專利名稱：抑制自身免疫疾病的方法
自身免疫疾病與細胞和激素介導的免疫性的異常調(diào)節(jié)有關(guān)，并且常常與針對自身抗原的不正常的或過高的T細胞、B細胞和巨噬細胞效應(yīng)器功能相關(guān)。據(jù)信，這些針對自身抗原的細胞成分的激活與由于與自身耐受性相關(guān)的反饋機制的中斷有關(guān)。自身免疫疾病涉及到臨床醫(yī)學的全部范圍，并且彼此有很多相似之處，盡管涉及的靶器官各不相同。這些類似之處包括，育齡婦女患自身免疫疾病的比率比男子高，例如，患淋巴瘤性甲狀腺腫的婦女與男子的比率是50∶1，患全身性紅斑狼瘡的比率是10∶1，患重癥肌無力的比率是2∶1(Ahmed等，Am.J.Path.,121:531(1985))。此外，這類疾病都具有如下特點慢性、不明原因的臨床緩解和“發(fā)作”趨勢、并且可以累及其他器官。雖然基本上在所有的自身免疫疾病中對自身抗體、Ⅱ類抗原的不適當表達、巨噬細胞激活和T細胞對靶器官的浸潤等現(xiàn)象均已有敘述，但對于導致此種疾病激活的觸發(fā)機制，或此種疾病的發(fā)展過程都不甚了解。因此，對這類疾病的治療都很不令人滿意，治療措施包括使用金鹽、氨甲喋呤、抗瘧藥、糖皮質(zhì)激素類(甲強龍)，以及其他類型的免疫抑制劑和血漿取出法及設(shè)法誘導自身耐受性。在過去的十年中，對自身免疫疾病的治療沒有取得明顯的進展，治療主要是應(yīng)用非甾族和甾族抗炎劑，以治療這類疾病的癥狀。顯然，盡管在治療中抑制抗宿主的特異性免疫應(yīng)答是必要的，但是，由于所產(chǎn)生副作用以及受免疫抑制的患者具有易患其他感染性和非感染性疾病的更大的危險，因此使用糖皮質(zhì)激素類藥物的全身免疫抑制法具有更多的不利條件。
雌激素看來與自身免疫疾病有關(guān)，雖然它在自身免疫疾病的發(fā)展或消退過程中的作用是復(fù)雜的，并且還取決于自身免疫疾病的性質(zhì)。例如，雌激素對類風濕性關(guān)節(jié)炎顯示出具有改善作用，而對全身性紅斑狼瘡具有使之加劇的作用(Chander和Spector；Ann.Rheum.Dis.50:139)。已經(jīng)證明，雌激素對T細胞功能具有抑制作用，而對B細胞具有免疫刺激作用。因此，類雌激素化合物通過抑制T細胞功能，對與T細胞激活有關(guān)的疾病有治療作用，包括類風濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、急性熱病性多神經(jīng)炎和淋巴瘤性甲狀腺腫等(Holmdahl,J.Autoimmun.2:651(1989))。
雌激素除了對T細胞具有抑制作用外，還可能具有另外一些保護作用。據(jù)Marui等人(J.Clin.Invest.92:1866(1993))最近報導，抗氧化劑可以抑制內(nèi)皮細胞表達VCAM-1。VCAM-1是VLA-4的配位體，即T細胞和巨噬細胞整合素(integrin)，這種整合素與這些細胞從脈管系統(tǒng)出來并進入血管周的間隙和靶器官的轉(zhuǎn)運過程有關(guān)。因為雌激素是一種抗氧化劑，所以推測，雌激素和有關(guān)的類似物將能抑制VLA-4依賴性細胞轉(zhuǎn)運過程，并因此阻礙與自身免疫介導的疾病有關(guān)的免疫級聯(lián)反應(yīng)(cascade)。
雌激素在其他一些自身免疫疾病(包括全身性紅斑狼瘡和腎小球性腎炎等)、與免疫綜合征有關(guān)的疾病中也起決定性作用。雖然對導致雌激素介導的疾病發(fā)展的機制尚不了解，但是已有報導，根據(jù)用雌激素處理的嚙齒類動物的實驗結(jié)果表明，雌激素具有提高Fc介導的吞噬作用的能力(Friedman等人，J.Clin,Invest.75:162(1985))，以及具有提高巨噬細胞表達Ⅱ類抗原和產(chǎn)生IL-1的能力(Flynn,LifeSci.,38:2455(1986))。這些巨噬細胞介導的效應(yīng)器功能的提高，認為有可能導致與自身毀滅有關(guān)的免疫級聯(lián)反應(yīng)。
本發(fā)明提供了抑制自身免疫疾病的方法，該方法包括給需要治療的患者施用有效量的式Ⅰ化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物， 其中R1和R3各自獨立地為氫、-CH3， (C1-C6烷基)或 ，這里Ar為任意取代的苯基；R2系選自吡咯烷子基(pyrrolidino)、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)經(jīng)選擇的2-苯基-3-芳?；讲⑧绶灶惢衔?各種苯并噻吩)，即式Ⅰ化合物，可用于抑制自身免疫疾病及其癥狀。據(jù)信公開的苯并噻吩類化合物通過抑制T細胞功能、抑制Ⅱ類抗原表達、從而抑制巨噬細胞介導的抗原先露和/或抑制細胞因子(cytokines)(包括IL-1、TNF和其他炎性間介器)釋放，而對自身免疫疾病是有活性的。本發(fā)明提供的治療和預(yù)防性治療方法通過給需要該治療的患者施用抑制自身免疫疾病或其癥狀有效劑量的式Ⅰ化合物或其藥學上適用的鹽或溶劑化物來實施。
術(shù)語“抑制”包括其通?？山邮艿囊饬x，即包括阻止、防止、限制、減緩、停止或逆轉(zhuǎn)所產(chǎn)生癥狀的發(fā)展、嚴重性。因此，本發(fā)明方法包括醫(yī)學治療和/或(如果需要)預(yù)防性給藥。
自身免疫疾病與細胞和激素介導的免疫性的異常調(diào)節(jié)有關(guān)，并且常常與針對自身抗原的不正常的或過高的T細胞、B細胞或巨噬細胞效應(yīng)器功能相關(guān)。自身免疫疾病的實例包括全身性紅斑狼瘡、淋巴瘤性甲狀腺腫、重癥肌無力、類風濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、急性熱病性多神經(jīng)炎和腎小球性腎炎。
雷洛昔芬是本發(fā)明優(yōu)選的化合物，它是式Ⅰ化合物的鹽酸鹽，其中R1和R3為氫，R2為1-哌啶基。
一般來講，可以將至少一個本發(fā)明化合物與常用的賦形劑、稀釋劑或載體進行配制并且可壓制成片劑，或者也可以配制成方便口服給藥的酏劑或溶液劑，或通過肌內(nèi)或靜脈內(nèi)途徑給藥。本發(fā)明化合物還可以經(jīng)皮給藥，并且可以配制成緩釋劑型等。
可以按照已有的方法制備用于本發(fā)明方法中的化合物，如按美國專利4，133，814、4，418，068和4，380，635所述方法進行制備，所有這些文獻均收編在本發(fā)明中作為參考。一般來講，該方法從帶有6-羥基和2-(4-羥基苯基)的苯并[b]噻吩開始。起始化合物被保護、?；兔摫Ｗo，生成式Ⅰ化合物。以上討論的美國專利中提供了制備上述化合物的實施例?！叭我馊〈谋交卑ū交陀肅1～C6烷基、C1～C4烷氧基、羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基一次或二次取代的苯基。
用于本發(fā)明方法中的化合物可以與各種有機和無機酸、堿生成藥學上適用的酸和堿加成鹽，藥學上適用的酸和堿加成鹽包括通常用于藥物化學上的生理上適用的鹽。所述鹽也是本發(fā)明的一部分。用于生成上述鹽的典型的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。也可以應(yīng)用由有機酸生成的鹽，可以應(yīng)用的有機酸有例如脂肪族一和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸，以及芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸。因此所述藥學上適用的鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、羥基乙酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯代苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
可藥用的酸加成鹽一般可通過使式Ⅰ化合物與等摩爾或過量的酸反應(yīng)制得。反應(yīng)物通常于互溶劑如乙醚或苯中進行化合。所述鹽一般在約1小時～10天內(nèi)從溶液中析出，并且可以經(jīng)過濾分離，或者可按常規(guī)方法除去溶劑。
通常用于生成鹽的堿包括氫氧化銨、堿金屬和堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽，以及脂肪族伯、仲和叔胺，脂肪族二胺。特別適用于制備加成鹽的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、乙二胺和環(huán)己胺。
與衍生它們的化合物相比較，藥學上適用的鹽一般具有提高溶解度的性質(zhì)，因此它們通常更適用于配制成液體或乳劑。
藥物制劑可以按本領(lǐng)域已知的方法制備。例如，可將所述化合物與常用的賦形劑、稀釋劑或載體一起配制，并可配制成片劑、膠囊劑、懸浮液劑、粉劑等。適用于上述制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的實例包括如下填充劑和增量劑如淀粉、糖、甘露糖醇以及硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其他的纖維素衍生物，藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；濕潤劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；阻滯溶解劑如石蠟；吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；以及潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂以及固體聚乙二醇類。
本發(fā)明化合物也可以配制成方便口服給藥的酏劑或溶液劑，或者配制成適于非經(jīng)胃腸道(如經(jīng)肌內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)途徑)給藥的溶液劑。另外，本發(fā)明化合物還非常適用于配制成緩釋劑型等。緩釋制劑可以這樣構(gòu)成，以使它們僅僅或最好在腸道的特定部位并可能在一定時間內(nèi)釋放活性成分。包衣、包袋和保護基質(zhì)可以由例如聚合物質(zhì)或蠟制得。
為抑制自身免疫疾病或其癥狀所需應(yīng)用的本發(fā)明式Ⅰ化合物的具體劑量將取決于病癥的嚴重程度、給藥途徑以及有關(guān)的因素，這要由主治醫(yī)師決定。一般來講，每天可接受的有效劑量為約0.1～約1000mg/天，更一般的是約50～約200mg/天。該劑量每天將對需治療的患者分一次至約三次施用，或按需要更經(jīng)常地施用，以便有效地治療或預(yù)防所述疾病或癥狀。
以酸加成鹽的形式施用式Ⅰ化合物通常是優(yōu)選的，正如通常施用帶有堿基(如哌啶子基環(huán))的藥物所常用的那樣。老年人(如絕經(jīng)后的婦女)施用本發(fā)明化合物是有益的。為此目的，可利用下述口服劑型。
制劑在下述制劑中“活性成分”是指式Ⅰ化合物。
制劑1明膠膠囊劑硬明膠膠囊劑按下面方法制備成分量(mg/膠囊)活性成分0.1-1000淀粉，NF0-650可流動的淀粉粉末0-650聚硅氧烷流體(350厘沲)0-15將上述成分混合，通過美國45號篩并將其裝入硬明膠膠囊。
已經(jīng)制備的雷洛昔芬的具體膠囊劑的實例包括下述制劑2雷洛昔芬膠囊劑成分量(mg/膠囊)
雷洛昔芬1淀粉，NF112可流動的淀粉粉末225.3聚硅氧烷流體(350厘沲)1.7制劑3雷洛昔芬膠囊劑成分量(mg/膠囊)雷洛昔芬5淀粉，NF108可流動的淀粉粉末225.3聚硅氧烷流體(350厘沲)1.7制劑4雷洛昔芬膠囊劑成分量(mg/膠囊)雷洛昔芬10淀粉，NF103可流動的淀粉粉末225.3聚硅氧烷流體(350厘沲)1.7
制劑5雷洛昔芬膠囊劑成分量(mg/膠囊)雷洛昔芬50淀粉，NF150可流動的淀粉粉末397聚硅氧烷流體(350厘沲)3.0按照所提供的合理的改變，還可以將上述具體的制劑進行變化。
用下述成分制備片劑制劑6片劑成分量(mg/片)活性成分0.1～1000微晶纖維素0～650煅制二氧化硅0～650硬脂酸0～15將上述成分混合并壓制成片劑。
另外，每片含0.1～1000mg活性成分的片劑可以按下法制備制劑7片劑成分量(mg/片)活性成分0.1～1000淀粉45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(為10%的水溶液)4羧甲基纖維素鈉4.5硬脂酸鎂0.5滑石1將活性成分、淀粉和纖維素通過美國45號篩，并充分地混合。使聚乙烯吡咯烷酮溶液與得到的粉末混合，然后再通過美國14號篩。所得到的顆粒于50～60℃干燥并通過美國18號篩。將預(yù)先通過美國60號篩的羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂和滑石加到上述顆粒中，在混合以后將其在壓片機上壓制成片劑。
每5ml劑量各含0.1～1000mg活性成分的各個懸浮液劑可按下法制備制劑8懸浮液劑成分量(mg/5ml)活性成分0.1～1000mg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿1.25mg
苯甲酸溶液0.10ml調(diào)味劑適量著色劑適量純化水加至5ml將活性成分通過美國45號篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合，得到調(diào)勻的糊狀物。用一些水將苯甲酸溶液、調(diào)味劑和著色劑稀釋，并在攪拌下加入。再加入足量的水至所需體積。
測定測定1測定按如下文獻中所提出的方法進行(Holmdahl等人，Clin.EXP.Immunol.,70,373-378(1987)，在本文中引入該文獻作為參考)。用4～30只鼠齡大約8-10周的雌性小鼠，先作卵巢切除手術(shù)。在對實驗組施行閹割手術(shù)后的3周內(nèi)開始給實驗組施用本發(fā)明化合物。給予式Ⅰ化合物一周后，小鼠以大鼠Ⅱ型膠原蛋白免疫。采用如下文獻中所提出的方法，根據(jù)關(guān)節(jié)炎的臨床嚴重程度，對小鼠進行分級(Holmdahl等人，ArthritisRheum.,29,106(1986)，在此引入該文獻作為參考)。采取血清，并測定抗Ⅱ型膠原蛋白反應(yīng)性抗體。實驗最后，取小鼠的脾細胞，用于測定T細胞活性。
所述活性以常規(guī)的ELISA測定法所測定的抗Ⅱ型膠原蛋白抗體滴度的降低來表明。T細胞對Ⅱ型膠原蛋白反應(yīng)性的降低，可以通過定量測定以胸腺嘧啶脫氧核苷攝取為指示的DNA合成來評價，這種對Ⅱ型膠原蛋白的反應(yīng)性是通過提供抗原的細胞給予脾T細胞的。最后，所述疾病的臨床嚴重程度可以通過每天檢查小鼠的1個或多個肢體的紅斑和腫脹等初期癥狀來評估。臨床評定和組織學檢查相互有關(guān)系。
測定2選用4～30只年輕成熟的雌性Sprague-Dawley大鼠，喂給動物飼料，水可以自由取得。實驗組動物給予式Ⅰ化合物，所有大鼠都接受鼠索(ratcord)處理，方法通常按如下文獻所述(Arnason等人，Arch.Neurol.,21,103-108(1969)，在此引入該文獻作為參考)。根據(jù)實驗性過敏性腦脊髓炎(EAE)的癥狀，對大鼠進行評級。在給予式Ⅰ化合物開始后的3～7周時間內(nèi)，處死大鼠，取出脊髓進行檢測。
所述活性以化合物抑制EAE的能力來表明。
測定3選用5～50只小鼠(MRL/1pr和NZB)。抗-DNA抗體活性降低(可通過ELISA法定量測定)，以及存活時間的變化和對腎臟的組織學檢查，均作為評價參數(shù)。對小鼠給予本發(fā)明化合物，用上述參數(shù)對疾病的發(fā)展情況進行評價。
測定4選用5～50名婦女作臨床研究。這些婦女均為絕經(jīng)后的婦女，即在研究開始前已停經(jīng)6到12個月，并都患有一種自身免疫疾病且有癥狀表現(xiàn)，除此之外的一般健康狀況良好。因為這類疾病既有特異性反應(yīng)，也有主觀性特點，所以研究中設(shè)立一個安慰劑對照組，也就是把受試婦女分為二組，一組給予式Ⅰ化合物作為活性藥劑，另一組給予安慰劑。實驗組婦女每天經(jīng)口服途徑給予50-200mg藥物。對其如此持續(xù)給藥治療3-12個月。對二組婦女發(fā)病癥狀的嚴重程度和次數(shù)始終進行精確記錄。研究結(jié)束后，對這些結(jié)果進行比較。比較每組各成員之間的結(jié)果，并將每個病人的結(jié)果與每個病人在試驗研究開始前報告的癥狀進行比較。
通過在上述至少一個試驗中的正性效果，表明式Ⅰ化合物的效用。
權(quán)利要求
1.適用于抑制自身免疫疾病的藥物組合物，該組合物包含下述式Ⅰ化合物或其藥學上適用的鹽或溶劑化物作為活性成分， 其中R1和R3各自獨立地為氫、-CH3， (C1-C6烷基)或 ，這里Ar為任意取代的苯基，R2系選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述化合物為其鹽酸鹽。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述組合物適用于預(yù)防性給藥。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述化合物為下式化合物或其鹽酸鹽，
全文摘要
抑制自身免疫疾病的方法，該方法包含給需要治療的患者施用有效量的下式化合物或其藥學上適用的鹽或溶劑化物，其中R
文檔編號A61K31/40GK1108102SQ9411973
公開日1995年9月13日 申請日期1994年12月19日 優(yōu)先權(quán)日1993年12月21日
發(fā)明者S·H·朱克曼 申請人:伊萊利利公司