本發(fā)明涉及以干酪乳桿菌作為有效成分的衣原體傳染病預(yù)防治療劑。
背景技術(shù):
衣原體傳染病是由于衣原體屬的微生物感染咽喉、生殖器而引起的疾病。特別是,在女性感染的情況下,伴隨著宮頸炎、骨盆內(nèi)炎癥性疾病等重癥的情況下,成為由輸卵管障礙導(dǎo)致的不孕的原因。
另外,衣原體傳染病有時(shí)幾乎沒(méi)有自覺(jué)癥狀,有時(shí)也會(huì)在沒(méi)察覺(jué)到衣原體傳染病的狀態(tài)下懷孕。該情況下,流產(chǎn)、早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)高而成為大的社會(huì)問(wèn)題。另外,推測(cè)該衣原體傳染病會(huì)以年輕人為中心而感染人數(shù)增大,然而,幾乎沒(méi)有自覺(jué)癥狀的情況下,沒(méi)有治療的患者多且沒(méi)有察覺(jué)到感染的情況下進(jìn)行性行為,從而擴(kuò)大了感染而成為大的社會(huì)問(wèn)題。
到目前為止,對(duì)于衣原體傳染病的預(yù)防、治療方法進(jìn)行了各種研究,例如,報(bào)告了針對(duì)衣原體屬微生物的抗菌藥(專利文獻(xiàn)1)。
但是,衣原體屬的微生物為細(xì)胞內(nèi)寄生菌,因此存在容易持續(xù)感染而抗菌藥難以起作用的問(wèn)題。另外,為了完全消滅衣原體屬的微生物,優(yōu)選長(zhǎng)期給藥,但通常地抗菌藥會(huì)產(chǎn)生副作用而不適合長(zhǎng)期給藥的情況也多。
現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn)1:日本特開(kāi)平9-216824號(hào)公報(bào)
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
發(fā)明要解決的問(wèn)題
因此,本發(fā)明的課題在于提供安全性高、能夠長(zhǎng)期給藥的衣原體傳染病預(yù)防治療劑以及起因于衣原體傳染病的不孕癥的改善劑。
用于解決問(wèn)題的方案
本發(fā)明人等,為了解決上述問(wèn)題進(jìn)行了深入研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),通過(guò)給予干酪乳桿菌,能夠?qū)崿F(xiàn)衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療。另外,本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn),通過(guò)給予干酪乳桿菌,也能夠改善起因于衣原體傳染病的不孕癥,至此完成本發(fā)明。
即,本發(fā)明為以干酪乳桿菌作為有效成分的衣原體傳染病預(yù)防治療劑。
另外,本發(fā)明為起因于衣原體傳染病的不孕癥的改善劑,其以干酪乳桿菌作為有效成分。
進(jìn)而,本發(fā)明為用于衣原體傳染病預(yù)防治療劑的制造的、干酪乳桿菌的使用;用于衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療的干酪乳桿菌;或者特征在于給予干酪乳桿菌的衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療方法。
另外,進(jìn)一步,本發(fā)明為用于起因于衣原體傳染病的不孕癥的改善劑制造的、干酪乳桿菌的使用;用于改善起因于衣原體傳染病的不孕癥的干酪乳桿菌;或者特征在于給予干酪乳桿菌的起因于衣原體傳染病的不孕癥的改善方法。
發(fā)明的效果
本發(fā)明的衣原體傳染病預(yù)防治療劑是以干酪乳桿菌作為有效成分的、能夠通過(guò)經(jīng)口給藥或?qū)Ω腥静课恢苯咏o藥來(lái)進(jìn)行衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療的優(yōu)異的物質(zhì)。
另外,本發(fā)明的起因于衣原體的不孕癥的改善劑以干酪乳桿菌作為有效成分、通過(guò)經(jīng)口給藥或?qū)Ω腥静课坏闹苯咏o藥來(lái)改善起因于衣原體的不孕癥。本發(fā)明中不孕癥包括:盡管希望妊娠且進(jìn)行了一定期間的性生活但未妊娠的狀態(tài);以及、即便妊娠也會(huì)因?yàn)榱鳟a(chǎn)、早產(chǎn)而導(dǎo)致胎兒至生育為止保不住的狀態(tài)兩者。因此,本發(fā)明的不孕癥改善劑能夠使雌性個(gè)體的生育率提高。需要說(shuō)明的是,本發(fā)明中生育率是指多個(gè)與雄性個(gè)體交配的雌性個(gè)體中正常生育的雌性個(gè)體的比例。
附圖說(shuō)明
圖1是表示實(shí)施例1中測(cè)定的陰道內(nèi)的衣原體的菌數(shù)的圖。
圖2是表示實(shí)施例2中算出的小鼠的生育率的圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明的衣原體傳染病預(yù)防治療劑以及不孕癥的改善劑(以下,也稱為“本發(fā)明預(yù)防治療劑”)的有效成分的干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)只要是該分類的菌株則沒(méi)有特別限定,可以使用市售的菌株、保藏于ATCC等保藏機(jī)構(gòu)的菌株、新發(fā)現(xiàn)的菌株、或者它們的變異株等。作為這樣的干酪乳桿菌,可列舉出例如:干酪乳桿菌YIT9018、干酪乳桿菌YIT9029等。這些干酪乳桿菌中,優(yōu)選干酪乳桿菌YIT9029。需要說(shuō)明的是,上述干酪乳桿菌沒(méi)有過(guò)氧化氫的產(chǎn)生能力、安全性高。
上述干酪乳桿菌中,干酪乳桿菌YIT9029是本申請(qǐng)人于1987年5月18日、在通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術(shù)院微生物工業(yè)技術(shù)研究所(需要說(shuō)明的是,前述微生物工業(yè)技術(shù)研究所現(xiàn)在成為獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基盤(pán)機(jī)構(gòu)專利生物保藏中心,轉(zhuǎn)移至新地址〒292-0818千葉縣木更津市上總鐮足2丁目5番地8120號(hào)室。)以FERM BP-1366進(jìn)行了保藏。
另外,對(duì)于干酪乳桿菌YIT9018,本申請(qǐng)人已經(jīng)于1984年11月14日在通商產(chǎn)業(yè)省工業(yè)技術(shù)院微生物工業(yè)技術(shù)研究所(需要說(shuō)明的是,前述微生物工業(yè)技術(shù)研究所現(xiàn)在成為獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià)技術(shù)基盤(pán)機(jī)構(gòu)專利生物保藏中心,轉(zhuǎn)移至新地址〒292-0818千葉縣木更津市上總鐮足2丁目5番地8 120號(hào)室。)以FERM BP-665進(jìn)行了保藏。
對(duì)于本發(fā)明預(yù)防治療劑中的上述干酪乳桿菌的形態(tài)沒(méi)有特別的限定,可以例示出菌體或菌體破碎物等。另外,為菌體的情況下,可以為活菌、死菌的任一者。本發(fā)明預(yù)防治療劑中的干酪乳桿菌的含量,沒(méi)有特別的限定,只要是與后述的劑型相匹配的量即可,例如,以活菌計(jì),可列舉出1×107~1×1013CFU。另外,為死菌的情況下,可以為將活菌數(shù)1×107~1×1013CFU的物質(zhì)用加熱等死菌化即可。另外,對(duì)于其給藥時(shí)間,沒(méi)有特別的限定,可以在感染前以預(yù)防為目的進(jìn)行給藥;也可以在感染后以治療為目的進(jìn)行給藥,但在感染衣原體后妊娠的情況下,流產(chǎn)/早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)變高,因此優(yōu)選在妊娠前并且在感染前以預(yù)防為目的給予本發(fā)明的預(yù)防治療劑。對(duì)于其給藥時(shí)間沒(méi)有特別的限定,但以預(yù)防為目的的情況下,優(yōu)選在早于感染7天前持續(xù)地進(jìn)行給藥。另外,以治療為目的的情況下,優(yōu)選在感染后持續(xù)給藥3天以上。對(duì)于給藥時(shí)間的上限,沒(méi)有特別的限定,可例示出1~2周的持續(xù)給藥;對(duì)于每1天的給藥次數(shù),也沒(méi)有特別的限定,可例示出1天1次~1天3次。另外,以不孕癥的改善劑形式給藥的情況下,也可以以上述的預(yù)防治療為目的的情況同樣地進(jìn)行給藥。
本發(fā)明預(yù)防治療劑含有上述干酪乳桿菌作為有效成分即可,所以可以僅由干酪乳桿菌構(gòu)成,也可以以與藥學(xué)允許的載體相組合而構(gòu)成。
作為藥學(xué)上允許的載體,可列舉出例如:葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖、環(huán)糊精、脂肪酸甘油酯、聚乙二醇、羥乙基淀粉、乙二醇、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、氨基酸、明膠、白蛋白、水、生理鹽水等。另外,也可以根據(jù)需要,適宜添加穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、粘結(jié)劑、等滲劑、賦型劑等常用的添加劑。
本發(fā)明預(yù)防治療劑的劑型沒(méi)有特別的限定,例如:液劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑、栓劑、外用劑等。另外,這些劑型的本發(fā)明預(yù)防治療劑可以根據(jù)使用了乳酸菌的公知制劑的調(diào)制法進(jìn)行調(diào)制。
這樣得到的本發(fā)明預(yù)防治療劑可以用于由沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)、鼠嗜衣原體(Chlamydia muridarum)等衣原體屬的微生物引起的衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療。
進(jìn)而,本發(fā)明的不孕癥的改善劑改善起因于衣原體傳染病的不孕癥而提高生育率。
需要說(shuō)明的是,本發(fā)明預(yù)防治療劑無(wú)論是經(jīng)口給藥還是經(jīng)陰道給藥等非經(jīng)口給藥都有效果,對(duì)于給藥方法沒(méi)有特別的限定,由于給藥容易且適合于長(zhǎng)期給藥,因此優(yōu)選經(jīng)口給藥。
另外,通過(guò)使食品含有規(guī)定量干酪乳桿菌,能夠制造表現(xiàn)出衣原體傳染病預(yù)防治療作用的食品。即,作為對(duì)最終產(chǎn)品附加衣原體傳染病預(yù)防治療作用而使用的食品添加物(原料)而使用干酪乳桿菌的、含有干酪乳桿菌的用于衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療的食品添加用組合物。對(duì)于本發(fā)明的食品添加用組合物中的上述干酪乳桿菌的形態(tài),沒(méi)有特別的限定,可例示出菌體或菌體破碎物等。另外,為菌體的情況下,可以為活菌、死菌的任一者。對(duì)于本發(fā)明的添加了食品添加用組合物的最終產(chǎn)品中的干酪乳桿菌的含量,沒(méi)有特別的限定,可列舉出例如以活菌計(jì)為1×107~1×1013CFU。另外,為死菌的情況下,可以為將活菌數(shù)1×107~1×1013CFU的物質(zhì)用加熱等死菌化即可。
實(shí)施例
以下,基于實(shí)施例對(duì)本發(fā)明詳細(xì)地進(jìn)行說(shuō)明,但本發(fā)明并不僅限定于這些實(shí)施例。
制造例1
干酪乳桿菌菌液的制作:
在10ml的MRS培養(yǎng)基中在37℃下培養(yǎng)干酪乳桿菌YIT9029(以下,稱為“LcS”)24小時(shí),然后在4℃、5000g、5分鐘的條件下用蔗糖-磷酸鹽谷氨酸緩沖液(sucrose-phosphate gultamate buffer)(以下,稱為“SPG緩沖液”:蔗糖75g/L、L-谷氨酸0.72g/L、磷酸氫二鈉12H2O 6.148g/L、磷酸二氫鉀0.247g/L、蒸餾水、pH7.0)離心2次進(jìn)行洗滌。去除上清,用1ml和10ml的SPG緩沖液進(jìn)行再懸浮,制作LcS菌液。將1ml的SPG緩沖液中再懸浮而成的物質(zhì)用于經(jīng)陰道給藥(LcS活菌數(shù):1×1010CFU/ml);將10ml的SPG緩沖液中再懸浮而成的物質(zhì)設(shè)為經(jīng)口給藥用(LcS活菌數(shù):1×109CFU/ml)。另外,將經(jīng)陰道給藥用和經(jīng)口給藥用的LcS菌液在100℃加熱30分鐘而制成加熱死菌液。
參考制造例1
約氏乳桿菌的菌液的制作
將LcS替換為約氏乳桿菌YIT0219T(Lactobacillus johnsonii標(biāo)準(zhǔn)株:以下,稱為“Lj”),除此以外,與制造例1同樣地制作Lj菌液。
實(shí)施例1
通過(guò)給予LcS的衣原體傳染病的預(yù)防·治療:
(1)感染菌的調(diào)制
將用添加了10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的McCoy細(xì)胞(4×105細(xì)胞/ml)的懸浮液分別注入24孔板中各1ml,在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)、37℃下培養(yǎng)24小時(shí)。使每1ml培養(yǎng)細(xì)胞感染1×105細(xì)胞的鼠嗜衣原體(C.muridarum)ATCC VR123T(以下,稱為“MoPn”)之后,進(jìn)行離心分離而去除上清之后,以成為1μg/ml的方式添加加入了環(huán)己酰亞胺(cycloheximide)的DMEM培養(yǎng)基,在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)、37℃下進(jìn)行72小時(shí)培養(yǎng)。將剝離MoPn感染細(xì)胞進(jìn)行離心分離而得到的沉淀懸浮于SPG緩沖液。對(duì)于MoPn感染細(xì)胞進(jìn)行超聲波處理(28kHz、5秒、10次)、離心分離,分取上清。將上清中的MoPn在4℃、15000g、1小時(shí)的條件下用SPG緩沖液離心2次進(jìn)行洗滌之后,用SPG緩沖液懸浮而制成感染液(1×108細(xì)胞/ml)。
(2)對(duì)小鼠感染MoPn
為了調(diào)節(jié)雌性小鼠的性周期,對(duì)于每1只小鼠皮下注射2.5mg的黃體酮(黃體酮注射液:ASKA Pharmaceutical Co.,Ltd.)。對(duì)該調(diào)節(jié)了性周期的小鼠按照常規(guī)方法用Somnopentyl進(jìn)行了麻醉。對(duì)該麻醉下的每1只小鼠向陰道內(nèi)注入10μl(MoPn菌數(shù):1×106細(xì)胞)的感染液,使小鼠感染MoPn。
(3)菌液的給予(各組6只)
[LcS活菌經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥(Somnopentyl)麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次向陰道內(nèi)給予制造例1中制造的經(jīng)陰道給藥用的LcS菌液10μl(1×108CFU)。
[LcS死菌經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次向陰道內(nèi)給予制造例1中制造的經(jīng)陰道給藥用的LcS加熱死菌液10μl。LcS加熱死菌液10μl在加熱前的LcS活菌數(shù)為1×108CFU。
[Lj活菌經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次對(duì)陰道內(nèi)給予參考制造例1中制造的經(jīng)陰道給藥用的Lj菌液10μl(1×108CFU)。
[對(duì)照經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)陰道給予10μl的SPG緩沖液。
[LcS活菌經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予制造例1中制造的經(jīng)口給藥用的LcS菌液100μl(1×108CFU)。
[LcS死菌經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予制造例1中制造的經(jīng)口給藥用的LcS加熱死菌液100μl。LcS加熱死菌液100μl在加熱前的LcS活菌數(shù)為1×108CFU。
[Lj活菌經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予參考制造例1中制造的經(jīng)口給藥用的Lj菌液100μl(1×108CFU)。
[對(duì)照經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予SPG緩沖液100μl。
(4)MoPn的菌數(shù)的測(cè)定
在感染MoPn后第3天,按照常規(guī)方法,從在戊巴比妥麻醉下出血死的小鼠無(wú)菌地采集陰道組織,使之懸浮在SPG緩沖液中,之后在-80℃下進(jìn)行冷凍保存。將其在室溫下溶解,均質(zhì)化之后,將其破碎液200μl用400μl的加入了RNA保護(hù)液(RNAprotect)的離心管(定量的RT-PCR用:Qiagen)分取,進(jìn)行RNA抽提。之后,使用Qiagen Onestep RT-PCR kit以及沙眼衣原體和鼠嗜衣原體特異性引物、通過(guò)定量的RT-PCR法進(jìn)行測(cè)定。更詳細(xì)地,在50℃、30分鐘;95℃、15分鐘下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),將94℃、20秒;55℃、20秒;72℃、50秒作為1個(gè)循環(huán),進(jìn)行45個(gè)循環(huán)。另外,沙眼衣原體和鼠嗜衣原體特異性引物的堿基序列為:正向引物:TGCATAGATAATTTGTCCTTAACTTG(序列號(hào)1);反向引物:CGAGATTTGACAACTAACTTACCT(序列號(hào)2)。
(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
計(jì)算出各組的MoPn菌數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差,用非參數(shù)曼-惠特尼U檢驗(yàn)(non-parametric Mann-Whitney′s U test)檢驗(yàn)給藥組相對(duì)于對(duì)照組的統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性;用多重比較法(Bonferroni)檢驗(yàn)各組的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。需要說(shuō)明的是,作為統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,使用SPSS Ver.11(SPSS株式會(huì)社),在所有的檢驗(yàn)中,顯著水平在雙側(cè)檢驗(yàn)中為5%。
(6)結(jié)果
將測(cè)定了陰道內(nèi)的MoPn菌數(shù)的結(jié)果示于圖1。
LcS活菌經(jīng)陰道給藥組中,與對(duì)照經(jīng)陰道給藥組比較,陰道內(nèi)的MoPn菌數(shù)為顯著的低值(P<0.01)。在LcS死菌經(jīng)陰道給藥組中,確認(rèn)到了與LcS活菌經(jīng)陰道給藥組相同程度的顯著的感染防御作用(P<0.01)。另一方面,Lj活菌經(jīng)陰道給藥組中,沒(méi)有確認(rèn)到對(duì)于MoPn陰道內(nèi)感染的感染防御作用。圖1中的**表示P<0.01。
在LcS活菌經(jīng)口給藥組中,與對(duì)照經(jīng)口給藥組比較,陰道內(nèi)的MoPn菌數(shù)為顯著的低值(P<0.05);確認(rèn)到了對(duì)于MoPn陰道內(nèi)感染的感染防御作用。進(jìn)一步,對(duì)于LcS死菌經(jīng)口給藥組,也確認(rèn)到了與LcS活菌經(jīng)口給藥組相同程度的顯著的感染防御作用(P<0.05)。另一方面,Lj活菌經(jīng)口給藥組中,沒(méi)有確認(rèn)到對(duì)于MoPn陰道內(nèi)感染的感染防御作用。圖1中的*表示P<0.05。
實(shí)施例2
通過(guò)LcS的給予帶來(lái)的小鼠生育率的改善:
(1)對(duì)小鼠感染MoPn
為了調(diào)節(jié)雌性小鼠的性周期,對(duì)于每1只小鼠皮下注射2.5mg的黃體酮(黃體酮注射液:ASKA Pharmaceutical Co.,Ltd.)。對(duì)該調(diào)節(jié)了性周期的小鼠按照常規(guī)方法用戊巴比妥進(jìn)行了麻醉。對(duì)該麻醉下的每1只小鼠,向陰道內(nèi)注入10μl(MoPn菌數(shù):1×106細(xì)胞)的實(shí)施例1中調(diào)制的感染液,使小鼠感染MoPn。
(2)菌液的給予(各組20只)
[LcS活菌經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次向陰道內(nèi)給予制造例1中制造的經(jīng)陰道給藥用的LcS菌液10μl(1×108CFU)。
[對(duì)照經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)陰道給予10μl的SPG緩沖液。
[LcS活菌經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予制造例1中制造的經(jīng)口給藥用的LcS菌液100μl(1×108CFU)。
[對(duì)照經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予100μl的SPG緩沖液。
(3)小鼠的交配
將MoPn感染第3天的小鼠雄性1:雌性1,在同一籠子內(nèi)飼養(yǎng)5天,使雌性小鼠與非感染的雄性小鼠交配。從交配第二天起至交配結(jié)束為止,每天早晚實(shí)施作為妊娠指標(biāo)的栓狀物(附著于雌性的陰道口的白色蠟狀物質(zhì))的確認(rèn)。將確認(rèn)到栓狀物的個(gè)體分離雌雄,在每1籠子飼養(yǎng)1只的條件下,觀察至感染第32天為止雌性小鼠有無(wú)生育。
(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
生育率利用Fisher精確檢驗(yàn)(Fisher′s exact test)來(lái)測(cè)定。需要說(shuō)明的是,作為統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件使用SPSS Ver.11(SPSS株式會(huì)社),顯著水平在雙側(cè)檢驗(yàn)中為5%。
(5)結(jié)果
由小鼠是否生育算出的生育率示于圖2。感染對(duì)照組的生育率為20%(20只中4只)。另一方面,LcS經(jīng)陰道給藥組的生育率為75%(20例中15例),確認(rèn)到了對(duì)于MoPn感染小鼠的不孕癥的顯著的改善作用(P=0.0012)。另外,對(duì)于LcS經(jīng)口給藥組,確認(rèn)到了對(duì)于MoPn感染小鼠的不孕癥的顯著的改善作用(生育率55%[20例中11例]、P=0.0483)。
實(shí)施例3
伴隨著LcS給藥的衣原體菌數(shù)的推移:
(1)對(duì)小鼠感染MoPn
為了調(diào)節(jié)雌性小鼠的性周期,對(duì)于每1只小鼠皮下注射2.5mg的黃體酮(黃體酮注射液:ASKA Pharmaceutical Co.,Ltd.)。對(duì)該調(diào)節(jié)了性周期的小鼠按照常規(guī)方法用戊巴比妥進(jìn)行了麻醉。對(duì)該麻醉下的每1只小鼠,向陰道內(nèi)注入10μl(MoPn菌數(shù):1×106細(xì)胞)的實(shí)施例1中調(diào)制的感染液,使小鼠感染MoPn。
(2)菌液的給予(各組6只)
[LcS活菌經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次向陰道內(nèi)給予制造例1中制造的經(jīng)陰道給藥用的LcS菌液10μl(1×108CFU)。
[對(duì)照經(jīng)陰道給藥組]
在戊巴比妥麻醉下,對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)陰道給予10μl的SPG緩沖液。
[LcS活菌經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予制造例1中制造的經(jīng)口給藥用的LcS菌液100μl(1×108CFU)。
[對(duì)照經(jīng)口給藥組]
對(duì)用手指固定的小鼠,使用灌胃器對(duì)于每1只小鼠,從感染7天前至感染后第3天連續(xù)地1天1次經(jīng)口給予100μl的SPG緩沖液。
(3)MoPn的菌數(shù)的測(cè)定
用與實(shí)施例1同樣的方法,在MoPn感染后第21天采集小鼠的陰道組織,測(cè)定陰道內(nèi)的MoPn菌數(shù)。
(4)結(jié)果
對(duì)照經(jīng)陰道給藥組中,在感染后第21天,由6只中3只檢測(cè)出1×105細(xì)胞/g的MoPn。另一方面,LcS活菌經(jīng)陰道給藥組中,LcS菌液的給予盡管至感染后第3天為止,其效果還在持續(xù),在感染后第21天,全部都沒(méi)有檢測(cè)到MoPn。
另外,對(duì)照經(jīng)口給藥組中,在感染后第21天,由6只中3只檢測(cè)出1×105細(xì)胞/g的MoPn。另一方面,LcS活菌經(jīng)口給藥組中,LcS菌液的給藥盡管至感染后3天為止,其效果還在持續(xù),在感染后第21天,6只中5只沒(méi)有檢測(cè)到MoPn。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性
本發(fā)明的衣原體傳染病預(yù)防治療劑能夠進(jìn)行衣原體傳染病的預(yù)防和/或治療。另外,本發(fā)明的不孕癥的改善劑能夠改善起因于衣原體傳染病的不孕癥,可以提高生育率。
序列表
<110> 株式會(huì)社益力多本社(Kabushiki Kaisha Yakult Honsha)
<120> 衣原體傳染病預(yù)防治療劑
<130> PF-150002-WO
<150> JP2014-101200
<151> 2014-05-15
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 正向引物
<400> 1
tgcatagata atttgtcctt aacttg 26
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 反向引物
<400> 2
cgagatttga caactaactt acct 24
PCT/RO/134表