專利名稱：4－苯胺基喹唑啉衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及喹唑啉衍生物，它們的制備方法，含有它們作為活性成分的藥物組合物，治療與血管生成和/或血管通透性升高有關(guān)的疾病的方法；本發(fā)明還涉及這些化合物作為藥物的應(yīng)用，以及它們在制備用于在溫血動物如人體內(nèi)產(chǎn)生抗血管生成和/或使血管通透性降低的藥物中的應(yīng)用。
正常的血管生成在包括胚胎發(fā)育，創(chuàng)傷愈合在內(nèi)的各種過程中和在雌性生殖機(jī)能的數(shù)種成分中起著重要作用。不良或病理性的血管生成與包括糖尿病性視網(wǎng)膜病，牛皮癬，癌癥，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，粉瘤，Kaposi肉瘤和血管瘤(haemangioma)在內(nèi)的疾病有關(guān)(Fan等人，1995,TrendsPharmacol.Sci.16:57-66；Folkman,1995，自然醫(yī)學(xué)(Nature Medicine)127-31)。據(jù)認(rèn)為，血管通透性的變化不僅在正常的生理過程中，而且在病理性生理過程中都起著一定作用(Cullinan-Bove等人，1993，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology)133:829-837；Senger等人，1993，癌癥和轉(zhuǎn)移綜述(Cancer and Metastasis Reviews),12:303-324)。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)一些具有體外內(nèi)皮細(xì)胞生長促進(jìn)活性的多肽，包括酸性和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF&bFGF)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)。由于其受體的限制性表達(dá)，VEGF的生長因子活性與FGFs不同，它們對內(nèi)皮細(xì)胞具有相對特異性。近年來的研究結(jié)果表明，VEGF不僅為正常血管生成和病理性血管生成的重要刺激質(zhì)(Jakeman等人，1993，內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology),133:848-859；Kolch等人，1995，乳腺癌的研究與治療(Breast CancerResearch and Treatment),36:139-155)，而且還是血管通透性的重要刺激質(zhì)(Connolly等人，1989，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)264:20017-20024)。通過VEGF與抗體分離產(chǎn)生的VEGF拮抗作用，可以抑制腫瘤生長(Kim等人，1993，自然(Nature)362:841-844)。
受體酪氨酸激酶(RTKs)在跨越細(xì)胞質(zhì)膜的生化信號傳遞中是重要的。這些跨膜分子的特征是由通過質(zhì)膜片段連于胞內(nèi)酪氨酸激酶域的胞外配體結(jié)合域組成。將配體與受體結(jié)合能夠刺激受體相關(guān)的酪氨酸激酶活性，這樣導(dǎo)致受體和其它胞內(nèi)分子上酪氨酸殘基磷酸化。這些酪氨酸磷酸化變化引發(fā)導(dǎo)致各種細(xì)胞響應(yīng)的級聯(lián)信號。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)了至少19種不同的RTK亞族，它們由氨基酸序列同源性所定義。這些亞族中一種目前由fms樣酪氨酸受體，F(xiàn)lt或Fltl，含激酶插入域的受體，KDR(也稱作Flk-1)，以及另一種fms樣酪氨酸激酶受體，F(xiàn)lt4組成。業(yè)已證明，這些相關(guān)RTKs,Flt和KDR中的兩種能夠高親和性地與VEGF結(jié)合(De Vries等人，科學(xué)(Science)1992,255:989-991；Terman等人，1992，生物化學(xué)與生物物理研究通訊(Biochem.Biophys.Res.Comm.)1992,187:1579-1586)。VEGF與異源細(xì)胞中表達(dá)的這些受體的結(jié)合與細(xì)胞蛋白的酪氨酸磷酸化程度和鈣流量的變化有關(guān)。
歐洲專利公開0326330中公開了一些喹啉、喹唑啉和噌啉植物殺菌劑。這些植物殺菌劑中的某些據(jù)說還具有殺蟲和殺螨活性。但該文獻(xiàn)并沒有公開或建議所公開的化合物可在動物如人體中用于任何目的。更具體講，該歐洲專利文獻(xiàn)中沒有包含關(guān)于細(xì)胞因子如VEGF介導(dǎo)的血管生成和/或血管通透性升高的任何教導(dǎo)。
歐洲專利公開0566226中描述了具有抗表皮生長因子(EGF)受體酪氨酸激酶活性的化合物。盡管本發(fā)明化合物落入EP 0566226中公開的較寬的通式內(nèi)，但令人驚奇的是我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物對VEGF具有優(yōu)良的抑制活性，而這些性質(zhì)在EP 0566226中并沒有公開。此外，測試后還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明范圍之外的EP 0566266中的化合物對VEGF受體酪氨酸激酶無明顯的抑制活性。
因此，本發(fā)明基于這種發(fā)現(xiàn)，即發(fā)現(xiàn)對VEGF作用具有意想不到抑制效果的化合物，這種性質(zhì)在治療與血管生長和/或血管通透性升高有關(guān)的病態(tài)方面具有價值，所述疾病如癌癥，糖尿病，牛皮癬，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Kaposi肉瘤和血管瘤(haemangioma)，急性和慢性腎病，粉瘤，動脈再狹窄，自身免疫病，急性炎癥和與視網(wǎng)膜血管增生有關(guān)的眼病。本發(fā)明化合物對VEGF受體酪氨酸激酶具有較高的活性，而對EGF受體酪氨酸激酶則僅具有一定活性。此外，本發(fā)明化合物對VEGF受體酪氨酸激酶的活性大大高于對EGF受體酪氨酸激酶或FGF R1受體酪氨酸激酶的活性。
本發(fā)明一方面提供了式Ⅰ喹唑啉衍生物及其鹽
(其中R1代表氫或甲氧基；R2代表甲氧基，乙氧基，2-甲氧基乙氧基，3-甲氧基丙氧基，2-乙氧基乙氧基，三氟甲氧基，2,2,2-三氟乙氧基，2-羥基乙氧基，3-羥基丙氧基，2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基，3-(N,N-二甲氨基)丙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基，4-嗎啉代丁氧基，2-哌啶子基乙氧基，3-哌啶子基丙氧基，4-哌啶子基丁氧基，2-(哌嗪-1-基)乙氧基，3-(哌嗪-1-基)丙氧基，4-(哌嗪-1-基)丁氧基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基，3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基或4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁氧基；載有(R3)2的苯基選自2-氟-5-羥基苯基，4-溴-2-氟苯基，2,4-二氟苯基，4-氯-2-氟苯基，2-氟-4-甲基苯基，2-氟-4-甲氧基苯基，4-溴-3-羥基苯基，4-氟-3-羥基苯基，4-氯-3-羥基苯基，3-羥基-4-甲基苯基，3-羥基-4-甲氧基苯基和4-氰基-2-氟苯基)。
R1優(yōu)選為甲氧基。
更有利的是R2代表甲氧基，乙氧基，2-甲氧基乙氧基，3-甲氧基丙氧基，三氟甲氧基，2,2,2-三氟乙氧基，2-羥基乙氧基，3-羥基丙氧基，2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基，3-(N,N-二甲氨基)丙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基，2-哌啶子基乙氧基，3-哌啶子基丙氧基，2-(哌嗪-1-基)乙氧基或3-(哌嗪-1-基)丙氧基，其它適宜的R2基團(tuán)為2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基和3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基。
優(yōu)選R2為甲氧基，乙氧基，2-甲氧基乙氧基，3-甲氧基丙氧基，2,2,2-三氟乙氧基，2-羥基乙氧基，3-羥基丙氧基，2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基，3-(N,N-二甲基氨基)丙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基，2-哌啶子基乙氧基，3-哌啶子基丙氧基，2-(哌嗪-1-基)乙氧基或3-(哌嗪-1-基)丙氧基。其它優(yōu)選的R2基團(tuán)為2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基和3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基。
更優(yōu)選R2為2-甲氧基乙氧基，2-羥基乙氧基，3-(N,N-二甲基氨基)丙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基或3-(哌嗪-1-基)丙氧基，其它更優(yōu)選的R2基團(tuán)為2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基和3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基。
特別優(yōu)選的R2基團(tuán)為2-甲氧基乙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基和2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基。
格外優(yōu)選的R2基團(tuán)為2-甲氧基乙氧基和3-嗎啉代丙氧基。
在本發(fā)明的一個特別的方面中，載有(R3)2的苯基選自2-氟-5-羥基苯基，4-溴-2-氟苯基，2,4-二氟苯基，4-氯-2-氟苯基，2-氟-4-甲基苯基，2-氟-4-甲氧基苯基，4-溴-3-羥基苯基，4-氟-3-羥基苯基，4-氯-3-羥基苯基，3-羥基-4-甲基苯基和3-羥基-4-甲氧基苯基。
載有(R3)2的苯基優(yōu)選3-羥基-4-甲基苯基或4-氯-2-氟苯基，尤其是4-氯-2-氟苯基。載有(R3)2的苯基進(jìn)一步特別優(yōu)選4-溴-2-氟苯基。
優(yōu)選的化合物包括4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，6，7-二甲氧基-4-(2-氟-5-羥基苯胺基)喹唑啉，4-(4-氯-3-羥基苯胺基)-6，7-二甲氧基喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6，7-二甲氧基喹唑啉，4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽，其它優(yōu)選的化合物包括4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6，7-二甲氧基喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉，6,7-二甲氧基-4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氰基-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-甲氧基丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-乙氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-羥基乙氧基)-6-甲氧基喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(4-嗎啉代丁氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)喹唑啉，以及它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽。
較優(yōu)選的化合物包括4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉，4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(2-氟-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉4-(4-氰基-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-甲氧基丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-乙氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-羥基乙氧基)-6-甲氧基喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(4-嗎啉代丁氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)喹唑啉，和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽。
特別優(yōu)選的化合物包括4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽，其它特別優(yōu)選的化合物為4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽。
更特別優(yōu)選的化合物包括4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽。
格外優(yōu)選的化合物包括4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽。
更格外優(yōu)選的化合物為4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，和它們的鹽，尤其是其鹽酸鹽，其中優(yōu)選4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉和它們鹽，尤其是其鹽酸鹽。
為避免引起誤解，應(yīng)當(dāng)理解，在本說明書中，當(dāng)基團(tuán)用“如上定義”或“定義如上”加以限定時，所述基團(tuán)包括第一次出現(xiàn)的最寬廣的定義和該基團(tuán)每種和所有優(yōu)選定義。
在本說明書中，術(shù)語“烷基”不僅包括直鏈烷基，而且還包括支鏈烷基，但所提及的個別烷基如“丙基”特只限于直鏈烷基。類似的規(guī)定適用于其它通用術(shù)語。除非另有說明，術(shù)語“烷基”最好指含1-6個碳原子，優(yōu)選含1-4個碳原子的鏈。
在本說明書中，術(shù)語“烷氧基”是指連接有氧原子的上述烷基。
在本說明書中，術(shù)語“芳基”包括C6-10芳族基，必要的話，它們載有一個或多個選自鹵素，烷基，烷氧基，氰基，硝基或三氟甲基的取代基(其中的烷基和烷氧基的定義同上)。術(shù)語“芳氧基”是指連接有氧原子的如上定義的芳基。
在本說明書中，術(shù)語“磺酰氧基”包括烷基磺酰氧基和芳基磺酰氧基，其中的“烷基”和“芳基”的定義同上。
在如上定義的式Ⅰ中，氫將存在在喹唑啉基團(tuán)的2,5和8位上。
應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)，式Ⅰ喹唑啉或其鹽可能會顯示出互變異構(gòu)現(xiàn)象，本說明書中的結(jié)構(gòu)圖只可能表示一種可能的互變形式。因此可以理解，本發(fā)明包括能抑制VEGF受體酪氨酸激酶活性的任何互變形式，而不僅局限于結(jié)構(gòu)圖中所示的一種互變形式。
還應(yīng)當(dāng)知道，某些式Ⅰ喹唑啉及其鹽可以以溶劑化物和非溶劑化物形式(如水合物形式)存在。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括所有這些能抑制VEGF受體酪氨酸激酶活性的溶劑化物形式。
本發(fā)明涉及如上所述的式Ⅰ化合物及其鹽。用于藥物組合物中的鹽應(yīng)當(dāng)是可藥用的鹽，但其它鹽也可用于生產(chǎn)式Ⅰ化合物和它們的可藥用鹽。例如，本發(fā)明的可藥用鹽可以包括上述具有足夠堿性的式Ⅰ化合物的酸加成鹽，這種式Ⅰ化合物的堿性足以形成這種鹽。這類酸加成鹽例如包括與能提供可藥用陰離子的無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的鹽，如與鹵化氫形成的鹽(尤其是與氫氯酸或氫溴酸(特別優(yōu)選氫氯酸)形成的鹽)，或與硫酸或磷酸形成的鹽，或與三氟乙酸、檸檬酸或馬來酸形成的鹽。另外，當(dāng)式Ⅰ化合物具有足夠強(qiáng)酸性時，它們可以與能提供可藥用陽離子的無機(jī)堿或有機(jī)堿形成可藥用鹽。這類與無機(jī)堿或有機(jī)堿形成的鹽例如包括堿金屬鹽，如鈉或鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣或鎂鹽，銨鹽，或者為與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥乙基)胺形成的鹽。
式Ⅰ化合物，或其鹽和本發(fā)明的其它化合物(如上所述)可采用用于制備化學(xué)相關(guān)化合物的任何已知方法制備。例如，這些方法包括歐洲專利申請公開0520722,0566226,0602851和0635498中所闡述的方法。這些方法進(jìn)一步構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面,并見下文所述。必需的起始物質(zhì)可通過有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得。這些起始物質(zhì)的制備在所附屬的非限制性實施例中有描述。另一方面，必需的起始物質(zhì)也可采用普通有機(jī)化學(xué)家所闡述方法的類似法獲得。
因此，下列方法(a)-(e)和(i)-(v)構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。
式Ⅰ化合物的合成(a)式Ⅰ化合物及其鹽的制備如下使式Ⅲ化合物
(其中R1和R2的定義同上，且L1為可置換基團(tuán))，與式Ⅳ化合物反應(yīng)
(其中R3的定義同上)，從而得到式Ⅰ化合物及其鹽。適宜的可置換基團(tuán)L1例如為鹵素，烷氧基(優(yōu)選C1-4烷氧基)，芳氧基或磺酰氧基，例如氯，溴，甲氧基，苯氧基，甲磺酰氧基或甲苯-4-磺酰氧基。反應(yīng)最好在有酸或堿存在下進(jìn)行。這種酸例如包括無水無機(jī)酸如氯化氫。這種堿包括例如有機(jī)胺堿，例如吡啶，2,6-二甲基吡啶，可力丁，4-二甲氨基吡啶，三乙胺，嗎啉，N-甲基嗎啉或二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯，或者例如為堿金屬或堿土金屬的碳酸鹽或氫氧化物(例如碳酸鈉，碳酸鉀，碳酸鈣，氫氧化鈉或氫氧化鉀)。另一方面，這種堿還包括例如堿金屬氫化物(例如氫化鈉)，或堿金屬或堿土金屬氨化物(如氨化鈉或雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉)。反應(yīng)優(yōu)選在惰性溶劑或稀釋劑存在下進(jìn)行，這些溶劑或稀釋劑包括例如鏈烷醇或酯(如甲醇，乙醇，異丙醇或乙酸乙酯)，鹵化溶劑(如二氯甲烷，三氯甲烷或四氯化碳)，醚(如四氫呋喃或1,4-二噁烷)，芳烴溶劑(如甲苯)，或偶極非質(zhì)子傳遞溶劑(如N,N-二甲基甲酰胺，N,N-二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷-2-酮或二甲亞砜)。反應(yīng)適宜在例如10-150℃，優(yōu)選20-80℃的溫度下進(jìn)行。
由此方法可以制得游離堿形式本發(fā)明化合物，或者得到它們與式H-L1酸形成的鹽，其中L1的定義同上。當(dāng)希望由鹽得到游離堿時，可采用常規(guī)方法用上述堿處理所述鹽。
(b)當(dāng)式Ⅱ基團(tuán)
(其中R3的定義同上)代表載有羥基的苯基時，式Ⅰ化合物及其鹽可通過脫保護(hù)式Ⅴ化合物制備
(其中R1,R2和R3的定義同上，P代表酚羥基保護(hù)基)。酚羥基保護(hù)基P如何選擇是有機(jī)化學(xué)家共有的常識，例如標(biāo)準(zhǔn)教科書《有機(jī)合成中的保護(hù)基》T.W.Greene和R.G.M.Wuts，第二版，Wiley 1991中所包括的保護(hù)基，這些包括醚(例如甲基，甲氧基甲基，烯丙基和芐基醚)，甲硅烷基醚(例如叔丁基二苯基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基醚)，酯(例如，乙酸酯和苯甲酸酯)以及碳酸酯(例如，甲基和芐基碳酸酯)。這類酚羥基保護(hù)基的去除可采用適合這種轉(zhuǎn)化的任何已知方法(包括諸如前面所述的標(biāo)準(zhǔn)教科書中所述的反應(yīng)條件)或相關(guān)方法進(jìn)行。反應(yīng)條件優(yōu)選應(yīng)能產(chǎn)生羥基衍生物，而不會在起始或產(chǎn)物化合物的其它位置發(fā)生不希望的反應(yīng)。例如，當(dāng)保護(hù)基P為乙酸酯時，轉(zhuǎn)化可以通過用前面所述的堿(包括氨及其一和二-烷基化的衍生物)處理喹唑啉衍生物很方便地進(jìn)行，轉(zhuǎn)化優(yōu)選在有質(zhì)子性溶劑或共溶劑如水或醇(例如甲醇或乙醇)存在下進(jìn)行。這種反應(yīng)可以在如前所述的附加的惰性溶劑或稀釋劑存在下于0-50℃，適宜約20℃的溫度下進(jìn)行。
(c)式Ⅰ化合物及其鹽的制備可通過使式Ⅵ化合物
(其中R1和R3的定義同上)與式Ⅶ化合物反應(yīng)實現(xiàn)，而且反應(yīng)適宜在有如前所述的堿存在下進(jìn)行R4-L1(Ⅶ)(其中L1的定義同上，且R4為甲基，乙基，2-甲氧基乙基，3-甲氧基丙基，2-乙氧基乙基，三氟甲基，2,2,2-三氟乙基，2-羥基乙基，3-羥基丙基，2-(N,N-二甲基氨基)乙基，3-(N,N-二甲基氨基)丙基，2-嗎啉代乙基，3-嗎啉代丙基，4-嗎啉代丁基，2-哌啶子基乙基，3-哌啶子基丙基，4-哌啶子基丁基，2-(哌嗪-1-基)乙基，3-(哌嗪-1-基)丙基，4-(哌嗪-1-基)丁基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基，3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基或4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基)；L1為易置換基團(tuán)，例如鹵素或磺酰氧基如溴或甲磺酰氧基。反應(yīng)優(yōu)選在堿(如上面方法(a)中所述的堿)存在下，且最好在有惰性溶劑或稀釋劑(如上面方法(a)中所述)存在下進(jìn)行，反應(yīng)溫度最好為例如10-150℃，優(yōu)選約50℃。
(d)式Ⅰ化合物及其鹽可按下所述制備使式Ⅷ化合物
與式Ⅸ化合物反應(yīng)R2-H(Ⅸ)(其中L1，R1,R2和R3的定義都同上)。反應(yīng)可以很方便地在堿(如上面方法(a)中所述)存在下，并優(yōu)選在有惰性溶劑或稀釋劑(如上面方法(a)中所述)存在下進(jìn)行，反應(yīng)溫度最好為10-150℃，優(yōu)選大約100℃。
(e)其中R2為R5C1-4烷氧基，特別是R5C1-3烷氧基的式Ⅰ化合物及其鹽的制備如下(其中R5選自甲氧基，乙氧基，羥基，N,N-二甲基氨基，嗎啉代，哌啶子基，哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基)使式Ⅹ化合物
(其中L1,R1和R3的定義同上，且R6為C1-4烷氧基，特別是C1-3烷氧基)與式Ⅺ化合物反應(yīng)R5-H(Ⅺ)(其中R5的定義同上)，得到式Ⅰ化合物。反應(yīng)可以很方便地在堿(如上面方法(a)中所述)存在下，且最好在惰性溶劑或稀釋劑(如上面方法(a)中所述)存在下，例如在0-150℃，更適宜在約50℃的溫度下進(jìn)行。中間體的合成(i)式Ⅲ化合物及其鹽構(gòu)成了本發(fā)明的另一特征。例如，其中L1為鹵素的這種化合物可通過鹵化式Ⅻ化合物制備
(其中R1和R2的定義同上)。
適宜的鹵化劑包括無機(jī)酸鹵化物，例如亞硫酰氯，三氯化磷(Ⅲ)，三氯氧化磷(V)。鹵化反應(yīng)可以很方便地在惰性溶劑或稀釋劑如鹵化溶劑(二氯甲烷，三氯甲烷或四氯化碳，或芳烴溶劑(如苯或甲苯)存在下進(jìn)行。反應(yīng)適宜在例如10-150℃優(yōu)選40-100℃的溫度下進(jìn)行。
式Ⅻ化合物及其鹽也構(gòu)成了本發(fā)明的一特征，而且它們可通過例如反應(yīng)式ⅩⅢ化合物
(其中R1和L1的定義同上)與上述式Ⅸ化合物制備。反應(yīng)可以在堿(如上面方法(a)中所述)存在下，且優(yōu)選在幅性溶劑或稀釋劑(如上面方法(a)中所述)存在下，優(yōu)選例如10-150℃，更適宜在大約100℃的溫度下很方便地進(jìn)行。
式Ⅻ化合物及其鹽還可以通過環(huán)化式ⅪⅤ化合物制備
(其中R1和R2的定義同上，且A1為羥基，烷氧基(優(yōu)選C1-4烷氧基)或氨基)，從而形成式Ⅻ化合物或其鹽。環(huán)化可通過使式ⅪⅤ化合物(其中A1為羥基或烷氧基)與甲酰胺或其能有效產(chǎn)生環(huán)合作用的等同物反應(yīng)來完成，從而得到式Ⅻ化合物或其鹽，如[3-(二甲氨基)-2-氮雜丙-2-烯亞基]二甲基氯化銨。環(huán)化適宜在作為溶劑的甲酰胺存在下或在有惰性溶劑或稀釋劑如醚(例如1,4-二噁烷)存在下進(jìn)行。并且環(huán)化適宜在高溫優(yōu)選80-200℃的溫度下進(jìn)行。式Ⅻ化合物還可以通過用甲酸或其能有效產(chǎn)生環(huán)合作用的等同物環(huán)化式ⅪⅤ化合物(其中A1為氨基)制備，從而得到式Ⅻ或其鹽。能有效產(chǎn)生環(huán)化作用的甲酸等同物包括例如三-C1-4烷氧基甲烷，例如三乙氧基甲基和三甲氧基甲烷。環(huán)化適宜在催化量無水酸(如磺酸例如對-甲苯磺酸)和惰性溶劑或稀釋劑(如鹵化溶劑例如二氯甲烷，三氯甲烷或四氯化碳，醚如乙醚或四氫呋喃，或芳烴溶劑如甲苯)存在下進(jìn)行。環(huán)化適宜在例如10-100℃優(yōu)選20-50℃的溫度下進(jìn)行。
構(gòu)成本發(fā)明另一方面的式ⅪⅤ化合物及其鹽，可通過例如還原式ⅩⅤ化合物中的硝基制備
(其中R1,R2和A1的定義同上)，產(chǎn)生上述式ⅪⅤ化合物。硝基的還原可以很方便地采用適合這類轉(zhuǎn)化的任何已知方法進(jìn)行。例如，還原可通過在前面所述的惰性溶劑或稀釋劑和能有效催化氫化反應(yīng)的金屬(如鈀或鉑)存在下進(jìn)行。其它還原劑包括例如活化金屬如活化鐵(例如通過用稀酸溶液如鹽酸洗滌鐵粉產(chǎn)生)。因此，還原可通過例如在溶劑或稀釋劑如水與醇(例如己醇或乙醇)混合物存在下，于例如50-150℃，更適宜在大約70℃的溫度下加熱硝基化合物和活化金屬進(jìn)行。
例如，構(gòu)成本發(fā)明又一方面的式ⅩⅤ化合物及其鹽可按下所述制備使式ⅩⅥ化合物
(其中R1,L2和A1的定義同上)與上述式Ⅸ化合物反應(yīng)，得到式ⅩⅤ化合物。式ⅩⅥ與Ⅸ的反應(yīng)適宜在上面方法(d)中所述的條件下進(jìn)行。
式ⅩⅤ化合物及其鹽還可以按下所述制備使式ⅩⅦ化合物
(其中R1和A1的定義同上)與如上定義的式Ⅶ化合物反應(yīng)，以產(chǎn)生定義如上的式ⅩⅤ化合物。式ⅩⅦ與Ⅶ化合物的反應(yīng)適宜在上面方法(c)中所述的條件下制備。
式Ⅲ化合物及其鹽還可按如下所述制備；例如，使式ⅩⅧ化合物
(其中R1的定義同上，L2代表可置換的保護(hù)基)與定義如上的式Ⅶ化合物反應(yīng)，從而得到式Ⅲ化合物，其中L1由L2表示。
適宜使用其中L2代表苯氧基的式ⅩⅧ化合物，如果需要的話，其中的苯氧基可載有多至5個取代基，優(yōu)選載有多至2個取代基，這些取代基選自鹵素，硝基和氰基。反應(yīng)可以很方便地在前面方法(c)中所述的條件下進(jìn)行。
例如，前文所定義的式ⅩⅧ化合物及其鹽可通過脫保護(hù)式ⅪⅩ化合物制備
(其中R1,P和L2的定義同上)。脫保護(hù)可采用文獻(xiàn)中公知的技術(shù)進(jìn)行，例如，當(dāng)P代表芐基時，脫保護(hù)可通過氫解或用三氟乙酸處理完成。
如果需要的話，可以將一種式Ⅲ化合物轉(zhuǎn)化為其中基團(tuán)L1不同的另一種式Ⅲ化合物。例如，其中L1不為鹵素(例如為任選取代的苯氧基)的式Ⅲ化合物可按下述轉(zhuǎn)化成其中L1為鹵素的式Ⅲ化合物水解式Ⅲ化合物(其中L1不為鹵素)，產(chǎn)生如前定義的式Ⅻ化合物，接著在如此得到的定義同上的式Ⅻ化合物中引入鹵化物，產(chǎn)生其中L1代表鹵素的式Ⅲ化合物。
(ⅱ)例如，構(gòu)成本發(fā)明又一特征的式Ⅴ化合物及其鹽可通過使定義如上的式Ⅲ化合物與式ⅩⅩ化合物反應(yīng)制備
(其中R3和P的定義同上)。例如，反應(yīng)可按照上面方法(a)所述進(jìn)行。式Ⅴ化合物及其鹽也可以按下所述制備使式ⅩⅪ化合物
(其中R1,L1,R3和P的定義同上)與定義同上的式Ⅸ化合物反應(yīng)。例如，反應(yīng)可按上面方法(d)所述進(jìn)行。
式Ⅴ化合物及其鹽還可以通過使式ⅩⅫ化合物
(其中R1,R3和P的定義同上)與上面所定義的式Ⅶ化合物反應(yīng)加以制備。例如，反應(yīng)可按照上面方法(c)所述進(jìn)行。
例如，式ⅩⅪ化合物及其鹽可按下所述制備使式ⅩⅩⅢ化合物
(其中R1和L1的定義同上，且4-及7-位上的L1可以相同或不同)與定義同上的式ⅩⅩ化合物反應(yīng)。反應(yīng)可以采用例如上面(a)中所述的方法進(jìn)行。
式ⅩⅫ化合物及其鹽可按下述制備在上文(a)中所述的條件下，反應(yīng)定義同上的式ⅪⅩ和ⅩⅩ化合物，得到式ⅩⅪⅤ化合物
(其中R1,R3和P的定義同上)，隨后按上面(ⅰ)中所述脫保護(hù)式ⅩⅪⅤ化合物。
(ⅲ)上文所述的式Ⅵ化合物及其鹽的制備如下采用例如上面(ⅰ)中所述的方法，脫保護(hù)式ⅩⅩⅤ化合物
(其中R1,R3和P的定義同上)。
式ⅩⅩⅤ化合物及其鹽可按下述制備在上文(a)中所述的條件下，反應(yīng)如上定義的式ⅪX與Ⅳ化合物，得到式ⅩⅩⅤ化合物或其鹽。
(ⅳ)上述式Ⅷ化合物及其鹽可通過反應(yīng)定義同上的式ⅩⅩⅢ與Ⅳ化合物制備，反應(yīng)可采用例如上面(a)中所述的方法進(jìn)行。
(ⅴ)上述式Ⅹ化合物及其鹽例如可按下述制備使定義同上的式Ⅵ化合物與式ⅩⅩⅥ化合物反應(yīng)L1-R6-L1(ⅩⅩⅥ)(其中L1和R6的定義同上)，得到式Ⅹ化合物。反應(yīng)可以采用例如上面(c)中所述的方法進(jìn)行。
式Ⅹ化合物及其鹽還可以采用例如上面(b)中所述的方法通過脫保護(hù)式ⅩⅩⅦ化合物制備
(其中L1,R6,R1,R3和P的定義同上)。
例如，在上面(c)中所述的條件下，通過反應(yīng)定義同上的式ⅩⅫ和ⅩⅩⅥ化合物，可以制得式ⅩⅩⅦ化合物及其鹽。
當(dāng)需要式Ⅰ化合物的可藥用鹽時，它們可以通過例如采用常規(guī)方法使所述化合物與具有可藥用陰離子的酸反應(yīng)制得。
本文所述的眾多中間體為新化合物，例如式Ⅲ,Ⅴ,Ⅻ,ⅪⅤ和ⅩⅤ化合物，而且這些化合物構(gòu)成了本發(fā)明的另一特征。
式Ⅵ,Ⅷ,Ⅹ,ⅩⅪ,ⅩⅫ,ⅩⅪⅤ,ⅩⅩⅤ和ⅩⅩⅦ中間體也構(gòu)成了本發(fā)明的另一特征。
需要對本發(fā)明化合物能有效抑制與VEGF受體(如Flt和/或KDR)有關(guān)的酪氨酸激酶活性和抑制血管生成和/或血管通透性升高的性質(zhì)進(jìn)行鑒定，而這也是本發(fā)明的主題之一。例如，這些性質(zhì)可采用一種或多種下文所述的方法評估(a)體外受體酪氨酸激酶抑制試驗本試驗測定受試化合物抑制酪氨酸激酶活性的能力。采用全基因合成(Edwards M,國際生物技術(shù)實驗室(International Biotechnology Lab)5(3),19-25,1987)或克隆技術(shù)制備編碼VEGF或表皮生長因子(EGF)受體胞質(zhì)域的DNA。隨后將它們在合適的表達(dá)體系中表達(dá)，以獲得具有酪氨酸激酶活性的多肽。例如，通過在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)重組蛋白，所獲得的VEGF和EGF受體胞質(zhì)域發(fā)現(xiàn)能顯示出固有的酪氨酸激酶活性。關(guān)于VEGF受體Flt(基因文庫登記號X51602),Shibuya等人(癌基因，1990,5:519-524)所述的起始于蛋氨酸783并包括終止密碼子編碼大部分胞質(zhì)域的1.7kb DNA片段，由cDNA分離得到并被克隆到桿狀病毒換位型載體上(例如pAcYMl(參見桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)實驗室指南，L.A.King and R.D.Possee,Chapman and Hall,1992)或pAc360或pBlueBacHis (購自Invitrogen公司))。將這種重組結(jié)構(gòu)與病毒DNA(如Pharmingen BaculoGold)共轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞上(例如草地粘蟲21(Sf21)),以制備重組桿狀病毒。(裝配重組DNA分子和制備及使用重組桿狀病毒的方法細(xì)節(jié)見標(biāo)準(zhǔn)教科書，例如Sambrook等人，1989，分子克隆-實驗室手冊，第二版，Cold Spring Harbour Laboratory Press和O′Reilly等人，1992，桿狀病毒表達(dá)載體-實驗室手冊，W.H.Freeman和Co,New York)。對于試驗中使用的其它酪氨酸激酶，可用類似方法克隆和表達(dá)始于蛋氨酸806(KDR，基因文庫登記號L04947)和蛋氨酸668(EGF受體，基因文庫登記號X00588)的胞質(zhì)片段。
為表達(dá)cFlt酪氨酸激酶活性，將Sf21細(xì)胞用噬斑純cFlt重組病毒感染，感染復(fù)制率為3,48小時后收獲。將收獲細(xì)胞用冰冷磷酸緩沖鹽溶液(PBS)(10mM磷酸鈉pH7.4,138mM NaCl,2.7mM KCl)洗滌，然后懸浮在冰冷HNTG/PMSF(20mM Hepes pH7.5,150mM NaCl,10％v/v甘油，1％v/v曲通(Triton)X100,1.5mM MgCl2,1mM乙二醇-雙(β-氨基乙醚)N,N,N′,N′-四乙酸(EGTA),1mM PMSF(苯甲基磺酰氟)；PMSF僅僅在使用前以新制備的100mM甲醇溶液加入)，每10×106個細(xì)胞使用1mlHNTG/PMSF。在4℃下以13,000rpm離心懸浮液10分鐘，移出上清液(酶貯存液)，并在-70℃下分成數(shù)等份貯存。在試驗中，每一批新制酶貯存液經(jīng)酶稀釋劑(100mM Hepes pH 7.4,0.2mM Na3VO4,0.1％v/v曲通X100,0.2mM二硫蘇糖醇)稀釋滴定。對于典型的一批，酶貯存液以1/2000比例用酶稀釋劑稀釋，而且每一測定孔使用50μl稀釋酶。
由含有酪氨酸的無規(guī)聚合物[例如Poly(Glu,Ala,Tyr)6:3:1(Sigma P3899)]制備底物溶液貯存液，在PBS中以1mg/ml貯存物形式貯藏在-20℃下，并以1/500比例用PBS稀釋供平板涂鋪。
試驗前一天，在測定板(Nunc Maxisop 96孔免疫滴定板)的所有孔內(nèi)分配100μl稀釋底物溶液，密封并在4℃下放置過夜。
試驗當(dāng)天，棄去底物溶液，將測定板的各孔用PBST(含0.05％v/v吐溫20的PBS)洗滌一次，再用50mM Hepes pH7.4洗滌一次。
將受試化合物用10％二甲亞砜(DMSO)稀釋，并取25μl稀釋化合物轉(zhuǎn)入洗滌過的測定板孔內(nèi)?！翱偂睂φ湛缀?0％DMSO來代替化合物。除含MnCl2無ATP的“空白”對照孔外，向所有試驗孔中加入25μl含8μM腺苷-5′-三磷酸(ATP)的40mM MnCl2。為啟動反應(yīng)，向每孔內(nèi)加入50μl新制稀釋酶，并將板在室溫下溫育20分鐘。然后棄去液體，各孔用PBST洗滌兩次。將小鼠IgG抗磷酸酪氨酸抗體(Uptate生物技術(shù)公司產(chǎn)品05-321)用含0.5％w/v牛血清白蛋白(BSA)的PBST以1/6000比例稀釋，取100μl此稀釋液加到每孔內(nèi)，并將板在室溫下溫育1小時，隨后傾去液體，并用PBST洗滌各孔兩次。再加入100μl被用含0.5％w/v BSA的PBST以1/500比例稀釋的辣根過氧化物酶(HRP)-連接綿羊抗小鼠Ig抗體(Amersham產(chǎn)品NXA 931)，并將板在室溫下溫育1小時，爾后傾去液體，用PBST洗滌各孔兩次。每孔加100μl 2,2′-連氮-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)溶液，該溶液系采用一片重50mg ABTS(Boehringer 1204 521)在50ml新制備的50mM磷酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液pH5.0+0.03％過硼酸鈉(系每100ml蒸餾水使用1個磷酸鹽檸檬酸鹽緩沖液和過硼酸鈉(PCBS)膠囊(Sigma P4922)制得)中制得的新鮮溶液。然后將板在室溫下溫育20-60分鐘，直至在405nm處測量的“總”對照孔的光密度值大約為1.0(使用平板讀數(shù)分光光度計)。“空白”(無ATP)和“總”(無化合物)對照組值用于測定使受試化合物產(chǎn)生50％酶活性抑制作用的稀釋范圍。(b)體外HUVEC增殖試驗本試驗測定受試化合物抑制生長因子刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增值的能力。
在MCDB 131(Gibco BRL)+7.5％v/v胎牛血清(FCS)中分離HUVEC細(xì)胞，并將這種細(xì)胞在MCDB 13l+2％v/v FCS+3μg/ml肝素+1μg/ml氫化可的松中平鋪(2-8代細(xì)胞)到96孔板內(nèi)，濃度為1000細(xì)胞/孔。最少4小時后，向它們中加入適當(dāng)?shù)纳L因子(即VEGF 3ng/ml,EGF3ng/ml或b-FGF 0.3ng/ml)和化合物。然后將培養(yǎng)物在37℃和7.5％CO2下孵育4天，第4天，培養(yǎng)物用1μCi/孔氘化胸苷(Amersham產(chǎn)品TRA 61)脈沖并孵育4小時。采用96-孔平板收獲器(Tomtek)收獲，然后用β-平板計數(shù)器測定氘的摻入量。放射性物在細(xì)胞中的摻入程度(以cpm表示)用于測定化合物對生長因子刺激細(xì)胞增值的抑制情況。(c)體內(nèi)大鼠子宮水腫試驗雌激素刺激后4-6小時，大鼠的子宮重量出現(xiàn)急性增加，本試驗就是測定化合物降低這種急性增加的能力。長期以來，人們都知道這種子宮重量的急性增加是由于子宮血管通透性升高引起水腫而造成的，但最近Cullinan-Bove和Koos(內(nèi)分泌學(xué)(Endocrinology),1993,133:829-837)證實，這種子宮重量增加與VEGF mRNA在子宮中的高效表達(dá)有著密切的短暫關(guān)系。我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，用VEGF的中和單克隆抗體預(yù)處理，能夠顯著降低子宮重量急性增加，這說明子宮重量的增加實質(zhì)上由VEGF介導(dǎo)。
取20-22天齡大鼠分成數(shù)組，皮下施用溶劑中的單劑量苯甲酸雌二醇(2.5μg/大鼠)處理，或僅用溶劑處理。后者作為非刺激對照物。在施用苯甲酸雌二醇前的不同時刻，口服施用受試化合物。施用苯甲酸雌二醇后5小時，以文明方式處死大鼠，切取它們的子宮，吸干并稱重。采用學(xué)生T試驗，比較用受試化合物和苯甲酸雌二醇處理的組和僅用苯甲酸雌二醇處理的組的子宮重量增加情況。當(dāng)p＜0.05時，認(rèn)為對苯甲酸雌二醇作用的抑制是顯著性的。
本發(fā)明另一方面提供了藥物組合物，它包括上述式Ⅰ化合物或其可藥用鹽以及可藥用賦形劑或載體。
本發(fā)明組合物可以為適合口服施用的形式(例如片劑或膠囊)、適合非腸道注射(包括靜脈，皮下，肌內(nèi)，血管內(nèi)或輸注)的形式(例如無菌溶液，懸浮液或乳狀液)、適合局部施用的形式(例如軟膏劑或霜劑)，或為適合直腸施用的形式(例如栓劑)。一般地，上述組合物可采用常規(guī)賦形劑通過常規(guī)方法制備。
本發(fā)明組合物較有利的是以單位劑量形式存在。通常，化合物以每平方米動物體面積5-5000mg，即大約0.1-100mg/kg單位劑量施用于溫血動物。設(shè)定單位劑量范圍為例如1-100mg/kg，優(yōu)選1-50mg/kg，通常這能提供治療有效劑量。諸如片劑或膠囊之類的單位劑量形式通常含有1-250mg活性成分。
本發(fā)明的再一方面是提供了通過治療用于處理人或動物體方法中的上述式Ⅰ化合物或其可藥用鹽。
我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物能夠抑制VEGF受體酪氨酸激酶活性，因此它們具有有價值的抗血管生成作用和/或引起血管通透性降低的能力。
本發(fā)明的另一特征是式Ⅰ化合物或其可藥用鹽用作藥物，適宜的是式Ⅰ化合物或其可藥用鹽用在溫血動物如人體內(nèi)產(chǎn)生抗血管生成和/或血管通透性降低作用的藥物。
因此，本發(fā)明的又一方面是提供了式Ⅰ化合物或其可藥用鹽在生產(chǎn)用于在溫血動物如人體內(nèi)產(chǎn)生抗血管生成和/或血管通透性降低作用的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的再一方面是提供了在需要治療的溫血動物，如人體內(nèi)產(chǎn)生抗血管生成和/或血管通透性降低作用的方法，該方法包括對所述動物施用有效量上述式Ⅰ化合物或其可藥用鹽。
如上所述，治療或預(yù)防性治療具體疾病所需要的劑量大小，必然隨所治療的宿主，給藥途徑和所治療疾病的嚴(yán)重程度而變化。優(yōu)選使用的日劑量為1-50mg/kg。然而，日劑量也必然隨要治療的宿主，具體的給藥途徑和所治療疾病的嚴(yán)重程度而改變。因此，最佳劑量要由主治醫(yī)師決定。
上文所述的抗血管生成和/或血管通透性降低治療法可采用單獨(dú)治療，或者除本發(fā)明化合物之外還可包含一種或多種其它物質(zhì)和/或治療物。這種聯(lián)合治療可通過同時、有序或分別施用各治療組分來實現(xiàn)。在腫瘤醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，通常的實踐是使用不同形式治療物的結(jié)合物來治療各癌癥患者。就腫瘤醫(yī)學(xué)而言，這種聯(lián)合治療除上文所述的抗血管生成和/或血管通透性降低治療外的其它組成部分可以為外科學(xué)、放射療法或化學(xué)療法。所述化學(xué)療法主要包括三種類型治療劑(ⅰ)其它抗血管生成劑，它們的作用機(jī)理不同于上文所述的抗血管生成劑(例如linomide，整聯(lián)蛋白αvβ3功能抑制劑，angiostatin，丙亞胺，酞胺哌啶酮)；(ⅱ)細(xì)胞靜止劑如抗雌激素劑(例如他莫昔芬，托瑞米芬，雷洛昔芬，屈洛昔芬，iodoxyfene),孕激素(例如甲地孕酮)，芳香酶抑制劑(例如anastrozole,letrazole,vorazole,exemestane),抗孕激素藥，抗雄激素藥(例如氟硝丁酰胺，尼魯他米，bicalutamide,環(huán)丙氯地孕酮)，LHRH激動劑和拮抗劑(如乙酸戈舍瑞林，luprolide)，睪酮5α-二氫還原酶抑制劑(例如菲納臺得)，抗侵染劑(例如金屬蛋白酶抑制劑如marimastat和尿激酶型纖溶酶激活物受體功能抑制劑)和生長因子功能抑制劑，(這類生長因子包括例如血小板衍生生長因子和肝細(xì)胞生長因子，這類抑制劑包括生長因子抗體，生長因子受體抗體，酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸-蘇氨酸激酶抑制劑)；和(ⅲ)如醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)中使用的抗增殖/抗腫瘤藥及其結(jié)合物，如抗代謝藥(例如抗葉酸劑如甲氨喋呤，氟嘧啶類如5-氟尿嘧啶，嘌呤和腺苷類似物，阿糖胞苷)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環(huán)類如阿霉素，糅紅霉素，表柔比星和伊達(dá)柔霉素，巴絲裂霉素C，更生霉素，光輝霉素)；鉑衍生物(例如順氯氨鉑，卡鉑)；烷基化劑(例如氮芥，苯丙氨酸氮芥，苯丁酸氮芥，馬利蘭，環(huán)磷酰胺，異環(huán)磷酰胺，亞硝基脲，噻替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿如長春新堿和紫杉醇類如紫杉酚，taxotere)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(例如表鬼臼毒素如鬼臼乙叉甙和鬼臼噻吩甙，胺苯吖啶，托泊替堪)。
如上所述，鑒于它們的抗血管生成和/或血管通透性降低作用，本發(fā)明化合物具有非凡價值。因此，本發(fā)明這些化合物可適用于各種疾病，這些包括癌癥，糖尿病，牛皮癬，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，Kaposi肉瘤，血管瘤(haemangioma),急性和慢性腎病，粉瘤，動脈再狹窄，自身免疫病，急性炎癥和與視網(wǎng)膜血管增生有關(guān)的眼病。特別是預(yù)計本發(fā)明這些化合物有利于減緩原發(fā)性和復(fù)發(fā)性實體瘤的生長，這些實體瘤例如結(jié)腸癌，乳腺癌，前列腺癌、肺癌和皮膚癌。更具體講是本發(fā)明這些化合物預(yù)計能夠抑制與VEGF有關(guān)的原性性和復(fù)發(fā)性實體瘤的生長，尤其是那些其生長和擴(kuò)散明顯依賴于VEGF的實體瘤，包括例如結(jié)腸、乳房、前列腺、肺、外陰及皮膚上的一些腫瘤。
此外，本發(fā)明化合物還特別適用于上述任何疾病，如其中VEGF是血管生成的主要作用因子，以及其中EGF對血管生成的作用低于VEGF作用的癌癥。
除它們在治療藥物中的應(yīng)用外，式Ⅰ化合物及其可藥用鹽還在評估VEGF受體酪氨酸激酶活性抑制劑，對實驗室動物所作體外及體內(nèi)試驗系統(tǒng)的開發(fā)和標(biāo)準(zhǔn)化方面用作藥理工具，作為開發(fā)新治療劑研究的一部分，其中所述的實驗室動物包括如貓，狗，兔，猴，大鼠以及小鼠。
應(yīng)當(dāng)理解，本說明書中所用術(shù)語“醚”是指乙醚。
本發(fā)明在此用下列非限制性實施例加以說明，其中，除非另有說明[(ⅰ)蒸發(fā)通過在真空中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行，后處理步驟是在濾除殘留固體如干燥劑后進(jìn)行；(ⅱ)所有操作都是在室溫即18-25℃的溫度下于惰性氣體如氬氣環(huán)境中進(jìn)行；(ⅲ)柱色譜(采用快速程序)和中壓液相色譜(MPLC)在購自E.Merck,Darmstadt,Germany的Merck Kieselgel硅膠(Art.9385)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相硅膠上進(jìn)行；(ⅳ)給出的收率僅為舉例說明性的，而且不一定是所能獲得的最大收率；
(ⅴ)熔點(diǎn)未經(jīng)校正，系采用Mettler SP62自動熔點(diǎn)儀、油浴裝置或Koffler熱板裝置測定。
(ⅵ)式Ⅰ最終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通過核(一般為質(zhì)子)磁共振(NMR)和質(zhì)譜技術(shù)確認(rèn)；質(zhì)子磁共振化學(xué)位移值用δ標(biāo)度測量，而且峰形表示如下s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；m，復(fù)峰；br，寬峰；q，四重峰；(ⅶ)中間體通常沒有充分表征，其純度通過薄層色譜(TLC)，高效液相色譜(HPLC)，紅外(IR)或NMR分析確定；(ⅷ)使用了下列縮寫DMF N,N-二甲基甲酰胺DMSO二甲亞砜THF四氫呋喃NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮TFA三氟乙酸]實施例1將4-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(624mg,2.27mmol)和4-氯-2-氟苯胺(305μl,2.6mmol)在異丙醇(20ml)中的溶液加熱回流30分鐘。蒸除溶劑并將殘留物分配到乙酸乙酯和水之內(nèi)。分離有機(jī)層，依次用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物用乙醚研制，得到白色固體4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉(662mg,84％)。m.p.140-141℃1H NMR譜(DMSOd6)3.35(s,3H)；3.74(t,2H)；4.29(t,2H)；7.21(s,1H)；7.28(d,1H)；7.35(d,1H)；7.6(m,2H)；8.36(d,1H)；8.43(s,1H)；9.75(s,1H)MS-ESI347[MH]+元素分析實測值C 58.49 H 4.41 N 12.08C17H15N3O2FCl計算值 C 58.70 H 4.31 N 12.08％起始物質(zhì)的制備如下將2-氨基-4-氟苯甲酸(3g,19.3mmol)的甲酰胺(30ml)溶液在150℃加熱6小時。隨后將反應(yīng)混合物傾入冰/水(l/l)(250ml)內(nèi)。過濾收集沉淀固體，水洗并干燥，得到7-氟-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(2.6g,82％)。
向2-甲氧基乙醇(10ml)中小心加入鈉(400mg,17mmol),并加熱回流此混合物30分鐘。向所形成的溶液中加入7-氟-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(750mg,4.57mmol),并加熱回流此混合物15小時。將混合物冷卻并傾入水(250ml)中。用濃鹽酸酸化混合物至pH4。過濾收集所得的固體產(chǎn)物，依次用水和乙醚洗滌，并真空干燥，得到7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(580mg,58％)。
加熱回流7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(500mg,2.2mmol)在亞硫酰氯(15ml)和DMF(0.1ml)中的溶液3小時。蒸除揮發(fā)性成分，得到4-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽，為膏狀固體(520mg,83％)。實施例2將4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(342mg,1.3mmol)和2-氟-5-羥基苯胺(183mg,1.4mmol)在異丙醇(10ml)中加熱回流2小時。冷卻反應(yīng)混合物，過濾收集沉淀產(chǎn)物，用異丙醇洗滌并干燥，得到6,7-二甲氧基-4-(2-氟-5-羥基苯胺基)喹唑啉鹽酸鹽固體(66mg,15％)。m.p.219-220℃1H NMR譜(DMSOd6)3.99(s,3H)；4.01(s,3H)；6.81(dd,1 H)；6.90(dd,1H)；7.20(t,1H)；7.31(s,1H)；8.15(s,1H)；8.81(s,1H)；9.72(s,1H)；11.28(s,1H).MS-ESI:316[MH]+元素分析 實測值C 53.5 H 5.3 N 9.9C16H14N3O3F HCl 0.5H2O 0.5C3H8O計算值C 53.8 H 5.1N 10.7％起始物質(zhì)如下制備將4,5-二甲氧基氨茴酸(19.7g)和甲酰胺(10ml)的混合物在190℃下加熱攪拌5小時。冷卻混合物至大約80℃，加入50ml水。將混合物在室溫下放置3小時。分離沉淀，水洗并干燥，得到6,7-二甲氧基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(3.65g)。
取部分如此得到的物料(2.06g)與亞硫酰氯(20ml)和DMF(1滴)混合并加熱回流攪拌此混合物2小時。蒸除揮發(fā)性成分，得到4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽。
在1大氣壓氫氣下，將4-氯-5-甲氧基羰氧基-2-氟硝基苯(1.2g,4.8mmol),(如EP 61741 A2中所述)，和10％鈀-炭催化劑(500mg)在乙醇(100ml)中攪拌18小時。進(jìn)一步一批加入10％鈀-炭催化劑(500mg)，并將混合物在氫氣氛下再攪拌3小時。通過硅藻土濾除催化劑，并蒸除濾液中的溶液。殘留物通過快速色譜純化，采用二氯甲烷/己烷(1/4)洗脫，得到2-氟-5-甲氧基羰氧基苯胺(0.42g,47％)，為一油狀物。1H NMR譜(DMSOd6)3.82(s,3H)；5.33(s,2H)；6.32(dt,1H)；6.57(dd,1H)；6.98(dd,1H).MS-ESI:186[MH]+在2-氟-5-甲氧基羰氧基苯胺(400mg,2.16mmol)的甲醇(10ml)溶液中加入濃氨水(15ml)。攪拌混合物2小時，蒸除大部分溶劑。所得殘留物用水稀釋，酸化至pH7，接著用乙酸乙酯提取。水洗有機(jī)提取液，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑，得到2-氟-5-羥基苯胺(200mg,73％).1H NMR譜(DMSOd6)4.90(s,2H)；5.84(dd,1H)；6.17(dd,1H)；6.65(ddd,1H)；8.80(s,1H).實施例3將4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(500mg,1.916mmol),(如實施例2中起始物質(zhì)部分所述制備)，和4-氯-3-羥基苯胺(300mg,2.09mmol),(如UK專利1427658中所述)，在異丙醇(10ml)中的混合物加熱回流2小時。冷卻混合物，過濾收集固體產(chǎn)物，用異丙醇洗滌并干燥，得到4-(4-氯-3-羥基苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(605mg,86％).m.p.＞250℃1H NMR譜(DMSOd6)4.02(s,3H)；4.04(s,3H)；7.15(dd,1H)；7.34-7.44(m,3H)；8.28(s,1H)；8.82(s,1H)；10.52(s,1H)；11.24(s,1H).MS:332[MH]+元素分析實測值C 52.4 H 4.2 N 11.3C16H14N3O3Cl 1HCl計算值C 52.2 H 4.1 N 11.4％實施例4將2-溴甲基甲基醚(712μl,7.56mmol)逐滴加到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(2.2g,6.88mmol)和碳酸鉀(2.84g,20.6mmol)的DMF(110ml)溶液內(nèi)。混合物在60℃攪拌10小時，隨后在室溫下攪拌2天，蒸除溶劑，粗產(chǎn)物通過快速色譜純化，使用乙酸乙酯/石油醚(4/1)洗脫。將所得固體溶于熱乙醇中，加入乙醇合氯化氫。冷卻之后，過濾收集所得固體，用乙醇洗滌并真空干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(1.74g,62％).m.p.255-257℃1H NMR譜(DMSOd6；CD3COOD)3.36(s,3H)；3.79(t,2H)；4.02(s,3H)；4.34(t,2H)；7.33(s,1H)；7.46(dd,1H)；7.60-7.68(m,2H)；8.15(s,1H)；8.79(s,1H).MS-ESI:378-380[MH]+元素分析 實測值C 52.1 H 4.6 N 10.1C18H17N3O3ClF 1Hcl計算值C 52.19 H 4.38 N 10.14％起始物質(zhì)的制備如下將2-氨基-4-芐氧基-5-甲氧基苯甲酰胺(醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.),1977,vol 20,146-149,10g,0.04mol)和Gold試劑(7.4g,0.05mol)在二噁烷(100ml)中的混合物加熱回流攪拌24小時。向反應(yīng)混合物中加入乙酸鈉(3.02g,0.037mol)和乙酸(1.65ml,0.029mol),并進(jìn)一步加熱3小時。蒸除揮發(fā)性成分，向殘留物中加入水，過濾收集固體，水洗并干燥。用乙酸重結(jié)晶，得到7-芐氧基-6-甲氧基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(8.7g,84％)。
攪拌并加熱回流含7-芐氧基-6-甲氧基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(2.82g,0.01mol),亞硫酰氯(40ml)和DMF(0.28ml)的混合物1小時。蒸除揮發(fā)性成分，將殘留物與甲苯共沸，得到7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(3.45g)。
將7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(1.2g,3.5mmol)和4-氯-2-氟苯胺(444μl,4mmol)的異丙醇(40ml)溶液回流1.5小時。冷卻之后，過濾收集沉淀，依次用異丙醇和乙醚洗滌，真空干燥，得到7-芐氧基-4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(1.13g,71％).m.p.239-242℃1H NMR譜(DMSOd6)4.0(s,3H)；5.36(s,2H)；7.39-7.52(m,9H)；8.1(s,1H)；8.75(s,1H).MS-ESI:410[MH]+元素分析 實測值C 59.2 H 4.3 N 9.4C22H17N3O2ClF 1HCl計算值C 59.21 H 4.07 N 9.41％回流7-芐氧基-4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(892mg,2mmol)的TFA(10ml)溶液50分鐘。冷卻后，將混合物傾入冰上。過濾收集沉淀，并再溶于甲醇(10ml)，并用氨水堿化至pH11。蒸發(fā)濃縮后，過濾收集固體產(chǎn)物，依次用水和乙醚依次洗滌，真空干燥后得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉，為黃色固體(460mg,72％).m.p.141-143℃1H NMR譜(DMSOd6)3.95(s,3H)；7.05(s,1H)；7.35(d,1H)；7.54-7.59(m,2H)；7.78(s,1H)；8.29(s,1H)MS-ESI:320-322[MH]+.實施例5將4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(147mg,0.56mmol)(如實施例2中起始物質(zhì)部分所述制備)和4-氯-2-氟苯胺(82mg,0.56mmol)在異丙醇(7ml)中的混合物加熱回流2小時。冷卻混合物，過濾收集固體產(chǎn)物，用異丙醇洗滌并干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(102mg,49％)。1H NMR譜(DMSOd6)4.00(s,6H)；7.37(s,1H)；7.42(d,1H)；7.60(t,1H)；7.67(dd,1H)；8.27(s,1H)；8.80(s,1H)MS-ESI:334[MH]+.實施例6攪拌下,將4-(3-氯丙基)嗎啉(美國化學(xué)會志(J.Am.Chem.Soc.)1945,67,736,174mg,1.06mmol)/DMF(0.5ml)加到4-(3-叔丁基二苯基甲硅烷氧基-4-甲基苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(471mg,0.88mmol)和碳酸鉀(200mg,1.45mmol)在DMF(5ml)中的懸浮液內(nèi)。然后在100℃加熱混合物2.5小時。蒸除溶劑，殘留物分配在二氯甲烷和水之中。產(chǎn)物用二氯甲烷提取，合并的提取液通過相分離紙。蒸除溶劑得到黃色油。將該油溶于THF(4ml)，并加入氟化四正丁銨(2ml 1MTHF溶液。2mmol)。室溫攪拌混合物72小時，蒸除溶劑并將殘留物分配在二氯甲烷和飽和碳酸氫鈉水溶液內(nèi)。水相用二氯甲烷(3×20ml)提取，將合并的提取液通過相分離紙，并蒸除溶劑。殘留物通過快速色譜純化，使用甲醇/二氯甲烷(1/9)為洗脫劑，得到4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，系淺黃色固體(225mg,兩步總收率60％)。1H NMR譜(DMSOd6)2.0(m,2H)；2.15(s,3H)；2.4(m,4H)；3.6(t,4H)；3.95(s,3H)；4.20(t,2H)；7.05(s,2H)；7.15(s,1H)；7.35(s,1H)；7.85(s,1H)；8.40(s,1H)；9.25(s,2H)MS-ESI:425[MH]+.
起始物質(zhì)如下制備將7-芐氧基-6-甲氧基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(5.18g,18.4mmol),(如實施例4起始物質(zhì)部分所述制備)，DMF(1ml)和亞硫酰氯(70ml)的混合物在氬氣氛下加熱回流2小時。使混合物冷卻，蒸除過量亞硫酰氯，并將殘留物與甲苯共沸至干。所得的粗制7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽懸浮在異丙醇(50ml)中，加入3-羥基-4-甲基苯胺(2.60g,21.1mmol)。加熱回流混合物3小時，然后使之冷卻。過濾收集沉淀產(chǎn)物，用異丙醇洗滌，干燥后得到7-芐氧基-4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉(4.7g,60％)。1H NMR譜(DMSOd6)2.15(s,3H)；4.0(s,3H)；5.35(s,2H)；6.95(dd,1H)；7.15(m,2H)；7.35-7.55(m,5H)；8.25(s,1H)；8.75(s,1H)；9.6(s,1H)；11.2(s,1H).
將咪唑(1.45g,21.6mmol)加到7-芐氧基-4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉(4.11g,9.69mmol)的DMF(50ml)溶液中，并在室溫下攪拌混合物至完全溶解。逐滴加入氯化叔丁基二苯基甲硅烷(2.5ml,9.6mmol),并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌72小時。加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用二氯甲烷提取產(chǎn)物。蒸除溶劑后得到潮濕固體，將其溶于DMF(40ml)、甲醇(40ml)和乙酸乙酯(40ml)的混合物中。加入10％鈀-炭催化劑(500mg)，在1大氣壓氫氣下攪拌混合物36小時。通過硅藻土濾除催化劑，并蒸除濾液中的溶劑。將粗產(chǎn)物通過快速色譜純化，使用甲醇/二氯甲烷(1/9)為洗脫劑，得到4-(3-叔丁基二苯基甲硅烷氧基-4-甲基苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉黃色固體(2.2g，兩步總收率為42％)。1H NMR譜(DMSOd6)1.1(s,9H)；2.35(s,3H)；3.90(s,3H)；6.9(m,2H)；7.1(d,1H)；7.4(m,6H)；7.5(d,1H)；7.7(m,5H)；7.85(s,1H)；9.05(s,1H)；10.2(s,1H)MS-ESI:536[MH]+.實施例7將含有7-(3-芐氧基丙氧基)-4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(180mg,0.4mmol)、5％鈀-炭催化劑(50mg)、甲醇(5ml)、三氯乙烷(5ml)和DMF(1ml)的混合物在1大氣壓氫氣下攪拌2小時。通過硅藻土濾除催化劑并蒸發(fā)除去溶劑。殘留物分配到乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液之內(nèi)，分離有機(jī)層并干燥(MgSO4)，隨后蒸除溶劑。所得殘留物用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-羥基丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉(48mg,33％)。m.p.199-201℃1H NMR譜(DMSOd6)1.92(t,2H)；3.60(t,2H)；3.95(s,3H)；4.20(t,2H)；4.55(t,1H)；7.18(s,1H)；7.33(dd,1H)；7.51(dd,1H)；7.55(td,1H)；7.78(s,1H)；8.38(s,1H)；8.32(s,1H)；9.50(s,1H)MS-ESI:378[MH]+.元素分析 實測值C 57.2 H 4.6 N 11.0C18H17N3O3FCl計算值C 57.2 H 4.5 N 11.1％
起始物質(zhì)制備如下5℃下，向三丁膦(376mg,1.9mmol)和4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(200mg,0.63mmol)[如實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]在二氯甲烷(20ml)中的溶液內(nèi)加入3-芐氧基-1-丙醇(150μl,0.9mmol)溶液。隨后向所得混合物內(nèi)加入1,1′-偶氮二羰基二哌啶(480mg,1.9mmol),在5℃下攪拌混合物1小時，然后溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。加入乙醚(10ml)，攪拌混合物15分鐘，爾后濾除沉淀固體。蒸除濾液中的揮發(fā)性成分，并將殘留物分配在乙酸乙酯和水之中。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)，并蒸除溶劑。將所得殘留物再溶于丙酮，加入氯化氫/乙醚(0.6ml 1M溶液，0.6mmol)。過濾收集所產(chǎn)生的沉淀產(chǎn)物并干燥，得到7-(3-芐氧基丙氧基)-4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(90mg,31％)。1H NMR譜(DMSOd6)2.22(t,2H)；3.74(t,2H)；4.10(s,3H)；4.37(t,2H)；4.60(s,2H)；7.34-7.56(m,7H)；7.68(t,1H)；7.76(dd,1H)；8.38(s,1H)；8.90(s,1H)；11.73(s,1H).實施例8將4-(2-氯乙基)嗎啉鹽酸鹽(40mg,2.1mmol)加到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(63mg,0.2mmol)[如實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]和碳酸鉀(95mg,0.69mmol)在DMF(3ml)的混合物中，并將混合物在100℃攪拌3小時。隨后冷卻混合物，蒸除揮發(fā)性成分，殘留物分配到水和二氯甲烷中。分離有機(jī)相，通過相分離紙，并蒸除溶劑。將殘留物溶于丙酮，加入氯化氫/乙醚(0.2ml，1M溶液，0.2mmol)。過濾收集沉淀產(chǎn)物并干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(50mg,50％).1H NMR譜(DMSOd6)3.6(m,2H)；3.85(m,4H)；3.95(s,3H)；4.6(m,2H)；7.35(m,2H)；7.6(m,2H)；8.05(s,1H)；8.55(s,1H)MS-ESI:433[MH]+.元素分析 實測值C 50.5 H 4.9 N 10.9C21H22N4O3FCl2HCl計算值C 49.9 H 4.8 N 11.1％實施例9將4-(3-氯丙基)嗎啉(美國化學(xué)會志(J.Am.Chem.Soc.),1945,67,736,2.26g,13.8mmol)加到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(2.21g,6.9mmol)[如實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]和碳酸鉀(6.5g,47mmol)在DMF(100ml)的混合物中，并將混合物在110℃攪拌4小時。隨后使之冷卻。蒸除揮發(fā)性成分，并將殘留物分配到水和二氯甲烷中。分離有機(jī)相，鹽水洗滌，通過相分離紙，隨后蒸除溶劑。將殘留物通過柱色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇/氨水(100/8/1)為洗脫劑。將產(chǎn)物溶于丙酮和異丙醇中，加入氯化氫/乙醚(4.8ml 1M溶液，4.8mmol)。過濾收集沉淀產(chǎn)物，用丙酮和乙醚洗滌，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(2.16g,65％).1H NMR譜(DMSOd6)2.25(m,2H)；3.7-3.9(br s,4H)；3.95(s,3H)；4.25(t,2H)；7.2(s,1H)；7.3(dt,1H)；7.55(m,2H)；7.95(s,1H)；8.40(s,1H)；9.85(brs,1H)；11.0(br s,1H)MS-ESI:447[MH]+.元素分析實測值C 54.7 H 5.6 N 10.8C22H24N4O3FCl 1HCl 0.5C3H6O計算值C 55.1 H 5.5 N10.9％實施例10向4-(3-乙酰氧基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉(2.38g,6mmol)在三氯甲烷(24ml)和甲醇(24ml)混合物中的溶液內(nèi)加入濃氨水(8ml)。加熱回流混合物8小時，并蒸除揮發(fā)性物。殘留物用水研制，過濾收集所得固體，并用二氯甲烷/乙醇重結(jié)晶。將產(chǎn)物再溶于二氯甲烷/乙醇混合物內(nèi)，加熱氯化氫/乙醇飽和溶液。蒸除部分溶劑，隨后冷卻混合物。過濾收集所產(chǎn)生的沉淀，用乙醚洗滌，并真空干燥，得到4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(1.68g,80％)。m.p.270℃(分解)1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)2.17(s,3H)；3.35(s,3H)；3.78(t,2H)；4.00(s,3H)；4.33(t,2H)；6.96(d,1H)；7.08(s,1H)；7.16(d,1H)；7.3(s,1H)；8.09(s,1H)；8.81(s,1H)MS-ESI:378[MNa]+.元素分析 實測值C 58.0 H 5.9 N 10.7C19H21N3O41HCl計算值C 58.2 H 5.7 N 10.7％起始物質(zhì)制備如下室溫下，將乙酐(1.9ml,20.3mmol)加到2-甲基-5-硝基苯酚(2.5g,16.3mmol)和1M氫氧化鈉水溶液(24.5ml)的混合物內(nèi)。攪拌混合物40分鐘，濾除固體，并用乙酸乙酯提取濾液。合并的有機(jī)提取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑，得到2-乙酰氧基-4-硝基甲苯(3.1g,100％)。將該產(chǎn)物(3.1g,15.9mmol)和10％鈀-炭催化劑(0.12g)的乙酸乙酯(50ml)混合物在1大氣壓氫氣下室溫攪拌2小時。通過硅藻土濾除催化劑，并蒸除濾液中的溶劑，得到3-乙酰氧基-4-甲基苯胺(2.45g,94％)。
將7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉(2.18g,7.25mmol)[如實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]，3-乙酰氧基-4-甲基苯胺(1.32g,8mmol)和異丙醇(50ml)的混合物加熱回流攪拌1小時。冷卻混合物至室溫。過濾收集沉淀，用異丙醇和乙醚洗滌，得到4-(3-乙酰氧基-4-甲基苯胺基)-7-芐氧基-6-甲氧基喹唑啉。
將4-(3-乙酰氧基-4-甲基苯胺基)-7-芐氧基-6-甲氧基喹唑啉(2.68g,5.75mmol)和10％鈀-炭催化劑(0.27g)在甲醇(50ml)，DMF(12ml)和三氯甲烷(50ml)中的混合物在1.5大氣壓氫氣下室溫攪拌30分鐘。通過硅藻土濾除催化劑并蒸除濾液內(nèi)的溶劑。殘留物用乙醚研制，過濾收集，并在50℃下真空干燥，得到4-(3-乙酰氧基-4-甲基苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(2.1g,100％)。
在4-(3-乙酰氧基-4-甲基苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(1.51g,4mmol)的DMF(30ml)溶液中加入碳酸鉀(2.2g,16mmol)，攪拌混合物15分鐘。隨后逐滴加入2-溴乙基甲基醚(667mg,4.8mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時，然后在60℃加熱17小時，最后冷卻。濾除不溶物，濾墊用DMF洗滌。將濾液分配到乙酸乙酯和水之內(nèi)，分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物通過柱色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇(其比例先為95/5，后為93/7)為洗脫劑。此精制產(chǎn)物用乙醚研制，得到4-(3-乙酰氧基-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉(1.34g,84％),為白色粉末。m.p.180-183℃1H NMR譜(CDCl3)2.16(s,3H)；2.34(s,3H)；3.47(s,3H)；3.87(t,2H)；3.99(s,3H)；4.31(t,2H)；6.98(s,1H)；7.21(d,1H)；7.24(d,1H)；7.42(d,1H)；7.50(s,1H)；8.64(s,1H)MS-ESI:420[MNa]+.元素分析 實測值C 63.1 H 6.1 N 10.4C21H23N3O5計算值C 63.5 H 5.8 N 10.6％實施例11將4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(130mg,0.5mmol)[如實施例2中起始物質(zhì)部分所述制備]和4-溴-2-氟苯胺(95mg,0.5mmol)在異丙醇(7ml)中的混合物加熱回流2小時。使混合物冷卻至室溫，過濾收集沉淀固體，用異丙醇和乙醚洗滌并干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(124mg,60％),為灰白色固體。HPLC特性柱-200×4.6mm C18 ODS Hypersil(商標(biāo)Shandon)反相5μm溶劑-流速1.5ml/min.0-3分鐘-H2O/CH3CN(95/5)0.03M三乙胺3-17分鐘-梯度H2O/CH3CN(95/5-5/95)；恒定0.03M三乙胺保留時間-13.01分鐘實施例12將4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(130mg,0.5mmol)[如實施例2中起始物質(zhì)部分所述制備]和2-氟-4-甲基苯胺(63mg,0.5mmol)在異丙醇(7ml)中的混合物加熱回流2小時。冷卻混合物至室溫，過濾收集沉淀固體，用異丙醇和乙醚洗滌并干燥，得到4-(2-氟-4-甲基苯胺基)-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(87mg,50％),為灰白色固體。HPLC特性柱-200×4.6mm C18 ODS Hypersil(商標(biāo)Shandon)反相5μm溶劑-流速1.5ml/min.0-3分鐘-H2O/CH3CN(95/5)0.03M三乙胺3-17分鐘-梯度H2O/CH3CN(95/5-5/95)；恒定0.03M三乙胺保留時間-12.32分鐘實施例13將4-氯-6,7-二甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(130mg,0.5mmol)[如實施例2中起始物質(zhì)部分所述制備]和3-羥基-4-甲基苯胺(62mg,0.5mmol)在異丙醇(7ml)中的混合物加熱回流2小時。使混合物冷卻至室溫，過濾收集沉淀固體，用異丙醇和乙醚洗滌并干燥，得到6,7-二甲氧基-4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)喹唑啉鹽酸鹽(98mg,56％),為灰白色固體。1H NMR譜(DMSOd6)2.14(s,3H)；3.98(s,3H)；4.00(s,3H)；6.97(d,1H)；7.12(s,1H)；7.14(d,1H)；7.38(s,1H)；8.27(s,1H)；8.77(s,1H)；9.65(br s,1H)MS-ESI:312[MH]+.元素分析 實測值C 59.1 H 5.4 N 11.8C17H17N3O31Hcl計算值C 58.6 H 5.2 N 12.1％實施例14將4-氯-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉(107mg,0.4mmol)和4-溴-2-氟苯胺(76mg,0.4mmol)在異丙醇(7ml)中的混合物加熱回流2小時。冷卻混合物至室溫，過濾收集沉淀固體，用異丙醇和乙醚洗滌并干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(151mg,82％),為灰白色固體。m.p.200-204℃1H NMR譜(DMSOd6；TFA)3.36(s,3H)；3.79(t,2H)；4.02(s,3H)；4.39(t,2H)；7.37(s,1H)；7.54-7.61(m,2H)；7.81(dd,1H)；8.16(s,1H)；8.86(s,1H)MS-ESI:422[MH]+.元素分析 實測值C 47.56 H 4.01 N 9.29C20H21N3O4BrF0.95HCl計算值C 47.32 H 3.96 N 9.20％起始物質(zhì)的制備如下將4-羥基-3-甲氧基苯甲酸乙酯(9.8g,50mmo1),2-溴乙基甲基醚(8.46ml,90mmol)和碳酸鉀(12.42g,90mmol)在丙酮(60ml)中的混合物加熱回流30小時。冷卻混合物并濾除固體。蒸除濾液中的揮發(fā)性成分，殘留物用己烷研制，得到3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(11.3g,89％),為白色固體m.p.57-60℃1H NMR譜(DMSOd6)1.31(t,3H)；3.29(s,3H)；3.32(s,3H)；3.68(m,2H)；4.16(m,2H)；4.28(q,2H)；7.06(d,1H)；7.45(d,1H)；7.56(dd,1H)MS-FAB:255[MH]+.
0℃及攪拌下，向濃硝酸(75ml)中分批加入3-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(9.5g,37mmol)。溫?zé)峄旌衔镏潦覝夭⑦M(jìn)一步攪拌90分鐘?；旌衔镉盟♂尣⒂枚燃淄樘崛。稍?MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物用己烷研制，得到5-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯甲酸乙酯(10.6g,95％)，為橙色固體。m.p.68-69℃1H NMR譜(DMSOd6)1.27(t,3H)；3.30(s,3H)；3.69(m,2H)；3.92(s,3H)；4.25(m,2H)；4.29(q,2H)；7.30(s,1H)；7.65(s,1H)MS-CI:300[MH]+.
將5-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)-2-硝基苯甲酸乙酯(10.24g,34mmol),環(huán)己烯(30ml)和10％鈀-炭催化劑(2.0g)在甲醇(150ml)中的混合物加熱回流5小時。使反應(yīng)混合物冷卻并用二氯甲烷稀釋。濾除催化劑并通過蒸發(fā)從濾液中除去揮發(fā)性成分。殘留物用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶，得到2-氨基-5-甲氧基-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酸乙酯(8.0g)，為米色固體。向此產(chǎn)物中加入甲酰胺(80ml)，并將此混合物在170℃加熱18小時。在高真空下蒸除大約一半溶劑，隨后靜置殘留物過夜。過濾收集固體產(chǎn)物，用乙醚洗滌并干燥，得到6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(5.3g，兩步總收率62％)，為灰色固體。1H NMR譜(DMSOd6)3.35(s,3H)；3.74(m,2H)；3.89(s,3H)；4.26(m,2H)；7.15(s,1H)；7.47(s,1H)；7.98(s,1H)；12.03(br s,1H)MS-CI:251[MH]+在6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(5.1g,20mmol)和亞硫酰氯(50ml)的混合物中加入DMF(0.5ml)。攪拌并加熱回流此混合物3小時，冷卻，然后蒸除過量亞硫酰氯。將殘留物懸浮于二氯甲烷中，用碳酸氫鈉水溶液洗滌。水相用二氯甲烷提取，并干燥(MgSO4)合并提取液。粗產(chǎn)物用二氯甲烷/己烷重結(jié)晶，得到4-氯-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉(2.8g，51％)，為白色細(xì)粉固體。1H NMR譜(DMSOd6)3.37(s,3H)；3.77(m,2H)；4.01(s,3H)；4.37(m,2H)；7.40(s,1H)；7.49(s,1H)；8.88(s,1H)MS-CI:269[MH]+實施例15將4-氯-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉(107mg,0.4mmol)[如實施例14中起始物質(zhì)部分所述制備]和2-氟-4-甲基苯胺(50mg,0.4mmol)在異丙醇(7ml)中的混合物加熱回流2小時。冷卻混合物至室溫，過濾收集沉淀固體，用異丙醇和乙醚洗滌并干燥，得到4-(2-氟-4-甲基苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(95mg,60％)，為灰白色固體。HPLC特性柱-200×4.6mm C18 ODS Hypersil(商標(biāo)Shandon)反相5μm溶劑-流速1.5ml/min.0-3分鐘-H2O/CH3CN(95/5)0.001M三乙胺3-17分鐘-梯度H2O/CH3CN(95/5-5/95)；恒定0.001M三乙胺保留時間-10.46分鐘實施例16將4-氯-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(450mg,1.6mmol)[如實施例1中起始物質(zhì)部分所述制備]和3-羥基-4-甲基苯胺(280mg,2.27mmol)在異丙醇(20ml)中的混合物加熱回流30分鐘。蒸除溶劑，將殘留物用異丙醇研制。過濾收集所形成的固體，用異丙醇洗滌并真空干燥，得到4-(3-羥基-4-甲基苯胺基)-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(428mg,74％)。1H NMR譜(DMSOd6)2.18(s,3H)；3.38(s,3H)；3.8(t,2H)；4.35(t,2H)；7.05(d,1H)；7.15(m,2H)；7.35(s,1H)；7.52(d,1H)；8.75(d,1H)；8.85(s,1H)；9.7(br s,1H)MS-ESI:326[MH]+.元素分析 實測值C 59.6 H 5.8 N 11.7C18H19N3O31Hcl計算值C 59.7 H 5.5 N 11.6％實施例17攪拌下，將1-(2-羥基乙基)-4-甲基哌嗪(112mg,0.78mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液加到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(225mg,0.7mmol)[按實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]和三丁基膦(420mg,2.1mmol)的二氯甲烷(10ml)懸浮液內(nèi)。隨后向混合物中分批加入1,1′-(偶氮二羰基)二哌啶(525mg,2.1mmol)。攪拌所形成的淺黃色清亮溶液3.5小時，爾后放置過夜。反應(yīng)混合物用乙醚(8ml)驟冷，并濾除沉淀物。蒸除濾液中的溶劑，隨后將殘留物溶于丙酮，用1M乙醚合氯化氫處理，直至產(chǎn)生鹽酸鹽沉淀為止。過濾收集沉淀，并再溶于甲醇，隨后用過量三乙胺堿化。蒸除揮發(fā)性成分，并將殘留物通過柱色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇/0.88氨水(100/8/1)為洗脫劑。所得精制油用乙醚研制，過濾收集并干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉(79mg,25％),為白色固體。m.p.173-175℃1H NMR譜(DMSOd6)2.10(s,3H)；2.3(m,4H)；2.5(m,4H)；2.75(t,2H)；3.95(s,3H)；4.25(t,2H)；7.21(s,1H)；7.30(dd,1H)；7.50(d,1H)；7.55(dd,1H)；7.75(s,1H)；8.30(s,1H)；9.50(s,1H)MS-ESI:446[MH]+.元素分析實測值C 59.1 H 5.8 N 15.5C22H25N5O2FCl計算值C 59.3 H 5.7 N 15.7％
起始物質(zhì)的制備如下將2-溴乙醇(2.36g,19mmol)滴加到1-甲基哌嗪(1.26g,13mmol)和碳酸鉀(5.0g,36mmol)的無水乙醇(150ml)混合物內(nèi)，并加熱回流混合物18小時。使混合物冷卻并濾除沉淀物，隨后蒸除揮發(fā)性溶劑。殘留物用丙酮/二氯甲烷處理，濾除不溶物，并從濾液中蒸除溶劑，得到1-(2-羥基乙基)-4-甲基哌嗪(870mg,48％),為亮棕色油。1H NMR譜(CDCl3)2.18(s,3H)；2.3-2.7(br m,8H)；2.56(t,2H)；3.61(t,2H)MS-ESI:145[MH]+.實施例18將4-氯-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉(2.5g,7.41mmol)和4-溴-2-氟苯胺(1.55g,8.15mmol)在DMF(20ml)中的溶液于150℃加熱4小時。混合物用乙醚(200ml)稀釋，并過濾收集所得沉淀物。將此固體分配到二氯甲烷和水之中，水相用1M氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)至pH8.5。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物通過快速色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇(9/1)為洗脫劑。將此精制固體再溶于甲醇和二氯甲烷中，加入2.2M乙醚合氯化氫(3ml)。蒸除揮發(fā)性成分，并將殘留物懸浮到乙醚中，過濾收集并真空干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(1.61g,26％).1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)2.3-2.4(m,2H)；3.15(t,2H)；3.34(t,2H)；3.54(d,2H)；3.76(t,2H)；4.02(s,3H)；4.04(m,2H)；4.33(t,2H)；7.41(s,1H)；7.5-7.65(m,2H)；7.80(dd,1H)；8.20(s,1H)；8.9(s,1H)元素分析實測值C 46.5 H 5.0 N 9.9C22H24N4O3BrF0.4H2O1.9HCl計算值C 46.5 H 4.7 N 9.9％.
起始物質(zhì)制備如下將4-羥基-3-甲氧基苯甲酸(4.5g,26.8mmol),3-嗎啉代丙基氯(9.5g,58.0mmol)[按照美國化學(xué)會志(J.Am.Chem.Soc.)1945,67,736中所述制備]，碳酸鉀(8.0g,58mmol),碘化鉀(1.0g,0.22mmol)和DMF(80ml)的混合物在100℃加熱攪拌3小時。濾除固體并蒸發(fā)濾液。將殘留物溶于乙醇(50ml)，加入2M氫氧化鈉溶液(50ml)，并在90℃加熱混合物2小時。在部分蒸發(fā)后，混合物用濃鹽酸酸化，并用乙醚洗滌，隨后用Diaion(商標(biāo)Mitsubishi)HP20SS樹脂柱純化，先用水洗脫，爾后用甲醇(0-25％)/鹽酸(pH2)梯度洗脫。蒸發(fā)部分溶劑后凍干，得到3-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)苯甲酸(8.65g,97％)。1H NMR譜(DMSOd6；TFA)2.17-2.24(m,2H)；3.10-3.16(m,2H)；3.30(t,2H)；3.52(d,2H)；3.71(t,2H)；3.82(s,3H)；4.01(br d,2H)；4.14(t,2H)；7.08(d,1H)；7.48(d,1H)；7.59(dd,1H)MS-ESI:296[MH]+.
0℃下，將發(fā)煙硝酸(1.5ml,36.2mmol)緩緩加到3-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)苯甲酸(7.78g,23.5mmol)的TFA(25ml)溶液中。移去冷卻浴，在室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時。蒸除TFA，向殘留物中加入冰。過濾收集沉淀物，先用極少量水洗滌，接著再用甲苯和乙醚洗滌。在五氧化二磷存在下真空干燥固體，得到5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)-2-硝基苯甲酸(7.54g)，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化而直接使用。1H NMR譜(DMSOd6；TFA)2.16-2.23(m,2H)；3.10-3.17(m,2H)；3.30(t,2H)；3.52(d,2H)；3.66(t,2H)；3.93(s,3H)；4.02(br d,2H)；4.23(t,2H)；7.34(s,1H)；7.61(s,1H)MS-EI:340[M]+.
將亞硫酰氯(15ml)和DMF(0.05ml)加到5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)-2-硝基苯甲酸(7.54g)中。將混合物在50℃下加熱1小時，通過蒸發(fā)和與甲苯一起共沸(×2)除去過量亞硫酰氯。將所得固體懸浮在THF(200ml)中,并向混合物內(nèi)通氨30分鐘。濾除沉淀，用THF洗滌。蒸發(fā)濃縮濾液，使產(chǎn)物結(jié)晶并過濾收集，得到5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)-2-硝基苯甲酰胺(5.25g)，為淺黃色結(jié)晶，該產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化直接使用。1H NMR譜(DMSOd6；TFA)2.17-2.24(m,2H)；3.11-3.18(m,2H)；3.31(t,2H)；3.53(d,2H)；3.67(t,2H)；3.93(s,3H)；4.03(br d,2H)；4.21(t,2H)；7.17(s,1H)；7.62(s,1H)MS-EI:339[M]+.
向5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)-2-硝基苯甲酰胺(5.67g)的甲醇(150ml)懸浮液中加入濃鹽酸(30ml)，并加熱混合物至60℃。當(dāng)5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)-2-硝基苯甲酰胺溶解后，向反應(yīng)混合物中分批加入鐵粉(5.6g,100mmol),隨后加熱反應(yīng)混合物90分鐘。冷卻后，通過硅藻土濾除不溶物，并蒸除濾液中的揮發(fā)性成分，殘留物通過Diaion(商標(biāo)Mitsubishi)HP20SS樹脂柱純化，先用水洗脫，隨后用鹽酸(pH2)洗脫。蒸發(fā)濃縮餾分，得一沉淀物，過濾收集，并在五氧化二磷存在下真空干燥，得到2-氨基-5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)苯甲酰胺的鹽酸鹽(4.67g,75％)，為米色結(jié)晶。1H NMR譜(DMSOd6；TFA)2.22-2.28(m,2H)；3.12(br t,2H)；3.29(t,2H)；3.51(d,2H)；3.75(t,2H)；3.87(s,3H)；4.00(br d,2H)；4.12(t,2H)；7.06(s,1H)；7.53(s,1H)MS-EI:309[M]+.
將2-氨基-5-甲氧基-4-(3-嗎啉代丙氧基)苯甲酰胺(4.57g,12.25mmol)和Gold試劑(2.6g,15.89mmol)在二噁烷(35ml)中的混合物加熱回流5小時。向反應(yīng)混合物中加入乙酸(0.55ml)和乙酸鈉(1.0g),并進(jìn)一步加熱混合物3小時。冷卻混合物至室溫，蒸除揮發(fā)性成分。殘留物用2M氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH7，隨后采用Diaion(商標(biāo)Mitsubishi)HP20SS樹脂柱純化，使用甲醇(0-60％梯度)/水洗脫。蒸發(fā)濃縮所收集的餾分，得一沉淀物，過濾收集并在五氧化二磷存在下真空干燥，得到6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(3.04g,78％),為白色固體。1H NMR譜(CDCl3)2.10(q,2H)；2.48(m,4H)；2.56(t,2H)；3.72(t,4H)；4.00(s,3H)；4.24(t,2H)；7.18(s,1H)；7.60(s,1H)；8.00(s,1H)；10.86(br s,1H)MS-EI:319[M]+.
將6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(638mg,2mmol)和亞硫酰氯(8ml)的混合物加熱回流30分鐘。通過蒸發(fā)和與甲苯(×2)共沸除去過剩亞硫酰氯。將殘留物懸浮于二氯甲烷并向混合物中加入10％碳酸氫鈉水溶液。分離有機(jī)層，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物用乙醚研制，過濾收集固體，用乙醚洗滌并真空干燥，得到4-氯-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉(590mg,87％)。1H NMR譜(CDCl3)2.10-2.16(m,2H)；2.48(br s,4H)；2.57(t,2H)；3.73(t,4H)；4.05(s,3H)；4.29(t,2H)；7.36(s,1H)；7.39(s,1H)；8.86(s,1H)MS-ESI:337[MH]+.實施例19將4-氯-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(238mg,0.69mmol)和4-氯-2-氟苯胺(145mg,1mmol)在異丙醇(5ml)中的混合物加熱回流1小時。蒸除溶劑，將殘留物分配到水和乙酸乙酯內(nèi)，水層用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)至pH8。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物通過快速色譜純化，使用二氯甲烷/乙腈/甲醇(60/30/10，繼之60/20/20)為洗脫劑。所得的半精制固體用中性氧化鋁色譜再次純化，使用二氯甲烷/甲醇(95/5)為洗脫劑。將所得的白色固體溶于二氯甲烷，加入4M乙醚合氯化氫(0.5ml)。蒸除揮發(fā)性成分，加入二氯甲烷研制殘留物，其后用甲醇和乙醚研制。過濾收集沉淀固體并真空干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(35mg,10％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)2.3(m,2H)；3.13(t,2H)；3.34(t,2H)；3.52(d,2H)；3.68(t,2H)；4.01(d,2H)；4.34(t,2H)；7.37(s,1H)；7.46(d,1H)；7.54(dd,1H)；7.61(t,1H)；7.71(d,1H)；8.71(d,1H)；8.93(s,1H)MS-ESI:471[MH]+元素分析 實測值C 50.9 H 5.2 N 11.5C21H22N4O2ClF0.8H2O 1.75HCl計算值C 50.9 H 5.2 N 11.3％.
起始物質(zhì)制備如下室溫下，將金屬鈉(2.2g,95mmol)小心加到芐基氯(50ml)中。混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后加熱到80℃反應(yīng)1小時。使混合物冷卻至40℃，加入7-氟-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(3.9g,24mmol)[如實施例1中起始物質(zhì)部分所述制備]。隨后將反應(yīng)混合物在130℃加熱攪拌4小時，并放置冷卻至室溫過夜。加水驟冷混合物，加乙醚(150ml)研制所得固體，過濾收集并在60℃下高真空干燥4小時，得到7-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(5.33g,89％)。
將7-芐氧基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(5.3g,21mmol)懸浮到無水DMF(50ml)中，加入氫化鈉(1g 60％礦物油懸浮物，25mmol)。待無氫氣逸出之后，冷卻反應(yīng)至室溫，然后在10分鐘內(nèi)滴加入新戊酸氯甲酯(4.1g,27mmol)。攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，隨后傾入檸檬酸水溶液(pH5)(250ml)中，并用乙醚(3×300ml)提取。用鹽水洗滌合并的提取液，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。所得固體用異己烷研制，過濾收集并真空干燥，得到7-芐氧基-3-甲基新戊?；?3,4-二氫喹唑啉-4-酮(6.9g,90％)。
在7-芐氧基-3-甲基新戊?；?3,4-二氫喹唑啉-4-酮(6.85g,18.7mmol)在乙酸乙酯(300ml)、甲醇(40ml)、DMF(40ml)和乙酸(0.7ml)中的溶液內(nèi)加入5％鈀-炭催化劑(0.7g,50％水懸液)。在常壓下于氫氣氛中強(qiáng)烈攪拌混合物4.5小時。通過硅藻土濾除催化劑，蒸發(fā)濃縮濾液至大約60ml，加水(300ml)稀釋，并用乙醚(3×300ml)提取。合并的提取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并蒸除揮發(fā)性成分。將所得的粗制固體溶于丙酮(200ml)和乙酸(0.2ml)中，并冷卻至0℃。加入高錳酸鉀(1.8g)，并攪拌混合物10分鐘。隨后將反應(yīng)混合物傾入水(250ml)內(nèi)，加入乙酸乙酯(250ml)。濾除沉淀物，分離有機(jī)相，水相用乙酸乙酯(2×100ml)再提取。合并的提取液用水及鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并蒸除揮發(fā)性成分，得到7-羥基-3-甲基新戊酰基-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(4.05g,78％)，為膏狀固體。
將7-羥基-3-甲基新戊?；?3,4-二氫喹唑啉-4-酮(750mg,2.7mmol)懸浮到二氯甲烷(40ml)中，隨后在5℃下加入1-(3-羥基丙基)嗎啉(490mg,3.4mmol)和三苯膦(890mg,3.4mmol)。混合物在5℃下攪拌5分鐘，然后在5分鐘內(nèi)加入偶氮二羧酸二乙酯(590mg,3.4mmol)。并在5℃下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，隨后在室溫下攪拌1小時。將反應(yīng)混合物直接進(jìn)行柱色譜純化，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈/乙酸乙酯(1/5)，最后為乙腈/乙酸乙酯/氨水(50/50/0.5)進(jìn)行洗脫。精制產(chǎn)物用乙醚/異己烷研制，過濾收集，得到3-甲基新戊?；?7-(3-嗎啉代丙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(745mg,68％)。
將3-甲基新戊?；?7-(3-嗎啉代丙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(680mg,1.6mmol)的飽和甲醇/氨(20ml)溶液在40℃攪拌6小時，隨后在室溫下攪拌18小時。蒸除溶劑，將殘留物乙醚/異己烷研制。過濾收集所得固體，得到7-(3-嗎啉代丙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(450mg,92％),為白色固體。1H NMR譜(DMSOd6)1.9(m,2H)；2.35(t,4H)；2.4(t,2H)；3.55(t,4H)；4.15(t,2H)；7.05(m,2H)；7.97(d,1H)；8.02(s,1H)MS-ESI:290[MH]+將7-(3-嗎啉代丙氧基)-3,4-二氫喹唑啉-4-酮(200mg,0.69mmol)在亞硫酰氯(5ml)和DMF(0.1ml)中的混合物加熱回流1小時。溶液用甲苯稀釋，并蒸除揮發(fā)性成分。將殘留物溶于二氯甲烷，加入乙醚。過濾收集所得產(chǎn)物，用乙醚洗滌，經(jīng)真空干燥后得到4-氯-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(238mg,100％)。
1-(3-羥基丙基)嗎啉的制備如下在3-溴-1-丙醇(75g,0.54mol)的甲苯(750ml)溶液中加入嗎啉(94g,1.08mol),然后在80℃加熱反應(yīng)4小時。使混合物冷卻至室溫，濾除沉淀固體。除去濾液中的揮發(fā)性成分，將所得黃色油狀物在0.4-7mmHg下通過蒸餾純化，得到1-(3-羥基丙基)嗎啉(40g,50％)，為無色油狀物。b.p.68-70℃(～0.5mmHg)1H NMR譜(DMSOd6)1.65-1.78(m,2H)；2.50(t,4H)；2.60(t,2H)；3.68(t,4H)；3.78(t,2H)；4.90(br d,1H).實施例20在4-氯-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉(202mg,0.6mmol)[如實施例18中起始物質(zhì)部分所述制備]和4-氰基-2-氟苯胺(100mg,0.72mmol)[USP 4,120,693]的異丙醇(5ml)溶液中加入5M異丙醇合氯化氫(1.5ml),并在50℃加熱。然后在80℃加熱混合物2小時，使之冷卻至室溫再放置過夜。過濾收集所得沉淀物，隨后將此固體分配在二氯甲烷和水之內(nèi)，加入1M氫氧化鈉水溶液(0.8ml)。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除溶劑。殘留物通過快速色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇(94/6)為洗脫劑。將此精制固體溶于二氯甲烷，加入2.2M乙醚合氯化氫。過濾收集沉淀產(chǎn)物，用乙醚洗滌并真空干燥，得到4-(4-氰基-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(125mg,39％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)2.3-2.4(m,2H)；3.15(t,2H)；3.36(t,2H)；3.54(d,2H)；3.75(t,2H)；4.02(d,2H)；4.04(s,3H)；4.34(t,2H)；7.44(s,1H)；7.8-7.9(m,2H)；8.11(d,1H)；8.25(s,1H)；8.94(s,1H)元素分析 實測值C 52.7 H 5.4 N 12.9C23H24N5O3F0.5H2O1.9HCl計算值C 52.7 H 5.3 N 13.1％.0.07乙醚0.15二氯甲烷實施例21將偶氮二羧酸二乙酯(123μl,0.88mmol)分批加到已冷卻到0℃的4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(250mg,0.8mmol)[按實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]，三苯膦(228mg,0.96mmol)和3-甲氧基-1-丙醇(71mg,0.8mmol)在二氯甲烷(20ml)的混合物內(nèi)。然后溫?zé)峄旌衔镏潦覝夭嚢?8小時。過濾除去所形成的沉淀物，并蒸除濾液中的溶劑。殘留物通過柱色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇/濃氨水(100/8/1)為洗脫劑。將此精制油用乙醚合氯化氫處理，爾后蒸除揮發(fā)性成分。再將殘留物用乙醚研制，過濾收集固體，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-甲氧基丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(100mg,32％),為黃色固體。1H NMR譜(DMSOd6)2.10(m,2H)；3.25(s,3H)；3.5(t,2H)；4.00(s,3H)；4.25(t,2H)；7.4(s,1H)；7.45(dd,1H)；7.60(m,2H)；8.25(s,1H)；8.8(s,1H)；11.5(s,1H)MS-ESI:392[MH]+元素分析 實測值C 52.7 H 4.4 N 10.1C19H19N3O3FCl0.1H2O1HCl計算值C 53.1 H 4.7 N 9.8％.實施例22將偶氮二羧酸二乙酯(123μl,0.88mmol)分批加到已冷卻到0℃的4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(250mg,0.8mmol)[按實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]，三苯膦(228mg,0.96mmol)和2-乙氧基乙醇(71μl,0.8mmol)在二氯甲烷(20ml)的混合物內(nèi)。然后溫?zé)峄旌衔镏潦覝夭嚢?8小時。過濾除去所產(chǎn)生的沉淀物，并蒸除濾液中的溶劑。層析純化殘留物，使用二氯甲烷/甲醇(96/4)為洗脫劑。將所得精制油溶于丙酮，先用水(80μl)處理，然后再用乙醚合氯化氫處理，過濾收集所產(chǎn)生的顆粒狀固體，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-乙氧基乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(96mg,31％)。1H NMR譜(DMSOd6)1.15(t,3H)；3.50(q,2H)；3.8(t,2H)；4.00(s,3H)；4.30(t,2H)；7.35(s,1H)；7.40(dd,1H)；7.60(dd,1H)；7.65(dd,1H)；8.25(s,1H)；8.8(s,1H)；11.53(s,1H)MS-ESI 392[MH]+元素分析 實測值C 53.2 H 4.6 N 10.1C19H19N3O3FCl 1HCl計算值C 53.28 H 4.71N 9.81％實施例23在4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(乙氧羰基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(150mg,0.3mmol)的THF(1ml)溶液內(nèi)加入硼氫化鋰(150μl 2M THF溶液，0.15mmol),攪拌混合物1.5小時。用氯化銨水溶液驟冷反應(yīng)混合物，再用乙酸乙酯提取。合并提取液，水洗，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)濃縮。加入己烷，冷卻混合物，隨后過濾收集沉淀固體，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(2-羥基乙氧基)-6-甲氧基喹唑啉(30mg,23％)。1H NMR譜(DMSOd6)3.82(t,2H)；3.98(S,3H)；4.18(t,2H)；4.92(t,1H)；7.20(dd,1H)；7.54-7.63(m,2H)；7.72(s,1H)；7.92(s,1H)；8.60(s,1H).MS-ESI 364[MH]+.
起始物質(zhì)制備如下將4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(3.0g,9mmol)[如實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]，溴乙酸乙酯(1.11ml,10mmol)和碳酸鉀(2.84g,20.6mmol)在NMP(60ml)中的混合物于90℃加熱3小時。冷卻混合物，加水稀釋并用乙酸乙酯提取。水洗合并提取液，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)濃縮。加入己烷，冷卻混合物，然后過濾收集沉淀固體，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(乙氧羰基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(1.75g,48％)。
1H NMR譜(DMSOd6)1.20(t,3H)；3.95(s,3H)；4.18(q,2H)；4.98(s,2H)；7.08(s,1H)；7.30(dd,1H)；7.48-7.58(m,2H)；7.82(s,1H)；8.34(s,1H)；9.57(s,1H).實施例24在4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(146mg,0.4mmol),三苯膦(314mg,1.2mmol)和1-(2-羥乙基)-4-甲基哌嗪(86mg,0.6mmol)[按實施例17中的起始物質(zhì)部分所述制備]在二氯甲烷(5ml)的懸浮液內(nèi)逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(209mg,1.2mmol)。室溫下攪拌混合物1小時，然后將混合物通過柱色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇(首先90/10，繼之80/20)為洗脫劑。純化產(chǎn)物用乙醚研制，過濾收集并真空干燥。將此固體溶于二氯甲烷，加入3M乙醚合氯化氫(0.5ml)。蒸除揮發(fā)性成分，殘留油用乙醚研制。過濾收集固體，用乙醚洗滌，真空干燥后，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(100mg,41％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD；60℃)2.89(s,3H)；3.55-3.7(m,8H)；3.74(t,2H)；4.04(s,3H)；4.68(t,2H)；7.49(s,1H)；7.55(m,1H)；7.56(s,1H)；7.75(d,1H)；8.29(s,1H)；8.84(s,1H)ES-EI:490[M]+元素分析 實測值C 43.9 H 5.1 N 11.0C22H25N5O2BrF1H2O2.7HCl0.2乙醚計算值C 44.0 H 5.1N 11.3％起始物質(zhì)制備如下將7-芐氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(8.35g,24.8mmol)[按實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]和4-溴-2-氟苯胺(5.65g,29.7mmol)的異丙醇(200ml)溶液加熱回流4小時。過濾收集所形成的沉淀固體物，用異丙醇和乙醚依次洗滌，真空干燥后得到7-芐氧基-4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(9.46g,78％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)4.0(s,3H)；5.37(s,2H)；7.35-7.5(m,4H)；7.52-7.62(m,4H)；7.8(d,1H)；8.14(9s,1H)；8.79(s,1H)ES-ESI:456[MH]+元素分析 實測值C 54.0 H 3.7 N 8.7C22H17O2N3BrF0.9HCl計算值C 54.2 H 3.7 N 8.6％.
將7-芐氧基-4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉鹽酸鹽(9.4g,19.1mmol)的TFA(90ml)溶液加熱回流50分鐘。冷卻混合物，然后傾入冰中。過濾收集所得沉淀物并溶于甲醇(70ml)。溶液用濃氨水溶液調(diào)節(jié)至pH9-10。蒸發(fā)濃縮混合物至初始體積的一半。過濾收集所得沉淀物，依次用水和乙醚洗滌，真空干燥后得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(5.66g,82％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)3.95(s,3H)；7.09(s,1H)；7.48(s,1H)；7.54(t,1H)；7.64(d,1H)；7.79(s,1H)；8.31(s,1H)ES-ESI:366[MH]+元素分析實測值C 49.5 H 3.1 N 11.3C15H11O2N3BrF計算值C 49.5 H 3.0 N 11.5％.實施例25在4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(146mg,0.4mmol)[按實施例24中起始物質(zhì)部分所述制備]，三苯膦(314mg,1.2mmol)和4-(2-羥乙基)嗎啉(79mg,0.6mmol)在二氯甲烷(5ml)中的懸浮液內(nèi)逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(209mg,1.2mmol)。室溫下攪拌混合物1小時，然后通過柱色譜純化，使用二氯甲烷/甲醇(首先95/5，繼之90/10)為洗脫劑，得到白色固體。將此固體溶于二氯甲烷/甲醇，加入2M乙醚合氯化氫(0.5ml)。蒸發(fā)濃縮混合物，然后過濾收集所得沉淀物，用乙醚洗滌，經(jīng)真空干燥后，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(155mg,70％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)3.3(t,2H)；3.6(d,2H)；3.75(m,2H)；3.8(m,2H)；4.0(m,2H)；4.03(s,3H)；4.7(t,2H)；7.5(s,1H)；7.55-7.65(m,2H)；7.8(d,1H)；8.26(s,1H)；8.9(s,1H)ES-EI:477[M]+元素分析實測值C 45.3 H 4.5 N 9.8C21H22N4O3BF 0.4H2O 2.0HCl計算值C 45.2 H 4.5N 10.0％實施例26將7-(4-氯丁氧基)-4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉(3.64g,8.87mmol)的嗎啉(70ml)溶液在110℃加熱2小時。冷卻混合物，并將其分配到乙酸乙酯和水之內(nèi)。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除揮發(fā)性成分。殘留物通過柱色譜純化，使用二氯甲烷和甲醇(92/8)混合液為洗脫劑。將此精制固體產(chǎn)物溶于二氯甲烷，加入3M乙醚合氯化氫。蒸除揮發(fā)性成分，殘留物用乙醚研制。過濾收集固體，用乙醚洗滌，然后在60℃下真空干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(4-嗎啉代丁氧基)喹唑啉鹽酸鹽(3.8g,78％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)1.85-2.0(m,4H)；3.09(t,2H)；3.2-3.3(t,2H)；3.46(d,2H)；3.74(t,2H)；4.0(d,2H)；4.03(s,3H)；4.27(s,2H)；7.42(s,1H)；7.46(d,1H)；7.63(t,1H)；7.68(d,1H)；8.21(s,1H)；8.88(s,1H)ES-ESI:461[MH]+元素分析 實測值C 50.8 H 5.3 N 10.0C23H26N4O3ClF1.95HCl0.6H2O計算值C 51.0 H 5.5N 10.2％0.08乙醚起始物質(zhì)制備如下將4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(3.6g,11.3mmol)[按實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]，1-溴-4-氯丁烷(1.95ml,16.9mmol)和碳酸鉀(4.66g,33.8mmol)在DMF(75ml)中的混合物在40℃加熱4小時。冷卻混合物，將其分配到二氯甲烷和水之內(nèi)。水層用2M鹽酸調(diào)節(jié)至pH7。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除揮發(fā)性成分。殘留物通過柱色譜純化，采用二氯甲烷/乙酸乙酯(1/1)洗脫。將此精制固體產(chǎn)物用戊烷研制，過濾收集并真空干燥，得到7-(4-氯丁氧基)-4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉(3.64g,79％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD)1.9-2.1(m,4H)；3.76(t,2H)；4.01(s,3H)；4.28(t,2H)；7.33(s,1H)；7.46(d,1H)；7.63(t,1H)；7.70(d,1H)；8.08(s,1H)；8.88(s,1H).實施例27將4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-氯丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉(150mg,0.38mmol)在1-甲基哌嗪(2ml)中的懸浮液于100℃加熱3小時。冷卻混合物，將其分配到碳酸鈉水溶液(pH11.5)和乙酸乙酯之內(nèi)。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除揮發(fā)性成分。將殘留物溶于二氯甲烷，加入乙醚。過濾收集所得沉淀物，用乙醚洗滌并干燥。將此固體溶于二氯甲烷，加入2.2M乙醚合氯化氫(1ml)。濃縮至初始體積一半之后，過濾收集所形成的沉淀物，用乙醚洗滌并真空干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)喹唑啉鹽酸鹽(158mg,75％)。1H NMR譜(DMSOd6；CF3COOD；60℃)2.35(m,2H)；2.95(s,3H)；3.43(t,2H)；3.52-3.7(m,8H)；4.03(s,3H)；4.34(t,2H)；7.41(s,1H)；7.45(d,1H)；7.6-7.7(m,2H)；8.11(s,1H)；8.8(s,1H)MS-EI:460[MH]+元素分析 實測值C 48.6 H 5.6 N 11.9C23H27N5O2FCl0.7H2O2.75HCl計算值C 48.2 H 5.5 N 12.2％.
起始物質(zhì)制備如下將4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-羥基-6-甲氧基喹唑啉(957mg,3mmol)[按實施例4中起始物質(zhì)部分所述制備]，1-溴-3-氯丙烷(2.36mg,15mmol)和碳酸鉀(2.1g,15mmol)在DMF(20ml)中的混合物于40℃加熱1.5小時。冷卻混合物，加水稀釋并用乙酸乙酯提取(3×50ml)。合并有機(jī)提取液，用水及鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸除揮發(fā)性成分。殘留物用己烷/乙酸乙酯研制，過濾收集并真空干燥，得到4-(4-氯-2-氟苯胺基)-7-(3-氯丙氧基)-6-甲氧基喹唑啉(650mg,55％)。1H NMR譜(DMSOd6)2.26(m,2H)；3.82(t,2H)；3.95(s,3H)；4.26(t,2H)；7.20(s,1H)；7.32(dd,1H)；7.48-7.60(m,2H)；7.80(s,1H)；8.35(s,1H)；9.52(s,1H)MS-EI:396[MH]+.實施例28下面說明有代表性的包含式Ⅰ化合物或其可藥用鹽(下文中的化合物Ⅹ)的藥物制劑形式，它們用于人類疾病的治療或預(yù)防。(a)片劑Ⅰ mg/片化合物Ⅹ……………………………100乳糖(歐洲藥典)……………………182.75微晶纖維素鈉………………………12.0玉米淀粉糊(5％w/v糊)……………2.25硬脂酸鎂……………………………3.0(b)片劑Ⅱ mg/片化合物Ⅹ……………………………50乳糖(歐洲藥典)……………………223.75微晶纖維素鈉………………………6.0玉米淀粉……………………………15.0聚乙烯吡咯烷酮(5％w/v糊)………2.25硬脂酸鎂……………………………3.0(c)片劑Ⅲ mg/片化合物Ⅹ……………………………1.0乳糖(歐洲藥典)……………………93.25微晶纖維素鈉………………………4.0玉米淀粉糊(5％w/v糊)……………0.75硬脂酸鎂……………………………1.0(d)膠囊劑mg/膠囊化合物Ⅹ……………………………10乳糖(歐洲藥典)……………………488.5硬脂酸鎂……………………………1.5(e)注射劑Ⅰ (50mg/ml)化合物Ⅹ……………………………5.0％w/v1N氫氧化鈉溶液……………………15.0％v/v0.1N鹽酸(調(diào)節(jié)至pH 7.6)聚乙二醇400………………………4.5％w/v加注射水至100％(f)注射劑Ⅱ(10mg/ml)化合物Ⅹ……………………………1.0％w/v磷酸鈉BP……………………………3.6％w/v0.1N氫氧化鈉溶液…………………15.0％v/v注射用水加至100％(g)注射劑Ⅲ (1mg/ml,緩沖至pH6)化合物Ⅹ……………………………0.1％w/v磷酸鈉BP……………………………2.26％w/v檸檬酸………………………………0.38％w/v聚乙二醇400………………………3.5％w/v注射用水加至100％附注上述制劑可采用制藥領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法制得。片劑(a)-(c)可采用常規(guī)方法腸溶包衣，例如得到乙酸鄰苯二甲酸纖維素包衣。
權(quán)利要求
1．式Ⅰ喹唑啉衍生物及其鹽
(其中R1代表氫或甲氧基；R2代表甲氧基，乙氧基，2-甲氧基乙氧基，3-甲氧基丙氧基，2-乙氧基乙氧基，三氟甲氧基，2,2,2-三氟乙氧基，2-羥基乙氧基，3-羥基丙氧基，2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基，3-(N,N-二甲氨基)丙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基，4-嗎啉代丁氧基，2-哌啶子基乙氧基，3-哌啶子基丙氧基，4-哌啶子基丁氧基，2-(哌嗪-1-基)乙氧基，3-(哌嗪-1-基)丙氧基，4-(哌嗪-1-基)丁氧基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基，3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基或4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁氧基；載有(R3)2的苯基選自2-氟-5-羥基苯基，4-溴-2-氟苯基，2,4-二氟苯基，4-氯-2-氟苯基，2-氟-4-甲基苯基，2-氟-4-甲氧基苯基，4-溴-3-羥基苯基，4-氟-3-羥基苯基，4-氯-3-羥基苯基，3-羥基-4-甲基苯基，3-羥基-4-甲氧基苯基和4-氰基-2-氟苯基)。
2．權(quán)利要求1的喹唑啉衍生物，其中R1為甲氧基。
3．權(quán)利要求1或2的喹唑啉衍生物，其中載有(R3)2的苯基為4-氯-2-氟苯基或4-溴-2-氟苯基。
4．前述權(quán)利要求中任一項的喹唑啉衍生物，其中R2為甲氧基，乙氧基，2-甲氧基乙氧基，3-甲氧基丙氧基，三氟甲氧基，2,2,2-三氟乙氧基，2-羥基乙氧基，3-羥基丙氧基，2-(N,N-二甲基氨基)乙氧基，3-(N,N-二甲基氨基)丙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基，2-哌啶子基乙氧基，3-哌啶子基丙氧基，2-(哌嗪-1-基)乙氧基，3-(哌嗪-1-基)丙氧基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基，和3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基。
5．權(quán)利要求4的喹唑啉衍生物，其中R2為2-甲氧基乙氧基，2-嗎啉代乙氧基，3-嗎啉代丙氧基或2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基。
6．權(quán)利要求5的喹唑啉衍生物，其中R2為2-甲氧基乙氧基或3-嗎啉代丙氧基。
7．權(quán)利要求1的喹唑啉衍生物，該喹唑啉衍生物選自4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉，4-(4-氯-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉和它們的鹽。
8．權(quán)利要求1的喹唑啉衍生物，該喹唑啉衍生物選自4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基)喹唑啉，4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(2-嗎啉代乙氧基)喹唑啉和它們的鹽。
9．前述權(quán)利要求中任一項的喹唑啉衍生物，該喹唑啉衍生物為可藥用鹽形式。
10．制備式Ⅰ喹唑啉衍生物或其鹽(如權(quán)利要求1中所述的)的方法，該方法包括(a)使式Ⅲ化合物
(其中R1和R2的定義同權(quán)利要求1，且L1為可置換基團(tuán))，與式Ⅳ化合物反應(yīng)
(其中R3的定義同權(quán)利要求1)，從而得到式Ⅰ化合物及其鹽；(b)為制備其中式Ⅱ基團(tuán)
(其中R3的定義同權(quán)利要求1)代表載有羥基的苯基的式Ⅰ化合物及其鹽，將式Ⅴ化合物脫保護(hù)基
(其中R1，R2和R3的定義同權(quán)利要求1，且P代表酚羥基保護(hù)基)；(c)使式Ⅵ化合物
(其中R1和R3的定義同權(quán)利要求1)與式Ⅶ化合物反應(yīng)R4-L1(Ⅶ)(其中L1的定義同本文，R4為甲基，乙基，2-甲氧基乙基，3-甲氧基丙基，2-乙氧基乙基，三氟甲基，2,2,2-三氟乙基，2-羥基乙基，3-羥基丙基，2-(N,N-二甲基氨基)乙基，3-(N,N-二甲基氨基)丙基，2-嗎啉代乙基，3-嗎啉代丙基，4-嗎啉代丁基，2-哌啶子基乙基，3-哌啶子基丙基，4-哌啶子基丁基，2-(哌嗪-1-基)乙基，3-(哌嗪-1-基)丙基，4-(哌嗪-1-基)丁基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基，3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基或4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁基)；(d)使式Ⅷ化合物
與式Ⅸ化合物反應(yīng)R2-H(Ⅸ)(其中L1的定義同本文，R1,R2和R3的定義同權(quán)利要求1)；(e)為制備其中R2為R5C1-4烷氧基的式Ⅰ化合物及其鹽(其中R5選自甲氧基，乙氧基，羥基，N,N-二甲基氨基，嗎啉代，哌啶子基，哌嗪-1-基或4-甲基哌嗪-1-基)，使式Ⅹ化合物
(其中L1的定義同本文，R1和R3的定義同權(quán)利要求1，且R6為C1-4烷氧基)與式Ⅺ化合物反應(yīng)R5-H(Ⅺ)(其中R5的定義同本文)；并且當(dāng)需要式Ⅰ喹唑啉衍生物的鹽時，使所得化合物與酸或堿反應(yīng)，從而得到需要的鹽。
11．一種藥物組合物，該組合物包括用作活性成分的權(quán)利要求1-9中任一項所述的式Ⅰ喹唑啉衍生物或其可藥用鹽以及可藥用賦形劑或載體。
12．在需要治療的溫血動物體內(nèi)產(chǎn)生抗血管生成和/或血管通透性降低作用的方法，該方法包括對所述動物施用有效量的權(quán)利要求1-9中任一項的式Ⅰ化合物或其可藥用鹽。
13．用作藥物的權(quán)利要求1-9中任一項所述的喹唑啉衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)喹唑啉衍生物及其鹽(其中R
文檔編號A61P43/00GK1212684SQ9719280
公開日1999年3月31日 申請日期1997年2月28日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月5日
發(fā)明者A·P·湯馬斯, L·F·A·亨內(nèi)奎恩, C·約翰斯通 申請人:曾尼卡有限公司, 曾尼卡制藥有限公司