專利名稱：橋連的茚并吡咯并咔唑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新型稠合芳基和雜芳基橋連的茚并吡咯并咔唑，在本文中稱作“橋連的茚并吡咯并咔唑”，本發(fā)明還涉及這種橋連的茚并吡咯并咔唑的制備和應用方法。
已報道的吲哚并咔唑化合物具有幾個共同的特性，特別是每個吲哚并咔唑均包含三個五元環(huán)，它們都包括氮原子部分；星形孢菌素(staurosporine)(鏈霉菌屬Streptorrayces sp.產(chǎn)生)和K-252a各自進一步包括由兩個N-糖苷鍵連接的糖基團。K-252a和星形孢菌素兩者作為治療劑的應用已進行了廣泛的研究。吲哚并咔唑類一般是親脂性的，這使得它們比較容易穿過生物膜，而不象蛋白物質。它們在體內表現(xiàn)為更長的半衰期。
盡管K-252a通常是經(jīng)過發(fā)酵方法從培養(yǎng)媒介物中生成，但已經(jīng)實現(xiàn)了天然異構體(+)和非天然異構體(-)(其中糖的三個手性碳原子具有相反的構型)的全合成(參見Wood等人，J.Am.Chem.Soc.117:10413,1995，和WIPO公開專利WO97/07081)。然而這種合成對商業(yè)用途并不實用。
除了K-252a和星形孢菌素代表的吲哚并咔唑生物堿之外，已經(jīng)制備了一些具有生物活性并稱為稠吡咯并咔唑的合成有機小分子(參見美國專利號5,475,110、5,591,855、5,594,009、5,705,511和5,616,724).
已知的還有稠合的異吲哚酮，它們是可以進行化學重復合成的不含吲哚結構的分子(參見WIPO公開專利WO97/21677)。
一些雙吲哚基馬來酰亞胺大環(huán)衍生物業(yè)已報道(例如，參見美國專利5,710,145、5,672,618、5,552,396；和5,545,636)。
已經(jīng)報道的還有吲哚并吡咯并咔唑的糖衍生物(參見WIPO公開專利WO98/07433)。
仍需要新的具有有益性能的吡咯并咔唑衍生物，本發(fā)明正是針對這一需要以及其它重要的目的。
本文所述的一些橋連的茚并吡咯并咔唑化合物還可用于治療涉及惡性細胞增殖的病狀，如癌癥。
公開了含有主題化合物的組合物、和主題化合物的使用方法，還公開了該橋連的茚并吡咯并咔唑化合物的制備方法，對本領域技術人員而言，一旦獲得本公開內容，其它有用的制備方法是顯而易見的。本發(fā)明化合物的這些特征和其它特征在下面給予更為詳細的闡明。
附圖2所示是制備橋連的茚并吡咯并咔唑的一般線路圖。
附圖3所示是制備與樹脂鍵合的茚并吡咯并咔唑的線路圖。
附圖4所示是制備被保護的、可溶的茚并吡咯并咔唑的線路圖。
附圖5所示是制備中間體V的線路圖。
附圖6所示是用方法A制備橋連的茚并吡咯并咔唑的線路圖。
附圖7所示是用方法B制備橋連的茚并吡咯并咔唑的線路圖。
附圖8所示是制備B環(huán)取代的橋連茚并吡咯并咔唑的線路圖。
附圖9所示是制備橋連茚并吡咯并咔唑的E環(huán)衍生的線路圖。
發(fā)明詳述本文公開的是以下式Ⅰ表示的橋連茚并吡咯并咔唑 其中B環(huán)和F環(huán)，各自獨立地與它們所連接的碳原子一起，為選自下面的基團(a)其中1-3個碳原子可以被氮原子置換的不飽和6-員芳香碳環(huán)；(b)不飽和5-員芳香碳環(huán)；和(c)不飽和5-員芳香碳環(huán)，其中(1)一個碳原子被氧原子、氮原子、或硫原子置換；(2)兩個碳原子被一個氮原子和一個硫原子、一個氮原子和一個氧原子、或兩個氮原子置換；或(3)三個碳原子被三個氮原子置換；R1選自(a)H、取代或未取代的1-4個碳原子烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜芳基烷基；(b)-C(=O)R9，其中R9選自烷基、芳基和雜芳基；(c)-OR10，其中R10選自H和1-4個碳原子烷基；(d)-C(=O)NH2、-NR11R12、-(CH2)pN11R12、-(CH2)pOR10、-O(CH2)pOR10和-O(CH2)pNR11R12，其中p是1-4；而且其中要么1)R11和R12各自獨立地選自H和1-4個碳原子烷基，要么2)R11和R12一起形成式-(CH2)2-X1-(CH2)2-的連接基，其中X1選自-O-、-S-和-CH2-；R2選自H、1-4個碳原子烷基、羥基、具有1-4個碳原子烷氧基、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pNR11R12、-O(CH2)pOR10、具有6-10個碳原子取代或未取代的芳基烷基，和取代或未取代的雜芳基烷基；R3、R4、R5和R6各自獨立地選自a)H、芳基、雜芳基、F、Cl、Br、I、-CN、CF3、-NO2、-OH、-OR9、-O(CH2)pNR11R12、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR2R7、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pOR10、-CH2OR10、-NR11R12、-NR10S(=O)2R9、-NR10C(=O)R9b)-CH2OR14，其中R14為移去羧基中的羥基后的氨基酸的殘基；c)-NR10C(=O)NR11R12、-CO2R2、-C(=O)R2、-C(=O)NR11R12、-CH=NOR2、-CH=NR9、-(CH2)pNR11R12、-(CH2)pNHR14、或-CH=NNR2R2A，其中R2A同R2；d)-S(O)yR2、-(CH2)pS(O)yR9、-CH2S(O)yR14，其中y是0、1或
2；e)具有1-8個碳原子的烷基、具有2-8個碳原子的鏈烯基、具有2-8個碳原子的炔基，其中1)各個烷基、鏈烯基或炔基是未取代的；或者2)各個烷基、鏈烯基或炔基被1-3個選自以下的基團所取代具有6-10個碳原子的芳基、雜芳基、芳基烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、羥基烷氧基、烷氧基-烷氧基、羥基烷硫基、烷氧基-烷硫基、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OR9、-X2(CH2)pNR11R12、-X2(CH2)pC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pOC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pCO2R9、-X2(CH2)pS(O)yR9、-X2(CH2)pNR10C(=O)NR11R12、-OC(-O)R9、-OCONHR2,-O-四氫吡喃基、-NR11R12、-NR10C(=O)R9、-NRCO2R9、-NR10C(=O)NR11R12、-NHC(=NH)NH2、NR10S(O)2R9、-S(O)yR9、-CO2R2、-C(=O)NR11R12、-C(=O)R2、-CH2OR10、-CH=NNR2R2A、-CH=NOR2、-CH=NR9、-CH=NNHCH(N=NH)NH2、-S(=O)2NR2R2A、-P(=O)(OR10)2、-OR14、和具有5-7個碳原子的單糖，其中單糖的每個羥基各自獨立地是未取代的，或者被H、1-4個碳原子的烷基、2-5個碳原子的烷羰氧基或具有1-4個碳原子的烷氧基所取代；X2是O、S、或NR10；R7和R8各自獨立地選自H、具有1-4個碳原子的烷基、具有1-4個碳原子的烷氧基、具有6-10個碳原子的取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的雜芳基烷基、-(CH2)pOR10、(CH2)pOC(=O)NR11R12和-(CH2)pNR11R12；或者R7和R8一起形成式-CH2-X3-CH2-的連接基，其中X3是X2或一個鍵。
m和n各自獨立地是0、1或2。
Y選自-O-、-S-、-N(R10)-、-N+(O-)(R10)-、-N(OR10)-和-CH2-；Z選自單鍵、-O-、-CH=CH-、-S-、-C(=O)-、-CH(OR10)-、-N(R10)-、-N(OR10)-、-CH(NR11R12)-、-C(=O)N(R17)-、-N(R17)C(=O)-、-N(S(O)yR9)-、-N(S(O)yNR11R12)-、-N(C(=O)R17)-、-C(R15R16)-、-N+(O-)(R10)-、-CH(OH)-CH(OH)-和-CH(O(C=O)R9)CH(OC(=O)R9A)-，其中R9A同R9；R15和R16各自獨立地選自H、-OH、-C(=O)R10、-O(C=O)R9、羥基烷基和-CO2R10；R17選自H、烷基、芳基和雜芳基；A1和A2選自H,H；H,-OR2；H,-SR2；H,-N(R2)2；和一個基團，其中A1和A2一起形成選自=O、=S和=NR2的部分；B1和B2選自H,H；H,-OR2；H,-SR2；H,-N(R2)2；和一個基團，其中B1和B2一起形成選自=O、=S和=NR2的部分；其前提條件是A1和A2，或B1和B2的至少一對形成=O。本發(fā)明化合物還包括位于取代基R2、R7和R8所連接的碳原子的所有非對映異構體和對映異構體。
優(yōu)選的橋連茚并吡咯并咔唑以下式表示 在式Ⅱ化合物的一些優(yōu)選的實施方案中，化合物具有下式的非對映異構體 在式Ⅱ化合物的其它優(yōu)選的實施方案中，化合物具有下式的對映異構體 在式Ⅰ和式Ⅱ化合物的一些優(yōu)選實施方案中，R1為H。在更優(yōu)選的實施方案中，R2為H、羥基、或者取代或未取代的烷基。
在其它優(yōu)選的實施方案中，R3、R4、R5和R6各自獨立地為H、取代或未取代的烷基、鹵素、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、或者取代或未取代的芳基。在更優(yōu)選的實施方案中，R7和R8各自獨立地為H、或者取代或未取代的烷基。
在一些優(yōu)選的實施方案中，Y為O。在更優(yōu)選的實施方案中，Z為單鍵、O、S、或者取代或未取代的N。在進一步優(yōu)選的實施方案中，m和n各自獨立地是1或2。在一些特別優(yōu)選的實施方案中，Y為O，Z為單鍵或O，且m和n各自獨立地是1或2。在更優(yōu)選的實施方案中，A1A2和B1B2各自獨立地是=O或H,H。
在一些特別優(yōu)選的實施方案中，R1、R4、R6和R7各自為H,Y是=O,n是1,A1A2和B1B2是=O或H,H,R2是H、OH、或低碳烷基，R3是H或取代烷基，R5和R8各自為H或烷氧基，并優(yōu)選甲氧基，Z為單鍵或O，以及m是1或2。
在其它優(yōu)選的實施方案中，式Ⅱ化合物具有下式 在更優(yōu)選的實施方案中，R3和R5各自獨立地選自以下基團a)H、雜芳基、F、Br、-CN、CF3、-NO2、-OH、-OR9、-O(CH2)pNR11R12、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR2R7、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pOR10、-CH2OR10、-NR11R12、-NR10S(=O)2R9、-NR10C(=O)R9；c)-NR10C(=O)NR11R12、-CO2R2、-C(=O)R2、-C(=O)NR11R12、-CH=NOR2、-CH=NR9、-(CH2)pNR11R12、-(CH2)pNHR14、或-CH=NNR R2A，其中R2A同R2；d)-S(O)yR2-(CH2)pS(O)yR9、-CH2S(O)yR14，其中y是0,1或2；e)具有1-8個碳原子的烷基、具有2-8個碳原子的鏈烯基、具有2-8個碳原子的炔基，其中1)各個烷基、鏈烯基或炔基是未取代的；或者2)各個烷基、鏈烯基或炔基被1-3個選自以下的基團所取代具有6-10個碳原子的芳基、雜芳基、芳基烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、羥基烷氧基、烷氧基-烷氧基、羥基烷硫基、烷氧基-烷硫基、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OR9、-X2(CH2)pNR11R12、-X2(CH2)pC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pOC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pCO2R9、-X2(CH2)pS(O)yR9、-X2(CH2)pNR10C(=O)NR11R12、-OC(=O)R9、-OCONHR2,-O-四氫吡喃基、-NR11R12、-NR10C(=O)R9、-NR10CO2R9、-NR10C(=O)NR11R12、-NHC(=NH)NH2、NR10S(O)2R9、-S(O)yR9、-CO2R2、-C(=O)NR11R12、-C(=O)R2、-CH2OR10、-CH=NR9、-S(=O)2NR2R2A、-OR14、和具有5-7個碳原子的單糖，其中單糖的每個羥基各自獨立地是未取代的，或者被H、1-4個碳原子的烷基、2-5個碳原子的烷羰氧基或具有1-4個碳原子的烷氧基所取代；
在更為優(yōu)選的實施方案中，R5獨立地選自基團H、-OR9、-O(CH2)pNR11R12、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR2R7、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pOR10、-CH2OR10、-NR11R12、-NR10S(=O)2R9、-NR10C(=O)R9、-C(=O)NR11R12、-(CH2)pNR11R12、-S(O)yR2、-(CH2)pS(O)yR9和-CH2S(O)yR14，其中y是0、1或2。
式Ⅱ化合物的一些特別優(yōu)選的實施方案為化合物Ⅱ-1、Ⅱ-1b、Ⅱ-2、Ⅱ-3、Ⅱ-4a、Ⅱ-4b、Ⅱ-5、Ⅱ-6、Ⅱ-7a、Ⅱ-7b、Ⅱ-8、Ⅱ-9、Ⅱ-10、Ⅱ-11、Ⅱ-12、Ⅱ-13、Ⅱ-14a、Ⅱ-14b、Ⅱ-15、Ⅱ-16a和Ⅱ-16b，它們的結構表述在下面的表8中。式Ⅱ化合物的一些具有手性特征的實施方案表述在下面的表9中。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了含有式Ⅰ或式Ⅱ化合物和可藥用載體的藥物組合物。
在一些優(yōu)選的藥物組合物中，組合物用來抑制trk激酶活性、VEGFR激酶活性或PDGFR活性中的一種或多種，在該組合物中含有式Ⅰ化合物和可藥用載體。在其它優(yōu)選的藥物組合物中，組合物用來提高營養(yǎng)因子或脊索ChAT的活性，在該組合物中含有式Ⅰ化合物和可藥用載體。
在其它優(yōu)選的藥物組合物中，組合物用來治療或預防前列腺疾病，如前列腺癌或良性的前列腺增生。在其它優(yōu)選的藥物組合物中，組合物用來治療或預防血管生成性疾病(angiogenic disorders)，如固體腫瘤、子宮內膜異位、糖尿病視網(wǎng)膜病、牛皮癬、成血管細胞瘤、眼科疾病或斑狀變性(macular degeneration)。在其它優(yōu)選的藥物組合物中，組合物用來治療或預防瘤形成(neoplasia)、類風濕關節(jié)炎、肺纖維變性、脊髓纖維變性、意外創(chuàng)傷的愈合、動脈粥樣硬化或再狹窄(restenosis)。在其它優(yōu)選的藥物組合物中，組合物用來治療或預防阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側索硬化、帕金森病、中風、局部缺血、亨廷頓舞蹈病、愛滋病癡呆、癲癇、多發(fā)性硬化、末稍神經(jīng)病、腦損傷或脊索損傷。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了抑制trk激酶活性的方法，包括給予足夠量的式Ⅰ化合物，以獲得有效的抑制。在一個優(yōu)選的實施方案中，用式Ⅰ化合物治療炎癥。在另一個優(yōu)選的實施方案中，trk激酶的受體是trkA。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防前列腺疾病的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的式Ⅰ化合物。在優(yōu)選的實施方案中，前列腺疾病是前列腺癌或良性前列腺增生。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了那些病理狀態(tài)緣于VEGFR激酶活性的血管原生成性疾病的治療或預防方法，包括給予足夠量的式Ⅰ化合物，使得血管內皮的生長因子受體與有效抑制量的化合物接觸。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防血管生成性疾病的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的式Ⅰ化合物。在優(yōu)選的實施方案中，所述血管生成性疾病是固體腫瘤、眼科疾病、斑狀變性、子宮內膜異位、糖尿病視網(wǎng)膜病、牛皮癬或成血管細胞瘤。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了那些病理狀態(tài)緣于PDGFR激酶活性的疾病的治療或預防方法，包括給予足夠量的式Ⅰ化合物，使得血小板產(chǎn)生的生長因子受體與有效抑制量的化合物接觸。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防疾病的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的式Ⅰ化合物。在優(yōu)選的實施方案中，所述疾病是瘤形成、類風濕關節(jié)炎、肺纖維變性、脊髓纖維變性、意外創(chuàng)傷的愈合、動脈粥樣硬化或再狹窄。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了那些特征為營養(yǎng)因子應答細胞活性異常的疾病的治療或預防方法，包括給予足夠量的式Ⅰ化合物，使得營養(yǎng)因子細胞受體與有效活性-誘導量的化合物接觸。在優(yōu)選的實施方案中，所述營養(yǎng)因子應答細胞的活性為ChAT活性。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側索硬化、帕金森病、中風、局部缺血、亨廷頓舞蹈病、愛滋病癡呆、癲癇、多發(fā)性硬化、末稍神經(jīng)病、腦損傷或脊索損傷的方法，該方法包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的式Ⅰ化合物。
本發(fā)明的化合物包括所有的非對映異構體和對映異構體。本文中，式(Ⅰ)化合物也稱為化合物(Ⅰ)，這同樣適用于其它式碼的化合物。
本文所采用的術語“碳環(huán)”是指環(huán)部分僅僅由碳原子組成的環(huán)基團。術語“雜環(huán)”是指環(huán)部分至少包括一個雜原子(如O、N或S)的環(huán)基團。
本文所采用的術語“烷基”是指具有1-8個碳原子的直鏈、環(huán)狀或支鏈化的烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、1-乙基丙基、己基、辛基、環(huán)丙基和環(huán)戊基。含烷基基團(如烷氧基、烷氧羰基和烷基氨基羰基)的烷基部分，其含義與上述定義的烷基相同。優(yōu)選的低碳烷基是指上述定義的具有1-4個碳原子的烷基。術語“鏈烯基”是指至少具有一個C-C雙鍵的直鏈或支鏈的烴鏈，鏈烯基的例子包括乙烯基和丙烯基。本文所用的術語“炔基”是指至少含有一個C-C叁鍵的直鏈或支鏈的烴鏈，炔基的例子包括乙炔基和丙炔基。
含?；鶊F(如酰氧基)的酰基部分，是指具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷羰基，如甲?；?、乙?；⒈；⒍□；?、戊?；?、新戊酰基或己?；?。
本文所用的術語“芳基”是指具有6-12個碳原子的基團，如苯基、聯(lián)苯基和萘基，優(yōu)選的芳基包括取代或未取代的苯基和萘基。本文所用的術語“雜芳基”表示一個或多個環(huán)碳原子被雜原子(即非碳原子，如O、N或S)置換的芳基，優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基、嘧啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、三唑基、四唑基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、噻唑基、吡唑基和苯并噻唑基。
術語“芳烷基”表示具有7-15個碳原子的基團，由帶有一個芳基的烷基所組成。芳烷基的例子包括芐基、苯乙基、二苯基甲基和萘甲基。含有取代基在內的烷基和烷基部分(如芳烷基、烷氧基、芳基烷氧基、羥基烷氧基、烷氧基-烷氧基、羥基-烷硫基、烷氧基-烷硫基、烷羰氧基、羥基烷基和酰氧基)可以是取代或未取代的。取代烷基具有1-3個獨立選擇的取代基，優(yōu)選羥基、低碳烷氧基、低碳烷氧基-烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基-低碳烷氧基、取代或未取代的雜芳基烷氧基-低碳烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代的雜芳基烷氧基、鹵素、羧基、低碳烷氧羰基、硝基、氨基、一或二低碳烷基氨基、二氧戊環(huán)、二氧六環(huán)、二硫戊環(huán)、二硫六環(huán)、呋喃、內酯或內酰胺。
取代的芳基、取代的雜芳基、取代的芳烷基各自具有1-3個獨立選擇的取代基，它們優(yōu)選低碳烷基、羥基、低碳烷氧基、羧基、低碳烷氧羰基、硝基、氨基、一或二低碳烷基氨基和鹵素。
由氮原子形成的雜環(huán)基包括吡咯烷基、哌啶基、哌啶子基、嗎啉基、嗎啉代基、硫嗎啉代基、N-甲基哌嗪基、吲哚基、異吲哚基、咪唑、咪唑啉、惡唑啉、惡唑、三唑、噻唑啉、噻唑、吡唑、吡唑酮和三唑基團。由氧原子形成的雜環(huán)基包括呋喃、四氫呋喃、吡喃和四氫吡喃。
“羥基烷基”是指含有羥基連接其上的烷基。“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。
本文所用的術語“雜芳基烷基”是指含有雜原子的芳烷基，術語“氧基oxy”表示存在的氧原子。因而“烷氧基”是通過氧原子連接的烷基，“羰氧基”是通過氧原子連接的羰基。
術語“雜環(huán)基烷氧基”是指雜環(huán)基連接到其烷基部分的烷氧基，而“芳基烷氧基”是指芳基連接到其烷基部分的烷氧基，術語“烷羰氧基”是指式“-O-C(=O)-烷基”的基團。
本文所用的術語“烷氧基-烷氧基”表示含有一個烷氧基取代基連接在其烷基部分的烷氧基。術語“烷氧基-烷硫基”是指含有一個烷氧基取代基連接在其烷基部分的烷硫基(即式“-S-烷基”基團)。術語“羥基-烷硫基”是指含有一個羥基取代基連接在其烷基部分的烷硫基(即式“-S-烷基”基團)。
本文所用的術語“單糖”是指具有習慣意義上的單糖。
本文所用的術語“氨基酸”表示同時含有氨基和羧基的分子，氨基酸的具體例子包括α-氨基酸，即，通式HOOC-CH(NH2)-(側鏈)的羧酸。
氨基酸側鏈包括天然的和非天然的側鏈，非天然的氨基酸側鏈是用來取代氨基酸同系物中的天然氨基酸側鏈的基團。例如，參見Lehninger,Biochemistry，第二版，Worth Publishers,Inc,1975,pp73-75,在此引作參考。
優(yōu)選的α-氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸和賴氨酸，它們具有D構型、L構型，或者是外消旋體。
其它有代表性的α-氨基酸的側鏈見表1所示。
表1 在一些優(yōu)選的實施方案中，式Ⅰ和式Ⅱ化合物的取代基包括脫除羧基中的羥基部分后形成的氨基酸殘基，即，式-C(=O)C-CH(NH2)-(側鏈)基團。
存在于式Ⅰ化合物上的功能基可以包含保護基，例如式Ⅰ化合物的氨基酸側鏈取代基可以被保護基所代替，如芐氧羰基或叔丁氧羰基。保護基是一種公知的化學功能基，它可以選擇性地附加到官能度(如羥基和羧基)或從官能度上離去，這些基團存在于化合物這種使得該官能度在化合物暴露的化學反應條件下保持惰性。本發(fā)明可以使用各種不同的保護基。這類保護基之一是芐氧羰基(Cbz；Z)。本發(fā)明其它優(yōu)選的保護基可參見Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.，“有機合成中的保護基(Protective Groups in organic Synthesis)”第二版，Wiley & Sons,1991。
橋連茚并吡咯并咔唑化合物已顯示出重要功能的藥理學活性，可用于不同的背景，包括研究和治療領域。這些衍生物是有用的治療劑，化合物的活性對營養(yǎng)因子應答細胞的功能和/或存活表現(xiàn)為正作用。對于營養(yǎng)因子應答細胞(如神經(jīng)元直系細胞，)的功能和/或存活的作用，已采用以下試驗予以揭示(1)培養(yǎng)脊索膽堿乙酰轉移酶(“ChAT”)試驗；或者(2)培養(yǎng)基礎前腦神經(jīng)元ChAT活性試驗。
本文所用的術語“作用(effect)”，當用于修飾術語“功能”和“存活”時，是指正的或負的改變或變化，正作用在這里可稱為“增強作用”或“增強”；負作用在這里可稱為“抑制作用”或“抑制”。
本文所用的術語“增強”，當用來修飾術語“功能”和“存活”時，是指橋連茚并吡咯并咔唑化合物存在對營養(yǎng)因子應答細胞的功能和/或存活，相比于沒有該化合物存在下的細胞，具有正作用。例如(不作為限制)對于膽堿能神經(jīng)元的存活，如果治療群落比未治療群落有相對更長的功能期，則表明該化合物對瀕于死亡(例如由于損傷、疾病、退化或自然進行性死亡)的膽堿能神經(jīng)元群，相比于沒有該化合物存在下的膽堿能神經(jīng)元群，具有增強存活作用。
本文所用的“抑制”和“抑制作用”是指在橋連茚并吡咯并咔唑化合物存在下，指定物質的特異反應(例如酶的活性)相對降低。
本文所用的術語“trk”指一族高親和性的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白的受體，目前包括trkA、trkB和trkC，及其它可以被神經(jīng)營養(yǎng)蛋白結合的膜結合蛋白。
在本文中，VEGFR抑制作用意味著疾病用途，例如，相關生成均勻重要作用的疾病，如固體腫瘤、子宮內膜異位、糖尿病視網(wǎng)膜病、牛皮癬、成血管細胞瘤，以及其它眼病和癌癥。
對trk的抑制作用意味著疾病用途前列腺疾病如前列腺癌和良性前列腺增生，以及治療炎癥疼痛。
對血小板生成的生長因子受體(PDGFR)的抑制作用意味著疾病用途，例如，瘤形成、類風濕關節(jié)炎、肺纖維變性、脊髓纖維變性、意外創(chuàng)傷愈合，與心血管端岔相關的疾病，如粥樣動脈硬化、再狹窄、血管成形術后再狹窄等。
本文所用的術語“癌”或“癌性的”是指哺乳動物細胞的惡性增生，例子包括前列腺癌、良性前列腺增生、卵巢癌、乳腺癌、腦瘤、肺癌、胰腺癌、結腸直腸(colorectal)癌、胃癌、腹部腫瘤、固體腫瘤、頭和頸部腫瘤、成神經(jīng)細胞瘤、腎細胞癌、淋巴瘤、白血病，其它已確認的造血系統(tǒng)的惡性腫瘤。
本文所用的術語“神經(jīng)元”，“神經(jīng)元直系細胞”和“神經(jīng)元細胞”包括(但不限于)具有單一傳遞質或多種傳遞質和/或單一或多種功能的神經(jīng)元類型的不均勻群落，優(yōu)選它們是膽堿能神經(jīng)元和感覺神經(jīng)元。這里所用的術語“膽堿能神經(jīng)元”指神經(jīng)介質是乙酰膽堿的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和未梢神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)神經(jīng)元；例如基礎前腦神經(jīng)元、紋狀體神經(jīng)元和脊髓神經(jīng)元。這里所用的術語“感覺神經(jīng)元”包括，例如對環(huán)境提示(例如溫度，運動)產(chǎn)生應答的神經(jīng)元，如來自皮膚、肌肉和關節(jié)的神經(jīng)元；例如，來自脊神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)元。
本文定義的“營養(yǎng)因子應答細胞”是含有能夠被營養(yǎng)因子特異性結合的受體的細胞；例子包括神經(jīng)元(例如，膽堿能神經(jīng)元和感覺神經(jīng)元)和非神經(jīng)元細胞(例如單核細胞和致瘤性細胞)。
本發(fā)明所述的橋連茚并吡咯并咔唑化合物應用于研究和治療領域，如在抑制酶活性方面。在研究領域，例如，化合物可用于開發(fā)測試方法和模型，以進一步弄清，在相關功能障礙和疾病機制中，抑制絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸蛋白激酶(如PKC，trk酪氨酸激酶)所起到的作用。在治療領域，抑制這些酶活性的化合物可用來抑制這些酶對疾病(如癌癥)的有害后果。
如以下實施例所示，使用橋連茚并吡咯并咔唑化合物，對酶活性的抑制作用可以通過如下的試驗方法測定1、trkA酪氨酸激酶活性抑制試驗；2、在全細胞制備過程中，NGF-激勵的trk磷酸化作用的抑制；3、血管內皮生長因子受體(VEGFR)激酶的抑制試驗；4、PKC活性抑制試驗；和5、PDGFR抑制試驗。
所公開的橋連茚并吡咯并咔唑化合物可用來增強哺乳動物(如，人)的神經(jīng)元細胞的功能和/或存活。在本文中，該化合物可以獨立使用或與其它稠合的吡咯并咔唑和/或吲哚并咔唑一起使用，或者和其它能夠對指定細胞的功能和/或存活顯有作用的有益分子聯(lián)合使用。
各種神經(jīng)疾病的特征表現(xiàn)為神經(jīng)元細胞的趨于死亡、損傷、功能受害、軸索退化、瀕于死亡等等。這些疾病包括(但不限于)阿爾茨海默氏病、運動神經(jīng)元疾病(例如肌萎縮性側索硬化)、帕金森病、腦血管疾病(例如中風，局部缺血)、亨廷頓舞蹈病、愛滋病癡呆、癲癇、多發(fā)性硬化；末稍神經(jīng)疾病(例如，那些在化學治療有關的未梢神經(jīng)病中影響到DRG神經(jīng)元的疾病)包括糖尿病神經(jīng)病、興奮性氨基酸誘導的疾病、與腦或脊索的震蕩或穿透性損傷有關的疾病。
ChAT對神經(jīng)介質乙先膽堿的合成起催化作用，并被認為是功能性膽堿能神經(jīng)元的酶標物。功能神經(jīng)元也能存活。神經(jīng)元的存活是將活神經(jīng)元對一種染料(例如，鈣黃綠素AM)的特異性攝入和酶轉化進行定量來分析的。
由于它們的不同用途，本發(fā)明的橋連茚并吡咯并咔唑化合物可用于不同的情況下。這些化合物可用于神經(jīng)元細胞存活、功用、鑒定的體外模型的開發(fā)，或者用于篩選其它和茚并吡咯并咔唑化合物具有相似活性的合成化合物。這些化合物可用于研究領域，以研究、定義和測定與功能應答相關的分子靶。例如，通過放射標記一種與特定的細胞功能(例如，促有絲分裂作用)相關的橋連茚并吡咯并咔唑化合物，該衍生物所結合的靶物實體可以被鑒定、分離、和純化而用于表征。
所述化合物不僅用于增強營養(yǎng)因子細胞(如膽堿能神經(jīng)元)的營養(yǎng)因子誘導活性，而且可以作為其它神經(jīng)元細胞類型(如多巴胺能和谷氨酰能神經(jīng)元)的存活促進劑。生長因子以信號通知小GTP結合蛋白ras、rac和cdc42的級聯(lián)下游，來調整神經(jīng)元的存活(Denhardt,D.T.,Biochem.J.,1996,318,729)。具體講，ras的激活導致磷酸化作用和細胞外受體活化激酶(ERK)的活化，而這些已經(jīng)和生物的生長和分化過程相連接。rac/cdc42的興奮使得JNK和p38的活化加強，產(chǎn)生和緊張、下垂蛋白(apoptosis)和炎癥相關的應答。盡管生長因子主要是通過ERK途徑，但是，對這些后面的過程的影響可以導致神經(jīng)元存活的另一機制，這可以模擬生長因子增強存活的性能(Xia等人.,Science,1995,270,1326)。化合物還可以通過一種和生長因子介導存活相關的，但又不同于它的機制，作為神經(jīng)元細胞和非神經(jīng)元細胞的存活促進劑，例如，抑制JNK和p38途徑，這可以通過抑制下垂蛋白(apoptotic)細胞死亡過程而導致存活。
本發(fā)明化合物用于治療和ChAT活性降低或脊索運動神經(jīng)元死亡、損傷相關的疾病，還用于，例如中樞和末梢神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的下垂蛋白(apoptotic)細胞死亡相關的疾病，以及炎癥疾病。
本文所述的橋連茚并吡咯并咔唑化合物還可以用于治療涉及惡性細胞增生的疾病，如許多癌癥。
化合物(Ⅰ)的可藥用鹽包括可藥用的酸加成鹽、金屬鹽、銨鹽、有機胺加成鹽、和氨基酸加成鹽。酸加成鹽的例子為無機酸加成鹽如鹽酸鹽、硫酸鹽和磷酸鹽，以及有機酸加成鹽如乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、灑石酸鹽，檸檬酸鹽和乳酸鹽；金屬鹽的例子是堿金屬鹽如鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽，堿土金屬鹽如鎂鹽和鈣鹽，鋁鹽和鋅鹽；銨鹽的例子是銨鹽和四甲基銨鹽；有機胺加成鹽的例子是與嗎啉和哌啶形成的鹽；氨基酸加成鹽的例子是與甘氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和賴氨酸形成的鹽，本文提供的化合物可與可藥用的無毒賦形劑和載體混合，配制成藥物組合物。該組合物可被制備成非腸道用藥，特別是液狀溶液或懸浮液的形式；或口服給藥，尤其是片劑或膠囊的形式；或鼻內給藥，尤其是粉劑、滴鼻劑或氣霧劑的形式；或皮膚給藥，如，通過透皮膏藥。
該組合物可以方便地以單位劑量形式給藥，也可通過任一種在藥物領域中熟知的方法進行制劑，例如，在Remington’s PharmaceuticalSciences(Mack Pub.Co.,Easton,PA,1980)中所描述的方法。用于非腸道給藥的制劑可以含有無菌水或鹽水、聚亞烷基二醇(如聚乙二醇)、油和植物原料、氫化萘等作為一般的賦形劑。特別是具有生物相容性的、可生物降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物，也可以用作賦型劑以控制活性化合物的釋放。對于這些活性化合物，其它可采用的非腸道釋藥體系包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物顆粒、滲透泵、可植入輸注體系和微脂粒。吸入給藥制劑含有例如乳糖作為賦型劑，或者是含有包含如聚氧乙烯-9-月桂基醚、甘氨膽酸鹽和脫氧膽酸鹽的水溶液，或者是鼻滴劑形式給藥的油性溶液，或者是用于鼻內的凝膠。用于非腸道給藥的制劑還可以包括用于口腔給藥的甘氨膽酸鹽、用于直腸給藥的水楊酸鹽、或用于陰道給藥的檸檬酸。用于透皮給藥的制劑優(yōu)選是親油性乳劑。
本發(fā)明的化合物可在藥物組合物中作為唯一的活性劑。另外，它們也可以和其它的活性成份聯(lián)合使用，例如，有利于疾病中的神經(jīng)元存活或軸索再生的其它生長因子。
式Ⅰ化合物及其可藥用鹽可以用口服給藥或非口服給藥，例如油膏或注射。本發(fā)明的化合物的濃度在治療組合物中可以變化，該濃度取決于，例如，用于給藥的總劑量、所用化合物的化學性質(例如疏水性)、給藥途徑、病人的年齡、體重和癥狀等因素。對于非腸道給藥，本發(fā)明的化合物一般提供以含約0.1-10％w/v化合物的水性生理緩沖溶液。一般劑量范圍是每天每kg體重約1μg-1g，優(yōu)選劑量是每天每kg體重0.01mg-100mg，優(yōu)選約0.1-20mg每kg體重，每天一到四次給藥。藥物的優(yōu)選劑量可能取決于變化因素，如疾病或病癥的種類和發(fā)展程度、具體病人的整體健康狀況、所選化合物的相對生物效能、化合物賦形劑的制劑及其給藥途徑等。
式Ⅰ化合物及其可藥用鹽可以其自身給藥，或根據(jù)藥物活性和給藥目的，以不同的藥物組合物形式給藥。本發(fā)明的藥物組合物可以將有效量的式Ⅰ化合物或其可藥用鹽，作為活性成分與可藥用載體均勻混合來制備。根據(jù)適于給藥的組合物形式，載體的形式可以是寬范圍的形式。希望這樣的藥物組合物制成適于口服或非口服給藥的單位劑量形式。用于非口服給藥的形式包括油膏和注射劑。
片劑的制備可以按照常規(guī)方式，使用諸如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇和甲基纖維素的賦形劑，諸如如淀粉，藻酸鈉、羧甲基纖維素鈣和結晶纖維素的崩解劑，諸如硬脂酸鎂和滑石的潤滑劑，諸如明膠、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素和甲基纖維素的粘合劑，諸如蔗糖脂肪酸酯和山梨糖醇脂肪酸酯表面活性劑等等。最好是每片含有15-300mg活性成份。
顆拉的制備可以按照常規(guī)方式，使用諸如乳糖和蔗糖的賦形劑，諸如淀粉的崩解劑，諸如明膠等的粘結劑等等。粉末的制備可以按照常規(guī)方式，使用諸如乳糖和甘露糖醇的賦形劑。膠囊的制備可以按照常規(guī)方式，使用諸如明膠、水、蔗糖、阿拉伯樹膠、山梨糖醇、甘油、結晶纖維素、硬脂酸鎂、滑石等。最好是每個膠囊含有15-300mg的活性成份。
糖漿的制備可以按照常規(guī)方式，使用糖(如蔗糖)、水、乙醇等。
油膏的制備可以按照常規(guī)方式，使用諸如凡士林、液體石蠟、羊毛脂和大粒凝膠(原文macrogol有誤，應當是macrogel)的油膏基質，諸如乳酸月桂酯鈉鹽、氯化苯甲烴銨、脫水山梨糖醇單脂肪酸酯、羧甲基纖維素鈉鹽和阿拉伯樹膠的乳化劑。
注射制劑的制備可以按照常規(guī)方式，使用諸如水、生理鹽水、植物油(例如橄欖油和花生油)、油酸乙酯和丙二醇的溶劑，諸如如苯甲酸鈉、水楊酸鈉和尿烷的加溶劑，使用諸如NaCl和葡萄糖的等滲試劑，使用諸如苯酚、甲苯酚、對羥基苯甲酸酯和三氯叔丁醇的防腐劑，使用諸如抗壞血酸和焦亞硫酸納的抗氧化劑。
通過以下用來闡明本發(fā)明的實施例，對其予以進一步說明。這些實施例既不是用來限定，也不是用來解釋所公開的范圍。
實施例實施例1trkA酪氨酸激酶活性抑制用以前描述的(Angeles等,Anal.Biochem.236:49-55,1996)ELISA基的分析方法，檢測選擇的橋接的茚并吡咯并咔唑化合物抑制桿狀病毒表達的人trkA胞質區(qū)域激酶活性的能力。96-孔微量滴定板包被有底物溶液(混和的人的磷脂酶C-γ1/谷光甘肽S-轉移酶融合蛋白(Rotin等，EMBO J.,11:559-567,1992))，在100μl含有50mM Hepes,pH7.440μm ATP,10mM MnCl2,0.1％BSA,2％DMSO和各種濃度抑制劑的分析混合物中進行抑制研究，通過加入trkA激酶激活反應并在37℃下進行15分鐘，然后加入磷酸酪氨酸抗體(UBI)，接著加入二級酶結合抗體和堿性磷酸酶標記的山羊抗大鼠IgG(Bio-Rad)。通過放大的檢測系統(tǒng)(Gibco-BRL)來測量鍵合酶的活性，在Graphpad Prism用S形劑量-響應(可變的坡度)方程來分析抑制數(shù)據(jù)，將導致激酶活性50％抑制的濃度稱為IC50，結果記錄于表2。
表2橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對trkA激酶活性抑制效果
實施例2在整個細胞制劑中NGF-刺激的trk磷酸化的抑制用以前描述的(見US專利5516771)如下的修正方法，進行橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對NGF-刺激的磷酸化抑制，在100mm培養(yǎng)皿培養(yǎng)trkA轉染的NIH3T3細胞，在37℃下，用含有化合物(100nM和1μM)或DMSO(加入作為對照)的沒有血清的0.05％BSA-DMEM作為介質，缺血清培養(yǎng)次融合細胞(Subconfluent cells)1小時，然后花5分鐘以10ng/ml的濃度加入NGF(Harlan/Bioproducts for Science)，在含有清潔劑和蛋白酶抑制的緩沖液中對細胞溶解，用BCA方法對澄清的細胞溶解物規(guī)范為蛋白并用抗trk抗體進行免疫沉淀。多克隆抗-trk抗體抵抗相應于trk羧基端的14氨基酸的縮氨酸(Martin Zanca等，Mol.Cell.Biol.9:24-33,1989)，在蛋白A的瓊脂糖珠上可收集到免疫配合物(Sigma Chem.Co.,St.Lois,MO)，用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離，并轉移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，用抗磷酸酪氨酸抗體(UBI)進行膜的免疫印染，接著通過加入辣根過氧化酶偶聯(lián)的山羊抗大鼠IgG(Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA)培養(yǎng)，用ECL(AmershamLite Science,Inc.,Arlington Heights,IL)來觀察磷酸化蛋白，測量trk蛋白帶區(qū)域并和NGF-刺激對照進行對比，基于trk蛋白帶的降低百分率，記錄抑制結果，如下0=沒有降低；1=1-25％；2=26-49％；3=50-75％；4=76-100％；結果列于表3。
表3在NIH3T3細胞中，橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對NGF-刺激的trkA磷酸化的作用
實施例3血管內皮生長因子受體的激酶活性抑制用上述描述的trkA激酶ELISA分析方法檢測橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對桿狀病毒表達的VEGF受體(人flk-1,KDR,VEGFR2)激酶區(qū)域激酶活性的抑制效果。將包括50mM Hepes,pH7.4,40μmATP,10mM MnCl2,0.1％BSA,2％DMSO,和不同濃度抑制劑的激酶反應混合物轉移到包被有PCL-γ/GST的板上，加入VEGFR激酶，在37℃下，反應進行15分鐘，通過加入抗磷酸酪氨酸抗體(UBI)來檢測形成的磷酸化產(chǎn)品。傳遞二級酶結合的抗體來捕獲抗體-磷酸化PCL-γ/GST配合物。通過放大的檢測系統(tǒng)(Gibco-BRL)來測量鍵合酶的活性，在Graphpad Prism用S形劑量-響應(可變的坡度)方程來分析抑制數(shù)據(jù)，結果記錄于表4。
表4橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對VEGF受體激酶活性抑制作用
實施例4蛋白激酶C活性抑制用如Pitt,A.M.和Lee,C.(J.Biomol.Screening,1:47-51,1996)描述的Millipore Multiscreen TCA“in-plate”方法檢測蛋白激酶C活性。在96-孔Multiscreen-DP板(Millipore)來進行分析，每份40ml的分析混和物含有20mM Hepes,pH為7.4,10mM MgCl2,2.5mM EGTA,2.5mM CaCl2,80mg/ml磷脂酰基絲氨酸，3.2mg/ml甘油二油酸酯，200mg/ml組蛋白H-1(Fluka),5mM[γ-32P]ATP,1.5ng蛋白激酶C(UBI；混合a,b,g同功酶)，0.1％BSA,2％DMSO,和要測試的橋式稠和吡咯咔唑化合物，在37℃下反應進行10分鐘，再加入冰冷的50％三氯乙酸停止反應，在4℃下，將板均化30分鐘，再用冰25％TCA洗滌，加入混和劑，用Wallac MicroBeta 1450 PLUS閃爍計數(shù)器測量放射性，在Graphpad Prism上用S形劑量-響應(可變的坡度)方程來分析數(shù)據(jù)計算IC50值，結果記錄于表5。
表5橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對蛋白激酶C活性抑制作用
實施例5血小板衍生的生長因子受體激酶活性抑制用上述描述的trkA激酶ELISA分析方法檢測橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對桿狀病毒表達的PDGFβ受體激酶區(qū)域激酶活性的抑制效果。分析在96孔的包被有PCL-γ/GST的微量滴定板上進行，每100μl的反應混合物包括50mM Hepes,pH為7.4,20μm ATP,10mMMnCl2,0.1％BSA,2％DMSO,和不同濃度的抑制劑。通過加入預磷酸化的人的酶的重組體(10ng/ml PDGFRβ)來引發(fā)反應，在37℃下，反應進行15分鐘，在使用前先在4℃下，在含有20μM ATP和10mMMnCl2的緩沖溶液中孵化來制備磷酸化的酶，通過加入辣根過氧化酶(HRP)-結合抗磷酸酪氨酸抗體(UBI)來檢測磷酸化產(chǎn)品的形成，后來加入含有3,3’-5,5’-四甲基對二氨基聯(lián)苯和過氧化氫的HPR溶液，在室溫下，將板孵化10分鐘，用酸停止反應，用Microplate Bio-kineticsReader(Bio-Tek Instrument EL 312e)在450nm記錄吸收值，在GraphpadPrism上用S形劑量-響應(可變的坡度)方程來分析抑制數(shù)據(jù)，結果記錄于表6。
表6橋接的茚并吡咯并咔唑化合物的PDGFR抑制作用
實施例6脊髓膽堿乙酰轉移酶活性的提高如上討論，膽堿乙酰轉移酶是功能性膽堿能神經(jīng)元的特定生化指示劑。膽堿能神經(jīng)元代表了進入海馬形成、嗅覺細胞核、腦間細胞核、皮層、扁桃體和丘腦的各部位主要的膽堿能。在脊髓中，運動原神經(jīng)元為含有膽堿乙酰轉移酶(Phelps等,J.Comp.Neurol.273:459-472,1988)的膽堿能神經(jīng)元，膽堿乙酰轉移酶的活性用于研究神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(例如NGF和NT-3)對膽堿能神經(jīng)元的存活和/或功能的影響，膽堿乙酰轉移酶測試也作為膽堿能神經(jīng)元內膽堿乙酰轉移酶水平調節(jié)作用的一種指示。
在分離的大鼠胚胎脊髓培養(yǎng)實驗中橋接的茚并吡咯并咔唑化合物提高了膽堿乙酰轉移酶活性(表7)，例如在這些實驗中，將化合物直接加入到分離的脊髓培養(yǎng)物中，相對于對照，增加了膽堿乙酰轉移酶活性至少120％的化合物被認為是有活性的，結果列于表7。
表7橋接的茚并吡咯并咔唑化合物對的活性的提高脊髓膽堿乙酰轉移酶％對照化合物號在30nM的活性最大活性Ⅱ-1114 139@300nM方法分離大鼠胎兒脊髓細胞，用(Smith等，J.Cell Biology 101:1608-1621(1985)；Glicksman等，J.Neurochem.61:210-221(1993))描述的方法進行實驗，用標準的胰蛋白酶分離技術(Smith等，supra.)從大鼠(14-15天的胚胎)切下來的脊髓上得到分離細胞，以6×105細胞/cm2的密度將細胞鋪在已被涂有鳥氨酸的塑料組織培養(yǎng)孔中，其中沒有血清的N2培養(yǎng)基用0.05％牛血清白蛋白(BSA)補充(Bottenstein等，PNASUSA 76:514-517(1979))。在37℃下，在5％CO2/95％空氣的潮濕氣氛中孵化培養(yǎng)物48小時，2天后，在體外用修正的根據(jù)McManaman等和Glicksman等(McManaman et al.,Developmental Biology 125:311-320(1988)；Glicksman et al.,J.Neurochem.,supra.)的Fonnum方法(Fonnum,J.Neurochem.24:407-409(1975))檢測膽堿乙酰轉移酶的活性。
實施例中的式Ⅱ化合物列于表8中，其中R1,R4,R6和R7為氫；Y為氧和n為1。
表8
合成方法和實施例的綜合說明制備本發(fā)明的橋接的茚并吡咯并咔唑的一般合成路線見

圖1和2,合成橋接的茚并吡咯并咔唑(Ⅲ)/(Ⅷ)的一般步驟如美國專利5,705,511所述，它公開的內容在這里作為參考，當R1為H時，茚并吡咯并咔唑(Ⅲ)/(Ⅷ)的內酰胺氮用合適的基團保護得到式(Ⅳ)/(Ⅸ)，在無水有機溶劑中，用合適的堿處理保護的化合物，得到深紅色溶液，肯定為碳負離子，碳負離子和雙功能團的試劑(Ⅴ)反應，對(Ⅴ)的C=Y鍵親電加成得到最初的中間體(Ⅵ)/(Ⅹ)，用硫酸或例如三氟化硼乙醚絡合物的路易斯酸處理中間體(Ⅵ)(Ⅹ)和/或(Ⅶ)/(Ⅺ)得到橋接的茚并吡咯并咔唑(Ⅰ)/(Ⅱ)。
可以用酸或堿催化的方法來保護內酰胺氮(見圖3或4)，用樹脂鍵合的試劑進行酸催化反應，讓茚并吡咯并咔唑(Ⅲ)/(Ⅷ)固定到聚合物載體上，例如聚苯乙烯基底、Rink酸性樹脂(Ⅻ)(圖3)，得到(ⅩⅢ)，另外用可溶試劑進行酸催化反應，得到化合物(ⅩⅣ)(圖4)，在堿催化下得到甲硅烷基保護的化合物(ⅩⅤ)(圖4)。
圖5描述了一些制備中間體(Ⅴ)的方法，步驟(a)描述了各種縮醛(ⅩⅥ)轉變?yōu)?ⅩⅦ,Z=鍵)的步驟。例如酯-縮醛/縮酮(ⅩⅥ,D=COOR)被完全還原為相應的醇或接著被氧化(例如Swem或Dess-Martin氧化)為醛-縮醛/縮酮(ⅩⅦ,R8=H)，另外用DIBAL部分還原酯-縮醛/縮酮(ⅩⅥ,D=COOR)直接得到醛(ⅩⅦ,R8=H)，同樣用DIBAL還原腈-縮醛(ⅩⅥ,D=CN)得到醛(ⅩⅦ,R8=H)，將格氏試劑加入到Weinreb酰胺-縮醛/縮酮(ⅩⅥ,D=CON(OMe)Me)得酮-縮醛/縮酮。
通過步驟(b)的兩步法也可以制備中間體(ⅩⅦ,Z=鍵)，將有機金屬試劑(ⅪⅩ)加入到縮醛/縮酮(ⅩⅧ)得到烯烴(ⅩⅩ)，接著臭氧分解，還原分離純化得到酮-縮醛/縮酮(ⅩⅦ)。用步驟(c)描述的兩步法制備中間體(ⅩⅦ,Z=雜原子)，用烯烴(ⅩⅪ)和縮醛(ⅩⅫ)偶合，接著所得烯烴進行臭氧分解(用還原分離純化)，得到酮-縮醛/縮酮(ⅩⅦ)。另外通過步驟(d)的兩步法也可以制備中間體(ⅩⅦ,Z=雜原予)，化合物(ⅩⅩⅣ)和縮醛/縮酮(ⅩⅧ)反應得到(ⅩⅩⅤ)，它用步驟(a)的方法轉變?yōu)橥?縮醛/縮酮(ⅩⅦ)，用羥胺、肼、N-烷基-N-烷氧基胺和胺與酮-縮醛/縮酮(ⅩⅦ)縮合得到帶有親電C=N官能團的中間體(ⅩⅩⅥ)。
用過量的格氏試劑作為堿處理樹脂鍵合的茚并吡咯并咔唑(ⅩⅢ)[圖6，方法A]，得到深紅色碳負離子溶液，接著與(Ⅴ)反應，對C=Y基團進行親電加成得到產(chǎn)品。經(jīng)過水分離純化和用稀釋酸(在二氯甲烷中的1％TFA)從樹脂上水解分離產(chǎn)品，分離得到化合物(ⅩⅩⅦ)和/或(ⅩⅩⅧ)。用硫酸或例如三氟化硼乙醚絡合物的路易斯酸處理中間體(ⅩⅩⅦ)和/或(ⅩⅩⅧ)得到橋接的茚并吡咯并咔唑(Ⅱ)。
將相同的方法應用于可溶內酰胺保護的中間體例如(ⅩⅤ)(圖7，方法B)的制備，然而在這種情況下，用在吡啶中的三通B作為堿來代替格氏試劑來處理中間體(ⅩⅤ)，中間體(ⅩⅪⅩ)和/或(ⅩⅩⅩ)可以同內酰胺保護基分開，再經(jīng)色譜純化，如方法A(圖6)一樣，用路易斯酸(例如三氟化硼乙醚絡合物)處理，得到橋接的茚并吡咯并咔唑(Ⅱ)，其中R1=H。
可以用在這里作為參考的美國專利5,705,511和4,923,986描述的方法將R3,R4,R5和R6基團引入。也可以如圖8所示，在形成橋接的茚并吡咯并咔唑后引入R3取代基，用NBS溴化B環(huán)的3位得到化合物(ⅩⅩⅪ)。通過運用鈀-催化的Stille,Suzuki,Heck,Kumada或Castro-Stephens反應,先后引入含碳基團，可以得到化合物(ⅩⅩⅫ)、(ⅩⅩⅢ)等，另外，利用Buchwald的鈀催化胺化反應，用化合物(ⅩⅩⅪ)可以得到以例如氨基堿為雜原子代替溴的化合物。
通過氧化方法，可以將含氧基團引入E環(huán)的茚碳，如圖9化合物(ⅩⅩⅩⅣ)所示。這種化學反應也導致了內酰胺(A環(huán))亞甲基的氧化，從而得到所示的亞酰胺衍生物。
實施例7Rink樹脂鍵合中間體的制備(ⅩⅢ-A)，(ⅩⅢ-B)和(ⅩⅢ-C)，(圖3)實施例7-A將Rink酸性樹脂Ⅻ(10.00g,0.64mmol/g)、1-甲基-2-吡咯烷酮，苯(350mL)，Ⅷ-A[A1,A2=H2,B1,B2=O,R3=R4=R5=R6=H](3.00g)和對甲苯磺酸(1.00g)逐個加入裝有機械攪拌器和Dean-Stark阱的三口園底燒瓶，將反應混合物加熱并回流20小時，然后過濾，用THF(5×175mL)洗滌樹脂并放置洗滌液，順序用DMSO(4×100mL)、2％碳酸氫鈉水溶液(4×100mL)、水(4×100mL)、DMSO(2×200mL)、THF(4×100mL)和乙酸乙酯(4×100mL)洗滌，在真空下(24小時)干燥樹脂得到11.70(0.47mmol/g)樹脂鍵合Ⅷ-A的化合物(ⅩⅢ-A)。
蒸餾最初的THF洗滌液，用水(750mL)稀釋殘留物，并將得到的沉淀物過濾并順序用水、2％碳酸氫鈉水溶液(4×100mL)和水(4×100mL)洗滌，在真空下干燥后，回收到Ⅷ-A(1.28g)。
實施例7-B以同樣的方法，將Ⅷ-B[A1,A2=O,B1,B2=H2,R3=R4=R5=R6=H](0.5g)偶合到Rink酸性樹脂Ⅻ(1.52g)上，得到1.58g樹脂鍵合Ⅷ-B的化合物(ⅩⅢ-B)。
實施例7-C以同樣的方法，將Ⅷ-C[A1,A2=H2,B1,B2=O,R3=R4=R5=H,R6=10-OMe](1.02g)偶合到Rink酸性樹脂Ⅻ(3.12g)上，得到3.70(0.46mmol/g)樹脂鍵合Ⅷ-C的化合物(ⅩⅢ-C)(0.44g)。
實施例8化合物(Ⅱ-1)、化合物(Ⅱ-2)、化合物(Ⅱ-3)、化合物(Ⅱ-4a)、化合物(Ⅱ-4b)、化合物(Ⅱ-6)和化合物(Ⅱ-8)的制備[方法A，圖6]實施例8-A向含有(ⅩⅢ-A)(1.25g)的THF(24mL)懸濁液中加入1.0M EtMgBr(THF中6.25mL)溶液，在加入HMPA(5.0mL)前攪拌1小時，在攪拌10分鐘后，加入二乙氧基丁醛(3.0g)[它通過文獻Paquette,L.A.,Backhaus,D.,Braum,R.,Underliner,T.L.,和Fuchs,K.J.Am.Chem.Soc.1997,119,9662-71來制備]，并攪拌20小時。用10％氯化銨水溶液(5mL)停止反應并過濾。樹脂順序用10％氯化銨水溶液(3×10mL)、水(3×10mL)、THF(3×10mL)、DMF(3×10mL)、水(3×10mL)、THF(3×10mL)和乙醚(3×10mL)洗滌，真空干燥樹脂，用二氯甲烷(15mL)吸收，并用三氟乙酸(0.15mL)處理，攪拌1小時后，過濾反應物，蒸發(fā)濾液，得到的殘留物用二氯甲烷(20mL)吸收，并用甲苯磺酸吡啶鹽(50mL)處理，將得到的溶液攪拌4小時。同時用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和蒸餾走溶劑后，用制備HPLC(Zorbax RX-8,4×25cm，用60％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)純化。用碳酸氫鈉中和，并用二氯甲烷(3×50mL)提取，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)溶劑后，得到70.2mg化合物Ⅱ-1白色粉末，它具有下列特征13C NMR(DMSO-d6)δ171.8,143.3,142.4,141.4,140.1,140.0,136.6,129.2,127.9,127.4,127.1,126.8,124.1(2C),122.7,121.6,121.5,118.3,112.1,88.1,79.2,56.6,45.6,33.4,24.8；1H NMR(DMSO-d6)δ9.21(d,J=7.5,1H),8.62(s,1H),7.98(d,J=7.7,1H),7.86(d,J=8.3,1H),7.71(d,J=7.3,1H),7.49(dd,J=7.9,7.4,1H),7.41(dd,J=7.5,7.4,1H),7.36-7.27(m,2H),6.86(d,J=6.0,1H),5.63-5.58(m,1H),4.91(s,2H),4.53(d,J=3.3,1H),2.23-2.14(m,1H),1.96-1.92(m,1H),0.96-0.88(m,1H),0.60-0.57(m,1H)；MS m/z(M+H)calcd379, obsd379.
也是用制備HPLC分離產(chǎn)品混合物得到化合物Ⅱ-2(0.5mg)它具有下列特征1H NMR(DMSO-d6)δ9.17(d,J=8.1,1H),8.62(s,1H),7.98(d,J=7.0,1H),7.85(d,J=6.8,1H),7.57(d,J=6.8,1H),7.49(dd,J=7.9,7.4,1H),7.44-7.26(m,3H),6.81(d,J=6.0,1H),5.43-5.33(m,1H),4.43(s,2H),2.23-2.14(m,1H),1.96-1.92(m,1H),1.45-1.55(m,2H),0.96-0.88(m,1H),0.60-0.57(m,1H),0.29(t,J=7.0,3H)；MS m/z(M+H)calcd407,obsd407.
實施例8-B用類似上述化合物Ⅱ-1方法，用1,1-二乙氧基-2-戊酮(0.75mL)[根據(jù)已知的Sworin,M.and Neuman,W.L.J.Org.Chem.1988,53,4894-6的方法制備]處理樹脂(ⅩⅢ-A)得到化合物Ⅱ-3(3.5mg)，通過制備TLC(硅膠，用50％乙酸乙酯/甲苯洗脫)分離，它具有以下性質1HNMR(DMSO-d6)δ9.42(d,J=8.2,1H),8.58(s,1H),7.95(d,J=7.4,1H),7.79(d,J=8.3,1H),7.71(d,J=7.1),7.50-7.20(m,4H),6.81(d,J=5.9,1H),4.90(s,2H),4.46(s,1H),2.35-2.20(m,1H),1.98(s,3H),1.75-1.60(m,1H),1.25-1.00(m,1H),0.35-0.15(m,1H)；MS m/z(M+H)計算值393，測量值393。
實施例8-C用類似方法，將(ⅩⅢ-A)(74.3mg)用1,1-二乙氧基-2-己酮(0.75mL)[根據(jù)已知Brenner,J.E.,J.Org.Chem.1961,26,22-7的方法制備]處理得到化合物Ⅱ-4a(2.10mg)和化合物Ⅱ-4b(1.06mg)，分別通過制備HPLC(Zorbax RX-8,4×25cm,用65％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)分離，化合物Ⅱ-4a具有以下性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.30(d,J=8.3,1H),8.55(s,1H),7.97(d,J=7.2,1H),7.65(d,J=8.5,1H),7.59(d,J=7.5),7.48(dd,J=7.8,7.2,1H)7.39-7.15(m,3H),6.31(dd,J=5.9,5.5,1H),5.02(s,1H),4.88(s,2H),0.88(s,3H)其它脂族信號消失在溶劑峰中MS m/z(M+H)計算值407，測量值407。化合物Ⅱ-4b具有以下性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.43(d,J=8.1,1H),8.59(s,1H),7.99(d,J=7.3,1H),7.75-7.65(m,2H),7.49(dd,J=7.0,6.4,1H),7.43(dd,J=8.2,8.1,1H),7.36-7.25(m,2H),6.75(s,1H),4.91(s,2H),4.50(s,1H),1.95(s,3H)其它脂族信號消失在溶劑峰中MS m/z(M+H)計算值407,測量值407。
實施例8-D用類似的方法，用二乙氧基丁醛(3.65g)處理(ⅩⅢ-C)(1.00g)得到化合物Ⅱ-6(87.8mg)，通過制備HPLC(Zorbax RX-8,2.5×25cm，用65％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)分離，它具有以下性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.09(d,J=8.6,1H),8.60(s,1H),7.95(d,J=7.4,1H),7.84(d,J=8.3,1H),7.47(dd,J=7.2,7.0,1H),7.35(s,1H),7.29(dd,J=7.0,7.0,1H),6.98(dd,J=8.6,1.9,1H),6.83(d,J=6.0,1H),5.65-5.55(m,1H),4.88(s,2H),4.48(d,J=3.9,1H),3.82(s,3H),2.25-2.10(m,1H),2.08-1.85(m,1H),0.96-0.75(m,1H),0.65-0.50(m,1H)；MS m/z(M+Na)計算值431，測量值431。
實施例8-E用類似的方法，用二乙氧基丁醛(1.5mL)處理樹脂(ⅩⅢ-B)(153.2mg)得到化合物Ⅱ-8(3.6mg)，通過制備HPLC(Zorbax RX-8,2.5×25cm，用65％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)分離，它具有以下性質1HNMR (DMSO-d6)δ9.09(d,J=7.9,1H),8.81(s,1H),7.817.73(m,3H),7.48-7.35(m, 3H),7.24(dd,J=7.6,7.5,1H),6.85(d,J=6.2,1H),5.63-5.59(m,1H),4.86(s,2H),4.61(d,J=3.6,1H),3.82(s,3H),2.21-2.13(m,1H),1.96-1.90(m,1H),0.87-0.79(m,1H),0.61-0.56(m,1H)；MS m/z(M+H)計算值379，測量值379。
實施例9化合物Ⅱ-7a和化合物Ⅱ-7b的制備(方法A，圖6)實施例9-A(1,1-二乙氧基乙氧基)丙酮的制備向冷的(0℃)NaH(2.68g,60％)的THF(150mL)懸濁液中加入1,1-二乙氧基乙醇(根據(jù)已知的文獻Zirkle,C.L.等J.Org.Chem.1961,26,395-407制備)(9.00g)的THF溶液(20mL)，在室溫下攪拌混合物1小時，然后加入甲代烯丙基氯(8.0mL)，將反應混合物加熱回流過夜，冷卻并通過硅藻土填料過濾，通過旋轉蒸餾去除溶劑，并用柱色譜(二氧化硅，20％乙醚/己烷)純化，得到1,1-二乙氧基乙基甲代烯丙基醚(11.5，90％)。將冷卻的(-30℃)醚(6.00g)的乙酸乙酯溶液(80mL)進行臭氧分解，直到用TCL檢測(1小時)沒有起始物為止，同時，用氧氣凈化反應，用pd(OH)2(150mg)處理，并在氫氣氣氛中攪拌過夜，過濾掉催化劑，旋轉蒸餾濃縮濾液，用柱色譜(二氧化硅，20％乙酸乙酯/己烷)純化得到的殘留物，得到目標化合物(4.53g,82％)。
實施例9-B根據(jù)方法A(圖6)，用EtMgBr(1.25mL)和(1,1-二乙氧基乙氧基)丙酮(實施例8-A)(1.2mL)處理樹脂(ⅩⅢ-A)(230.2mg)，純化分離和樹脂分離后，用二氯甲烷(20mL)提取出部分粗產(chǎn)品混合物(10.5mg)，并用三氟化硼的醚絡合物(20uL)處理，攪拌2.5小時后，用碳酸氫鈉飽和水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。經(jīng)過濾并去除溶劑，用制備HPLC(Zorbax RX-8,4×25cm，用65％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)純化得到的殘留物得到化合物Ⅱ-7a(2.34mg)和化合物Ⅱ-7b(1.34mg)，化合物(Ⅱ-7a)具有下列性質1H NMR(CDCl3)δ9.35-9.20(m,1H),7.87(d,J=7.6,1H),7.62(d,J=7.0,1H),7.60-7.45(m,1H),7.49(dd,J=7.7,7.5,1H),7.40(d,J=8.1,1H),7.37-7.26(m,3H),6.22(s,1H),5.20-4.85(m,1H),4.47(s,1H),3.67(d,J=12.7,1H)3.52(d,J=11.8,1H),3.40(d,J=12.7,1H),3.38(d,J=11.8,1H),1.91(s,3H)；MS m/z(M+H)計算值409，測量值409?；衔?Ⅱ-7b)具有下列性質1H NMR (CDCl3)δ9.58-9.22(m,1H),7.82(d,J=7.4,1H),7.60-7.40(m,3H),7.37-7.27(m,3H),7.21(d,J=8.1,1H),5.81(s,1H),5.21(s,1H),5.10-4.80(m,1H),4.59(d,J=13.5,1H),4.38(dd,J=13.5,5.3,1H),4.21(d,J=13.1,1H),3.82(d,J=13.2,1H),1.13(s,3H)；MS m/z(M+H)計算值409，測量值409。
實施例10化合物Ⅱ-5的制備(圖8)向化合物Ⅱ-1(8.1mg)的THF(2mL)溶液中加入NBS(4.6mg)，并攪拌過夜，再加入NBS(4.5mg)并攪拌2.5小時，過濾掉不溶解的物質，并旋轉濃縮濾液，用柱色譜(C-18，用65％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)純化得到的殘留物，用碳酸氫鈉中和合適的部分，用二氯甲烷(3×20mL)提取，并用硫酸鎂干燥，經(jīng)過濾和蒸發(fā)溶劑后，得到化合物Ⅱ-5(5.1mg)白色粉末，它具有下列性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.22(d,J=7.4,1H),8.67(s,1H),8.14(s,1H), 7.86(d,J=8.7,1H),7.72(d,J=7.0,1H),7.63(d,J=7.8,1H),7.42(dd,J=7.5,7.3,1H),7.35(dd,J=7.3,7.2,1H),6.86(d,J=6.0,1H),5.63-5.58(m,1H),4.94(s,2H),4.54(d,J=3.1,1H),2.30-2.14(m,1H),2.00-1.82(m,1H),0.96-0.88(m,1H),0.62-0.50(m,1H)；MS m/z(M+H)計算值475/9(1∶1)，測量值457/9(1∶1)。
實施例11中間體ⅩⅤ的制備(圖4)向Ⅷ-A[A1,A2=H2,B1,B2=O,R3=R4=R5=R6=H](1.05g)的DMF(25mL)溶液中加入三乙基胺(0.75mL)和叔丁基二甲基甲硅烷氯化物(TMS-Cl)(0.65g)，攪拌3小時后，用飽和碳酸氫鈉水溶液停止反應，并用乙酸乙酯提取，用水和鹽水洗滌有機層，并用硫酸鎂干燥，經(jīng)過濾和蒸發(fā)溶劑后，將殘留物用乙醚破碎得到化合物ⅩⅤ(848mg)，蒸發(fā)洗滌液，得到的殘留物用柱色譜(二氧化硅，1％乙酸乙酯/二氯甲烷)純化，得到產(chǎn)品(502mg，結和產(chǎn)率94％)具有下列性質1H NMR(DMSO-d6)δ11.94(s,1H),9.32(d,J=7.6,1H),8.03(d,J=7.7,1H),7.64(d,J=7.2,1H),7.58(d,J=8.1,1H),7.44(dd,J=7.7,7.6,1H),7.39(dd,J=7.7,7.6,1H),7.32(d,J=7.3,1H),7.25(dd,J=7.6,7.3,1H),5.00(s,2H),4.14(s,2H),0.99(s,9H),0.46(s,6H)；MS m/z(M+H)計算值425，測量值425。
實施例12通過方法B(圖7)制備化合物Ⅱ-1將40％的三通B的甲醇(10mL)溶液溶解于吡啶(10mL)中，制備三通B的吡啶溶液(0.45M)，在減壓(20mmHg)下去除溶劑得到8mL溶液，然后用吡啶稀釋到50mL，過濾并保存在氮氣中。用氬氣沖洗ⅩⅤ(20.3mg)的吡啶溶液(2.0mL)后，用300μL的三通B(吡啶中0.45M)和二乙氧基丁醛(50μL)處理，然后攪拌2小時，將反應物轉移到乙酸乙酯中，并用1N鹽酸水溶液、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，經(jīng)過濾和蒸發(fā)溶劑后，在二氯甲烷(10mL)中用三氟化硼的乙醚絡合物(10μL)處理加和物，攪拌2小時后，用碳酸氫鈉飽和水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。經(jīng)旋轉蒸發(fā)去除溶劑，用制備HPLC(Zorbax RX-8,2.5×25cm，用65％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)純化得到的殘留物，用碳酸氫鈉中和合適的部分，用二氯甲烷(3×20mL)提取，并用硫酸鎂干燥，經(jīng)過濾和蒸發(fā)溶劑后，得到化合物Ⅱ-1(11.8mg,65％產(chǎn)率)，它的1HNMR和MS光譜和HPLC保留值和實施例8-A中用方法A制備的物質相同。
實施例13化合物Ⅱ-9的制備(圖8)向溴代化合物Ⅱ-5(6.2mg)的1-丙醇(4.0mL)懸濁液中加入3-氨基苯基硼酸(3.8mg)，攪拌0.25小時后，順序加入乙酸鈀(2.0mg)、三苯基磷(4.8mg)、碳酸鈉(2.8mg)和水(2.0mL)，將反應化合物加熱回流0.75小時，冷卻，用二氯甲烷提取，用水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥有機層，通過旋轉蒸餾去除溶劑，得到的殘留物用制備HPLC(Zorbax RX-8,2.5×25cm，用50％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)純化，用碳酸氫鈉中和合適的部分，用二氯甲烷(3×20mL)提取，并用硫酸鎂干燥，經(jīng)過濾和蒸發(fā)溶劑后，得到化合物Ⅱ-9(3.1mg,49％產(chǎn)率)，具有下述光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.22(d,J=7.5,1H),8.66(s,1H),8.00-7.25(m,8H),7.12(dd,J=7.1,7.0,1H),6.95-6.80(m,3H),6.53(d,J=6.0,1H),5.63-5.58(m,1H),4.99(s,2H),4.55(s,1H),2.25-2.10(m,1H),1.95-1.90(m,1H),0..98-0.88(m,1H),0.65-0.57(m,1H)；MS m/z(M+H)計算值470，測量值470。
實施例14化合物Ⅱ-10的制備(圖9)向化合物Ⅱ-1(5.0mg)的DMSO(1mL)溶液中加入氰化鈉(4.3mg)，將混合物加熱到145℃1小時，冷卻混合物，并用乙酸乙酯提取，用水(3×20mL)和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥有機層，過濾并蒸發(fā)，得到的殘留物用制備HPLC(Zorbax RX-8,2.5×25cm,用55％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸洗脫)純化，用碳酸氫鈉中和合適的部分，用二氯甲烷(3×20mL)提取，并用硫酸鎂干燥，經(jīng)過濾和蒸發(fā)溶劑后，得到化合物Ⅱ-10(2.7mg,50％產(chǎn)率)，具有下述光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ11.4(s,1H),8.86(d,J=7.9,1H),8.79(d,J=7.6,1H),7.90(d,J=8.3,1H),7.62-7.55(m,2H),7.49(dd,J=7.6,7.4,3H),7.40(dd,J=7.4,7.3 1H),7.35(dd,J=7.5,7.4,1H),6.86(d,J=6.0,1H),6.03(s,1H),5.40-5.30(m,1H),2.25-2.14(m,1H),2.03-1.90(m,1H),1.10-0.98(m,1H),0.82-0.77(m,1H).
實施例15化合物(Ⅱ-11)的制備(方法A，圖6)根據(jù)方法A(圖6)，用EtMgBr(1.0mL)和2,5-二氧雜戊酸己酯(1.5mL)和樹脂(ⅩⅢa)(150.2mg)[Schmidt,U.,Reidl,B.Synthesis1993,809]，純化分離和樹脂分離后，用二氯甲烷(20mL)提取出粗產(chǎn)品混合物，并用三氟化硼的醚絡合物(20uL)處理，攪拌2.5小時后，用碳酸氫鈉飽和水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。經(jīng)過濾并去除溶劑后，用制備HPLC(Zorbax RX-8,4×25cm，用55-75％乙腈/水w/0.1％三氟乙酸梯度洗脫)純化得到的殘留物，得到化合物Ⅱ-11(6.4mg)，它具有下列性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.36(d,J=7.7,1H),8.68(s,1H),8.00(d,J=7.7,1H),7.83(d,J=8.3,1H),7.58-7.15(m,5H),6.97(d,J=5.9,1H),4.93(s,2H),4.82(s,1H),4.48(q,J=7.1,2H),2.42-1.91(m,2H),1.37(t,3H,J=7.1),1.25-0.63(m,2H).
實施例16化合物Ⅱ-12的制備用2M LiBH4(1.0mL的THF溶液)溶液處理化合物Ⅱ-11(3.4mg)的THF(2mL)溶液，并攪拌1.5小時。加入1N鹽酸水溶液(4mL)冷卻，攪拌20分鐘后，加入10％的氫氧化鈉(15mL)，并用二氯甲烷(3×10mL)提取。用硫酸鎂干燥后，經(jīng)過濾并蒸餾溶劑后，得到化合物Ⅱ-12(0.32mg)，它具有下列性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.35(d,J=7.7,1H),8.62(s,1H),7.98(d,J=7.7,1H),7.83(d,J=8.2,1H),7.75(d,J=8.2,1H),7.50-7.25(m,4H),6.84(d,J=7.7,1H),6.11(s,1H),4.91(s,2H),4.71(s,1H),4.50-4.40(m,1H),4.30-4.20(m,1H)2.42-1.91(m,2H),1.25-0.63(m,2H)；MS m/z(M+H)計算值409，測量值409。
實施例17化合物Ⅱ-13的制備根據(jù)實施例11的方法，在DMF(45mL)中，用三乙基胺(0.85mL)和叔丁基二甲基甲硅烷氯化物(0.65g)將Ⅷ-C[A1,A2=H2,B1,B2=O,R3=R4=R5=H,R6=OMe]和Ⅷ-D[A1,A2=H2,B1,B2=O,R3=R4=R6=H,R5=OMe](1.25g)的約為95-5的混合物甲硅烷基化，得到ⅧB-TDBMS(1.41g)，它具有下列光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ11.91(s,1H),9.18(d,J=8.6,1H),7.99(d,J=7.8,1H),7.56(d,J=8.0,1H),7.42(dd,J=7.7,7.6,1H),7.30-7.20(m,2H),6.95(dd,J=7.6,2.5,1H),4.97(s,2H),4.09(s,2H),3.81(s,3H),0.99(s,9H),0.45(s,6H).也可以用柱色譜得到ⅧD-TBDMS(65mg)，它具有下列光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ11.92(s,1H),9.01(d,J=1.8,1H),8.02(d,J=7.9,1H),7.58(d,J=8.1,1H),7.53(d,J=8.3,1H),7.44(dd,J=7.2,7.1,1H),7.25(dd,J=7.2,7.1,1H),6.91(dd,J=8.1,2.7,1H),4.99(s,2H),4.06(s,2H),3.78(s,3H),0.99(s,9H),0.46(s,6H).化合物Ⅱ-13的液相合成根據(jù)實施例12的方法，用氬氣沖洗ⅧD-TBDMS(10.3mg)的吡啶(2.0mL)溶液，并用350μL三通B(0.45M的吡啶溶液)和二乙氧基丁醛(50μL)(根據(jù)已知的方法制備，Paquette,L.A.,Backhaus,D.,Braum,R.,Underiner,T.L.,Fuchs,K.J.Am.Chem.Soc.1997,119,9662-71，它在這里作為參考)處理。攪拌2小時后，提取到乙酸乙酯中，用10％的硫酸酮水溶液(3×50mL)和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥。過濾和蒸發(fā)溶劑后，通過硅膠(30％乙酸乙酯/己烷)洗提，濃縮UV活性部分，提取到二氯甲烷中(4mL)，并用三氟化硼乙醚絡合物(10μL)處理。攪拌2小時后，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，通過旋轉蒸餾去除溶劑，得到的殘留物用乙醚研磨，得到純的化合物Ⅱ-13(4.6mg),它具有以下光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ8.92(d,J=2.3,1H),8.59(s,1H),7.97(d,J=7.7,1H),7.86(d,J=8.3,1H),7.59(d,J=8.2,1H),7.47(dd,J=7.7,7.6,1H),7.28(dd,J=7.5,7.4,1H),6.89(dd,J=8.3,2.4,1H),6.82(d,J=6.0),5.55-5.50(m,1H),4.99(s,2H),4.53(d,J=3.5,1H),3.85(s,3H),2.30-2.20(m,1H),2.10-1.90(m,1H),1.10-0.90(m,1H),0.73-0.66(m,1H)；MS m/z(M+H)計算值409,測量值409。
實施例18化合物Ⅱ-14a和化合物Ⅱ-14b的合成ⅧA-TBDPS的合成。向Ⅷ-A(6.2g)的DMF(150ml)溶液中加入TEA(9.7mL)、叔丁基氯代二苯基硅烷(tBDPS-Cl,10.5ml)和催化劑量的二甲基氨基吡啶。將化合物在50℃加熱15小時。另外加入三乙基胺(5.0mL)和tBDPS-Cl(5.0mL)，并在50℃下保持20小時，用碳酸氫鈉冷卻和用乙酸乙酯提取，用水(2×100mL)和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。過濾和蒸發(fā)溶劑后，用1∶1的乙醚己烷研磨殘留物，得到ⅧA-TBDPS(9.1g,83％)，它具有以下的光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ11.95(s,1H),9.21(d,J=1.8,1H),7.80-7.20(m,16H),7.13(dd,J=8.1,2.7,1H),4.83(s,2H),4.13(s,2H),1.25(s,9H)；MS m/z(M+H)計算值549，測量值549。Ⅱ-17的液相合成用氬氣沖洗ⅧA-TBDPS(102.5mg)的吡啶(4.0mL)溶液，并用1.0mL三通B(0.45M的吡啶溶液)和二乙氧基丁醛(140μL)(根據(jù)已知的方法制備，Paquette,L.A.,Backhaus,D.,Braum,R.,Underiner,T.L.,Fuchs,K.J.Am.Chem.Soc.1997,119,9662-71)處理，攪拌2小時后，提取到乙酸乙酯中，用10％的硫酸酮水溶液(3×50mL)和鹽水洗滌，并用硫酸鎂干燥，過濾和蒸發(fā)溶劑后，通過硅膠(30％乙酸乙酯/己烷)洗提，濃縮UV活性部分，提取到二氯甲烷中(10mL)，并用三氟化硼乙醚絡合物(10μL)處理，攪拌0.5小時后，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，通過旋轉蒸餾去除溶劑，得到的殘留物用柱色譜(硅膠，25％乙酸乙酯/己烷)純化產(chǎn)品(75.5mg)，它具有以下光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.08(d,J=7.2,1H),7.86(d,J=8.2,1H),7.73(d,J=6.9,1H),7.70-7.24(m,15H),6.88(d,J=5.9,1H),5.72(m,1H),4.86(s,2H),4.55(d,J=3.3,1H),2.30-2.20(m,1H),2.10-1.90(m,1H),1.10-0.90(m,1H),0.73-0.66(m,1H)；MS m/z(M+Na)計算值639，測量值639。
通過手性HPLC分離TBDPS保護的Ⅱ-1a對映異構體，并制備化合物Ⅱ-14a和Ⅱ-14b。
將TBDPS-保護的Ⅱ-1a溶于少量的(1∶4,v/v)三氯甲烷∶乙醇溶液中，并將500μL注射到CHIRACEL OD柱(1cm ID×25cm)中，用100％的乙醇(1.5mL/min)洗提，收集相應于對映體A(24.0-27.0分鐘)和對映體B(36.0-39.0分鐘)的餾份，并分別濃縮，將每一種TBDPS保護的Ⅱ-1a異構體提取到THF(12mL)中，并加入用HF(0.125mL的0.1M水溶液)緩沖的0.1M KF水溶液(4.6mL)，將每份溶液攪拌40小時，提取到DCM中，并用碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層用DCM(3×100mL)提取，將混和的有機層溶液立刻過硫酸鎂填料，蒸發(fā)后剩下殘留物用1∶1的乙醚∶己烷研磨，并用如實施例8A所述的制備HPLC純化，每種異構體的HPLC保留時間和MS光譜數(shù)據(jù)相應于真正的Ⅱ-1a。通過手性HPLC檢測，得到的化合物Ⅱ-14a(2.84mg)為97％ee和化合物Ⅱ-14b(3.52mg)為90％ee，用CHIRACEL OD柱(0.46cm ID×5cm)檢測每種異構體的手性純度，用1∶1的甲醇/乙醇作為洗脫液(0.25mL/min),Ⅱ-14a的Rt為14.0分鐘，Ⅱ-14b的Rt為20.5分鐘。
實施例19化合物Ⅱ-15的合成向Ⅷ-A(1g,3.2mmol)的THF(40mL)懸濁液加入NBS(632mg,3.5mmol)，在室溫下攪拌反應混合物18小時，真空去除溶劑，并將桔黃色固體產(chǎn)品懸浮于甲醇(50mL)中。將漿狀物過濾，并用更多的甲醇洗滌固體。干燥后，回收到淺黃色溴化物(R3=Br)(1.09g,2.8mmol,88％產(chǎn)率)(MS:m/z(M+H)389,391)。
向上述溴化物(1.09g,2.8mmol)的苯(60mL)和N-甲基吡咯烷酮(6mL)溶液中加入4,4’-二甲氧基二苯基甲醇(818mg,3.4mmol)和對甲苯磺酸(532mg,2.8mmol)，將混合物加熱回流。24小時后，冷卻到室溫，并用乙酸乙酯(200mL)稀釋。用碳酸氫鈉洗滌有機層2次，水洗2次，鹽水洗2次。用無水硫酸鎂干燥有機層，過濾并真空去除溶劑。通過柱色譜(10％乙酸乙酯-己烷)純化粗產(chǎn)品，得到期望的DMB保護的3-溴吲哚衍生物(1.5g,2.4mmol,87％產(chǎn)率)它為桔色固體(MS m/z(M+H)615,617)。
將DMB保護的3-溴化合物(1.5g,2.4mmol)、二(三苯基磷?；?鈀二氯化物(100mg,0.14mmol)、無水乙酸鈉(3.9g 4.8mmol和甲氧基乙醇(50mL)注入250mL可密封的試管。將試管抽真空并充滿一氧化碳，并將其放置在一氧化碳氣氛中。將其放置在150℃的油浴中。4小時后，將試管冷卻到室溫，繼續(xù)充入一氧化碳，再重復反應共10小時。然后用乙酸乙酯(250mL)稀釋，用水洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾并真空干燥。用甲醇研磨得到3-羧基化合物(1.29g,2.02mmol,84％產(chǎn)率)，它為黃色固體MS m/z(M+H)639。
向上述酯(1.2g,1.9mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入苯硫基甲烷(1mL)和TFA(4mL)。在室溫下攪拌1小時后，將反應混合物蒸發(fā)到干燥，并將殘留物懸浮于乙醚中。過濾懸濁液，用乙醚洗滌固體直到濾液為無色。在真空下干燥固體得到白色固體的酯(636mg，1.54mmol):MS m/z(M+H)413。
將上述的酯(500mg,1.2mmol)懸浮于二氯甲烷(15mL)中，并加入二異丁基鋁氫化物的二氯甲烷溶液(5.5mL,5.5mmol,1.0M)。在室溫下2小時后，用甲醇冷卻反應物，通過旋轉蒸餾去除溶劑，并加入水到殘留物中。將漿狀物過濾，真空干燥固體，得到期望的產(chǎn)品(A1,A2=O,B1,B2=H2,R3=3-CH2OH,R4=R5=R6=H,Q=NH)(367mg,1.08mmol)，為淺黃色固體:MS m/z(M+H)341m/e。
將上述醇(360mg,0.9mmol)[A1,A2=O,B1,B2=H2,R3=3-CH2OH,R4=R5=R6=H,Q=NH]與乙醇(15mL)一起放置在可密封的試管中。向這個懸浮液中加入三氟乙酸酐(254mL,1.8mmol)。在70℃下將反應混合物加熱15小時。冷卻試管，真空下去除溶劑，得到的固體與甲醇研磨，過濾和干燥得到期望的醚(239mg,0.65mmol,72％產(chǎn)率)，桔黃色固體MS m/z(M+H)369根據(jù)實施例11的方法，在DMF(5mL)中，用三乙基胺(0.75mL，0.54mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(81.0mg,0.54mmol)甲硅烷化上述的醚(100mg,0.27mmol)，分離凈化水之后，蒸發(fā)溶劑，用乙醚∶己烷(1∶1)研磨固體，得到桔黃色固體產(chǎn)品(114.6mg,0.24mmol,88％):MS m/z(M+H)483。
根據(jù)實施例12的方法，用氬氣沖洗上述醚(23.0mg，0.048mmol)的吡啶(4.0mL)溶液，然后用200μL的三通B(在吡啶中0.45M)和5,5-二甲基-1,3-二氧六環(huán)-2-丙醛(50μL)處理。Khanna,I.K.；Weier,R.M.；Yu.Y.；Collins,P.W.；Miyashiro,J.M.；等,J.Med.Chem.1997,40,1619-33在這里作為參考。0.5小時后，另外加入三通B(200μL，在吡啶中0.45M)，重復此操作2次，最后提取到乙酸乙酯中，用10％的硫酸酮水溶液(3×50mL)、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥。過濾和蒸發(fā)溶劑后，通過硅膠(30％乙酸乙酯/己烷)洗提殘留物，濃縮UV活性部分，提取到二氯甲烷中(4mL)，并用催化劑量的甲苯磺酸吡啶鹽(1mg)處理。將混合物加熱回流48小時，然后真空去除溶劑，將得到的殘留物轉移到THF(8.0mL)中，并加入用HF(0.09mL的0.1M水溶液)緩沖的0.1MKF水溶液(2.9mL)。將溶液攪拌20小時，提取到DCM中，并用碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層用DCM(3×100mL)提取，將混和的有機層溶液立刻過硫酸鎂填料，蒸發(fā)后剩下殘留物用1∶1的乙醚∶己烷研磨，并用如實施例8A所述的制備HPLC純化，得到期望的產(chǎn)品Ⅱ-15(1.26mg,6.0％)，它具有下列的光譜性質∶1H NMR(DMSO-d6)δ9.41(d,J=2.3,1H),8.53(s,1H),7.90(s,1H),7.80-7.25(m,5H),6.33(d,J=6.0,1H),5.31(m,1H),4.95(s,2H),4.66(s,2H),4.48(m,1H),3.50(q,J=6.8,2H),2.30-2.20(m,1H),2.10-1.90(m,1H),1.25(t,J=6.8,3H,1.10-0.90(m,1H),0.73-0.66(m,1H)；MS m/z(M+H)計算值437，測量值437。
向ⅩⅣ(圖4)(102.5mg)的THF(6.0mL)溶液中加入EtMgBr的THF(0.8mL的1.0M)溶液，并攪拌1小時，加入5,5-二甲基-1,3-二氧六環(huán)-2-丙醛(300μL)(它根據(jù)已知文獻制備，I.K.；Weier,R.M.；Yu.y.；Collins,P.W.；Miyashiro,J.M.；等，J.Med.Chem.1997,40 1619-33)，并將混合物攪拌3小時，用氯化銨水溶液冷卻混合物，用乙酸乙酯提取，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，再用硫酸鎂干燥，通過旋轉蒸餾蒸發(fā)溶劑，得到的殘留物用柱色譜(硅膠，40％乙酸乙酯/己烷)純化，得到兩部分不同異構體的物質MS m/z(M+H)709。更極性的部分(25mg)用二氯甲烷(10mL)提取，并用三氟化硼乙醚絡合物(10μL)處理。
攪拌1.5小時后，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，再用無水硫酸鎂干燥有機層，過濾和在真空下濃縮，得到的殘留物用實施例8-A描述的制備HPLC純化，得到產(chǎn)品(1.75mg)，它具有以下光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.20(d,J=7.46,1H),8.56(s,1H),7.97(d,J=7.7,1H),7.69(d,J=8.2,1H),7.57(d,J=7.3,1H),7.52-7.20(m,4H),6.57(m,1H),5.1(m,1H),4.88(s,2H),4.67(s,1H),2.30-2.20(m,1H),2.10-1.90(m,1H),1.10-0.90(m,1H),0.73-0.66(m,1H)；MSm/z(M+H)計算值379，測量值379。
實施例21化合物Ⅱ-16a和Ⅱ-16b的合成用氬氣沖洗ⅧA-TBDPS(見實施例18)(214mg)的吡啶(4.0mL)溶液，在吡啶中(2mL)，用750μL的三通B(在吡啶中0.45M)和2,2-二乙氧基-乙氧基-乙醛(200mg)[根據(jù)已知的文獻方法制備Aparico,F.J.L.；Benitez,F.Z.；Gonzalez,F.S.；Carbohydr.Res.1983,297-302,其公開的內容在這里作為參考]處理。2小時后，另外加入三通B(250μL)。另外攪拌0.5小時后，用乙酸乙酯提取反應混合物，用10％的硫酸銅水溶液(3×50mL)、鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾和蒸發(fā)溶劑后，通過硅膠(35％乙酸乙酯/己烷)洗提，濃縮UV活性部分，提取到二氯甲烷中(10mL)，并用三氟化硼乙醚絡合物(10μL)處理。攪拌0.5小時后，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，通過旋轉蒸餾去除溶劑，得到的殘留物用柱色譜(硅膠，35％乙酸乙酯/己烷)純化，得到兩部分非對應異構體加合物，MS m/z(M+H)725。將每一種加合物提取到二氯甲烷中(10mL)，并用三氟化硼乙醚絡合物(10μL)處理。攪拌0.5小時后，通過旋轉蒸餾去除溶劑，將得到的殘留物轉移到THF(15mL)中，并加入用HF(0.20mL的0.1M水溶液)緩沖的0.1M KF水溶液(5.8mL)，將每種溶液攪拌20小時，提取到DCM中，并用碳酸氫鈉水溶液洗滌，水層用DCM(3×100mL)提取，將混和的有機層溶液立刻過硫酸鎂填料，蒸發(fā)后剩下殘留物用二氯甲烷(10mL)提取，并用三氟化硼乙醚絡合物(10μL)處理并攪拌48小時。
將每種反應混合物提取到二氯甲烷中，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用硫酸鎂干燥，通過旋轉蒸餾去除溶劑，得到的殘留物用實施例8-A描述的制備HPLC純化，一種非對映異構體化合物Ⅱ-16a(分離2.38mg)具有下述的光譜性質13CNMR(DMSO-d6)δ172.0,142.6,142.5,142.1,141.0,139.8,134.8,130.6,128.0,127.2,127.0,126.6,124.4,124.2,122.7,121.7,121.0,116.8,112.1,80.0,70.0,69.1,65.6,54.1,45.7；1H NMR(DMSO-d6)δ9.23(d,J=7.7,1H),8.58(s,1H),7.99(d,J=7.7,1H),7.77(d,J=8.3,1H),7.63(d,J=7.22,1H),7.48-7.30(m,4H),6.56(s,1H),5.10(m,1H),4.90(s,2H),4.70(m,1H),3.80-3.60(m,2H),3.30-3.00(m,2H)MS m/z(M+Na)計算值395，測量值395。
另一種非對映異構體化合物Ⅱ-16b(分離1.00mg)具有下述的光譜性質1H NMR(DMSO-d6)δ9.21(d,J=7.7,1H),8.59(s,1H),7.99(d,J=7.7,1H),7.77-7.30(m,6H),5.95(s,1H),5.05(m,1H),4.91(s,2H),4.63(m,1H),4.55-4.30(m,2H),另外的信號掩埋在溶劑峰中；MS m/z(M+Na)計算值395，測量值395。
參考表9可以進一步了解式Ⅱ化合物，它列出了式Ⅲ的一些優(yōu)選實施方式，其中指出了手性中心(*)。R1,R4,R6和R7為H,Y為
表9
需要申明，在本專利文本中提到的專利、申請和公開文獻都整個作為本發(fā)明的參考。本領域普通技術人員可以在不脫離本發(fā)明的宗旨的情況下，對優(yōu)選的實施方式進行預見、改變或修改。需要申明，這些變化都在本發(fā)明的范圍之內。
權利要求
1．式Ⅰ化合物 其中B環(huán)和F環(huán)，各自獨立地與它們所連接的碳原子一起，為選自下面的基團(a)其中1-3個碳原子可以被氮原子置換的不飽和6-員芳香碳環(huán)；(b)不飽和5-員芳香碳環(huán)；和(c)不飽和5-員芳香碳環(huán)，其中(1)一個碳原子被氧原子、氮原子、或硫原子置換；(2)兩個碳原子被一個氮原子和一個硫原子、一個氮原子和一個氧原子、或兩個氮原子置換；或(3)三個碳原子被三個氮原子置換；R1選自(a)H、取代或未取代的1-4個碳原子烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的雜芳基、或取代或未取代的雜芳基烷基；(b)-C(=O)R9，其中R9選自烷基、芳基和雜芳基；(c)-OR10，其中R10選自H和1-4個碳原子烷基；(d)-C(=O)NH2、-NR11R12、-(CH2)pN11R12、-(CH2)pOR10、-O(CH2)pOR10和-O(CH2)pNR11R12，其中p是1-4；而且其中要么1)R11和R12各自獨立地選自H和1-4個碳原子烷基，要么2)R11和R12一起形成式-(CH2)2-X1-(CH2)2-的連接基，其中X1選自-O-、-S-和-CH2-；R2選自H、1-4個碳原子烷基、羥基、具有1-4個碳原子烷氧基、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pNR11R12、-O(CH2)pOR10、具有6-10個碳原子取代或未取代的芳基烷基，和取代或未取代的雜芳基烷基；R3、R4、R5和R6各自獨立地選自a)H、芳基、雜芳基、F、Cl、Br、I、-CN、CF3、-NO2、-OH、-OR9、-O(CH2)pNR11R12、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR2R7、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pOR10、-CH2OR10、-NR11R12、-NR10S(=O)2R9、-NR10C(=O)R9；b)-CH2OR14，其中R14為移去羧基中的羥基后的氨基酸的殘基；c)-NR10C(=O)NR11R12、-CO2R2、-C(=O)R2、-C(=O)NR11R12、-CH=NOR2、-CH=NR9、-(CH2)pNR11R12、-(CH2)pNHR14、或-CH=NNR2R2A，其中R2A同R2；d)-S(O)yR2、-(CH2)pS(O)yR9、-CH2S(O)yR14，其中y是0、1或2；e)具有1-8個碳原子的烷基、具有2-8個碳原子的鏈烯基、具有2-8個碳原子的炔基，其中1)各個烷基、鏈烯基或炔基是未取代的；或者2)各個烷基、鏈烯基或炔基被1-3個選自以下的基團所取代具有6-10個碳原子的芳基、雜芳基、芳基烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、羥基烷氧基、烷氧基-烷氧基、羥基烷硫基、烷氧基-烷硫基、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OR9、-X2(CH2)pNR11R12、-X2(CH2)pC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pOC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pCO2R9、-X2(CH2)pS(O)yR9、-X2(CH2)pNR10C(=O)NR11R12、-OC(=O)R9、-OCONHR2，-O-四氫吡喃基、-NR11R12、-NR10C(=O)R9、-NR10CO2R9、-NR10C(=O)NR11R12、-NHC(=NH)NH2、NR10S(O)2R9、-S(O)yR9、-CO2R2、-C(=O)NR11R12、-C(=O)R2、-CH2OR10、-CH=NNR2R2A、-CH=NOR2、-CH=NR9、-CH=NNHCH(N=NH)NH2、-S(=O)2NR2R2A、-P(=O)(OR10)2、-OR14、和具有5-7個碳原子的單糖，其中單糖的每個羥基各自獨立地是未取代的，或者被H、1-4個碳原子的烷基、2-5個碳原子的烷羰氧基或具有1-4個碳原子的烷氧基所取代；X2是O、S、或NR10；R7和R8各自獨立地選自H、具有1-4個碳原子的烷基、具有1-4個碳原子的烷氧基、具有6-10個碳原子的取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的雜芳基烷基、-(CH2)pOR10、-(CH2)pOC(=O)NR11R12和-(CH2)pNR11R12；或者R7和R8一起形成式-CH2-X3-CH2-的連接基，其中X3是X2或一個鍵。m和n各自獨立地是0、1或2。Y選自-O-、-S-、-N(R10)-、-N+(O-)(R10)-、-N(OR10)-和-CH2-；Z選自單鍵、-O-、-CH=CH-、-S-、-C(=O)-、-CH(OR10)-、-N(R10)-、-N(OR10)-、-CH(NR11R12)-、-C(=O)N(R17)-、-N(R17)C(=O)-、-N(S(O)yR9)-、-N(S(O)yNR11R12)-、-N(C(=O)R17)-、-C(R15R16)-、-N+(O-)(R10)-、-CH(OH)-CH(OH)-和-CH(O(C=O)R9)CH(OC(=O)R9A)-，其中R9A同R9R15和R16各自獨立地選自H、-OH、-C(=O)R10、-O(C=O)R9、羥基烷基和-CO2R10；R17選自H、烷基、芳基和雜芳基；A1和A2選自H,H；H,OR2；H,-SR2；H,-N(R2)2；和一個基團，其中A1和A2一起形成選自=O、=S和=NR2的部分；B1和B2選自H,H；H,-OR2；H,-SR2；H,-N(R2)2；和一個基團，其中B1和B2一起形成選自=O、=S和=NR2的部分；其前提條件是A1和A2，或B1和B2的至少一對形成=O。
2．權利要求1的化合物，具有下式
3．權利要求2的化合物，具有下式的非對映異構體
4．權利要求2的化合物，具有下式的對映異構體
5．權利要求1的化合物，其中R1為H。
6．權利要求1的化合物，其中R2為H、羥基、或者取代或未取代的烷基。
7．權利要求1的化合物，其中R3、R4、R5和R6各自獨立地選自H、取代或未取代的烷基、鹵素、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基、或者取代或未取代的芳基。
8．權利要求1的化合物，其中R7和R8各自獨立地選自H、或者取代或未取代的烷基。
9．權利要求1的化合物，其中Y為O。
10．權利要求1的化合物，其中Z為單鍵、O、S、或者取代或未取代的N。
11．權利要求1的化合物，其中m和n各自獨立地是1或2。
12．權利要求1的化合物，其中Y為O,Z為單鍵或O，且m和n各自獨立地是1或2。
13．權利要求1的化合物，其中A1A2和B1B2各自獨立地是=O或H,H。
14．權利要求1的化合物，其中R1、R4、R6和R7各自為H，Y是O,n是1,A1A2和B1B2各自獨立地是=O或H,H,R2是H、OH、或低碳烷基，R3是H或取代烷基，R5和R8各自為H或烷氧基，Z為單鍵或O，以及m是1或2。
15．權利要求1的化合物，具有下式
16．權利要求15的化合物，其中R3和R5各自獨立地選自以下基團a)H、雜芳基、F、Br、-CN、CF3、-NO2、-OH、-OR9、-O(CH2)pNR11R12、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR2R7、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pOR10、-CH2OR10、-NR11R12、-NR10S(=O)2R9、-NR10C(=O)R9；c)-NR10C(=O)NR11R12、-CO2R2、-C(=O)R2、-C(=O)NR11R12、-CH=NOR2、-CH=NR9、-(CH2)pNR11R12、-(CH2)pNHR14；d)-S(O)yR2、-(CH2)pS(O)yR9、-CH2S(O)yR14，其中y是0,1或2；e)具有1-8個碳原子的烷基、具有2-8個碳原子的鏈烯基、具有2-8個碳原子的炔基，其中1)各個烷基、鏈烯基或炔基是未取代的；或者2)各個烷基、鏈烯基或炔基被1-3個選自以下的基團所取代具有6-10個碳原子的芳基、雜芳基、芳基烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、羥基烷氧基、烷氧基-烷氧基、羥基烷硫基、烷氧基-烷硫基、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OR9、-X2(CH2)pNR11R12、-X2(CH2)pC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pOC(=O)NR11R12、-X2(CH2)pCO2R9、-X2(CH2)pS(O)yR9、-X2(CH2)pNR10C(=O)NR11R12、-OC(=O)R9、-OCONHR2,-O-四氫吡喃基、-NR11R12、-NR10C(=O)R9、-NR10CO2R9、-NR10C(=O)NR11R12、-NHC(=NH)NH2、NR10S(O)2R9、-S(O)yR9、-CO2R2、-C(=O)NR11R12、-C(=O)R2、-CH2OR10、-CH=NR9、-S(=O)2NR2R2A、-OR14、和具有5-7個碳原子的單糖，其中單糖的每個羥基各自獨立地是未取代的，或者被H、1-4個碳原子的烷基、2-5個碳原子的烷羰氧基或具有1-4個碳原子的烷氧基所取代。
17．權利要求16的化合物，其中R5獨立地選自下列基團H、-OR9、-O(CH2)pNR11R12、-OC(=O)R9、-OC(=O)NR2R7、-OC(=O)NR11R12、-O(CH2)pOR10、-CH2OR10、-NR11R12、-NR10S(=O)2R9、-NR10C(=O)R9、-C(=O)NR11R12、-(CH2)pNR11R12、-S(O)yR2-(CH2)pS(O)yR9和-CH2S(O)yR14，其中y是0、1或2。
18．權利要求17的化合物，具有下式
19．權利要求18的化合物，具有下式的對映異構體
20．權利要求18的化合物，具有下式的非對映異構體
21．藥物組合物，含有權利要求1的化合物和可藥用載體。
22．藥物組合物，含有權利要求18的化合物和可藥用載體。
23．用于治療或預防前列腺疾病的藥物組合物，含有權利要求1的化合物和可藥用載體。
24．權利要求23的藥物組合物，其中的前列腺疾病為前列腺癌或良性的前列腺增生。
25．用于治療或預防血管生成性疾病的藥物組合物，含有權利要求1的化合物和可藥用載體。
26．權利要求25的藥物組合物，其中的血管生成性疾病為固體腫瘤、子宮內膜異位、糖尿病視網(wǎng)膜病、牛皮癬、成血管細胞瘤、眼科疾病或斑狀變性。
27．用于治療或預防瘤形成、類風濕關節(jié)炎、肺纖維變性、脊髓纖維變性、意外創(chuàng)傷的愈合、動脈粥樣硬化或再狹窄的藥物組合物，含有權利要求1的化合物和可藥用載體。
28．用于治療或預防阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側索硬化、帕金森病、中風、局部缺血、亨廷頓舞蹈病、愛滋病癡呆、癲癇、多發(fā)性硬化、末稍神經(jīng)病、腦損傷或脊索損傷的藥物組合物，含有權利要求1的化合物和可藥用載體。
29．抑制trk激酶活性的方法，包括提供足夠量的權利要求1的化合物，以獲得有效的抑制。
30．權利要求29的方法，其中trk激酶是trkA。
31．權利要求29的方法，其中提供權利要求1的化合物用來治療炎癥。
32．治療或預防前列腺疾病的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的權利要求1的化合物。
33．權利要求32的方法，其中的前列腺疾病是前列腺癌或良性前列腺增生。
34．治療或預防血管生成性疾病的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的權利要求1的化合物。
35．權利要求34的方法，其中的血管生成性疾病為固體腫瘤、子宮內膜異位、糖尿病視網(wǎng)膜病、牛皮癬、成血管細胞瘤、眼科疾病或斑狀變性。
36．治療或預防緣于PDGFR活性的疾病的方法，包括提供足夠量的權利要求1的化合物，使得血小板產(chǎn)生的生長因子受體與有效抑制量的該化合物接觸。
37．治療或預防瘤形成、類風濕關節(jié)炎、肺纖維變性、脊髓纖維變性、意外創(chuàng)傷的愈合、動脈粥樣硬化或再狹窄的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的權利要求1的化合物。
38．治療或預防具有營養(yǎng)因子應答細胞異?；钚蕴卣鞯募膊〉姆椒?，包括提供足夠量的權利要求1的化合物，使得營養(yǎng)因子細胞受體與有效誘導活性量的該化合物接觸。
39．治療或預防阿爾茨海默氏病、肌萎縮性側索硬化、帕金森病、中風、局部缺血、亨廷頓舞蹈病、愛滋病癡呆、癲癇、多發(fā)性硬化、末稍神經(jīng)病、腦損傷或脊索損傷的方法，包括對需要治療或預防的宿主給予治療有效量的權利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型稠合芳基和雜芳基橋連的茚并吡咯并咔唑,它尤其可以用作治療劑,本發(fā)明還涉及制備和應用這種橋連的茚并吡咯并咔唑的方法。
文檔編號A61K31/553GK1304311SQ99807036
公開日2001年7月18日 申請日期1999年6月4日 優(yōu)先權日1998年6月5日
發(fā)明者賈斯伯·辛格, 羅伯特·L·赫德金斯, 約翰·P·馬拉姆, 西奧多·L·昂德伊納, 拉賓德拉納特·特里帕蒂 申請人:賽福倫公司