專利名稱：低分子量肝素預防和治療腦水腫的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及低分子量肝素預防和治療腦水腫的應用。
本發(fā)明還涉及低分子量肝素在制備用于預防和治療腦水腫的藥物方面的應用。
標準肝素是平均分子量為12000～15000 Dalton分離自牛、羊和豬的腸粘膜的磺化多糖。在臨床上肝素用來預防和治療血栓栓塞性疾病，但有時會引起出血。
十余年來，肝素逐漸被低分子量肝素所替代，它不再呈現(xiàn)或者在很低程度上呈現(xiàn)出血的缺點，而且每天只須注射一次，不象標準肝素那樣一天注射2～3次。這種低分子量肝素具體是由肝素分級、控制解聚或化學合成制備的。其抗Xa活性/抗IIa活性之比大于2。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，低分子量肝素能夠減緩腦水腫。
腦水腫表示一種血栓栓塞性腦血管意外、腦出血和中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷(腦創(chuàng)傷和髓創(chuàng)傷)以及心跳和/或呼吸停止的嚴重惡化的結果，或者所有在機能上相當?shù)臓顩r(心室纖維性顫動、惡性哮喘發(fā)作)。腦水腫還可以在伴隨有各種大腦實質血流灌注過少的昏迷病理或偶發(fā)狀況中出現(xiàn)。腦水腫也可以伴隨著腦腫瘤、輻射和腦實質的細菌、病毒感染以及寄生蟲感染。
按照本發(fā)明，優(yōu)選使用平均分子量為1000～10000Dalton，特別是1500～6000Dalton，更特別是4000～5000Dalton的低分子量肝素。
它們可以由肝素經(jīng)過不同的方法來制備借助于溶劑分級(FR2440376、US4692435)，在陰離子樹脂上分級(FR2453875)，凝膠過濾(Barrowcliffe，Thromb.Res.12，27-36(1977))，親和力色譜(US4401758)，借助于化學試劑控制解聚亞硝酸(EP-14184、EP-37319、EP-76279、EP-623629、FR-2503714、US-4804652、WO-813276)、由肝素酯進行β-消除反應(EP-40144、US-5389618)、高碘酸鹽(EP-287477)、硼氫化鈉(EP-347588、EP-380943)、抗壞血酸(US-4533549)、過氧化氫(US-4629699、US-4791195)、由肝素季銨鹽得到的氫氧化季銨(US-4981955)、堿金屬氫氧化物(EP-380943、EP-347588)或者借助酶(EP64452、US-4396762、EP-244235、EP-244236、US-4826827、US-3766167)、借助于輻射(EP-269981)。
某些也可以通過化學合成制備(US-4801583、US-4818816、EP-165134、EP-84999、FR-2535306)。
在這些低分子量肝素當中，更具體可以舉出由Rhone-Poulenc Rorer公司商品化的作用依諾肝素(DCI)、Sanofi公司商品化的那屈肝素(DCI)、Opocrin-Alfa公司商品化的帕肝素(DCI)、Knoll公司商品化的瑞維肝素(DCI)、Kabi Pharmacia公司商品化的達肝素(DCI)、Novo Nordisk公司商品化的亭扎肝素(DCI)、Organon公司商品化的Danaparine(DCI)、Wyeth Ayerst公司商品化的阿地肝素(DCI)、Sandoz公司商品化的舍托肝素(DCI)和正在研究中的產(chǎn)品，如Sanofi-Choay公司的CY-222[見Tromb.Haemostasis，58(1)，553(1987)]、Sanofi-Organon公司的SR90107/ORG31540[見Thrombosis and Haemostasis，74，1468-1473(1995)]。
低分子量肝素優(yōu)選由在其一端具有2-O-磺基-4-enopyrano-suronique酸的低聚糖構成。
低分子量肝素特別優(yōu)借助堿如碳酸鈉解聚肝素的酯而得到。
A.低分子量肝素對水腫的預防作用通過下述方法在光致血栓大腦損傷后的大鼠體內進行測定用水合氯醛(400mg/kg，皮下)麻醉體重150-200g的Sprague-Dawley雄鼠，其中處理組26只，對照組22只，將其放在趨觸性固定器上。切開皮膚，暴露顱骨，用冷光(Bioblock，150W)接觸人字點前的顱骨右側。將低分子量肝素溶解于鹽水溶液(NaCl 0.9％)中，然后按照下面的方式操作在損傷前3小時，皮下注射2mg/kg/5mL低分子量肝素，
在即將損傷之前，靜脈注射0.5mg/kg/5mL低分子量肝素，此后立即經(jīng)皮下注射10mg/kg/5mL的孟加拉玫瑰染色劑的鹽水(NaCl 0.9％)溶液。
然后通過照射顱骨5分鐘造成損傷，然后縫合皮膚，將動物放回籠子中，損傷后3小時和21小時，經(jīng)皮下注射2mg/kg/5mL低分子量肝素，損傷后24小時，殺死動物，回收大腦。
用直徑6mm的軟木鉆在損傷點和損傷點對側取樣。由組織的濕重量/組織的干重量之比測定試樣的含水體積，將每只大鼠的損傷試樣與對側半球試樣進行比較得到的過量水的百分數(shù)就表示水腫。對照組的動物在同樣的條件下接受生理血清。
在此測試中，低分子量肝素減輕水腫大約30％。
依諾肝素減輕水腫33％。
這些結果表明，低分子量肝素具有預防水腫的效果。
B.低分子量肝素對水腫的治療作用通過下述方法在光致血栓大腦損傷后的大鼠體內進行測定用水合氯醛(400mg/kg，皮下)麻醉體重200-240g的Sprague-Dawley雄鼠，其中對照組20只，處理組分別有12只和8只，將其放在趨觸性固定器上。切開皮膚，暴露顱骨，用冷光(Bioblock，150W)接觸人字點前的顱骨右側。經(jīng)靜脈注射10mg/kg/5mL的孟加拉玫瑰染色劑在生理血清中的溶液。然后照射顱骨5分鐘。然后縫合皮膚。將低分子量肝素溶解于鹽水溶液(NaCl 0.9％)中，然后或者在損傷后2小時，靜脈注射0.5mg/kg/5mL低分子量肝素，再過15分鐘以后，皮下注射2mg/kg/5mL低分子量肝素，或者是在損傷后6小時，皮下注射2mg/kg/5mL低分子量肝素。將動物放回它們的籠子。損傷24小時以后，殺死動物，回收大腦。用直徑6mm的軟木鉆在損傷點和損傷點對側取樣。由組織的濕重量/組織的干重量之比測定試樣的含水體積，將每只大鼠的損傷試樣與對側半球試樣進行比較得到的過量水的百分數(shù)就表示水腫。對照組的動物在同樣的條件下接受生理血清。
在此實驗中，當在損傷后2小時或6小時注射低分子量肝素時，低分子量肝素減輕水腫大約30％。
在兩種情況下依諾肝素減輕水腫33％。
進行同樣的測試，不同的是在損傷后18小時靜脈注射低分子量肝素0.5mg/kg/5mL，然后再過15分鐘皮下注射2mg/kg/5mL，這樣仍然能夠明顯地減輕水腫大約10-30％(依諾肝素是23％，那屈肝素是14％)。
這些結果表明，低分子量肝素具有治療水腫的效果。
C.低分子量肝素對腦水腫的作用也能夠按照如下技術在形成創(chuàng)傷誘發(fā)水腫的大鼠體內得到印證用N2O/O2(70/30)混合物中的氟烷(1.5％)麻醉體重280-300g的Sprague-Dawley雄鼠(Charles River France)，對照組12只，處理組12只，將他們放在趨觸性固定器上。切開頭蓋骨，借助帶齒鉆在右頂部皮層處打一個洞(坐標在耳間線之上6mm前3.5mm處)。將一根內徑3mm的聚乙烯管放在用牙科膠固定在頭蓋骨洞上的硬模上，并連接在一個螺形閥(Danfoss Evsi 24V，15W)上。該硬模保持不受損壞。該閥門連接著高性能液相色譜泵(Walters 590)。該系統(tǒng)充滿滅菌水，當泵的壓力達到3.8-4bar時，閥門短時間打開(20ms)引入中等程度(1.6-1.8bar)的流體沖擊。然后取出管子，縫合切口，在加熱到26-28℃的房間內，將動物送回其籠子中。
按照下面的方式給藥低分子量肝素的鹽水(NaCl 0.9％)溶液受傷后2小時0.5mg/kg/5mLIV丸，受傷后2小時15分鐘2mg/kg/5mLSC，受傷后6小時2mg/kg/5mL SC，受傷后24小時2mg/kg/5mL SC以及受傷后30小時2mg/kg/5mL SC。
對照組在同樣的條件下服用5mL/kg的鹽水溶液(NaCl 0.9％)。
在創(chuàng)傷后48小時殺死動物，根據(jù)濕重量/干重量(100℃下24小時)的技術評估大腦水腫。在海馬和損傷點附近的皮質處測定以大腦水含量評估的水腫程度。
在此測試中，在海馬和在臨近損傷點的皮質處，低分子量肝素減輕水腫至少40％。
在海馬處依諾肝素(Lovenox)減輕水腫69％，而在臨近損傷點的皮質處依諾肝素減輕水腫50％。
采用呈組合物形式的低分子量肝素的鹽(優(yōu)選鈉鹽或鈣鹽)組成藥物，在該組合物中該鹽與可以呈惰性或生理活性的所有其它可藥用成分結合。本發(fā)明的藥物可以經(jīng)靜脈、皮下、口服、直腸、局部或肺(吸入)等途徑給藥。
經(jīng)靜脈或皮下給藥的滅菌組合物一般是水溶液。這些組合物還可以含有添加劑，特別是潤濕劑、等滲劑、乳化劑、分散劑和穩(wěn)定劑?？梢杂迷S多方式進行滅菌，比如滅菌過濾、在組合物中加入滅菌劑、輻照等。該藥物還可以制備成固體的滅菌組合物形式，在使用時可以溶解于滅菌水或各種其它注射用滅菌介質中。
作為口服用的固體組合物，可以使用片劑、丸劑、粉劑(明膠膠囊、袋劑)或粒劑。在這些組合物中，活性組分在氬氣流下與一種或幾種惰性稀釋劑如淀粉、纖維素、蔗糖、乳糖或二氧化硅混合。這些組合物還可以含有除稀釋劑以外的其它物質，比如一種或幾種潤滑劑，如硬脂酸鎂或滑石、口吸收的香味劑、著色劑、糖衣或凡士林。
作為口服的液體組合物，可以使用含有惰性稀釋劑如水、乙醇、甘油、植物油或石蠟油的可藥用溶液、懸浮液、乳液、糖漿和酏劑。這些組合物可以含有除稀釋劑以外的其它物質，比如潤濕劑、甜味劑、增稠劑、芳香劑或穩(wěn)定劑。
用于直腸給藥的組合物是錠劑或直腸膠囊，它們除了活性物質以外還含有賦形劑，如可可脂、半合成甘油酯或聚乙二醇。
局部給藥組合物可以是比如乳脂、洗劑、洗眼劑、漱口劑、滴鼻劑或氣溶膠。
其劑量根據(jù)目的效果、治療時間或給藥途徑而定；一般皮下給藥每天每kg體重0.2-4mg，對于成年人，每天給藥14-280mg。
一般說來，醫(yī)生將根據(jù)年齡、體重和被治療主體的各種其它因素來確定適當?shù)膭┝俊?br> 本發(fā)明還涉及預防或治療人類腦水腫的方法，其中包括給藥有效量的低分子量肝素。
權利要求
1.低分子量肝素在制備用于預防和治療腦水腫藥物方面的用途。
2.按照權利要求1的用途，其中低分子量肝素的平均分子量為1000-10000dalton。
3.按照權利要求1的用途，其中低分子量肝素的平均分子量為1500-6000dalton。
4.按照權利要求1的用途，其中低分子量肝素的平均分子量為4000-5000dalton。
5.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素由在其端部之一具有2-O-磺基-4-enopyrano-suronique酸的低聚糖構成。
6.按照權利要求1-5中任一項的用途，其中通過使用堿使肝素酯解聚而得到低分子量肝素。
7.按照權利要求1-6中任一項的用途，其中低分子量肝素是依諾肝素(DCI)。
8.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是那屈肝素(DCI)。
9.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是帕肝素(DCI)。
10.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是瑞維肝素(DCI)。
11.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是達肝素(DCI)。
12.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是亭扎肝素(DCI)。
13.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是Danaparine(DCI)。
14.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是阿地肝素(DCI)。
15.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是舍托肝素(DCI)。
16.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是CY-222。
17.按照權利要求1-4中任一項的用途，其中低分子量肝素是SR90107/ORG31540。
全文摘要
低分子量肝素在預防和治療腦水腫方面的用途。
文檔編號A61K31/727GK1257429SQ98805490
公開日2000年6月21日 申請日期1998年5月25日 優(yōu)先權日1997年5月28日
發(fā)明者V·瑪利, J·普萊特, J·－M·斯圖茲曼, A·烏贊, F·威爾 申請人:羅納-布朗克羅萊爾股份有限公司