以無菌水溶液的形式使用，該制劑可含有其它物質(zhì)，如足夠的鹽或葡萄糖使得溶液與血液等滲。如有必要，水溶液應(yīng)當(dāng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)鼐彌_(優(yōu)選使pH為3-9)。在無菌條件下制備適當(dāng)?shù)姆悄c道制劑通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的標(biāo)準(zhǔn)制藥技術(shù)容易地完成。
正如指出的，本發(fā)明的化合物可以鼻內(nèi)或吸入方式給藥，并且可以干粉吸入器或氣霧劑噴射形式從加壓容器、泵、噴霧器或霧化器借助于適當(dāng)?shù)耐七M(jìn)劑方便地進(jìn)行遞送，所述推進(jìn)劑諸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫氟烷如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134AT″″)或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA)(例如得自Ineos Fluor)、二氧化碳或其他適當(dāng)?shù)臍怏w。在加壓氣霧劑的情況下，可通過提供閥來遞送計(jì)量的量從而確定劑量單位。加壓容器、泵、噴霧器或霧化器可含有活性化合物的溶液或懸浮液，例如使用乙醇和推進(jìn)劑的混合物作為溶劑，其可另外含有潤(rùn)滑劑如三油酸山梨聚糖。供吸入器或吹藥器使用的藥倉(cāng)或藥筒(例如從明膠制得)可配制為含有化合物和適當(dāng)?shù)姆勰┗|(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物。
或者，本發(fā)明的化合物可以栓劑或陰道栓劑的形式給藥，或者可以凝膠、水凝膠、洗液、溶液、霜?jiǎng)⒏鄤┗蚣?xì)粉形式進(jìn)行局部施用。本發(fā)明的化合物還可以皮膚的或經(jīng)皮方式給藥，例如，通過使用皮膚貼片。它們還可通過肺或直腸途徑給藥。它們還可通過眼途徑給用。對(duì)于眼部應(yīng)用，化合物可配制為在等滲的、pH經(jīng)調(diào)節(jié)的、無菌鹽水中的微粉化懸浮液，或者優(yōu)選作為在等滲的、pH經(jīng)調(diào)節(jié)的、無菌鹽水中的溶液的形式，任選地結(jié)合有防腐劑如苯扎氯銨?；蛘?，它們可配制在膏劑如礦脂中。
對(duì)于皮膚的局部施用，本發(fā)明的藥物可配制為含有懸浮在或溶于例如具有一種或多種以下物質(zhì)的混合物中的適當(dāng)?shù)母鄤┑V物油、液體礦脂、白礦脂、丙二醇、聚氧化乙烯聚氧化丙烯化合物、乳化蠟和水?；蛘?，其可配制為懸浮在或溶于例如具有一種或多種以下物質(zhì)的混合物中的適當(dāng)?shù)南匆夯蛩獎(jiǎng)┑V物油、單硬脂酸山梨聚糖、聚乙二醇、液狀石蠟、聚山梨酯60、鯨蠟基酯蠟、cetearyl醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
本發(fā)明的組合物可直接注射給藥。
在優(yōu)選方案中，本發(fā)明的藥物可系統(tǒng)給藥，諸如經(jīng)口服、口頰、舌下，更優(yōu)選經(jīng)口服給藥。
因此，藥物優(yōu)選為適合經(jīng)口服給藥的形式。
通常，醫(yī)生可以確定最適合單獨(dú)受試者的實(shí)際劑量。特定的劑量水平和給藥頻率對(duì)于任何特定的個(gè)體可以是不同的并且根據(jù)以下各種因素而定使用的具體化合物的活性，該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)間，年齡，體重，一般健康狀況，性別，進(jìn)食，給藥方式和時(shí)間，排泄速率，藥物聯(lián)合，和具體病況的嚴(yán)重程度，以及單獨(dú)的經(jīng)歷治療。
對(duì)于對(duì)人的經(jīng)口服和非腸道給藥，藥物的日劑量水平可為單一劑量或分開的劑量。
本發(fā)明化合物用于對(duì)人(約70kg體重)給藥的推薦劑量為每單位劑量0.1毫克到2克，更典型地為1毫克到500毫克活性成分，以游離堿的重量表示。單位劑量可以例如每天以1-4次給藥。劑量根據(jù)給藥途徑的不同而不同。將理解的是，可能有必要根據(jù)患者的年齡和體重以及待治療病況的嚴(yán)重程度進(jìn)行常規(guī)的劑量改變。劑量還將根據(jù)給藥途徑的不同而不同。精確的劑量和給藥途徑將根據(jù)隨同醫(yī)師或獸醫(yī)的判斷進(jìn)行最終確定。
本發(fā)明的化合物還可用于與其它治療劑聯(lián)合使用。因此，本發(fā)明在另一方面提供包括本發(fā)明的化合物和另外的治療劑的組合。
當(dāng)本發(fā)明的化合物與另外的有效對(duì)抗相同疾病的治療劑聯(lián)合使用時(shí)，各個(gè)化合物的劑量可與所述化合物單獨(dú)使用時(shí)的劑量不同。適當(dāng)?shù)膭┝靠赏ㄟ^本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易地確定。可以理解的是，本發(fā)明的化合物用于治療應(yīng)用的量將隨著治療的病況的性質(zhì)以及患者的年齡和病況的不同而不同，并且根據(jù)隨同醫(yī)師或獸醫(yī)的判斷進(jìn)行最終確定。可與本發(fā)明的化合物聯(lián)合使用的其它活性劑的例子可包括但不限于(a)其他VLA-4拮抗劑；(b)H1組胺拮抗劑；(c)NSAID′s；(d)抗糖尿病藥，如格列酮類；(e)抗膽堿能藥物；(f)COX-2抑制劑；(g)PDE-IV抑制劑；(h)甾族化合物，如皮質(zhì)類固醇；(i)β激動(dòng)劑；(t)趨化因子受體如CCR-2、CCR-3、CCR-5和CCR-8的拮抗劑；(k)適當(dāng)?shù)亩喟l(fā)性硬化藥物，如β干擾素；和(l)LFA-1拮抗劑；(m)TNF抑制劑；(n)柳氮磺吡啶和5-氨基水楊酸類，和(o)免疫抑制劑。
上述的組合可方便地以藥物制劑和由此包括上述組合以及藥學(xué)可接受的載體或賦形劑的藥物制劑中使用的形式存在，其構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。這種組合的單獨(dú)組分可在分開的或合并的藥物制劑中通過常規(guī)途徑順序地或同時(shí)地給藥。當(dāng)順序給藥時(shí)，本發(fā)明的化合物或另外的治療劑可首先給藥。當(dāng)同時(shí)給藥時(shí)，組合可在相同或不同的藥物組合物中給藥。
當(dāng)組合在相同的制劑中時(shí)，可以理解的是，兩種化合物必須是穩(wěn)定的并且彼此相容并與制劑的其它組分相容。當(dāng)分別進(jìn)行配制時(shí)，它們可以任何方便的制劑形式被提供，這種方便的形式為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。本說明書引用的所有出版物，包括但不限于專利和專利申請(qǐng)，各自作為具體的和單獨(dú)的出版物被引入本文作為參考，并且如同完全闡述的那樣被引入本文作為參考。
以下制備例和實(shí)施例闡述了本發(fā)明化合物的制備。除非另作說明，所有反應(yīng)在環(huán)境溫度下進(jìn)行。
制備例13-(4-羥基甲基苯基)丙烯酸乙酯(P1)4-溴苯甲醇(10.5g，56.1mmol)、三苯基膦(0.5g，1.9mmol)和乙酸鈀(0.5g，2.2mmol)在丙烯酸乙酯(20mL)和三乙胺(100mL)中攪拌回流72小時(shí)，然后冷卻，反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，并濃縮，粗品固體通過硅膠色譜法純化(20％v/v的乙酸乙酯，在石油醚中)，得到標(biāo)題化合物，為油狀物。
制備例23-(4-羥基甲基苯基)丙酸乙酯(P2)在大氣壓力的氫氣中，將在乙醇(30mL)中的3-(4-羥基甲基苯基)丙烯酸乙酯(P1，3g，14.5mmol)和碳載鈀(0.3g)攪拌4小時(shí)，反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物，為油狀物。
制備例33-(4-氯甲基苯基)丙酸乙酯(P3)在0℃向攪拌的3-(4-羥基甲基苯基)丙酸乙酯(P2，2.9g，13.9mmol)在三乙胺(4.0mL，27.8mmol)和二氯甲烷(30mL)中的溶液中緩慢加入甲磺酰氯(1.6mL，20.9mmol)。溶液在室溫下攪拌18小時(shí)，然后溶液用1N鹽酸水溶液洗滌。有機(jī)相經(jīng)過干燥(無水硫酸鎂)并濃縮，得到標(biāo)題化合物，為油狀物。
制備例4(E)-3-(4-甲?；交?丁-2-烯酸乙酯(P4)4-溴苯甲醛(12.0g，65mmol)、巴豆酸乙酯(26.0mL，209mmol)、三苯基膦(0.5g，2mmol)和乙酸鈀(II)(0.5g，2mmol)在氬氣中回流攪拌24小時(shí)，然后混合物經(jīng)過過濾和真空濃縮，得到棕褐色油狀物。通過硅膠色譜法純化(含0-30％乙酸乙酯的己烷，梯度洗脫)，得到標(biāo)題化合物，為油狀物；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 219(C13H14O3預(yù)計(jì)有在m/z219處的[M+H]+)。
制備例5(R，S)-3-(4-羥基甲基苯基)丁酸乙酯(P5)(E)-3-(4-甲?；交?丁-2-烯酸乙酯(P4，8.74g，40mmol)和10％碳載鈀(60％，含水糊，0.5g)在乙醇(200mL)中在大氣壓力下氫化4小時(shí)，混合物經(jīng)過硅藻土過濾，濾液經(jīng)真空濃縮，得到無色油狀物。在通過硅膠色譜法純化后(合0-60％乙酸乙酯的己烷，梯度洗脫)，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物；MS(ES+ve)[M-OH]+，在m/z 205(C13H18O3預(yù)計(jì)有在m/z 205的[M-OH]+)。
制備例64-[(S)-2-((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲酰基)-1-甲基乙基]苯甲酸乙酯(P6a)和4-[(R)-2-((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?-1-甲基乙基]-苯甲酸乙酯(P6b)向在冰浴中冷卻的4-(2-羧基-1-甲基乙基)苯甲酸乙酯(J.I.DeGraw等人J.Med.Chem.1986，29，1056)(3.54g，15mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入草酰氯(3.9mL，45mmol)。加入N，N-二甲基甲酰胺(0.1mL)，混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后減壓濃縮，將殘留的?；热苡诙燃淄?60mL)中并在30分鐘內(nèi)加入到用冰冷卻的(S)-2苯基甘氨醇(2.72g，20mmol)和三乙胺(6.3mL，45mmol)在二氯甲烷(60毫升)中的混合物中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，加入2N鹽酸，分離有機(jī)相，然后用水洗滌，干燥(無水硫酸鎂)并蒸發(fā)。通過急驟色譜法，用乙酸乙酯，乙酸乙酯-甲醇(9∶1)洗脫，分離出非對(duì)映產(chǎn)物。得到較早洗脫出的非對(duì)映體(P6a)；TLC(硅膠；乙酸乙酯)Rf0.36；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 356(C21H25NO4預(yù)計(jì)有在m/z 356的[M+H]+)；和較遲洗脫出的非對(duì)映體(P6b)；TLC(硅膠；乙酸乙酯)Rf0.19；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 356(C21H25NO4預(yù)計(jì)有在m/z 356的[M+H]+)。
制備例7(S)-3-(4-羥基甲基苯基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)丁酰胺(P7a)和(R)-3-(4-羥基甲基苯基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)丁酰胺(P7b)向較遲洗脫出的非對(duì)映體4-[(R)-2-((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?-1-甲基乙基]苯甲酸乙酯(P6b，2.42g，6.81mmol)在四氫呋喃(100mL)中的溶液中加入硼氫化鋰在四氫呋喃(2M，15mL，30mmol)中的溶液，滴加甲醇(1mL)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。加入另一份在四氫呋喃中的硼氫化鋰(2M，10mL，20mmol)和甲醇(0.8mL)，混合物另外攪拌3小時(shí)，然后在冰浴中冷卻，小心地加入2N鹽酸(100mL)，然后減壓濃縮混合物。加入乙酸乙酯，有機(jī)相用水、鹽水洗滌，干燥(無水硫酸鎂)并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物的一種非對(duì)映體(P7b)；MS(ES-ve)[M-H]-在m/z 312(C19H23NO3預(yù)計(jì)有在m/z 312的[M-H]-)。
可以按類似方式從較早洗脫出的非對(duì)映體4-[(S)-2-((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?-1-甲基乙基]苯甲酸乙酯(P6a)制備另一個(gè)非對(duì)映體(P7a)。
制備例8(R)-(-)-3-(4-羥基甲基苯基)丁酸甲酯(P8)向非對(duì)映體(R)-3-(4-羥基甲基苯基)-N-((S)-2-羥基-1-苯基乙基)丁酰胺(P7b，2.0g，6.38mmol)在二氧雜環(huán)己烷(85mL)中的溶液中加入3N硫酸(85mL)。混合物加熱回流6小時(shí)，冷卻并減壓濃縮。濃縮物用乙酸乙酯提取三次，合并的有機(jī)相用水、鹽水洗滌，干燥(無水硫酸鎂)并蒸發(fā)。將殘留的固體溶于甲醇(90mL)中并加入濃硫酸(2mL)。混合物回流1小時(shí)，冷卻，然后減壓濃縮，加入水和乙酸乙酯，有機(jī)相用水、鹽水洗滌，干燥(無水硫酸鎂)并蒸發(fā)。通過急驟色譜法，用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物；[α]D30℃-41.2°(c＝1.0，MeOH)。
制備例9(S)-(+)-3-(4-羥基甲基苯基)丁酸甲酯(P9)可以按制備例8的類似方式從非對(duì)映體P7a制備標(biāo)題化合物；[α]D30℃+42.4°(c＝1.0，MeOH)。
制備例10(R)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)丁酸甲酯(P10)將(R)-(-)-3-(4-羥基甲基苯基)丁酸甲酯(P8，400mg，1.80mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液在冰浴中冷卻，并用三乙胺(0.28mL，1.99mmol)和甲磺酰氯(0.15mL，1.99mmol)處理，反應(yīng)在冰浴中攪拌1小時(shí)，然后混合物用二氯甲烷和水稀釋。分離有機(jī)層后，水層進(jìn)一步用二氯甲烷提取，然后將合并的有機(jī)層通過硫酸鎂干燥。過濾并蒸發(fā)溶劑后，得到的粗品直接使用，無需進(jìn)一步純化。
根據(jù)以下反應(yīng)圖解表示制備例6-10
制備例112-乙氧基-4-甲基-1-硝基苯(P11)在氬氣下將氫化鈉(60％，在礦物油中，2.30g，57mmol)在用固體二氧化碳浴冷卻的N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中攪拌，同時(shí)在10分鐘內(nèi)加入在無水N，N-二甲基甲酰胺(75mL)中的2-羥基-4-甲基-1-硝基苯(8.00g，52mmol)?；旌衔镌诃h(huán)境溫度下攪拌1小時(shí)，在冰中再次冷卻，用碘乙烷(4.6mL，57mmol)處理。該混合物在環(huán)境溫度下攪拌5天，減壓濃縮，用乙酸乙酯(200mL)稀釋，用水(3×200mL)和鹽水(200mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z182(C9H11NO3預(yù)計(jì)有在m/z 182的[M+H]+)。
制備例12[(E)-2-(3-乙氧基-4-硝基苯基)乙烯基]二甲胺(P12)將2-乙氧基-4-甲基-1-硝基苯(P11，9.26g，51mmol)和叔丁氧基雙(二甲基氨基)甲烷(20.2mL，98mmol)加熱到100℃，持續(xù)60小時(shí)，然后減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES-ve)M-在m/z 236(C12H16N2O3預(yù)計(jì)有在m/z 236的M-)。
制備例13(3-乙氧基-4-硝基苯基)乙腈(P13)[(E)-2-(3-乙氧基-4-硝基苯基)乙烯基]二甲胺(P12，12.10g，51mmol)和羥胺-O-磺酸(17.40g，154mmol)在水(200mL)中在氬氣下攪拌5小時(shí)，過濾并干燥后，得到固體的標(biāo)題化合物。該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES-ve)[M-H]-在m/z 205(C10H10N2O3預(yù)計(jì)有在m/z 205的[M-H]-)。
制備例142-(3-乙氧基-4-硝基苯基)乙酰胺(P14)(3-乙氧基-4-硝基苯基)乙腈(P13，5.0g，190mmol)在濃鹽酸(20mL)中劇烈攪拌48小時(shí)，然后用水(100mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×100mL)提取，有機(jī)相用飽和碳酸氫鈉(2×100mL)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物。該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 225(C10H12N2O4預(yù)計(jì)有在m/z 225的[M+H]+)。
制備例155-(3-乙氧基-4-硝基苯基)-3H-嘧啶-4-酮(P15)2-(3-乙氧基-4-硝基苯基)乙酰胺(P14，1.78g，8.0mmol)和N，N′，N″-次甲基三甲酰胺(N，N′，N″-methylidynetrisformamide)(2.30g，16mmol)在氬氣下在甲酰胺(3mL)中劇烈攪拌，將混合物加熱到160℃，持續(xù)8小時(shí)，用水(25mL)稀釋，并用2N氫氧化鈉水溶液(10mL)處理，在蒸汽浴中加熱直到溶解，然后用碳(2.5g)處理，超聲處理并過濾。使二氧化碳鼓泡通過濾液，直到pH為7，得到的沉淀物經(jīng)過濾，然后與甲苯(3×50mL)進(jìn)行共沸，得到標(biāo)題化合物，該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 262(C12H11N3O4預(yù)計(jì)有在m/z 262的[M+H]+)。
制備例165-(4-氨基-3-乙氧基苯基)-3H-嘧啶-4-酮(P16)5-(3-乙氧基-4-硝基苯基)-3H-嘧啶-4-酮(P15，830mg，3.2mmol)在氬氣下在乙酸乙酯(50mL)和乙醇(50mL)中攪拌，加入二水合氯化錫(II)(3.59g，16mmol)，將混合物在80℃加熱，持續(xù)5小時(shí)，加入飽和碳酸氫鈉(100mL)，過濾混合物，濾液用乙酸乙酯(3×50mL)提取，用水(2×50mL)和(50mL)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 232(C12H13N3O2預(yù)計(jì)有在m/z 232的[M+H]+)。
制備例171-[2-乙氧基-4-(6-氧代-1，6-二氫嘧啶-5-基)苯基]-3-鄰甲苯基脲(P17)5-(4-氨基-3-乙氧基苯基)-3H-嘧啶-4-酮(P16，390mg，1.7mmol)在氬氣下在二氯甲烷(20mL)中攪拌，在5分鐘內(nèi)加入鄰甲苯基異氰酸酯(0.32mL，2.5mmol)，反應(yīng)另外攪拌4小時(shí)，然后減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為固體，該物質(zhì)直接用于下一步，無需進(jìn)一步純化；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 365(C20H20N4O3預(yù)計(jì)有在m/z 365的[M+H]+)。
制備例18(R，S)-3-(4-{5-[3-乙氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基}-苯基)丁酸乙酯(P18)(R，S)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)丁酸乙酯(按照制備例10所述的類似方法從(R，S)-3-(4-羥基甲基苯基)丁酸乙酯(P5)制備，495mg，1.5mmol)在氬氣下在N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中攪拌，加入1-[2-乙氧基-4-(6-氧代-1，6-二氫嘧啶-5-基)苯基]-3-鄰甲苯基脲(P17，400mg，1.1mmol)和碳酸銫(716mg，2.2mmol)，混合物攪拌16小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴?20mL)和水(20mL)稀釋，分離有機(jī)層后，水相用乙酸乙酯(2×20mL)再提取，合并的有機(jī)層用鹽水(20mL)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。粗品通過硅膠色譜法(Flashmaster II，50g二氧化硅)純化，用乙酸乙酯∶己烷(66∶34)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色固體；LC/MS(AP+ve)[M+H]+，在m/z 569(C33H36N4O5預(yù)計(jì)有在m/z 569的[M+H]+)。
以下反應(yīng)圖解表示制備例11-18。
制備例19(R)-3-{4-[5-(4-硝基苯基)-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基]苯基}丁酸甲酯(P19)向5-(4-硝基苯基)-3H-嘧啶酮(400mg，1.8mmol){Tsatsaronis等人，Chem.Ber.，94，1961，2876}的N，N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液中加入碳酸銫(1.2g，3.6mmol)，然后加入(R)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)丁酸甲酯(P10，～1.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液。反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋，分離有機(jī)層后，水相用乙酸乙酯再提取。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，粗品通過硅膠色譜法純化，用60∶40的乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物，為固體；MS(APCI+ve)[M+H]+，在m/z 408(C22H21N3O5預(yù)計(jì)有在m/z 408的[M+H]+)。
制備例20(R)-3-{4-[5-(4-氨基苯基)-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基]苯基}丁酸甲酯(P20)向(R)-3-{4-[5-(4-硝基苯基)-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基]苯基}丁酸甲酯(P19，420mg，1.03mmol)在1∶1的乙酸乙酯∶乙醇(30mL)中的溶液中加入二水合氯化錫(II)(1.2g，5.30mmol)。反應(yīng)混合物在80℃加熱2小時(shí)，然后將其冷卻到室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)，過濾除去得到的沉淀物，產(chǎn)物用乙酸乙酯提取，硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，殘余物通過硅膠色譜法純化，用70∶30的乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物，為泡沫狀物；MS(APCI+ve)[M+H]+，在m/z 378(C22H23N3O3預(yù)計(jì)有在m/z 378的[M+H]+)。
制備例21(R)-3-(4-{6-氧代-5-[4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6H-嘧啶-1-基甲基}苯基)丁酸甲酯(P21)向(R)-3-{4-[5-(4-氨基苯基)-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基]苯基}丁酸甲酯(P20，360mg，0.95mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入鄰甲苯基異氰酸酯(0.18mL，1.45mmol)。反應(yīng)在室溫下攪拌14小時(shí)，然后真空濃縮，粗品通過硅膠色譜法純化，用70∶30的乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物，為無色泡沫狀物。MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z511(C30H30N4O4預(yù)計(jì)有在m/z 511的[M+H]+)。
制備例22
3-(4-氨基苯基)-1H-吡嗪-2-酮(P22)在攪拌下將3-苯基-1H-吡嗪-2-酮(4.3g，25mmol，根據(jù)G Karmas和P.E.Spoerri，J.Amer.Chem.Soc.，1956，78，4071的方法制備)少量多次加入到攪拌的預(yù)先冷卻到-40℃的濃硫酸(5mL)和發(fā)煙硝酸(15mL)的混合物中，在加入期間保持溫度低于-30℃。反應(yīng)混合物另外攪拌1小時(shí)，逐漸回溫到0℃，然后傾入到攪拌的冰/水(125mL)中。在收集得到的固體、用水洗滌并真空干燥后，得到硝基異構(gòu)體的混合物。所需的3-(4-硝基苯基)-1H-吡嗪-2-酮異構(gòu)體可以從該混合物中通過從丙酮中分級(jí)結(jié)晶作為第一批料獲得，在乙醇/水中的氫化(10％Pd/C，50psi)得到標(biāo)題化合物，為固體；MS(AP+ve)[M+H]+，在m/z 188(C10H9N3O預(yù)計(jì)有在m/z 188的[M+H]+)。
另一個(gè)產(chǎn)物通過對(duì)第二批料氫化，并使得到的異構(gòu)體從硅膠色譜法純化，用1∶3的甲醇/飽和氨∶二氯甲烷洗脫得到，標(biāo)題化合物首先被洗脫。
制備例234-(1-芐氧羰基亞甲基丙基)苯甲酸甲酯(P23)在氬氣下，在攪拌下將(二甲氧基磷?；?乙酸芐基酯(6.7g，25.9mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液滴加到用冰浴冷卻的氫化鈉(1.1g，60％的油懸浮液，27.5mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(60mL)中的懸浮液中，然后混合物在室溫下攪拌30分鐘，加入4-丙?；郊姿峒柞?5.0g，26.0mmol)的無水N，N二甲基甲酰胺(20mL)溶液，并在室溫下攪拌過夜，混合物減壓濃縮，然后在乙酸乙酯(100mL)和含有10％乙酸的水(50mL)中分配，水層另外用乙酸乙酯(2×100mL)提取，合并的有機(jī)層用鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾并蒸干。通過硅膠色譜法純化，用含15-30％乙酸乙酯的己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物的E和Z異構(gòu)體的混合物，以及雙鍵的位置異構(gòu)體4-((E)-1-芐氧羰基甲基丙烯基)苯甲酸甲酯，該混合物用于后面步驟，無需進(jìn)一步純化。
制備例24(R，S)-4-(l-羧基甲基丙基)苯甲酸甲酯(P24)包括4-(1-芐氧羰基亞甲基丙基)苯甲酸甲酯(P23，3.37g，10.4mmol)的雙鍵異構(gòu)體在甲醇(150mL)中的混合物與10％碳載鈀在大氣壓力下在室溫下氫化5小時(shí)，通過硅藻土墊過濾后，進(jìn)一步用甲醇洗滌，得到的溶液蒸干，得到產(chǎn)物，其最初為無色油狀物，放置后固化。
制備例254-{(S)-1-[((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?甲基]丙基}苯甲酸甲酯(P25a)和4-{(R)-1-[((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?甲基]丙基}苯甲酸甲酯(P25b)按照與制備例6類似的方法從(R，S)-4-(1-羧基甲基丙基)苯甲酸甲酯(P24)制備標(biāo)題化合物。
通過硅膠柱色譜法分離非對(duì)映產(chǎn)物，用乙酸乙酯，然后用含5-10％甲醇的乙酸乙酯洗脫。
較早獲得的級(jí)分為4-{(S)-1-[((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?甲基]丙基}苯甲酸甲酯(P25a)，為白色固體；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z356(C21H25NO4預(yù)計(jì)有在m/z 356的[M+H]+)。
較遲獲得的級(jí)分為4-{(R)-1-[((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?甲基]丙基}苯甲酸甲酯(P25b)，為白色固體；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z356(C21H25NO4預(yù)計(jì)有在m/z 356的[M+H]+)。
制備例26(S)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸((S)-2-羥基-1-苯基乙基)酰胺(P26a)和(R)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸((S)-2-羥基-1-苯基乙基)酰胺(P26b)按照制備例7的方法，使用硼氫化鋰，將較遲洗脫的非對(duì)映體4-{(R)-1-[((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?甲基]丙基}苯甲酸甲酯(P25b)還原，得到標(biāo)題化合物(R)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸((S)-2-羥基-1-苯基乙基)酰胺(P26b)；MS(ES-ve)[M-H]-，在m/z 326(C20H25NO3預(yù)計(jì)有在m/z 326的[M-H]-)。
按照類似的方法從較早洗脫出的非對(duì)映體4-{(S)-1-[((S)-2-羥基-1-苯基乙基氨基甲?；?甲基]丙基}苯甲酸甲酯(P25a)制備另一個(gè)非對(duì)映體(S)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸((S)-2-羥基-1-苯基乙基)酰胺(P26a)；MS(ES-ve)[M-H]-，在m/z 326(C20H25NO3預(yù)計(jì)有在m/z 326的[M-H]-)。
制備例27(R)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸(P27)將(R)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸((S)-2-羥基-1-苯基乙基)酰胺(P26b，2.93g，8.24mmol)的二氧雜環(huán)己烷(120mL)溶液和3N硫酸(120mL)加熱回流5小時(shí)，冷卻并減壓濃縮，用乙酸乙酯(3×100mL)提取后，合并的有機(jī)層用水(50mL)、然后用鹽水(50mL)洗滌，然后用無水硫酸鎂干燥，過濾并蒸干得到標(biāo)題化合物。
制備例28(S)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸(P28)按照與相應(yīng)的(R)異構(gòu)體(P27)類似的方法從(S)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸((S)-2-羥基-1-苯基乙基)酰胺(P26a)制備得到標(biāo)題化合物。MS(ES-ve)[M-H]-，在m/z 207(C12H16NO3預(yù)計(jì)有在m/z 207得[M-H]-)。
制備例29(R)-(-)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸甲酯(P29)將(R)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸(P27，2.0g，9.6mmol)的甲醇(150mL)溶液和濃硫酸(3mL)加熱回流1.5小時(shí)，然后冷卻并減壓濃縮，在乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)之間分配，水層另外用乙酸乙酯(2×50mL)提取，合并的有機(jī)層用鹽水(50mL)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾并蒸干。通過硅膠柱色譜法純化，用1∶1的乙酸乙酯洗脫后，得到標(biāo)題化合物，為無色油狀物；MS(ES+ve)[M-OH]+，在m/z 205(C13H18O3預(yù)計(jì)有在m/z 205的[M-OH]+)；[α]D30℃-30.7°(c＝1.0，MeOH)。
制備例30(S)-(+)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸甲酯(P30)按照制備例29的方法，從(S)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸(P28)制備標(biāo)題化合物，為無色油狀物；MS(ES+ve)[M-OH]+，在m/z 205(C13H18O3預(yù)計(jì)有在m/z 205的[M-OH]+)；[α]D30℃+31.4°(c＝1.0，MeOH)。
制備例31(R)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)戊酸甲酯(P31)
按照制備例10的方法從(R)-(-)-3-(4-羥基甲基苯基)戊酸甲酯(P29)制備標(biāo)題化合物；MS(ES+ve)[M-OMs]+，在m/z 205(C14H20O5S預(yù)計(jì)有在m/z 205得[M-OMs]+)。
制備例32(R)-3-(4-{6-氧代-5-[4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6H-噠嗪-1-基甲基}苯基)-戊酸甲酯(P32)向在N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的1-[4-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]-3-鄰甲苯基脲(按照制備例17的一般方法，從4-(4-氨基苯基)-2H-噠嗪-3-酮制備[在EP 0138344中有述])(341mg，60％純度，0.66mmol)中加入碳酸銫(896mg，2.75mmol)和(R)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)戊酸甲酯(P31，330mg，1.1mmol)，按照制備例18的方法，溶液在環(huán)境溫度攪拌16小時(shí)。加入乙酸乙酯(50mL)，用水(2×50mL)洗滌，然后真空濃縮有機(jī)層，化合物通過硅膠色譜法純化，用含10-100％乙酸乙酯的己烷線性梯度洗脫。合并適當(dāng)?shù)募?jí)分，蒸干后得到標(biāo)題化合物；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 525(C31H32N4O4預(yù)計(jì)有在m/z 525的[M+H]+)。
制備例335-氯-4-(3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮(P33)將3-甲氧基苯基溴化鎂的四氫呋喃溶液(1M，100mL，100mmol)緩慢加入到攪拌下的冷卻到15℃的4，5-二氯-2H-噠嗪-3-酮(6.6g，40mmol)在四氫呋喃(30mL)和乙醚(100mL)的混合物中的溶液中。混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后在冰浴中冷卻。緩慢加入飽和氯化銨水溶液(70mL)，混合物用水稀釋，過濾收集固體。固體用稀鹽酸、水和乙醚順序洗滌，然后真空干燥，合并的濾液用乙醚提取，用水、鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾并蒸干，殘余物從乙酸乙酯結(jié)晶，得到另一批產(chǎn)物，為白色固體；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 237/239(C11H9ClN2O2預(yù)計(jì)有在m/z 237/239的[M+H]+)。
制備例344-(3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮(P34)
將5-氯-4-(3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮(P33，8.22g，34.7mmol)溶于氫氧化鈉(3.48g，87mmol)在水(100mL)和N，N-二甲基甲酰胺(12mL)的溶液中，加入10％碳載鈀(0.3g)，混合物在室溫下在氫氣下(50psi)振搖3小時(shí)，加入2M氫氧化鈉，從而使沉淀物溶解，將過濾的溶液用濃鹽酸酸化。得到的白色固體通過過濾收集，用水洗滌，真空干燥，得到標(biāo)題化合物。MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 203(C11H10N2O2預(yù)計(jì)有在m/z 203的[M+H]+)。
制備例35N-[2-甲氧基-4-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]乙酰胺(P35)在15℃將4-(3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮(P34，4.0g，19.8mmol)少量多次加入到攪拌的濃硝酸(16mL)和濃硫酸(1.6mL)的混合物中，混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，然后加入到迅速攪拌的冰水混合物(300mL)中。過濾收集淺黃色固體，用水洗滌，真空干燥，得到4-(3-甲氧基-2-硝基苯基)-2H-噠嗪-3-酮、4-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2H-噠嗪-3-酮和4-(5-甲氧基-2-硝基苯基)-2H-噠嗪-3-酮的混合物；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 248(C11H9N3O4預(yù)計(jì)有在m/z 248的[M+H]+)。
將上述獲得的硝基異構(gòu)體的混合物(4.76g)溶于氫氧化鈉(1.64g，41mmol)在水(120mL)和N，N-二甲基甲酰胺(14mL)中的溶液中，加入10％碳載鈀(0.2g)，混合物在室溫下在氫氣中(15psi)振搖16小時(shí)，加入2M氫氧化鈉(6mL)使沉淀物溶解，加入另一份10％碳載鈀(0.2g)，繼續(xù)氫化6小時(shí)。濾過的溶液通過加入濃鹽酸酸化到pH 2.0。溶液蒸干，含有4-(2-氨基-3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮、4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮和4-(2-氨基-5-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮的殘余物在40℃真空干燥過夜。
將上述混合物溶于水(350mL)中，加入三水合乙酸鈉(30g)，混合物在冰浴中冷卻。加入乙酸酐(25mL)，10分鐘后，除去冰浴并繼續(xù)另外攪拌30分鐘。蒸干混合物，殘余物用二氯甲烷/甲醇的混合物(9∶1，250mL)提取，提取液用硅膠色譜法部分純化(硅膠，含5-10％甲醇的二氯甲烷)，以洗脫順序得到N-[2-甲氧基-4-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]乙酰胺，N-[4-甲氧基-2-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]乙酰胺和N-[2-甲氧基-6-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]乙酰胺。最先洗脫的異構(gòu)體從乙酸乙酯結(jié)晶，得到純的N-[2-甲氧基-4-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]乙酰胺；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 260(C13H13N3O3預(yù)計(jì)有在m/z 260的[M+H]+)。
制備例364-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2H-噠嗪-3-酮(P36)N-[2-甲氧基-4-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)苯基]乙酰胺(P35，0.42g)和6M鹽酸(20mL)的混合物加熱回流30分鐘，冷卻并濃縮后，將殘余物溶于稀氫氧化鈉中，在冰浴冷卻下加入稀鹽酸調(diào)節(jié)pH 5-6，過濾收集得到的固體，用冷水洗滌，并真空干燥，得到標(biāo)題化合物；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 218(C11H11N3O2預(yù)計(jì)有在m/z 218的[M+H]+)。
制備例372-甲氧基-3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)吡嗪(P37)在-30℃將2，2，6，6-四甲基哌啶(0.71mL，4.21mmol)加入到正丁基鋰(1.6M，2.6mL，4.16mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液中。使混合物回溫到0℃并在該溫度攪拌15分鐘。然后將溶液冷卻到-70℃，加入2-甲氧基吡嗪(200mg，1.80mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液，然后混合物在該溫度攪拌30分鐘，隨后在-70℃加入氯化鋅(500mg，3.67mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液，然后使混合物緩慢回溫到室溫，向有機(jī)鋅衍生物中加入含有四(三苯基膦)鈀(0)(83mg，0.07mmol)和4-溴-2-甲氧基-1-硝基苯(459mg，1.98mmol)的四氫呋喃(5mL)溶液，混合物在65℃加熱2小時(shí)，然后，反應(yīng)混合物用含有乙二胺四乙酸(1.1g，3.7mmol)的水(10mL)溶液水解，所述溶液已經(jīng)用飽和碳酸鉀水溶液略微堿化。水相用二氯甲烷(3×100mL)提取，合并的提取液用硫酸鎂干燥，并真空濃縮，產(chǎn)物通過硅膠色譜法純化，用含0-80％乙酸乙酯的己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物，為固體MS(APCI+ve)[M+H]+，在m/z 262(C12H11N3O4預(yù)計(jì)有在m/z262的[M+H]+)。
制備例38將3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1H-吡嗪-2-酮(P38)
將亞硫酰氯(2mL)加入到2-甲氧基-3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)吡嗪(P37，340mg，1.30mmol)的乙醇(10mL)溶液中，反應(yīng)混合物加熱回流24小時(shí)，然后真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為固體；MS(APCI+ve)[M+H]+，在m/z 248(C11H9N3O4預(yù)計(jì)有在m/z 248的[M+H]+)。
制備例39N-乙?；?2-(4-硝基苯基)乙酰胺(P39)將2-(4-硝基苯基)乙酰胺(7.25g，40.3mmol)在乙酸酐(30mL)中攪拌，同時(shí)加入三氟化硼-乙酸復(fù)合物(1.5mL，10.8mmol)，混合物攪拌4天，用另一份三氟化硼乙酸復(fù)合物(3.0mL，21.6mmol)處理，另外攪拌1天，然后用乙酸鈉(50g)的水(250mL)溶液稀釋，回溫到100℃，持續(xù)20分鐘，冷卻到室溫，濾出固體，用水洗滌，得到標(biāo)題化合物，為粉末；LC/MS(ES-ve)[M-H]-，在m/z 221(C10H10N2O4預(yù)計(jì)有在m/z 221的[M-H]-)。
制備例402，6-二甲基-5-(4-硝基苯基)-4(1H)-嘧啶酮(P40)將N-乙?；?2-(4-硝基苯基)乙酰胺(P39，3.12g，14.1mmol)和三氟化硼-乙酸復(fù)合物(7.5mL，54.0mmol)在乙酸酐(100mL)中在60℃攪拌20小時(shí)，冷卻，真空蒸干。加入乙酸(100mL)和乙酸銨(8g)，混合物回流攪拌1小時(shí)，然后再次真空蒸發(fā)至干，將殘余物溶于水(100mL)和乙酸乙酯(50mL)中，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，濾出固體，用乙酸乙酯、水洗滌，真空干燥，得到標(biāo)題化合物，為粉末；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 246(C12H11N3O3預(yù)計(jì)有在m/z 246的[M+H]+)。
制備例41(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-(4-硝基苯基)-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P41)將2，6-二甲基-5-(4-硝基苯基)-4(1H)-嘧啶酮(P40，0.25g，1.02mmol)、(R)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)丁酸甲酯(P10，0.337g，1.18mmol)和碳酸銫(0.67g，2.06mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中攪拌16小時(shí)，然后用乙酸乙酯(50mL)稀釋，用水(2x)和鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，并真空蒸發(fā)。用硅膠急驟色譜法純化，用含20-100％乙酸乙酯的己烷洗脫，最初得到推測(cè)的O-烷基化物質(zhì)，然后是標(biāo)題化合物，蒸干后為固體。LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 436(C24H25N3O5預(yù)計(jì)有在m/z 436的[M+H]+)。
制備例42(3R)-3-(4-{[5-(4-氨基苯基)-2，4-二甲基-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]-甲基}苯基)丁酸甲酯(P42)將(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-(4-硝基苯基)-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}-苯基)丁酸甲酯(P41，0.266g，0.611mmol)和二水合氯化錫(II)(0.69g，3.06mmol)在乙醇(10mL)和乙酸乙酯(10mL)的混合物中回流攪拌2小時(shí)，冷卻，用過量的碳酸氫鈉固體處理，通過硅藻土過濾混合物，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥，真空蒸干，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物；LC/MS(ES+ve)[M+H]-，在m/z 406(C24H27N3O3預(yù)計(jì)有在m/z 406的[M+H]-)。
制備例43(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[4-({[(2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)-苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P43)將(3R)-3-(4-{[5-(4-氨基苯基)-2，4-二甲基-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P42，0.225g，0.555mmol)和鄰甲苯基異氰酸酯(0.083mL，0.670mmol)在無水二氯甲烷(10mL)中攪拌16小時(shí)，將反應(yīng)混合物直接施加到急驟硅膠柱上，用含40-100％乙酸乙酯的己烷洗脫，得到被起始原料污染的標(biāo)題化合物。重復(fù)該反應(yīng)，攪拌4天，如上進(jìn)行色譜法純化，然后得到純的標(biāo)題化合物，為膠狀物；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 539(C32H34N4O4預(yù)計(jì)有在m/z 539的[M+H]+)。
制備例44[3-甲氧基-4-硝基苯基]乙腈(P44)將2-硝基苯甲醚(8.0mL，65.5mmol)和[(4-氯苯基)氧基]乙腈(12.0g，71.6mmol)溶于無水N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中并在-20℃將其滴加到攪拌的叔丁醇鉀(16.1g，143.7mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液/懸浮液中。混合物在-20℃攪拌30分鐘，傾入到冰/2M鹽酸中，攪拌1小時(shí)，濾出得到的半固體，用水洗滌，溶于乙酸乙酯，無水硫酸鎂干燥，并真空蒸發(fā)，得到黑色油狀物(17.14g)。通過硅膠急驟色譜法純化，用含0-60％乙酸乙酯的己烷洗脫，得到較快洗脫的異構(gòu)體，為標(biāo)題化合物，固體；LC/MS(ES-ve)[M-H]-，在m/z 191(C9H8N2O3預(yù)計(jì)有在m/z 191的[M-H]-)。
制備例45[3-甲氧基-4-硝基苯基]乙酸(P45)將[3-甲氧基-4-硝基苯基]乙腈(P44，2.43g，12.7mmol)在濃鹽酸(50mL)中回流攪拌1小時(shí)，將混合物冷卻，蒸干，與水研磨。濾出固體并干燥，得到標(biāo)題化合物，為固體；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z212(C9H9NO5預(yù)計(jì)有在m/z 212的[M+H]+)。
制備例462-[3-甲氧基-4-硝基苯基]乙酰胺(P46)將[3-甲氧基-4-硝基苯基]乙酸(P45，1.70g，8.1mmol)在亞硫酰氯(10mL)中回流攪拌1小時(shí)，然后蒸干，將殘余物溶于無水四氫呋喃(20mL)中，然后在劇烈攪拌下緩慢加入氨水(d 0.88，20mL)，放置3天后，混合物用水(100mL)稀釋，用乙酸乙酯提取，將提取液用無水硫酸鎂干燥，并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為固體；LC/MS(ES-ve)[M-H]-，在m/z 209(C9H10N2O4預(yù)計(jì)有在m/z 209的[M-H]-)。
制備例472，6-二甲基-5-[3-甲氧基-4-硝基苯基]-4(1H)-嘧啶酮(P47)將2-[3-甲氧基-4-硝基苯基]乙酰胺(P46，1.23g，5.86mmol)和三氟化硼-乙酸復(fù)合物(3.3mL，23.7mmol)在乙酸酐(30mL)中在60℃攪拌16小時(shí)，冷卻，真空蒸干，加入乙酸(30mL)和乙酸銨(4g)，混合物攪拌回流1小時(shí)，然后再次真空蒸發(fā)至干，將殘余物溶于水(100mL)和乙酸乙酯(50mL)中，用飽和碳酸氫鈉溶液中和，濾出固體，用乙酸乙酯、水洗滌，真空干燥，得到標(biāo)題化合物，為固體；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 276(C13H13N3O4預(yù)計(jì)有在m/z 276的[M+H]+)。
制備例48(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[3-甲氧基-4-硝基苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P48)將2，6-二甲基-5-[3-甲氧基-4-硝基苯基]-4(1H)-嘧啶酮(P47，0.27g，0.98mmol)、(3R)-3-(4-{[(甲基磺?；?氧基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P10，0.337g，1.18mmol)和碳酸銫(0.67g，2.06mmol)在無水N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中攪拌16小時(shí)，用乙酸乙酯(50mL)稀釋，用水(x2)和鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥并真空濃縮。通過硅膠急驟色譜法純化，用含20-100％乙酸乙酯的己烷洗脫，最初得到推測(cè)的O-烷基化物質(zhì)，然后是標(biāo)題化合物，為膠狀物；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 466(C25H27N3O6預(yù)計(jì)有在m/z 466的[M+H]+)。
制備例49(3R)-3-(4-{[5-[4-氨基-3-甲氧基苯基]-2，4-二甲基-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P49)將(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[3-甲氧基-4-硝基苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P48，0.246g，0.529mmol)和二水合氯化錫(II)(0.60g，2.66mmol)在乙醇(10mL)和乙酸乙酯(10mL)的混合物中回流攪拌2小時(shí)，冷卻，用過量的碳酸氫鈉固體處理，通過硅藻土過濾混合物，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥，真空蒸干，得到標(biāo)題化合物，為膠狀物；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 436(C25H29N3O4預(yù)計(jì)有在m/z 436的[M+H]+)。
制備例50(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[3-甲氧基-4-({[(2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P50)將(3R)-3-[4-{[5-[4-氨基-3-甲氧基苯基]-2，4-二甲基-6-氧代-1[6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯[P49.0.184g，0.423mmol)和鄰甲苯基異氰酸酯(0.063mL，0.509mmol)在無水二氯甲烷(10mL)中攪拌16小時(shí)，將反應(yīng)混合物直接施加到急驟硅膠柱上，用含40-100％乙酸乙酯的己烷洗脫，得到被起始原料污染的標(biāo)題化合物，重復(fù)該反應(yīng)，攪拌4天，如上進(jìn)行色譜法純化，然后得到純的標(biāo)題化合物，為膠狀物；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 569(C33H36N4O5預(yù)計(jì)有在569的[M+H]+)。
實(shí)施例



*以Na鹽形式制備的化合物以母體酸的質(zhì)量計(jì)算值表示上述列表中的化合物E1-E18使用如下所述的方法制備。
實(shí)施例9(R，S)-3-(4-{5-[3-乙氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基}苯基)丁酸(E9)將(R，S)-3-(4-{5-[3-乙氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6-氧代-6H-嘧啶-1-基甲基}苯基)丁酸乙酯(P18，348mg，0.61mmol)在四氫呋喃(16mL)中的溶液用0.5N氫氧化鋰水溶液(13mL)處理，反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)，然后用2N鹽酸酸化，將殘余物用乙酸乙酯(20mL)稀釋，分離有機(jī)層后，水相再次用乙酸乙酯(2×20mL)提取，合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物，為無色固體；1H NMRδ(DMSO-d6)1.18(3H，d)，1.41(3H，t)，2.27(3H，s)，2.46(2H，m)，3.15(1H，m)，4.18(2H，q)，5.15(2H，s)，6.97(1H，ap.t)，7.15(1H，ap.t)，7.18(1H，d)，7.27(5H，m)，7.42(1H，d)，7.71(1H，d)，8.13(1H，d)，8.19(1H，s)，8.48(1H，s)，8.63(1H，s)，8.67(1H，s)，12.05(1H，br.s)；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 541(C31H32N4O5預(yù)計(jì)有在m/z 541的[M+H]+)。
相應(yīng)的手性的甲氧基取代的化合物E7和E8按照制備例14-18的類似方法從已知的(3-甲氧基-4-硝基苯基)乙腈[PCT國(guó)際申請(qǐng)WO86/01204]制備，不同之處在于是在16小時(shí)而非48小時(shí)內(nèi)將乙腈水解得到乙酰胺。
實(shí)施例4(R)-3-(4-{6-氧代-5-[4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6H-嘧啶-1-基甲基}苯基)丁酸(E4)(R)-3-(4-{6-氧代-5-[4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6H-嘧啶-1-基甲基}苯基)丁酸甲酯(P21，380mg，0.75mmol)在四氫呋喃(10mL)中與0.5N氫氧化鋰(10mL)在室溫下攪拌3小時(shí)，反應(yīng)混合物用2N鹽酸水溶液酸化到pH 1，用乙酸乙酯提取，有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到標(biāo)題化合物，為固體；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 497(C29H28N4O4預(yù)計(jì)有在m/z 497的[M+H]+)；1H NMRδ(DMSO-d6)1.18(3H，d)，2.24(3H，s)，2.50(2H，d)，3.14(1H，q)，5.13(2H，s)，6.93(1H，t)，7.13(2H，m)，7.25(2H，d)，7.32(2H，d)，7.50(2H，d)，7.65(2H，d)，7.85(1H，d)，7.96(1H，s)，8.12(1H，s)，8.65(1H，s)，9.16(1H，s)，11.92(1H，s)。
化合物E1和E2使用本文中的有關(guān)制備例和實(shí)施例的類似方法從3-(4-氨基苯基)-1H-吡嗪-2-酮(P22)制備，例如，E1的制備為，按照制備例17的方法，使P22與鄰甲苯基異氰酸酯反應(yīng)，得到的吡嗪酮用(R)-3-(4-甲磺酰氧基甲基苯基)丁酸甲酯(P10)烷基化，得到的酯通過實(shí)施例9的方法水解。
化合物E10-E12按照上述關(guān)于E1的類似方法使用適當(dāng)?shù)耐榛噭?-(4-氨基苯基)-2H-噠嗪-3-酮[在EP 0138344中有述]制備。
實(shí)施例11(R)-3-(4-{6-氧代-5-[4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6H-噠嗪-1-基甲基}苯基)-戊酸鈉鹽(E11)向在四氫呋喃(5mL)中的(R)-3-(4-{6-氧代-5-[4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6H-噠嗪-1-基甲基}苯基)戊酸甲酯(P32)中加入0.5M氫氧化鋰(5mL)，溶液在環(huán)境溫度攪拌3小時(shí)，加入10％檸檬酸溶液直到pH 5，產(chǎn)物用乙酸乙酯(2×50mL)提取，然后用水(2×50mL)洗滌，有機(jī)層濃縮，然后通過硅膠色譜法純化，用含0-10％甲醇的二氯甲烷梯度洗脫，將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，濃縮溶液，加入氫氧化鈉(2M，93μL，1當(dāng)量)，溶液再次濃縮，得到標(biāo)題化合物，為白色固體；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 511(C30H30N4O4(游離酸)預(yù)計(jì)有在m/z 511的[M+H]+)；1H NMRδ(DMSO-d6)0.67(3H，t)，1.44(1H，m)，1.67(1H，m)，2.16(1H，dd)，2.22(1H，d)，2.24(3H，s)，2.93(1H，m)，5.24(1H，d)，5.30(1H，d)，6.93(2H，dd)，7.11(1H，dd)，7.14(1H，d)，7.15(2H，d)，7.23(2H，d)，7.53(2H，d)，7.59(2H，d)，7.62(1H，d)，7.81(1H，d)，7.92(1H，d)，9.84(1H，br.s)，11.12(1H，br.s)。
其他手性的乙基取代的化合物E2、E5、E6和E12按照化合物E11的類似方法制備。
實(shí)施例13(R)-3-(4-{5-[3-甲氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6-氧代-6H-噠嗪-1-基甲基}苯基)丁酸(E13)從P36制備標(biāo)題化合物，首先按照制備例17的方法與鄰甲苯基異氰酸酯反應(yīng)，得到1-[2-甲氧基-4-(3-氧代-2，3-二氫噠嗪-4-基)-苯基]-3-鄰甲苯基脲，然后按照制備例18的一般方法用甲磺酸酯P10烷基化，得到(R)-3-(4-{5-[3-甲氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6-氧代-6H-噠嗪-1-基甲基}苯基)丁酸甲酯。
然后(R)-3-(4-{5-[3-甲氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-6-氧代-6H-噠嗪-1-基甲基}-苯基)丁酸甲酯(84mg，0.155mmol)在四氫呋喃(5mL)中用0.5M氫氧化鋰(7mL)處理，在室溫下攪拌6.5小時(shí)，然后按照實(shí)施例9的方法分離產(chǎn)物；MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 527(C30H30N4O5預(yù)計(jì)有在m/z 527的[M+H]+)；1H NMRδ(DMSO-d6)1.18(3H，d)，2.26(3H，s)，2.47(2H，溶劑使之模糊)，3.11(1H，m)，3.94(3H，s)，5.30(2H，s)，6.96(1H，t)，7.12-7.28(7H，m)，7.52(2H，dd)，7.66(2H，m)，7.80(1H，d)，8.00(2H，d)，8.23(1H，d)，8.61(1H，s)，8.83(1H，s)，12.06(1H，s)。
實(shí)施例14
(R)-3-(4-{3-[3-甲氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-2-氧代-2H-吡嗪-1-基甲基}-苯基)丁酸(E14)標(biāo)題化合物按照本文所述的那些方法從P38制備，即按照制備例19的方法將3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-1H-吡嗪-2-酮(P38)轉(zhuǎn)化為(R)-3-{4-[3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2-氧代-2H-吡嗪-1-基甲基]苯基}丁酸甲酯；按照制備例20的方法，還原得到(R)-3-{4-[3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-2-氧代-2H-吡嗪-1-基甲基]苯基}丁酸甲酯。然后按照制備例21的方法將胺轉(zhuǎn)化為脲(R)-3-(4-{3-[3-甲氧基-4-(3-鄰甲苯基脲基)苯基]-2-氧代-2H-吡嗪-1-基甲基}苯基)丁酸甲酯，并最終按照實(shí)施例4的方法進(jìn)行甲酯的水解，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例16(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[4-({[(2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸(E16)將(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[4-({[(2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P43，0.230g，0.427mmol)在四氫呋喃(5mL)和0.5M氫氧化鋰(5mL)的混合物中攪拌4小時(shí)，混合物用水稀釋，用乙醚洗滌，用2M鹽酸羧化，并用乙酸乙酯提取，當(dāng)提取液用無水硫酸鎂干燥時(shí)，開始發(fā)生沉淀，因此將干燥劑用含20％甲醇的二氯甲烷充分洗滌，蒸發(fā)濾液，得到白色固體，將其溶于水中，過濾后，用水洗滌并干燥，得到標(biāo)題化合物，為白色固體；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 525(C31H32N4O4預(yù)計(jì)有在m/z 525的[M+H]+)。
實(shí)施例18(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[3-甲氧基-4-({[(2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸(E18)(3R)-3-(4-{[2，4-二甲基-5-[3-甲氧基-4-({[(2-甲基苯基)氨基]羰基}氨基)苯基]-6-氧代-1(6H)-嘧啶基]甲基}苯基)丁酸甲酯(P50，0.200g，0.352mmol)在四氫呋喃(5mL)和0.5M氫氧化鋰(5mL)的混合物中攪拌2.5小時(shí)，混合物用水稀釋，用乙醚洗滌，用2M鹽酸酸化，用乙酸乙酯提取，將提取液用無水硫酸鎂干燥，并真空蒸發(fā)，得到灰白色的半固體。其通過制備性HPLC純化，得到標(biāo)題化合物，為白色固體；LC/MS(ES+ve)[M+H]+，在m/z 555(C32H34N4O5預(yù)計(jì)有在m/z 555的[M+H]+)。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物 其中A、B和D獨(dú)立地為芳基或雜芳基；R1、R2和R3獨(dú)立地為C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、羥基、氰基、CF3、OCF3、硝基、C1-6烷硫基、氨基、單-或二-C1-6烷基氨基、羧基、C1-6烷?；?、酰胺基、單-或二-C1-6烷基酰胺基、-NHCOR9或-NHSO2R9{其中R9為C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基或苯基(任選被最多三個(gè)選自以下的基團(tuán)取代C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、氰基、苯基和CF3)}或?yàn)榛鶊F(tuán)-E-(CH2)1-6NRxRy(其中E為單鍵或-OCH2-，Rx和Ry獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或組合在一起形成5-7元雜環(huán))；R4和R4′獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、鹵素或C1-6烷氧基；V為O、S、NH、N-C1-6烷基、NNO2或NCN；W、X、Y和Z獨(dú)立地為C、CH或N，條件是X、Y和Z中的至少一個(gè)為N；L為-(CH2)q-或-(CH2)q′O-，其中q為0、1、2或3，q′為2或3；J為(i)基團(tuán)-CR5＝CR6，其中R5和R6獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；(ii)基團(tuán)-CHR7-CHR8，其中R7和R8獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基、雜芳基、其中R9定義同上的基團(tuán)-NHCOR9或-NHSO2R9、或?yàn)槠渲蠷x和Ry定義同上的基團(tuán)-(CH2)1-6NRxRy；(iii)單鍵；(iv)-CHR6，其中R6的定義同上；或(v)基團(tuán)-O-CHR10-、-NR11-CHR10-或-CR12R13-CHR10-，其中R10和R11獨(dú)立地為氫或C1-6烷基，R12和R13獨(dú)立地為C1-6烷基，或R12和R13組合在一起形成C3-7環(huán)烷基或5-7元雜環(huán)；m、n和p獨(dú)立地為0、1、2或3；和t為0、1或2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物為式(I′)化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物 其中R1-R4、m、n、p、t、A、B、D、L、J、V、W、X、Y和Z的定義同式(I)。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中A為苯基或吡啶基。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中B為苯基。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中D為苯基或吡啶基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物為式(Ia)化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物 其中R1-R4、R4′、L、J、X、Y、Z、m、n、p和t的定義同式(I)。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中化合物為式(Ia′)化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物 其中R1-R4、L、J、X、Y、Z、m、n、p和t的定義同式(I)。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中R1、R2和R3獨(dú)立地選自C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基、氰基和CF3。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中J選自-CH＝CH-、-(CH2)2-和-CHR7-CH2-，其中R7為C1-6烷基。
10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中L為-(CH2)q-，其中q為0、1、2或3。
11.權(quán)利要求1的化合物，其選自E1-E18或其藥學(xué)可接受的衍生物。
12.制備式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物的方法，該方法包括使式(II)的羧酸酯衍生物水解 其中R1-R4、R4′、m、n、p、t、A、B、D、L、J、V、W、X、Y和Z的定義同式(I)，R為能夠形成羧酸酯和任選地隨后形成其藥學(xué)可接受的衍生物的基團(tuán)。
13.用于治療應(yīng)用的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的化合物。
14.藥物組合物，其包括與藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑混合的治療有效量的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的化合物。
15.藥物組合物，其包括權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的化合物和另一種治療活性劑。
16.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的化合物在制備用于治療或預(yù)防其中α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的抑制劑是有益的病況的藥物中的應(yīng)用。
17.治療或預(yù)防其中α4整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞粘附的抑制劑是有益的病況的方法，該方法包括對(duì)需要的患者給用安全和有效量的權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的化合物。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述病況選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)；哮喘；變應(yīng)性病況，如鼻炎；成人呼吸窘迫綜合征；AIDS-癡呆；阿爾茨海默氏病；心血管疾病；血栓形成或有害的血小板聚集；血栓溶解后的再阻塞；再灌注損傷；皮膚炎癥性疾病，如牛皮癬、濕疹、接觸性皮炎和特應(yīng)性皮炎；糖尿病(如胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性糖尿病)；多發(fā)性硬化；系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)；炎癥性腸病，如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病(局限性回腸炎)和隱窩炎(例如在直腸結(jié)腸切除術(shù)和回腸肛門吻合術(shù)后導(dǎo)致)；與白細(xì)胞浸潤(rùn)到胃腸道有關(guān)的疾病，如乳糜瀉、非熱帶性口炎性腹瀉、與血清反應(yīng)陰性的關(guān)節(jié)病有關(guān)的腸病、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎或膠原性結(jié)腸炎、和嗜酸細(xì)胞性胃腸炎；與白細(xì)胞浸潤(rùn)到其它上皮排列組織有關(guān)的疾病，所述組織如皮膚、尿路、呼吸氣道、和關(guān)節(jié)滑膜；胰腺炎；乳腺炎(乳腺)；肝炎；膽囊炎；膽管炎或膽管周炎(膽管、和肝臟周圍組織)；支氣管炎；竇炎；肺的導(dǎo)致間質(zhì)性纖維化的炎癥性疾病，如超敏性肺炎；膠原病(在SLE和RA中)；結(jié)節(jié)??；骨質(zhì)疏松癥；骨關(guān)節(jié)炎；動(dòng)脈粥樣硬化；腫瘤性疾病，包括腫瘤性或癌性生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)移；傷口愈合增強(qiáng)；某些眼病如視網(wǎng)膜脫離、變應(yīng)性結(jié)膜炎和自身免疫葡萄膜炎；舍格倫綜合征；器官移植后的排斥(慢性和急性的)；宿主抗移植物或移植物抗宿主??；內(nèi)膜過度增生；動(dòng)脈硬化(包括移植后的移植物動(dòng)脈硬化)；術(shù)后如經(jīng)皮腔內(nèi)冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)和經(jīng)皮腔內(nèi)動(dòng)脈再疏通后的再梗塞或再狹窄；腎炎；瘤性血管生成；惡性腫瘤；多發(fā)性骨髓瘤和骨髓瘤誘發(fā)的骨吸收；膿毒??；和中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，如中風(fēng)、外傷性腦損傷和脊髓損傷及梅尼埃病。
19.權(quán)利要求17的方法，其中所述病況為哮喘、變應(yīng)性病況、炎癥性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎、多發(fā)性硬化或器官移植后的排斥。
20.式(II)的化合物 其中R1-R4、R4′、m、n、p、t、A、B、D、L、J、V、W、X、Y和Z的定義同式(I)，R為能夠形成羧酸酯的基團(tuán)。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)化合物、其制備方法、包括其的組合物及其在治療或者預(yù)防能夠通過抑制細(xì)胞粘附進(jìn)行調(diào)節(jié)的疾病中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07D241/18GK1918133SQ20058000447
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2005年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月9日
發(fā)明者R·W·沃德, J·威瑟林頓 申請(qǐng)人:田邊制藥株式會(huì)社