專利名稱：抑制男性不育癥的方法
在美國估計(jì)五對夫婦中即有一對具有某種程度的不育癥。不育癥的定義是在無保護(hù)性交一年內(nèi)異性配偶不能實(shí)現(xiàn)懷孕(CecilTextbookofMedicine,W.B.SaundersCompany,第19版，1339-1340頁，(1992))。主要的病因?qū)W因素包括排卵機(jī)能障礙、輸卵管機(jī)能異常、宮頸因素和男性精子等因素(TheMerckManualofDiagnosisandTherapy,MerckResearchLaboratories，第16版，1768-1770頁，(1992))。估計(jì)在生殖年齡的男性中有5-6%不能生育。男性不育癥的大多數(shù)原因是精子數(shù)異常或精液質(zhì)量低。
與男性生育力有關(guān)的主要問題起源于睪酮含量發(fā)生變化。尤其是，這種類固醇濃度的降低會導(dǎo)致不育癥和陽萎。文獻(xiàn)中已詳細(xì)報(bào)道了內(nèi)源性雌激素通過與雌激素受體相互反應(yīng)可作為睪酮產(chǎn)生的調(diào)節(jié)因子(Nozu,K.等，J.Biol.Chem.256,1915(1981)；Brinkman,A.等人，Endocrinology,110,1834(1982))。因此，隨著抑制睪酮產(chǎn)生的雌激素含量的增加，睪丸內(nèi)的雌激素在睪酮甾類產(chǎn)生中起著重要作用(Cigorraga,S.B.等人，J.Clin.Invest.65,699(1982)；Padron,R.S.J.,Clin.Endocrinol.Metab.50,1100(1980))。需要新的治療或預(yù)防男性不育癥的方法。
本發(fā)明提供了抑制男性不育癥的方法，該方法包括給需要該治療的人施用有效量的式Ⅰ化合物及其可藥用鹽和溶劑化物，
其中R1和R3獨(dú)立地為氫、-CH3， (C1-C6烷基)或 ，其中Ar是任意取代的苯基；R2選自吡咯烷子基(pyrrolidino)、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)所選的一組2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩類化合物(各種苯并噻吩)，即式Ⅰ化合物，可用于抑制男性不育癥。本發(fā)明提供的治療方法可進(jìn)行如下給需要治療的人施用抑制男性不育癥有效劑量的式Ⅰ化合物或其可藥用鹽或溶劑化物。術(shù)語抑制定義為包括其通?？山邮艿暮x，它包括對易患上述疾患的人預(yù)防性地治療、控制和/或治療已存在的疾患。就其本身而言，本發(fā)明方法包括醫(yī)療和/或(如果需要)預(yù)防性治療。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物雷洛昔芬是其中R1和R3為氫且R2為1-哌啶基的式Ⅰ化合物的鹽酸鹽，并且該化合物是核調(diào)節(jié)分子。雷洛昔芬已表明與雌激素受體結(jié)合，并且最初被認(rèn)為是這樣一種分子即其功能和藥理學(xué)是抗雌激素的功能和藥理學(xué)，因?yàn)樗钄啻萍に丶せ钭訉m組織和雌激素依賴型乳腺癌的能力。實(shí)際上，在某些細(xì)胞中雷洛昔芬的確阻斷了雌激素的作用；然而在其他各類細(xì)胞中，雷洛昔芬激活了與雌激素激活的基因相同的基因并顯示出同樣的藥理學(xué)(例如骨質(zhì)疏松、高脂血)。與通過雌激素-雌激素受體復(fù)合物活化和/或抑制基因相反，雷洛昔芬所顯示和不同于雌激素的獨(dú)特的特征目前被認(rèn)為是由于通過雷洛昔芬-雌激素受體復(fù)合物獨(dú)特地活化和/或抑制了各種基因功能。因此，盡管雷洛昔芬和雌激素利用和競爭同樣的受體，但是這兩者調(diào)節(jié)基因的藥理學(xué)結(jié)果是難以預(yù)見的并且是彼此不同的。據(jù)信，本發(fā)明所述化合物阻斷了雌激素對睪酮產(chǎn)生的抑制作用。
通?？梢詫⒈景l(fā)明化合物與普通的賦形劑、稀釋劑或載體一起配制，并壓成便于口服的片劑、或者配制成便于口服的酏劑或溶液劑；或者通過肌內(nèi)或靜脈途徑給藥。該化合物可以經(jīng)皮給藥，并且可以配制成緩釋劑型等劑型。
本發(fā)明方法中所使用的化合物可以按既定的方法(例如US 4，133，814、4，418，068和4，380，635中所詳述的方法，這些專利引入本文作為參考)制備。一般，該方法用具有6-羥基和2-(4-羥基苯基)基團(tuán)的苯并[b]噻吩開始。將起始化合物保護(hù)、?；⒚摫Ｗo(hù)，得到式Ⅰ化合物。在上述美國專利中提供了這些化合物的制備實(shí)例。任意取代的苯基包括苯基和由C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基一次或二次取代的苯基。
用于本發(fā)明方法的化合物可以與各種有機(jī)和無機(jī)酸和堿反應(yīng)生成藥學(xué)上適用的酸和堿加成鹽，藥學(xué)上適用的酸和堿加成鹽包括通常用于制藥化學(xué)中的生理上適用的鹽。所述的鹽也是本發(fā)明的一部分。生成所述鹽的常用無機(jī)酸包括氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。也可使用由有機(jī)酸得到的鹽，可以應(yīng)用的有機(jī)酸有例如脂肪族一和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸，芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸。因此所述藥學(xué)上適用的鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、羥基乙酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
藥學(xué)上適用的酸加成鹽通常由式Ⅰ化合物與等摩爾或過量的酸反應(yīng)制得。通常使反應(yīng)物于互溶劑如乙醚或苯中進(jìn)行化合。鹽通常約在約1小時(shí)至10天內(nèi)從溶液中析出，可經(jīng)過濾分離，或可按常規(guī)方法除去溶劑。
通常用于形成鹽的堿包括氫氧化銨、堿金屬和堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽，以及脂肪族伯、仲和叔胺，脂肪族二胺。在制備加成鹽中尤其適用的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、1，2-乙二胺和環(huán)己胺。
與衍生它們的化合物相比較，所述藥學(xué)上適用的鹽通常具有提高溶解度的性能，因此常常更適用于配制成液體劑或乳劑。
藥用制劑可以按本領(lǐng)域已知的方法制備。例如，可將該化合物與普通的賦形劑、稀釋劑或載體進(jìn)行配制，并可制成片劑、膠囊、懸浮液、粉劑等。適用于上述制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的實(shí)例包括如下填充劑和增量劑如淀粉、糖類、甘露糖醇和硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素和其他纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑如甘油；崩解劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；阻滯溶解劑如石蠟；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇、單硬脂酸甘油酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣和硬脂酸鎂，以及固體聚乙二醇類。
所述化合物也可以配制成便于口服給藥的酏劑或溶液劑，或適于非腸道給藥的溶液劑，例如經(jīng)肌內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)途徑給藥。此外，所述化合物也非常適合配制成緩釋劑型等劑型。該制劑也可這樣構(gòu)成，以使它們僅僅或最好在腸道的特定部位，可能在一定的時(shí)間內(nèi)釋放活性成分。包衣、包膜和保護(hù)基質(zhì)可以由例如聚合物質(zhì)或蠟制成。
根據(jù)本發(fā)明，抑制男性不育癥所需要的式Ⅰ化合物的具體劑量取決于疾病的嚴(yán)重程度、給藥途徑和有關(guān)因素，這些將由主治醫(yī)生確定。一般來講，每天可接受的和有效的劑量為約0.1～約1000mg/天，更通常為約50～約200mg/天。對需治療的患者給藥的上述劑量可為每天1次～約3次，或?yàn)榱擞行У刂委熕黾不夹枰?jīng)常地服用。
正如給藥帶有堿基(如哌啶子基環(huán))的藥物所習(xí)用的那樣，通常最好給藥酸加成鹽形式的式Ⅰ化合物。通過口服途徑給藥本發(fā)明化合物也是有利的。為此目的，以下口服劑型是適用的。
制劑在以下制劑中，“活性成分”是指式Ⅰ化合物。
制劑1明膠膠囊用下列成分制備硬明膠膠囊成分用量(mg/膠囊)活性成分0.1-1000淀粉，NF0-650可流動(dòng)的淀粉粉末0-650硅氧烷流體(350厘沲)0-15將各成分混合，通過美國45號篩，并裝填入硬明膠膠囊。
已制備的其中R2是哌啶子基的式Ⅰ化合物(雷洛昔芬)的具體膠囊制劑的實(shí)例包括如下所示那些制劑2雷洛昔芬膠囊成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬1淀粉，NF112可流動(dòng)的淀粉粉末225.3硅氧烷流體(350厘沲)1.7
制劑3雷洛昔芬膠囊成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬5淀粉，NF108可流動(dòng)的淀粉粉末225.3硅氧烷流體(350厘沲)1.7制劑4雷洛昔芬膠囊成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬10淀粉，NF103可流動(dòng)的淀粉粉末225.3硅氧烷流體(350厘沲)1.7制劑5雷洛昔芬膠囊成分用量(mg/膠囊)雷洛昔芬50淀粉，NF150
可流動(dòng)的淀粉粉末397硅氧烷流體(350厘沲)3.0可以對上述具體的制劑進(jìn)行合理的改變。
用下述成分制備片劑制劑6片劑成分用量(mg/片)活性成分0.1～1000微晶纖維素0～650煅制二氧化硅0～650硬脂酸0～15將上述成分混合，并壓成片劑。
另外，每片含0.1～1000mg活性成分的片劑按以下方法制備制劑7片劑成分用量(mg/片)活性成分0.1～1000淀粉45微晶纖維素35聚乙烯吡咯烷酮(為10%的水溶液)4
羧甲基纖維素鈉4.5硬脂酸鎂0.5滑石1將活性成分、淀粉和纖維素通過美國45號篩并充分地混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與得的粉末混合，然后通過美國14號篩。將制備的顆粒于50°～60℃干燥，并通過美國18號篩。然后將預(yù)先通過美國60號篩的羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂和滑石加入此顆粒中，混合后將顆粒在壓片機(jī)上壓片，得到片劑。
每5ml劑量各含0.1～1000mg藥物的各個(gè)懸浮液按下法制備制劑8懸浮液劑成分用量(mg/5ml)活性成分0.1～1000mg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿1.25mg苯甲酸溶液0.10ml調(diào)味劑適量著色劑適量純化水加至5ml將藥物通過美國45號篩，并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合制成調(diào)勻的糊狀物。苯甲酸溶液、調(diào)味劑和著色劑用一部分水稀釋，并在攪拌下加入糊狀物中。然后加入足量的水至產(chǎn)生所需體積。
測定法測定法Ⅰ在Cigorraga等人的J.ClinInvest,65,699-705(1980年3月)中描述了下列測定法，該文獻(xiàn)引入本文作為參考。
得到5-50只雄性大鼠(200～250g)。通過靜脈注射hCG或皮下注射GnRH實(shí)現(xiàn)促性腺激素引起的萊迪希細(xì)胞的脫敏作用。在對照組中并在皮下給藥LH釋放-激素前，在靜脈注射hCG的同時(shí)施用式Ⅰ化合物或單獨(dú)使用。在注射促性腺激素或GnRH后2或3天將動(dòng)物斷頭處死，通過膠原酶消化作用從正常的和處理過的動(dòng)物的睪丸制備間質(zhì)細(xì)胞。通過密度梯度離心法將細(xì)胞進(jìn)一步分級，得到含有90%以上萊迪希細(xì)胞的純化的細(xì)胞制劑(根據(jù)形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和代謝應(yīng)答判斷)。將純化的萊迪希細(xì)胞洗滌一次，并再懸浮于含0.1%牛血清白蛋白的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基與細(xì)胞的比例相當(dāng)于2ml/睪丸，得到約106個(gè)純化的萊迪希細(xì)胞/ml。
將萊迪希細(xì)胞與純化的hCG或雙丁酰環(huán)(c)AMP(Bt2cAMP)一起培養(yǎng)。當(dāng)要測定孕烯醇酮累積時(shí)，向細(xì)胞培養(yǎng)物中加入3β-羥基類固醇脫氫酶和17-羥化酶，然后加入刺激物；對照培養(yǎng)物進(jìn)行相似的處理。
在下列處理后還對以下各組大鼠進(jìn)行研究(a)對照組；(b)靜脈注射hCG組；(c)靜脈和肌內(nèi)注射hCG加式Ⅰ化合物組；(d)皮下注射hCG組。在注射后在所選時(shí)間殺死大鼠。使從斷頭處死的動(dòng)物收集的血樣凝結(jié)，并在進(jìn)行睪酮分析前將所述血清貯存于-70℃。取出睪丸并冷凍，直至進(jìn)行雌二醇17β、睪酮、孕酮和17α-羥基孕酮的分析。
類固醇和血清hCG的測定法將剝除被膜的睪丸在PBS/睪丸中打成勻漿，并在加入痕量H-類固醇以對分級過程中損失的量計(jì)數(shù)之后用乙酸乙酯萃取。測量睪酮，并且在分離類固醇之后測定睪丸提取物和血清的睪酮含量。用對11-半琥珀酸鹽白蛋白軛合物高度專一性的兔抗血清測量孕烯醇酮。用3-羧甲基肟衍生物的抗血清進(jìn)行17α-羥基孕酮的放射免疫分析。用對與牛血清白蛋白共軛的6-酮基雌二醇高度專一性的兔抗血清進(jìn)行17β-雌二醇測定。測量免疫反應(yīng)性血清hCG濃度。
測定分散的萊迪希細(xì)胞中LH受體放射碘化hCG示蹤物通過乳過氧化物酶方法制備并經(jīng)瓊脂糖-伴刀豆球蛋白A色譜法純化。在34℃將純化的萊迪希細(xì)胞(5×105個(gè))與5×105dpm125I-hCG(特異活性40μCi/μg)一起培養(yǎng)3小時(shí)，同時(shí)加入hCG以確保受體飽和。在未標(biāo)記的hCG存在下通過將細(xì)胞與標(biāo)記的激素一起培養(yǎng)來測定非特異性結(jié)合。計(jì)算所有結(jié)合能力，以重復(fù)估計(jì)飽和時(shí)特異性125I-hCG結(jié)合，同時(shí)校正示蹤物制劑的特異活性和最大結(jié)合能力。計(jì)算每一試驗(yàn)組的平均結(jié)合能力，并以占對照值的百分?jǐn)?shù)表示，或者以每細(xì)胞的受體位點(diǎn)數(shù)表示。
細(xì)胞LH受體和/或睪酮應(yīng)答的增加，或者防止hCG脫敏動(dòng)物的萊迪希細(xì)胞中最大睪酮應(yīng)答的降低說明了式Ⅰ化合物的活性。
測定法Ⅱ選擇5-50名男性進(jìn)行臨床研究。這些男性總的來說是健康的，但是患有不育癥。該研究設(shè)安慰劑對照組，即將這些男性分為兩組，其中一組接受本發(fā)明的活性藥劑，另一組接受安慰劑。在此項(xiàng)研究中對所有男性均測定其精子的質(zhì)量和數(shù)量的基準(zhǔn)值。試驗(yàn)組的男性每天口服接受50-200mg該活性藥劑。該治療對其持續(xù)3-12個(gè)月。記錄有關(guān)兩組基準(zhǔn)點(diǎn)的精確數(shù)據(jù)，并在研究結(jié)束時(shí)對其進(jìn)行比較。在每組各受試者之間進(jìn)行結(jié)果比較，并且還將每位患者的結(jié)果與研究開始前每位患者的基準(zhǔn)點(diǎn)進(jìn)行比較。
在至少一個(gè)上述測定法中所得到的本發(fā)明化合物的確定效果說明了其效用。
權(quán)利要求
1.適于抑制男性不育癥的藥物組合物，它包含式Ⅰ化合物或其可藥用鹽或溶劑化物作為活性成分， (Ⅰ)其中R1和R3獨(dú)立地為氫、-CH3， (C1-C6烷基)或 ，其中Ar是任意取代的苯基；R2選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述化合物是其鹽酸鹽。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述組合物適用于預(yù)防性給藥。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述化合物是下式化合物或其鹽酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了抑制男性不育癥的方法，該方法包括給需要該治療的人施用有效量的式I化合物及其可藥用鹽和溶劑化物，其中R
文檔編號A61K31/445GK1108101SQ9411973
公開日1995年9月13日 申請日期1994年12月19日 優(yōu)先權(quán)日1993年12月21日
發(fā)明者J·A·道奇 申請人:伊萊利利公司