專利名稱：：預(yù)防和治療疾病的方法及免疫調(diào)節(jié)核酸組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療或預(yù)防疾病的方法和組合物。所述方法包括免疫調(diào)節(jié)序列的給藥。本發(fā)明還涉及改進的免疫調(diào)節(jié)序列，用于預(yù)防或治療疾病，更特別的是治療和預(yù)防自身免疫性疾病或炎性疾病。本發(fā)明還涉及疾病的治療或預(yù)防，包括免疫調(diào)節(jié)序列的單獨給藥。本發(fā)明還涉及疾病的治療或預(yù)防，包括將免疫調(diào)節(jié)序列與編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸的組合給藥。例如，及疾病的治療或預(yù)防，包括將免疫調(diào)節(jié)序列與自身分子的組合給藥，所述自身分子如自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白。本發(fā)明還涉及疾病的治療或預(yù)防，包括將免疫調(diào)節(jié)序列與一個或多個另外的免疫調(diào)節(jié)治療劑的組合給.》歹及廳J丁杜zi、譯Y'/S了？矢？丙日3萬〉S"7fP多且S、^，戶斤述疾病與所述個體中的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)并與非生理學狀態(tài)有關(guān)。本發(fā)明還涉及用于在個體中預(yù)防疾病的方法和組合物，所述疾病與所述個體中的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)并與非生理學狀態(tài)有關(guān)。本發(fā)明還涉及包括免疫調(diào)節(jié)序列和多核苷酸的組合療法的給藥，所述多核苷酸編碼存在于非生理學狀態(tài)中與并與疾病相關(guān)的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽。本發(fā)明還涉及調(diào)節(jié)對一個或多個自身分子疾病相關(guān)。更特別地，本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防自身免疫性疾病的方法和組合物，所述自身免疫性疾病與存在于動物中的非生理性狀態(tài)的一個或多個自身分子相關(guān)，如多發(fā)性硬化(MS)、風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、胰島素依賴的糖尿病(IDDM)、自身免疫性葡萄膜炎(AU)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、重癥肌無力(MG)、斯耶格倫(氏)綜合征(Sjogren，ssyndrome)、尋常天皰瘡(PV)、硬皮病、惡性貧血、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和格雷夫斯病(Grave'sdisease)。本發(fā)明還特別涉及與存在于動物中的非生理性狀態(tài)的一個或多個自身分子相關(guān)的其他疾病，如骨關(guān)節(jié)炎、脊髓損傷、消化性潰瘍病、痛風、偏頭痛、血脂過多和冠狀動脈病。發(fā)明背景々^f^瘦^疾病自身免疫性疾病指由錯誤指向機體健康細胞和/或組織的適應(yīng)性免疫引起的疾病。自身免疫性疾病影響3%的美國人口和可能類似比例的工業(yè)4b世界人口(Jacobsonefa/"C7/w/mwwwo//mmtmopaf/zo/84,223-43,1997)。自身免疫性疾病的特征為異常地靶向自身分子的T和B淋巴細胞，由此造成體內(nèi)器官、組織或細胞類型(例如，胰腺、腦、曱狀腺或胃腸道)的損傷和/或機能失調(diào)，從而引起該疾病的臨床表現(xiàn)(Marrack"a/.,A^MW7,899-905,2001)，所述自身分子包括但不限于自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白和它們的衍生物。自身免疫性疾病包括影響特異組織的疾病和影響多組織的疾病。對某些疾病而言，這可能部分取決于自身免疫反應(yīng)是針對局限于特定組織的自身分子抗原還是針對廣泛分布于機體的自身分子抗原。組織特異性自身免疫的表征特征為選擇性耙向或作用于單個組織或單一細胞類型。然而，靶向普遍存在的自身分子抗原的某些自身免疫性疾病也能影響特異組織。例如，在多肌炎中，自身免疫反應(yīng)靶向廣泛存在的蛋白組氨?；?tRNA合成酶，然而主要涉及的臨床表現(xiàn)為肌肉的自身免疫性破壞。免疫系統(tǒng)采用高度復(fù)雜的機制用于產(chǎn)生反應(yīng)以保護哺乳動物抵抗多種外源病原體并同時阻止對一個或多個自身抗原的反應(yīng)。除了決定是否反應(yīng)(抗原特異性)之外，免疫系統(tǒng)還必須選擇適當?shù)男?yīng)功能以處理每種病原體(效應(yīng)特異性)。介導并調(diào)控這些效應(yīng)功能的關(guān)鍵細胞是CD4+T細胞。此外，看起來，對來自CD4+T細胞的特異細胞因子的精細加工是T細胞介導其功能的主要機制之一。因此，表征CD4+T細胞產(chǎn)生的細胞因子類型及它們的分泌是如何控制的對理解免疫反應(yīng)是如何被調(diào)節(jié)的極為重要。10多年前初次發(fā)表了對長期小鼠CD4+T細胞克隆產(chǎn)生細胞因子的表征(Mosmann"a/.，j:/附mw"o/.136:2348-2357，1986)。在這些研究中，顯示了CD4+T細胞產(chǎn)生細胞因子的兩種不同方式，命名為T輔助細胞l(Thl)和T輔助細胞2(Th2)。已發(fā)現(xiàn)Thl細月包選擇性產(chǎn)生白介素-2(IL-2)、干擾素-Y(IFN-力和淋巴毒素(LT)，而Th2克隆選擇性產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6和IL-13(CherwinskiWa/"五;c尸.169:1229-1244,198"。隨后，從Th2克隆中分離出另外的細胞因子IL-9和IL-10(VanSnickefa/.，丄A/ed.169:363-368，1989;FiorentinoWa/.,J".Exp.MW.170:2081-2095，1989)。最后，發(fā)現(xiàn)Thl和Th2細胞兩者都分泌諸如IL-3、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和肺瘤壞死因子-a(TNF-a)的另外的細胞因子。自身免疫性疾病包括能影響下表列出的機體內(nèi)許多不同器官和組織的廣譜疾病。參見例如Paul,W.E(ed.2003)Fw油me幽//畫歸/ogy(基礎(chǔ)免疫學)(第五版),LippincottWilliams&Wilkins;ISBN-10:0781735149,ISBN-13:978-0781735148;RoseandMackay(eds.2006)777e爿wtoz'mw朋eD/seosas1(自身免疫性疾病)(第四版)AcademicPress,ISBN-10:0125959613，ISBN-13:978-0125959612;Erkan,etal,(eds.2004)T7zeiVewra/og/c/"vo/vemewf/w5y他mz'c*toz>wwi/weD/seosas(系統(tǒng)性自身免疫性疾病的一申經(jīng)受累),Volume3(//awt/600A:o/5^Wemfc^t/fo/附WMweZ)&e"^s(系統(tǒng)性自身免疫性疾病手冊))ElsevierScience,ISBN-10:0444516514,ISBN-13:978-0444516510;和Richter,etal.(eds.2003)7V^3/附e",V」w^z'w附M"gZXyortfera(自身免疫'l"生疾病的-臺療)，Springer,ISBN-10:3211837728,ISBN-13:978-3211837726。人自身免疫性疾病的現(xiàn)有治療包括糖皮質(zhì)激素、細胞毒性劑和最近開發(fā)的生物學療法。通常，治療人系統(tǒng)性自身免疫性疾病根據(jù)經(jīng)驗且不能令人滿意。在多種嚴重的自身免疫性疾病和炎性疾病中主要采用諸如皮質(zhì)類固醇的廣譜免疫抑制藥物。除皮質(zhì)類固醇之外，在治療系統(tǒng)性自身免疫性疾病中使用其他免疫抑制劑。環(huán)磷酰胺是導致T和B兩種淋巴細胞大量消減及細胞介導的免疫損害的烷化劑。環(huán)孢霉素、他克莫司和嗎替麥考吩酯是具有抑制T淋巴細胞的特異性質(zhì)的天然產(chǎn)物，并且已用于治療SLE、RA,并在限定范圍內(nèi)用于治療脈管炎和肌炎。這些藥物伴有明顯的腎臟毒性。曱氨蝶呤也作為"二線"試劑用于RA，目的為減緩疾病進展。它還用于多肌炎和其他結(jié)締組織疾病。已嘗試的其他方法包括意在阻斷細胞因子作用或去除淋巴細胞的單克隆抗體。參見Fox,爿w.Met/;99:82-881995。MS的治療包括干擾素|3和共聚物1,它們降低復(fù)發(fā)率達20-30%且僅適度影響疾病進展。MS的治療還使用包括曱強龍、其他類固醇、曱氨蝶呤、克拉屈濱和環(huán)磷酰胺的免疫抑制劑。在治療MS中這些免疫抑制劑具有最小效力。RA的當前療法采用諸如曱氨蝶呤、柳氮磺吡啶、羥化氯喹、來氟米特(leflunamide)、強的松的非特異性抑制或調(diào)節(jié)免疫功能的藥劑，以及近來開發(fā)的TNFa拮抗劑依那西普和因福利美(Morelandefa/,臉謂a/。/28，1431-52,2001)。依那西普和因福利美全面阻斷TNFa，使患者更易死于敗血癥、慢性分枝桿菌感染的惡化和脫髓磷脂事件的發(fā)生。在器官特異性自身免疫的情況下，已嘗試過大量不同的治療方法。全身性給予可溶性蛋白抗原以抑制隨后針對該抗原的免疫反應(yīng)。這些療法包括向患有實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的動物和患有多發(fā)硬化的人遞送髓磷脂石咸性蛋白、其顯性肽或髓磷脂蛋白混合物(BrockeWa/.，7Vafwre379,343-6,1996;Critchfieldefa/.,Sc/ewce263,1139-43.，1994;Weinera/"^畫7ev/畫畫/12，809-37,(1994));對患有膠原蛋白誘導的關(guān)節(jié)炎的動物和患有風濕性關(guān)節(jié)炎的人給予II型膠原蛋白或月交原蛋白的〉'昆合物(Gumanovskayada/"/mmimo/ogy97，466-73，1999;McKownWg/.，^W/^/"si/zewm42，1204-8,1999;TrenthamdSc/ewce261，1727-30，1993);向患有自身免疫性糖尿病的人和動物遞送胰島素(PozzilliandGisellaCavallo，飾6e^M由67&sWev16，306-7,2000);以及向患有自身免疫性葡萄膜炎的人和動物遞送S-抗原(Nussenblatt"a/"顛/Op磁a/腦/123,583-92，1997)。與該方法相關(guān)的問題是全身性注射抗原誘導的T細胞無反應(yīng)性?；赥細胞受體和結(jié)合到主要組織相容性(MHC)分子上的肽之間的特異相互作用，另一種方法嘗試設(shè)計用于肽抗原的全身性給藥的合理治療策略。在糖尿病動物模型中使用肽方法的一項研究導致了針對該肽的抗體的發(fā)生(Hurtenbache/a/"/^cp.MW177:1499,1993)。另一種方法是給予TCR肽免疫。參見例如，VandenbarkW，341:541,1989。另有一種方法還通過攝入肽或蛋白抗原誘導口服耐受。參見例如，WeinerHL，/www""*/7Wa少，18:3351997。當前通過單獨或與佐劑組合遞送蛋白、多肽或肽來改變針對病原體或肺瘤的免疫反應(yīng)。例如，乙型肝炎病毒疫苗包括作為佐劑的氫氧化鋁配制的重組乙型肝炎病毒表面抗原(非自身抗原)。該疫苗誘導針對乙型肝炎病毒表面抗原的免疫反應(yīng)以抗感染?？蛇x擇方法涉及遞送減毒的、復(fù)制缺陷的和/或非病原體形式的病毒或細菌(各自為非自身抗原)以引發(fā)針對該病原體的宿主保護性免疫反應(yīng)。例如，口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗由減毒活病毒(非自身抗原)組成，該疫苗在已接種的個體內(nèi)感染細胞并復(fù)制，從而誘導針對脊髓灰質(zhì)炎病毒(外源或非自身抗原)的有效免疫，而不會引起臨床疾病。作為選4奪，該失活脊髓灰質(zhì)炎疫苗包括不能感染或復(fù)制的失活的或"滅活的"病毒，皮下給藥該疫苗以誘導針對脊髓灰質(zhì)炎病毒的保護性免疫。乂瘦^A的啟動和遽A^刺與初^的^^疾病微生物感染導致靶器官的炎癥，在某些情況下為全身性炎癥，所述微生物包括支原體、病毒、細菌、寄生蟲和分枝桿菌。顯著的實例包括細菌膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、感染性葡萄膜炎和感染性休克。作為先天免疫系統(tǒng)的一部分，13諸如凝血級聯(lián)的組分、緩激肽和補體的炎癥介質(zhì)被激活，促進炎癥發(fā)包括蛋白、脂質(zhì)、糖類和核酸。包含被稱為"CpG"基序(下述被更詳細的定義)的某些基序的細菌DNA在動物模型中能啟動炎癥反應(yīng)。例如，將細菌DNA或CpG基序(兩者都為非自身分子)注射入滑膜關(guān)節(jié)模擬特征為膿毒性關(guān)節(jié)炎的炎癥跡象和癥狀。與"初^的義^疾病在沒有任何已知的傳染病因?qū)W的情況下，許多人類疾病與急性或慢性炎癥相關(guān)。在這些疾病中，免疫系統(tǒng)是活躍的，引起被感染的組織發(fā)炎和白細胞與淋巴細胞的異常滲入，但看起來與感染無關(guān)。實例包括骨關(guān)節(jié)炎、冠狀動脈疾病、阿爾茨海默氏病(Alzheimer'sDisease),某些形式的皮炎、胃炎和肺炎。在缺乏適應(yīng)性免疫反應(yīng)的情況下，主要的免疫反應(yīng)是先天性免疫反應(yīng)。與"《,分f"初^W《;I^瘦^^4:許多自身免疫性疾病已被描述，包括風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、糖尿病、牛皮癬和許多其他的疾病。如上述與自身分子相關(guān)的炎性疾病一樣，免疫系統(tǒng)是活躍的，引起被感染的組織發(fā)炎和白細胞與淋巴細胞的異常滲入，但看起來與感染無關(guān)。與自身分子相關(guān)的炎性疾病不同的是，抗體和/或T細胞。宿主T和B淋巴細胞選擇性靶向自身分子的機制還不清楚。一些研究者提出自身免疫性疾病是由微生物病原體觸發(fā)或加劇的。微生物CpG序列的刺激與動物模型中諸如EAE(Segala/.，/mwM"o/ogy,158:5087,1997)和SLE(Gilkesonefa/"/z>ww,o/ogy，142:1482,1989)的自身免疫性疾病發(fā)生的增加的敏感性相關(guān)；然而，盡管炎性疾病能被誘發(fā)，很少的證據(jù)支持以下假設(shè)CpG序列或微生物產(chǎn)物本身能夠觸發(fā)另外的健康動物中的自身免疫性疾病。例如，使用無菌動物系統(tǒng)(即，飼養(yǎng)在無菌環(huán)境中的動物)幾個重要的試驗已經(jīng)證實在不暴露在天然存在的微生物或微生物CpG的情況下會有自身免疫性疾病的自發(fā)發(fā)生。實例包括在強直性脊柱炎的無菌轉(zhuǎn)基因嚙齒動物模型中的自身免疫性皮膚和生殖器疾病的發(fā)生(Taurog,/Me《180:2359，1994,);以及在SLE的兩個不同模型中狼瘡的發(fā)生14(MaldonadoiW"/.，162:6322，1999;Unnida/"J"i/2ewm,2:35，1975)?？烧T導的SLE模型已被描述，其中用烴油、姥鮫烷對任何小鼠品系的單次注射導致SLE的發(fā)生，其特征為特征性自身抗體的產(chǎn)生以及免疫復(fù)合物介導的腎病的發(fā)生?？傊@些試驗性模型提出了在不暴露在微生物DNA或CpG的情況下，能夠發(fā)生自發(fā)的和可誘導的自身免疫性疾病。名瘦>^/;哀#/{/(75^:先天免疫系統(tǒng)被認為是抵抗微生物和病原體的第一防線。先天免疫系統(tǒng)的最有效刺激物之一是微生物DNA，其包含免疫刺激序列(ISS)。細菌DNA中特異性免疫刺激序列對先天免疫的活化在小鼠中需要用于刺激的包含5，-噤呤-噤呤-胞嘧啶-烏噪呤-嘧啶-嘧啶-3，的非甲基化的核心六聚物序列基序，在人中需要用于刺激的包含5，-噤呤-嘧啶-胞嗜啶-鳥。票呤-嘧啶-嘧啶-3，的非甲基化的核心六聚物序列基序(Kriegetal.,」wwiev.//ww"wo/.，20:709-760,2002)。在免疫刺激序列基序中包含被稱為"CpG"序列的二核苷酸基序的細菌DNA和合成的寡脫氧核苷酸(ODN)能夠刺激B細;!包增殖和分泌IL-6、IL-10和免疫球蛋白(Kriegetal.,淑騰，374:546-549，1995;Yietal，/附mw"o/.,157:5394-5402，1996)。ISSDNA還直接激活樹突細胞、巨噬細胞和單核細胞分泌諸如TNF-a、IL6和IL12的Thl樣細胞因子并上調(diào)MHC和共刺激分子的表達(Klinman"a/.，Prac.A^at爿cad5W.t/.S.yl,93:2879-2883，1996;Martin-Orozco"a/.,/"t/mmw"o/"11:1111-1118，1999;SparwasserWa/.'五w./w附w"o/.，28:2045-2054,1998)。在小鼠中，Toll樣受體-9(TLR-9)已被鑒定為識別CpG基序的關(guān)鍵受體。在脊推動物DNA中，CpG二核苷酸的頻率被抑制到預(yù)測(期望)值的約1/4,在CpG二核苷酸中的C約80%的情況下被曱基化。相反，細菌DNA,與合成的ODN類似，CpG二核普酸中的C優(yōu)選地不被曱基化。因此，細菌DNA與脊推動物DNA的結(jié)構(gòu)上的不同在于其有增加的多于20倍的非甲基化CpG基序的含量。許多研究已確立了非曱基化的CpG基序作為激活免疫細胞的細菌DNA的分子模式(Krieg"a/"J畫.Wev,/薩畫/.，20:709-760,2002)。由于CpGDNA能夠誘導對諸如雞卵溶菌酶、卵清蛋白的非自身抗原的強的抗體反應(yīng)和Th1樣T細胞反應(yīng)，被公認為有效的佐劑(Chuda/.,>/Me<i.，186:1623-1631,1997;Lipford"/■，五w.//附mwwo/.,27:2340-2344,1997)。當前，CpGDNA和CpGODN在傳染病、腫瘤、過敏性疾病和自身免疫性疾病的各種動物模型中被用作治療性疫苗(Kriegetal,A畫.Rev.Immunol,20:709-760,2002)。CpG用作疫苗的成功顯然主要依賴于其在誘導強Thl樣反應(yīng)和在某些情況下如在過敏性哞喘模型中改變Th2反應(yīng)為Thl反應(yīng)的效力(Klineetal，J.Immunol,160:2555-2559,1998;Broideetal，J.Immunol,161:7054-7062,1998)。對CpGDNA的先天性免疫激活的治療性應(yīng)用已給予了極大關(guān)注。CpGDNA誘導的有效的非抗原特異性先天性免疫細胞激活足以保護小鼠對抗細菌刺激，甚至足以治療由細胞內(nèi)病原體建立的感染(Agrawaletal.，TrendsMol.Med.，8:114-121,2002)。CpGDNA也誘導對小鼠中腫瘤的先天性免疫抗性和小鼠中已建立腫瘤的退化(Dowetal.,J.Immunol.，163:1552-1561,1999;Carpenteretal.,CancerRes.，59:5429-5432,1999;Smithetal.,J.Natl.CancerInst"90:1146-1154,1998)。CpGDNA的有效的Thl佐劑作用甚至取代先存在的Th2免疫反應(yīng)；CpGDNA已被用作過敏性疫苗的佐劑，其中它在先存在Th2反應(yīng)的情況下，誘導針對抗原的Thl反應(yīng)，導致并發(fā)的過敏原吸入后的癥狀減輕(VanUdenetal"J.AllergyClin.Immunol,104:902-910，1999)。名瘦#*,/{/(7/》免疫刺激序列寡脫氧核苷酸(ISS-ODN)的抑制劑作為用于降低對細菌和病毒中ISS-ODN的宿主免疫反應(yīng)的抗炎劑，已被用于抑制ISS-ODN的免疫刺激活性，例如用于抑制存在于重組表達載體特別是在基因治療的情況下的任何ISS-ODN的免疫刺激活性，作為與偶聯(lián)的自身抗原或自身抗體組合的自身免疫調(diào)節(jié)劑，被用于抑制ISS-ODN刺激的Thl介導的IL-12產(chǎn)生，作為用于對胞外抗原的Th2免疫反應(yīng)的佐劑，通常被用于將宿主免疫反應(yīng)從Thl反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)門h2反應(yīng)。參見，例如WO04/047734和美國專利第6,255,292號。Yamadaetal，//mww"o/.，169;55卯-5594，2002,使用多種體外免疫激活細胞系統(tǒng)評價了在CpG誘導的免疫刺激中的IIS寡脫氧核苷酸。Yamada等人發(fā)現(xiàn)IIS寡脫氧核苷酸的抑制優(yōu)于寡脫氧核苷酸的刺激，并且對CpG誘導的免疫反應(yīng)是特異性的。他們發(fā)現(xiàn)抑制性最強的寡核苷酸序列包含多聚G或G-C富集序列，但沒有發(fā)現(xiàn)特異性六聚物基序。Kriegetal.,PNAS,95;12631-12636，1998，發(fā)現(xiàn)包含中和基序或在5'側(cè)具有C或在3，側(cè)具有G的合成寡核苷酸能阻斷免疫刺激性CpG基序的免疫激活，所述中和基序被作者定義為CpG二核苷酸的同向重復(fù)蔟。而且，六聚物免疫抑制序列沒有被發(fā)現(xiàn)。在ZeunerWg/.，y^An'^a"dW/^Mma&m，46:2219-2224，2002中，由上述Kreig等人描述的IIS被證明在動物;漢型中減少CpG誘導的關(guān)節(jié)炎。另外的IIS在US20050239732，Jurk"fl/.中被描迷，特征為G富集寡聚物5，的CC二核苷酸，以及在Lenertetal.,(2003，DNACellBiol.22:621-31)中被描述，特征為臨近嘧啶富集的CCT序列至末梢GGG三聯(lián)體有3-5個核苷酸。然而，在兩者中都沒有發(fā)現(xiàn)六聚物免疫抑制序列。在US6,225,292中，Raz等人描述了特異性六聚物基序，稱為5，-嘌呤-嘌呤-["-[2]-嘧啶-嘧啶-3，，其中Y為除胞嘧啶外的任意核苷酸，Z為任意核苷酸，其中當Y不是鳥苷或肌苷時，Z為烏苷或肌苷，鳥苷或肌苷阻斷CpG免疫刺激序列的刺激活性。在每個上述實例中，IIS被證明特異性抑制刺激性CpG序列引起的免疫激活。^乂^^f:反義寡核苷酸最初被設(shè)計為與特異性靶基因互補以降低它們的表達(Krieg，^畫.紐/畫畫/"20:709-760，2002)。為了防止這些寡核苷酸的降解，骨架通常被修飾，例如為硫代磷酸骨架。盡管在很多情況下，反義寡核苷酸在組織培養(yǎng)細胞中的確抑制了靶基因的表達，然而體內(nèi)試驗在改變表達中很少成功。而且，許多研究者出乎意料地發(fā)現(xiàn)一些這樣的寡核苷酸在體內(nèi)刺激免疫反應(yīng)。例如，針對人免疫缺陷性病毒(HIV)的rev基因的反義寡核苷酸具有免疫刺激作用，表現(xiàn)為增加的B細月包增殖和脾腫大(BrandaWa/.，所oc/zem.尸/zwmaco/.:45:2037-2043，1993)。盡管從這些早期研究中沒有鑒定出直接的免疫刺激序列基序，這些發(fā)現(xiàn)最終導致了針對特異性免疫刺激基序的研究。多核苷酸治療劑已被用于"基因治療"，包括編碼肽和/或多肽的棵DNA、在沉淀促進劑和轉(zhuǎn)染促進劑中配制的DNA以及病毒載體?；蛑委煘槎嗪塑账岬倪f送，以提供蛋白或肽的表達來代替宿主中缺陷性或沒有的蛋白或肽和/或增加期望的生理功能。基因治療包括將DNA整合進個體基因組來達到治療目的的方法。基因治療的實例包括DNA的遞送，所述DNA編碼用于血友病的凝血因子、用于重癥聯(lián)合免疫缺陷的腺苷脫氨酶、用于家族性高膽固醇血癥的低密度脂蛋白受體、用于葡萄糖腦苷脂沉積癥(Gaucher，sdisease)的葡糖腦苷脂酶、用于dr抗胰蛋白酶缺陷的(Xr抗胰蛋白酶、用于血紅蛋白病的a-或P-球蛋白基因、以及用于囊腫性纖維化的氯化物通道(VermaandSomia，淑廚389，239-42,1997)。治^f^染的Z)AU名瘦在DNA免疫中，無復(fù)制轉(zhuǎn)錄單位提供了蛋白或蛋白片斷合成的模板，其誘導或提供宿主中特異性免疫反應(yīng)。注射棵DAN促進了針對多種微生物和肺瘤的疫苗接種(RobinsonandTorres,Se附/w/wmwwo/,9,271-83.，1997)。編碼存在于病毒(乙型肝炎病毒、人免疫缺陷性病毒、輪狀病毒和流感)、細菌(結(jié)核分枝桿菌)和寄生蟲(癡疾)、所有非自身抗原中特異性蛋白的DAN疫苗已在開發(fā)用于子貞P方禾口'治療這些感染(Le"a/.,Fac"'we,18，1893-901,2000;RobinsonandPertmer，W層55,1-74，2000).治;^^形A的DA^:編碼主要組織相容性抗原類型I、細胞因子(IL-2、IL-12和IFN-y)以及胂瘤抗原的DNA疫苗已在開發(fā)用于治療瘤形成(WlazloandErtl,/附m""o/77^￡x/，49:1-11,2001)。例如,編碼B細胞免疫球蛋白個體基因型(抗原結(jié)合區(qū))的病毒DNA已被用于消除和防止B細胞淋巴瘤(Timmerman"a/,脅od，97:1370-1377，2001)。治療自身免疫性疾病的DNA免疫其他文獻已經(jīng)描述了編碼免疫分子的DNA療法治療自身免疫性疾病。這樣的DNA療法包括編碼T細胞受體的抗原結(jié)合區(qū)的DNA以改變啟動自身免疫性反應(yīng)的自身反應(yīng)性T細胞的水平(Waismandg/，Mec/,2:899-905,1996;美國專利第5，939，400號)。將編碼自身抗原的DNA連接到微粒上通過基因槍遞送到皮膚以預(yù)防多發(fā)性硬化和膠原誘導的關(guān)節(jié)炎。(PCT公開號WO97/46253;Ramshaw"/畫歸/，andCe〃腸.，75:409-413，1997)編碼粘著分子、細胞因子(TNFa)、趨化因子(C-C趨化因子)和其他免疫分子(Fas-配體)的DNA已被用于治療自身免疫性疾病的動物模型(Youssef"a/，/C/zw/謂"，106:361-371,2000;Wildbaumda/，/C7z'w/羅W,106:671-679,2000;Wildbaum"a/,//畫畫/，165:5860-5866，2000;Wildbaum"a/,J"/畫畫/，161:6368-7634，1998;和Youssefe"/，"幽畫im，13:21-9，1999》本發(fā)明的目的在于提供治療或預(yù)防疾病特別是自身免疫性疾病或炎性疾病的方法和組合物，包括免疫調(diào)節(jié)核酸的給藥。本發(fā)明的另一另一目的是提供治療疾病的方法和手段，所述疾病與存在于并涉及動物中非生理學過程的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)，所述方法和手段包括將免疫調(diào)節(jié)序列與編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸組合給藥。本發(fā)明的另一個目的是提供用于治療或預(yù)防疾病的組合物，所述疾病與動物中非生理性存在的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)。本發(fā)明還涉及疾病的治療或預(yù)防，包括將免疫調(diào)節(jié)核酸與一個或多個自身分子組合給藥。本發(fā)明的這些和其他目的在整個說明書中是顯而易見的。發(fā)明簡述本發(fā)明基于改進的免疫調(diào)節(jié)序列的發(fā)現(xiàn)，其單獨或組合被用于預(yù)防或治療與自身分子相關(guān)的自身免疫性疾病或炎性疾病。具體地，本發(fā)明提供包括如下的改進的免疫調(diào)節(jié)序列(IMS):1)六聚物序列5'-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶,嘧啶w-3，；其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了a.X和Y不能是胞嘧啶-鳥噤呤；b.當嘧咬[2]是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶c.當嘧啶m是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶2)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及3)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G，并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；其中免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列。作為選擇，本發(fā)明提供了包括如下的改進的免疫調(diào)節(jié)序列1)六聚物序列5，_噪呤-嘧啶_[x]-[Y]-嘧啶-嘧啶-3，；其中X和Y是鳥噤呤-鳥噤呤；2)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及3)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括2-10個鄰接G，并位于所述六聚物序列3，的2-10核苷酸；其中免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列。在本發(fā)明的一些實施方案中，六聚物序列的X和Y是GpG。在某些實施方案中，六聚物序列是5，-GTGGTT-3'。在一些實施方案中，CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸。在某些實施方案中，多聚G區(qū)包括3個鄰接的鳥嘌呤堿基，并位于所述六聚物序列3'的2核香酸。在某些實施方案中，改進的免疫調(diào)節(jié)序列是5'-CCATGTGGTTATGGGT-3，。實現(xiàn)本發(fā)明目的通過新方法和組合物治療或預(yù)防疾病特別是自身免疫性疾病或炎性疾病，包括具有一個或多個免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸的給藥。免疫調(diào)節(jié)核酸可單獨給藥，或?qū)⑵渑c編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸組合給藥。也可將免疫調(diào)節(jié)核酸與其他自身分子組合給藥以治療與個體中非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)的自身免疫性疾病或炎性疾病。本發(fā)明還涉及藥學上的組合物，用于治療或預(yù)防自身免疫性疾病或炎性疾病，其中藥學上的組合物包括諸如DNA多核苷酸的多核苷酸形式的免疫調(diào)節(jié)序列?？蓪⒚庖哒{(diào)節(jié)序列包含在載體中，通過修飾載體核香酸序列元件包括免疫調(diào)節(jié)序列基序，當用于與個體中非生理學存在的自身分子相關(guān)的疾病如自身免疫性疾病或炎性疾病的情況中時，還包括抑制性二核苷酸基序。所述疾病與動物中非生理學存在的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)，所述新方法包括給予動物免疫調(diào)節(jié)序列。本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防動物中疾病的新方法，所述疾病與動物中非生理學存在的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)，所述新方法包括給予動物與編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽組合的免疫調(diào)節(jié)序列。本發(fā)明一方面提供了治療或預(yù)防自身免疫性疾病的方法，所述自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化、風濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素依賴的糖尿病、自身免疫性葡萄膜炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、重癥肌無力、斯耶格倫(氏)綜合征(Sjogren，ssyndrome)、尋常天皰癡、硬皮病、惡性貧血、系統(tǒng)性紅斑狼癡(SLE)、強直性脊柱炎、自身免疫性皮膚病以及格雷夫斯病，所述方法包括給予動物單獨的免疫調(diào)節(jié)序列，或與自身載體組合的免疫調(diào)節(jié)序列，所述自身載體包括編碼與自身免疫性疾病相關(guān)的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸。在本發(fā)明另一方面，免疫調(diào)節(jié)序列與多核苷酸組合給藥，所述多核苷酸包括編原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的DNA。本發(fā)明另一方面提供了治療或預(yù)防炎性疾病的方法，所述炎性疾病如骨關(guān)節(jié)炎、痛風、假痛風、羥基磷灰石沉積疾病、哮喘、粘液嚢炎、肌腱炎、結(jié)膜炎、尿道炎、膀胱炎、陰莖頭炎、皮炎、冠狀動脈疾病或偏頭痛，所述方法包括給予動物單獨的或組合的免疫調(diào)節(jié)序列。本發(fā)明另一方面還提供了治療或預(yù)防疾病的方法，所述疾病與器官或細胞移植相關(guān)，包括但不限于GVHD或移植排斥，所述方法包括給予動物單獨的或與自身載體組合的免疫調(diào)節(jié)序列，所述自身載體包括編碼與GVHD或移植排斥相關(guān)的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸。免疫調(diào)節(jié)序列和自身載體的給藥調(diào)節(jié)對由自身載體表達的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的免疫反應(yīng)，所述自身載體包括編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸。在所述方法和組合物的一些實施方案中，很多(即兩個或多個)免疫調(diào)節(jié)序列被單獨或連接到一起使用，例如連續(xù)地或一前一后地連接到一起。所述兩個或多個IMS可以是相同的或不同的。附圖簡述圖1:抑制性IMS抑制CpG依賴的人PBMC細胞的增殖。存在刺激物CpG-ODN(5(ig/ml)或CpG和抑制劑IMS的情況下，孵育人PBMC(5xl0Vml)。細胞用DNA孵育96小時，孔用1pCi[3H]TdR脈沖進行最后的24小時培養(yǎng)，接著測量摻入的放射性。每個數(shù)據(jù)點代表4次重復(fù)的平均值。a，b)在兩個不同的細胞供者，即QB8(a)和QB10(b)中，刺激物CpG-ODN2395(5嗎/ml)被單獨孵育(從左邊的第二柱)，或與濃度逐漸增加的抑制劑IMS—起孵育(如括號中所示的1-25(ig/ml+5嗎/ml2395)。圖2:IMSGpG.l和IlS對CpG刺激的細胞因子產(chǎn)生的效應(yīng)的劑量反應(yīng)分析。在CpGODN(2006,2395，C274，D19)單獨存在或與劑量逐漸增加的IMSGpG.l和118(所有IMS樣品包含5嗎/ml的CpG寡核香酸)組合存在的情況下，將人PBMC(5xl06/ml)孵育48小時。通過ELISA測定培養(yǎng)基中細胞因子的水平。每個數(shù)據(jù)點代表3次重復(fù)的平均值。對于IL-10和IL-12(a和b),隨著IMS劑量增加，對細胞因子產(chǎn)生的抑制增強。對于IFN-y(c)和IFN-a(d)，增加的IMS劑量引起對IMS和IMS118的細胞因子表達增加，盡管相對于單獨的CpG樣品，對于IMS118，低劑量抑制總的IFN-y水平，所有118劑量抑制IFN-a水平。圖3:ConA和多聚I:C對IMSGpG.l和118的抑制作用。a)人PBMC(5xl0Vml)用單獨的多聚I:C(10嗎/ml)或與濃度逐漸增加的IMS一起孵育48小時。通過ELISA測定上清液中IFN-a蛋白水平。每個數(shù)據(jù)點代表3次重復(fù)的平均值。5嗎(25嗎/ml)劑量的118和GpG.l在抑制多聚I:C誘導的IFN-a時是有效的。b)PBMC用單獨的10嗎/ml的22ConA或與GpG.l和118(每個為25lag/ml)組合孵育，且如圖1所述分析增殖情況。圖4:抑制性IMS誘導不依賴于CpG的細胞因子產(chǎn)生。在無CpG寡核苷酸的情況下，將增加劑量的IMS與PBMC(供者QB11和QB12)孵育48小時，通過ELISA分析細胞因子。每個數(shù)據(jù)點代表3次重復(fù)的平均值。a)IL-6b)IL-10c)IFN-ad)IFN畫y。圖5:抑制性IMS在沒有刺激物CpGODN的情況下能刺激PBMC增殖。存在刺激物CpG-ODN2395(5嗎/ml)或濃度逐漸增加的IMSGpG.l和118的情況下，孵育人PBMC(5xl0Vml)。如上所述(圖l)測定細胞增殖。圖6:抑制性IMS在體內(nèi)能抑制CpG誘導的IL-12表達。腹膜內(nèi)注射給予寡核苷酸，24小時后眼眶后放血取出血清。通過EUSA分析血清中IL-12水平。圖7:每周一次50照IMS寡核苷酸給藥沒有顯著影響狼瘡小鼠模型中向蛋白尿的進展。用TpT或GpG寡核苷酸處理的NZB/WFl雌性小鼠以及用PBS處理的對照組每周一次評分尿中蛋白的存在。顯示蛋白尿小鼠的百分比隨時間作圖，蛋白尿被定義為通過阿爾伯狄克(Albustix)試劑條評分的兩次連續(xù)評分〉300mg/dl。在任何治療組中沒有觀察到蛋白尿發(fā)作顯著延遲。圖8:每周一次50ngIMS寡核苷酸給藥沒有顯著影響狼瘡小鼠模型中抗DNA自身抗體效價。用TpT或GpG寡核普酸處理的NZB/WFl雌性小鼠以及用PBS處理的對照組在處死時收集血清。用購買的試劑盒測定抗雙鏈DNA抗體效價。寡核苷酸治療輕度降低了總的抗DNA反應(yīng)，但沒有達到統(tǒng)計上顯著性。圖9:口強飼法給予GpGIMS寡核苦酸顯著降低狼瘡小鼠模型中腎的炎癥的嚴重性。對取自已發(fā)展為蛋白尿的用TpT或GpG寡核苷酸處理的NZB/WFl雌性小鼠以及用PBS處理的對照組的腎進行組織病理學評分。評分系統(tǒng)被設(shè)計為測量炎癥的程度，定義為1=最??；2=輕度；3=中度以及4=顯著/嚴重。由合同獸醫(yī)病理學家進行盲評。對每組組織學分值取平均值，下文表示為平均值+A標準誤差。在GpG處理組觀察到腎臟炎癥的減少，然而只有通過口強飼法給予GpG組達到統(tǒng)計上顯著性。圖10:在用GpGIMS寡核苷酸處理的狼瘡小鼠模型中，蛋白尿發(fā)作劑量依賴性延遲。用劑量逐漸增加的GpG寡核苷酸(50、200和500嗎)每周一次通過腹膜內(nèi)(IP)處理的NZB/WFl雌性小鼠以及用PBS賦形劑處理的對照動物被每周一次評分尿中蛋白的存在。顯示蛋白尿小鼠的百分比隨時間作圖，蛋白尿被定義為通過阿爾伯狄克(Albustix)試劑條評分的兩次連續(xù)評分〉300mg/dl。在蛋白尿發(fā)作中存在劑量依賴性延遲，最高劑量的GpG提供了最顯著的延遲(p二0.03)。圖11:在用GpGIMS寡核苷酸處理的狼瘡小鼠模型中，抗DNA抗體反應(yīng)劑量依賴性降低。用劑量逐漸增加的GpG寡核苷酸(50、200和500pg)每周一次通過IP或皮內(nèi)(ID)處理的NZB/WF1雌性小鼠以及用PBS賦形劑處理的對照動物在處死時收集血清。用購買的試劑盒測定抗雙鏈DNA抗體。寡核苷酸治療輕度降低了總的抗DNA反應(yīng)，但沒有達到統(tǒng)計上顯著性。抗體效價圖顯示隨著GpG濃度增加，抗DNA反應(yīng)劑量依賴性降低。圖12:1-18mIMS寡核苷酸處理顯著降低狼瘡小鼠模型中抗DNA抗體反應(yīng)。用50pgGpG、I-18h、I18m或TpT每天一次通過IP注射處理的NZB/WFl雌性小鼠以及用PBS賦形劑單獨處理的對照組在處死時收集血清。用購買的試劑盒測定抗雙鏈DNA抗體?？贵w效價圖顯示I-18m處理與對照相比顯著降低針對DNA的自身抗體水平。圖13:GpGIMS寡核普酸與低劑量類固醇組合降低與EAU相關(guān)的炎癥。用hIRBP161-18Q肽免疫的BIO.RIII小鼠每周一次ID被給予200嗎GpG或TpT加低劑量甲基潑尼松龍(Depromedrol)(lmg/kg)。第21天眼睛的組織學評價由EAU的專家盲評給予每個實驗組的平均嚴重度分值。盡管單獨的類固醇或類固醇加TpTIMS寡核苷酸的給藥對葡萄膜炎的嚴重性沒有顯著影響，用類固醇加GpG顯著降低疾病分值。圖14:單獨的GpGIMS寡核苷酸處理顯著降低EAU中炎癥的嚴重度。腹膜內(nèi)或皮內(nèi)給予用hlRBP!6wso肽免疫的BIO.RIII小鼠單獨的或與低劑量曱基潑尼松龍(lmg/kg)組合的200(igGpG或TpT寡核苷酸，處死所述小鼠，收集眼睛用于組織學評價。眼睛由EAU專家盲法評分。雖然觀察到單獨的類固醇或其與GpG寡核苷酸的組合對葡萄膜炎沒有顯著影響，但單獨的GpGIP遞送顯著改進了類似于抗CD3陽性對照的嚴重度分值。圖15:每天一次IMS寡核苷酸的IP遞送不影響EAU疾病的嚴重度。第0天開始，用I-18h、I-18m、GpG或TpT每天一次通過IP注射給予用hlRBP!6W8Q肽免疫的B10.RIII小鼠。第21天，動物被處死，收集眼睛用于組織學分析。眼睛組織學由EAU專家盲法評分。IMS寡核苦酸對EAU疾病嚴重度沒有顯著影響。圖16:過繼轉(zhuǎn)移后用GpGIMS寡核苷酸的處理降低EAU疾病嚴重度分值。來自MRBP^w8。免疫的小鼠的淋巴結(jié)和脾細胞在體外與誘導肽一起培養(yǎng)三天。在第四天，3x107細胞被轉(zhuǎn)移到首次用于實驗的B10.RIII動物，該動物隨后每周一次通過IP遞送用200jigGpG寡核苷酸或PBS處理。觀察到降低疾病嚴重度的趨勢。圖17:I-18hIMS寡核苷酸在膠原抗體誘導的關(guān)節(jié)炎模型中顯著降低平均的關(guān)節(jié)炎發(fā)病率。第0天靜脈內(nèi)(IV)注射單克隆抗膠原致關(guān)節(jié)炎抗體的Balb/c小鼠在第4-10天通過IP注射每天一次給予50(igIMS寡核香酸進行處理。觀察動物，每天對疾病進行評分。顯示了隨時間變化每個實驗組的平均關(guān)節(jié)炎分值。I-18h寡核苷酸的處理相比于PBS對照組和GpG寡核苷酸的處理顯著降低了平均關(guān)節(jié)炎分值。圖18:I-18h在膠原抗體誘導的關(guān)節(jié)炎模型中顯著降低關(guān)節(jié)炎發(fā)病率。第0天IV注射單克隆抗膠原致關(guān)節(jié)炎抗體的Balb/c小鼠在第4-10天通過IP注射每天一次給予50pgIMS寡核香酸進行處理。觀察動物，每天對疾病進行評分。I-18h寡核苷酸的處理相比于PBS對照組和GpG寡核香酸的處理顯著降低了關(guān)節(jié)炎發(fā)病率。圖19:用GpG寡核香酸的預(yù)處理降低響應(yīng)于TNBS誘導的結(jié)腸炎的并發(fā)的體重減輕。第-5天用致結(jié)腸炎亞劑量的TNBS(0.5%)經(jīng)直腸處理的C3H小鼠從第-5天到第O天每天一次給予GpG寡核普酸，第O天時給予致結(jié)腸炎劑量的TNBS(3.5%)。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予TNBS的動物。賦形劑對照在與寡核苷酸處理相同的進度中用TNBS處理和用PBS處理。統(tǒng)計分析顯示用IO或者100ng劑量的GpG寡核苷酸的處理顯著優(yōu)于賦形劑處理的對照組，而GpG寡核苷酸50pg劑量組沒有達到統(tǒng)計學顯著性。圖20:用I-18h寡核香酸的預(yù)處理降低響應(yīng)于TNBS誘導的結(jié)腸炎的并發(fā)的體重減輕。第-5天用致結(jié)腸炎亞劑量的TNBS(0.5%)經(jīng)直腸處理的C3H小鼠從第-5天到第0天每天一次給予I-18h寡核普酸，第0天時給予致結(jié)腸炎劑量的TNBS(3.5°/。)。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予TNBS的動物。賦形劑對照在與寡核苷酸處理相同的進度中用TNBS處理和用PBS處理。統(tǒng)計分析顯示用所有劑量的I-18h寡核苷酸的處理顯著優(yōu)于賦形劑處理的對照組。圖21:用I-18m寡核苷酸的預(yù)處理降低響應(yīng)于TNBS誘導的結(jié)腸炎的并發(fā)的體重減輕。第-5天用致結(jié)腸炎亞劑量的TNBS(0.5%)經(jīng)直腸處理的C3H小鼠從第-5天到第0天每天一次給予I-18h寡核苷酸，第0天時給予致結(jié)腸炎劑量的TNBS(3.5%)。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予TNBS的動物。賦形劑對照在與寡核苷酸處理相同的進度中用TNBS處理和用PBS處理。統(tǒng)計分析顯示用50pg的I-18m寡核苷酸的處理顯著優(yōu)于賦形劑處理的對照組，而lOO(ig劑量水平?jīng)]有達到統(tǒng)計學顯著性。圖22:用GpG的預(yù)處理降低與DSS誘導的結(jié)腸炎相關(guān)的體重減輕。從第-2天開始用IP注射50或200|igGpG寡核苷酸預(yù)處理的雌性C3H小鼠從第0-7天通過飲用水被喂以3.5%DSS以誘導急性結(jié)腸炎。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予DSS的動物。賦形劑對照組在與寡核苷酸處理相同的進度中用DSS處理和給予PBS。統(tǒng)計分析顯示用50pgGpG寡核苷酸處理的組相比于賦形劑處理的對照組顯著降低體重減輕(p〈0.05;用鄧奈特多比較(Dunnett'sMultipleComparison)單向方差分析)。200jig劑量水平?jīng)]有達到統(tǒng)計學顯著性(pX).05)。圖23:用I-18h寡核苷酸的預(yù)處理顯著降低與DSS誘導的結(jié)腸炎相關(guān)的體重減輕。從第-2天開始用IP注射50或200pgI-18h寡核苷酸預(yù)處理的雌性C3H小鼠從第0-7天通過飲用水被喂以3.5%DSS以誘導急性結(jié)腸炎。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予DSS的動物。賦形劑對照組在與寡核苷酸處理相同的進度中用DSS處理和給予PBS。統(tǒng)計分析顯示用50嗎I-18h處理的組相比于賦形劑處理的對照組顯著降低體重減輕(p〈0.05;用鄧奈特多比較單向方差分析)。200嗎劑量水平?jīng)]有達到統(tǒng)計學顯著性(p>0.05)。圖24:從疾病誘發(fā)時開始用GpG寡核苷酸的處理顯著降低與DSS誘導的結(jié)腸炎相關(guān)的體重減輕。第0天用IP注射GpG寡核苷酸處理的雌性C3H小鼠從第0-7天通過飲用水被喂以3.5%DSS以誘導急性結(jié)腸炎。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予DSS的動物。賦形劑對照組在與寡核苷酸處理相同的進度中用DSS處理和給予PBS。統(tǒng)計分析顯示用50嗎(pO.01)和200嗎(p<0.05)GpG寡核苷酸處理的組相比于賦形劑處理的對照組顯著降低體重減輕(用鄧奈特多比較單向方差分析)。而且，50嗎GpG寡核苷酸處理的組與未處理(沒有DSS)的對照組沒有顯著不同(pX).05)，提示了在該劑量水平的GpG寡核苷酸對DSS誘導的結(jié)腸炎的完全阻斷。圖25:從疾病誘發(fā)時開始用I-18h寡核苷酸的處理對與DSS誘導的結(jié)腸炎相關(guān)的體重減輕沒有顯著影響。第O天用IP注射I-18h寡核苷酸處理的雌性C3H小鼠從第0-7天通過飲用水被喂以3.5%DSS以誘導急性結(jié)腸炎。計算每組的平均體重減輕和標準誤差(SEM)并作圖。未處理的對照為沒有給予DSS的動物。賦形劑對照組在與寡核苷酸處理相同的進度中用DSS處理和給予PBS。統(tǒng)計分析顯示用50嗎和200嗎I-18h寡核苷酸處理的組相比于賦形劑處理的對照組沒有顯著降低體重減輕(用鄧奈特多比較單方差分析)。圖26:118誘變。存在刺激物CpG-0DN(5(ig/ml)和衍生自118的抑制劑IMS的情況下孵育人PBMC。細胞用DNA孵育96小時，孔用1jxCi[SH]TdR脈沖進行最后的24小時培養(yǎng)，接著測量摻入的放射性。顯示了118衍生的序列(上)與CpG刺激的增殖的百分比抑制(下)。多聚G區(qū)內(nèi)的突變(I18.M3-6和8)顯著降低了含有六聚物序列5，-GTGGTT-3，的寡核苷酸抑制兩個不同供者中PBMC增殖的能力。圖27:118資變。存在刺激物CpG-ODN(5(ig/ml)和衍生自118的抑制劑IMS的情況下孵育人PBMC。細胞用DNA孵育96小時，孔用1!^Ci[SH]TdR脈沖進行最后的24小時培養(yǎng)，接著測量摻入的放射性。物序列的5'突變(I18.M10-12)顯著降低了含有六聚物序列5，-GTGGTT-3，的寡核苷酸抑制PBMC增殖的能力。而且，六聚物序列和多聚G之間的核苷酸增加適度地降低了PBMC增殖(118.M13-16)。圖28顯示了人118和小鼠118核苷酸序列的比較。圖29:U8抑制TLR3、5、7和9。表達TLR2、3、4、5、7、8或9的HEK293細胞在存在對應(yīng)的TLR配體的情況下，用包含25jag/mL118的免疫調(diào)節(jié)序列孵育，測定NF-kB的激活。第一排顯示無配體的情況下基線信號傳導(無配體)，而最后一排顯示TLR由其對應(yīng)的配體的激活(對照+)。存在配體的情況下，118抑制TLR3、5、7和9的信號傳導(118+配體；從前數(shù)第二排)。圖30:118抑制TLR7配體誘導的pDC的IFN-a產(chǎn)生。A.從供者1分離的pDC當用TLR7配體洛索立賓或R-837孵育時產(chǎn)生IFN-a。IFN-a產(chǎn)生被5嗎/mL或25嗎/mL的118完全阻斷。B.類似的，5(ig/mL的118完全阻斷由供者2分離的pDC的IFN-a響應(yīng)于TLR7配體的表達(洛索立賓與1ox+I18相比)。圖31:118抑制TLR3配體誘導的PBMC的IFN-a產(chǎn)生。A.從供者1分離的PBMC產(chǎn)生響應(yīng)于多聚I:C的IFN-a,這被25嗎/mL的118阻斷。B.在由供者2分離的PBMC中由TLR3激活的IFN-a產(chǎn)生被5lag/mL和25pg/mL的118阻斷。圖32:118抑制CpG誘導的pDC的IFN-a產(chǎn)生。A.從供者1和2分離的pDC用單獨的免疫刺激性CpG序列(CpG)或與逐漸增加量的118—起(CpG+118)孵育后，產(chǎn)生的IFN-a用ELISA測量。118抑制IFN-a產(chǎn)生。C，D.從供者1和2分離的pDC用單獨的CpG序列(C274)孵育，或在用其孵育前用等摩爾比率的118(118(1)(To)+C274(l)(24hrs))或5倍過量的118(118(5)(To)+C^74(l)p4hrs)預(yù)孵育24小時產(chǎn)生的IFN-a。用118的預(yù)孵育完全阻斷IFN-a產(chǎn)生。圖33:來自SLE患者的免疫復(fù)合物與抗-dsDNA抗體一起誘導pDC的IFN-a產(chǎn)生。A.來自四名SLE患者(SLE19558;SLE22914;SLEKP491;SLEKP504)的血清相比于正常對照(正常)用ELISA分析抗誦dsDNA抗體。B.從四名SLE患者(SLE19558;SLE22914;SLEKP491;SLEKP504)與正常對照(正常)中分離的血清免疫復(fù)合物。C.用分離的人pDC孵育分離的免疫復(fù)合物，通過ELISA分析IFN-a產(chǎn)生。單獨的pDCs(僅細胞)產(chǎn)生4艮少的IFN-a，但被免疫刺激物CpG序列和來自具有抗-dsDNA抗體的SLE患者(19558和22914)的免疫復(fù)合物誘導。相反，來自沒有抗-dsDNA抗體的SLE患者(KP491和KP504)或正常對照(正常SG)的免疫復(fù)合物不誘導IFN-a產(chǎn)生。圖34:118抑制SLE-免疫復(fù)合物誘導的pDC的IFN-a。從血清中含有抗-dsDNA抗體的SLE患者和正常對照中純化的Ig在有或沒有118的情況下用分離的pDC孵育24小時。分離的(僅細胞)或用來自正常對照(正常)的免疫復(fù)合物孵育的pDC產(chǎn)生很少的IFN-a。相反，用來自SLE患者的免疫復(fù)合物孵育的pDC產(chǎn)生顯著量的IFN-a(SLE19558;SLE22914)。IFN畫a產(chǎn)生被118抑制(SLE19558+118;SLE22914+118)。圖35:I18抑制正常外周CD19+B細胞的CpG激活，A,B.CD19+B細胞被單獨孵育(無DNA)、與5嗎/mL刺激物CpG-ODN—起孵育(CpG(5))、或存在5[ig/mL118的情況下與5昭/mL刺激物CpG-ODN一起孵育(CpG+118(5))，通過ELISA分析細胞因子水平。118抑制CpG刺激的IL-6(A)和IL-10(B)表達。C.CD19+B細胞被單獨孵育(無DNA)、與5jig/mL刺激物CpG-ODN—起孵育(CpG)、存在5pg/mL118的情況下與5pg/mL刺激物CpG-ODN—起孵育(CpG+118(5))、或存在25嗎/mL118的情況下與5pg/mL刺激物CpG-ODN—起孵育(CpG+118(25))。通過[311]胸腺嘧啶摻入分析細胞增殖。118在兩個劑量上都顯著抑制CpG刺激的B細胞增殖。29圖36:118抑制來自診斷為SLE的患者的外周CD19+B細胞的CpG激活。A，B.CD19+B細胞被單獨孵育(僅細胞)、與5嗎/mL刺激物CpG—起孵育(CpG(5))、存在5pg/mLI18的情況下與5pg/mL刺激物CpG—起孵育(CpG+118(5))、或與5嗎/mL刺激物CpG和25(ig/mL118—起孵育(CpG十118(25)),通過ELISA分析細胞因子水平。118抑制CpG刺激的IL畫6(A)和IL-10(B)表達。C,CD19+B細胞被單獨孵育(僅細胞)，與5(ig/mL刺激物CpG—起孵育(CpG-5)，與5嗎/mL刺激物CpG—起孵育時存在1嗎/mL118(CpG+118-1)、5嗎/mL118(CpG+118-5)或25ng/mL118(CpG+118-25)。通過[311]胸腺嘧啶摻入分析細胞增殖。I18在所有劑量上都顯著抑制CpG刺激的C細胞增殖。圖37:I18激活正常B細胞中IL-6表達。A.分離的CD19+CD27+記憶B細胞被單獨孵育(無dna)、與5嗎/mLCpG一起孵育(CpG(5))、與5ng/mLI18—起孵育(I18(5))、或與25嗎/mL118—起孵育(118(25))，通過ELISA分析IL-6表達。118相比于CpG序列誘導IL-6在記憶B細胞中的低水平表達。B.分離的CD19+CD27-初始B細胞(naiveBcells)被單獨孵育(無dna)、與5嗎/mLCpG一起孵育(CpG(5))、與5嗎/mLI18—起孵育(118(5))、或與25(ig/mLI18—起孵育(118(25)),通過ELISA分析IL-6表達。118在初始B細胞中激活I(lǐng)L-6表達的程度與CpG序列類似。圖38:118激活I(lǐng)L-10在正常B細胞中的表達。A.分離的CD19+CD27+記憶B細胞被單獨孵育(無dna)、與5嗎/mLCpG—起孵育(CpG(5))、與5|ig/mL118一起孵育(118(5))、或與25|ig/mL118一起孵育(I18(25))'通過ELISA分析IL-10表達。118相比于CpG序列誘導IL-10在記憶B細胞中的低水平表達。B.分離的CD19+CD27-初始B細胞被單獨孵育(無dna)、與5(ig/mLCpG—起孵育(CpG(5))、與5|ig/mLI18—起孵育(118(5))、或與25jig/mLI18—起孵育(118(25))，通過ELISA分析IL-10表達。118相比于CpG序列誘導IL-10在初始B細胞中較低水平表達。圖39:118激活共刺激性標志物在正常B細胞中表達。分離的CD19+B細胞被單獨孵育(無dna)、與單獨的5嗎/mLCpG—起孵育(CpG-1826)、或存在氯奎的情況下與5pg/mLCpG—起孵育(CpG-1826+Chl)、或單獨的與5嗎/mLI18—起孵育(118)、或存在氯奎的情況下與5嗎/mL118—起孵育(118+Chl)。FACs測定CD80和CD86的表達，顯示了表達每個共刺激性標志物的細胞的百分比。118相比于CpG序列激活CD80和CD86的較低水平表達。圖40:118不刺激正常B細胞的長期存活或增殖。分離的CD19十B細胞被單獨孵育(僅細胞)；與1嗎/mL的三種不同的CpG序列(101S;2395;2006)—起孵育；或與0.2嗎/mL、1|ag/mL或5|ig/mL118—起孵育。顯示了細胞的起始濃度，13天后對每種情況下的細胞總數(shù)作圖。118不增加B細胞的存活或增殖。圖41:118是狼瘡B細胞的弱激活劑。來自狼瘡患者的分離的CD19+B細胞被單獨孵育(無dna);與1(ig/mL、5pg/mL或25昭/mL118一起孵育；與5|ag/mLCpG—起孵育；或存在5pg/mL或25^g/mL118的情況下與5pg/mLCpG—起孵育。分析IL-6表達(A)、IL-10表達(B)以及細胞增殖(C)。118弱激活I(lǐng)L-6和IL-10表達，以及輕度增加細胞增殖。圖42:在SLE動物模型中118給藥降低產(chǎn)生抗-dsDNA抗體的動物的百分比。118IMS寡核苷酸通過皮內(nèi)遞送纟皮每周一次給予NZB/WFl雌性小鼠10|ig、50iig和250pg。相比于PBS陰性對照和類固醇陽性對照(曱基潑尼松龍+環(huán)磷酰胺)，對具有抗-dsDNA抗體的動物的百分比作圖。具有抗-dsDNA抗體的動物的百分比在接受50嗎(p=0.17)和250pg&=0.04)的每周一次118劑量組中統(tǒng)計上較小。圖43:在SLE動物模型中118給藥延遲疾病發(fā)作。NZB/WF1雌性小鼠被每天一次、每周三次或每周一次共45周給予10(ig、50嗎或250(ig118。評價蛋白尿發(fā)作，對每組顯示隨時間的具有蛋白尿動物的百分比。A.10|ag118的給藥不影響疾病發(fā)作。B.每天一次、每周三次或每周一次的50pg118的給藥相比于PBS對照顯示降低疾病發(fā)作的趨勢。C.每周一次和每周三次的250jigl18的給藥顯示相比于PBS對照的降〗氐疾病發(fā)作的趨勢。圖44:在SLE動物中250figll8給藥延遲疾病發(fā)作。NZB/WF1雌性小鼠被每天一次、每周三次或每周一次共45周給予10pg、50嗎或250[ig118。評價蛋白尿發(fā)作，對每組顯示隨時間的具有蛋白尿動物的百分比。A.每天一次10jig或50pgl18的給藥不影響疾病發(fā)作。B.每周三次的250ng118給藥相比于10|ig和50(ig118的給藥顯示統(tǒng)計上顯著趨勢(時序檢驗(LogRankTest)p=0.31)。C.每周一次250pg118的給藥相比于10嗎和50pg118的給藥顯示了顯著的統(tǒng)計學上的趨勢(時序檢驗(LogRankTest)p=0.03)。圖45:118衍生的寡核苷酸抑制人B細胞的CpG刺激的IL-6產(chǎn)生。分離的人B細胞用單獨的5嗎/mL刺激物CpG-ODN或118衍生的寡核普酸(左邊的柱)、或存在5昭/mLI18或118衍生的寡核苷酸的情況下與刺激物CpG-ODN—起(右邊的柱)孵育48小時。ELISA分析培養(yǎng)基中細胞因子水平，并以pg/ml記錄在y軸上。圖46顯示118和M49之間的序列比較。圖47顯示118和M49在體外的抑制活性比較從健康C57B1/6小鼠中分離小鼠脾細胞，并在存在a)TLR9(CpG寡核苷酸1018101ig/ml)和b)TLR7(加德喹莫特(gardiquimod)1(ig/ml)激動劑和劑量范圍的抑制性寡核苷酸的情況下，以lxl(^細胞/ml的密度培養(yǎng)。抑制性寡核苷酸和激動劑^^皮同時加入到培養(yǎng)物。加入寡核苷酸和激動劑后24小時分離培養(yǎng)物上清，并用購買的ELISA試劑盒測定IL-6水平。通過計算每個寡核苷酸劑量的IL-6水平相比于單獨的激動劑水平的量確定抑制百分比。118化合物在這些分析中是TLR9和TLR7的適度良好的抑制劑。圖48顯示118和M49在體內(nèi)的抑制性活性比較相比于118,B細胞激動劑活性。M19在NZB/W模型中具有改善存活率和降低蛋白尿分值的效力，并且抗-dsDNA抗體效價優(yōu)于118。M49顯示在六聚物核心區(qū)的序列變化影響活性，如"CCC"相比于118中"GTT，，的取代。M49在NZB模型中增加的效力和降低的激動劑活性。M49在脾細胞分析中作為TLR9抑制劑的效果較差，但在體內(nèi)具有良好的效力。NZB/WF1小鼠(每組n-15)從21周齡開始皮下注射250嗎(0.05mL的5mg/mlPBS溶液)寡核苷酸(118,M49)持續(xù)到40周齡。對照小鼠每周一次給予0.05mLPBS。預(yù)采血和每月一次采血用于自身抗體譜，每周一次測量蛋白尿水平。測量重量，觀察到體重25%降低后使動物安樂死。M49寡核苷酸處理導致蛋白尿水平降低(a),致死率的完全抑制(b),以及抗-dsDNA抗體水平的降低(c),所述抗體水平由購買的ELISA試劑盒在研究的終點(處理的第20周)所測定。圖49顯示與重組CD40配體和寡核苷酸M49組合一起孵育的人B細胞的降低的激活。從健康供者血液中純化的人B細胞與單獨的重組CD40配體孵育或存在1劑量的抑制性寡核苷酸(118或M49)時用重組CD40配體孵育。24小時孵育后從培養(yǎng)基移除上清液，通過ELISA測定IL-6蛋白水平。發(fā)明詳述詳細描述本發(fā)明之前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于特定的制劑或處理參數(shù)，它們當然可以變化。還應(yīng)理解本文使用的術(shù)語目的在于僅描述本發(fā)明特定的實施方案，而不是旨在限定。定義本文使用的"核酸"和"多核苷酸"是同義的，指核苷酸的多聚物(例如，脫氧核糖核香酸、核糖核苷酸、或其類似物，包括單鏈或雙鏈形式)。本文使用的"寡核苷酸"指長約6-175或更多個核苷酸的核酸的子集。本發(fā)明典型的寡核苷酸長達約14高至50、75或100個核苷酸。寡核苷酸指寡聚核糖核香酸和寡聚脫氧核糖核苷酸兩者，后者在下文中稱作ODN。ODN包括寡核苷酸和其他含有聚合物的有機堿。核苷酸是包括連接到磷酸基團和可互換的有機堿上的糖(優(yōu)選核糖或脫氧核糖)的分子，所述可互換的有機堿是可取代的噤呤(鳥嘌呤(G)、腺噤呤(A)或次黃。票呤(I))或可取代的嘧啶(胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(c)或尿嘧啶cu))。免疫調(diào)節(jié)序列(IMS)。本文使用的"免疫調(diào)節(jié)序列"或"IMS"指核酸的核苷酸序列或能夠調(diào)節(jié)自身免疫性疾病或炎性疾病的核酸的區(qū)域。IMS例如可以是寡核苷酸或并入載體例如表達載體的核苷酸序列。本發(fā)明IMS通常長約14-50個核苷酸，更普遍的約15-30個核苷酸。本文使用的"免疫調(diào)節(jié)核酸"指包括一個或多個IMS的核酸分子。術(shù)語IMS與免疫抑制序列(IIS)可互換使用。在兩個或多個核酸或肽序列情況下的術(shù)語"一致性"或"百分比一致性，，指兩個或多個序列或子序列，當使用諸如例如PILEUP或BLAST的序列比較算法或類似算法(參見例如HigginsandSharp,C贏OS，5:151-153,1989;Altschul"a/'/Mo/.編，215:403-410,1990)測量，比較和比對最大一致性時，它們是相同的或具有相同的氨基酸殘基或核苷酸的特定百分比?？蛇M行用于比較的最佳序列比對，例如通過Smith&Waterman,A/v.々少/.Ma仇，2:482,1981的局部同源性算法，Needleman&Wunsch，乂Mo/.5/o/.，48:443，1970的同源性比對算法，Pearson&Lipman,/Voc,7Vaf7.Jcadt75^,85:2444,1988的4叟索相似性方法，這些算法的計算機化實現(xiàn)(在威斯康星遺傳性軟件包中的GAP,BESTFIT，F(xiàn)ASTA和TFASTA，遺傳性計算機組，575ScienceDr.,Madison,WI),或通過目測(通常參見Ausubel""/.,上述)。用于兩個核酸或多肽的短語"大體上一致的"指兩個或多個序列或子序列，當比較和比對最大一致性時，它們具有至少60%、優(yōu)選至少約70%、更優(yōu)選至少約80%和最優(yōu)選至少約90%或至少約95%、97%或99%的核苷酸或氨基酸殘基一致性。優(yōu)選地，大體上一致存在于長至少約50個殘基的序列區(qū)，更優(yōu)選至少約100個殘基的區(qū)域，最優(yōu)選所述序列至少約150個殘基大體上一致。在優(yōu)選的實施方案中，所述序列在給定的核酸或多肽全長上大體上一致。在本發(fā)明某些實施方案中，核酸或多肽(例如自身蛋白、自身多肽或自身肽，或編碼自身蛋白、自身多肽或自身肽的核酸)與本文公開的特定核酸或多肽大體上一致。本文使用的"自身分子"包括自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白。"一個或多個自身蛋白、自身多肽或自身肽、或片斷或衍生物"包括動物基因組內(nèi)被編碼的一個或多個蛋白、多肽或肽；在動物中產(chǎn)生或生成；在動物的生命過程中某些時間被翻譯后修飾；或非生理學存在于動物中。術(shù)語"非生理學的(non-physiological)""非生理學地(non-physiologically)"當用于描述本發(fā)明自身蛋白、自身多肽或自身肽時，指偏離或背離這些自身蛋白、自身多肽或自身肽在動物中的正常作用或過程。本發(fā)明一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽還稱為自身抗原。當提及自身蛋白、自身多肽或自身肽是"與疾病相關(guān)的"或"與疾病有關(guān)的"，應(yīng)理解為是指所述自身蛋白、自身多肽或自身肽可在形式或結(jié)構(gòu)上被修飾，因此不能進行其生理學作用或過程；或通過誘導病理有關(guān)；和/或成為病理生理學過程的靶標。例如，在自身免疫性疾病中，免疫系統(tǒng)異常攻擊自身分子，如自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白，造成表達和/或存在該自身分子的細胞和組織的損傷和機能障礙。可選擇地，所述自身分子本身可在非生理的水平下表達和/或非生理地發(fā)揮作用。例如在神經(jīng)退化疾病中，自身蛋白被異常表達，并且在腦內(nèi)以損傷形式聚集，從而造成神經(jīng)機能障礙。在其他情況下，該自身蛋白會加重不希望的狀態(tài)或過程。例如在骨關(guān)節(jié)炎中，包含膠原酶和基質(zhì)金屬蛋白酶的自身蛋白會異常地降解覆蓋于關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)面的軟骨。一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的翻譯后修飾的實例是糖基化、添加脂質(zhì)基團、磷酸酶的脫磷酸作用、添加二曱基精氨酸殘基、通過肽基精氨酸脫亞氨酸酶(PAD)將微絲聚集蛋白和纖維蛋白瓜氨酸化；a卩-晶體蛋白的磷酸化、MBP的瓜氨酸化；以及caspase(天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶)和粒酶作用的SLE自身抗原蛋白水解。在免疫學上，認為自身蛋白、自身多肽或自身肽都是宿主自身抗原，并且在正常生理情況下，宿主免疫系統(tǒng)會通過命名為"免疫耐受，，的過程清除、滅活、或失活具有識別所述自身抗原能力的免疫細胞來忽略自身蛋白、自身多肽或自身肽。自身蛋白、自身多肽或自身肽不包括如下免疫蛋白、多肽或肽出于調(diào)節(jié)免疫功能的目的專門由免疫系統(tǒng)的細胞生理上表達的分子。免疫系統(tǒng)是防御機制，該防御機制提供的手段可對居35住在動物界的無數(shù)的潛在致病微生物進行快速、高度特異且是保護性的反應(yīng)。一個或多個免疫蛋白、多肽或肽的實例是如下蛋白包括T細胞受體、免疫球蛋白、包括I型白細胞介素細胞因子、和包括干擾素與IL-10的II型細胞因子、TNF-a、淋巴毒素、和諸如巨噬細胞炎性蛋白-la和卩、單核細胞-趨化性蛋白和RANTES的趨化因子、以及諸如Fas-配體的直接參與免疫功能的其他分子。本發(fā)明的自身蛋白、自身多肽或自身肽包括某些免疫蛋白、多肽或肽，它們是I類MHC膜糖蛋白、II類MHC糖蛋白和骨橋蛋白。自身蛋白、自身多肽或自身肽不包括如下蛋白、多肽和肽由于造成代謝或功能失調(diào)的遺傳性或獲得性缺陷個體完全或基本上缺失的，并通過給予所述蛋白、多肽或肽或者通過給予編碼所述蛋白、多肽或肽的多核苷酸(基因治療)替代的蛋白、多肽和肽。這些病癥的實例包括杜興(氏)(Duche皿e)肌營養(yǎng)不良、貝克爾(氏)(Becker)肌營養(yǎng)不良、嚢腫性纖維化、苯丙酮酸尿癥、半乳糖血癥、槭糖尿病以及高胱氨酸尿。自身蛋白、自身多肽或自身肽不包括下述細胞特異且專門表達的蛋白、多肽和肽，即細胞具有可將它們與其正常對應(yīng)物明顯區(qū)分的特性，其包括(l)克隆性，它代表遺傳改造后的單一細胞的增殖，從而形成惡性細胞克隆，(2)自律性，它表示對生長的不適當調(diào)控，以及(3)退變性，或正常協(xié)同細胞分化的缺乏。具有前述三條標準之一條或多條的細胞稱作腫瘤細胞、癌細胞或惡性細胞。"質(zhì)粒"和"載體"以小寫p及其后的字母和/或數(shù)字命名。所述起始質(zhì)?？蓮纳虡I(yè)渠道獲得、非限制地向公眾開放，或者可以根據(jù)公開的程序用可獲得的質(zhì)粒構(gòu)建。此外，與描述質(zhì)粒等同的質(zhì)粒為本領(lǐng)域已知，并且對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。"載體"或"質(zhì)粒"指通過包括適當?shù)目刂坪驼{(diào)節(jié)元件存在于宿主細胞時能進行復(fù)制的任何遺傳成分。為達到本發(fā)明的目的，載體或質(zhì)粒的實例包括，但不限于，質(zhì)粒、噬菌體、轉(zhuǎn)座子、粘粒、病毒等。本文使用的"棵核酸"指沒有被包裝的核酸分子(諸如例如在病毒顆粒、細菌細胞或脂質(zhì)體內(nèi))，不與結(jié)合到核酸的分子(諸如例如DEAE-葡聚糖)復(fù)合，也不偶聯(lián)到核酸上(例如金顆粒或基于多糖的支持物)。疾病或病癥的"治療(treating)"、"治療(treatment)"或"療法"指減慢、停止或逆轉(zhuǎn)已建立的疾病的進展，其證據(jù)為通過給予本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)核酸，減少、停止或去除了臨床上或診斷上的癥狀。"已建立的疾病"指免疫系統(tǒng)是活躍的，引起受影響的組織發(fā)炎及白細胞和淋巴細胞的異常滲入。疾病或病癥的"治療(treating)"、"治療(treatment)"或"療法"還指通過免疫調(diào)節(jié)核酸與自身分子的組合給藥，減慢、停止或逆轉(zhuǎn)疾病的進展。本文使用的"自身分子"指自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白。疾病或病癥的"治療(treating)"、"治療(treatment)"或"療法"還指通過免疫調(diào)節(jié)核酸與免疫調(diào)節(jié)治療劑的組合給藥，減慢、停止或逆轉(zhuǎn)疾病的進展。當提及包括免疫調(diào)節(jié)核酸與另外的化合物如編碼自身蛋白、自身肽或自身多肽的DNA的治療方案時，"組合"包括如下的兩個或多個化合物分別給藥但物理上以小瓶中共給藥被一起給予、例如通過偶聯(lián)連接到一起、由一個或多個載體上的DNA編碼、或在不同部位分別給藥但時間上如此接近在一起以致于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員認為被"組合"給予。如本文所使用的，改善疾病和治療疾病是等同的。本發(fā)明上下文使用的疾病或病癥的"預(yù)防(preventing)"、"預(yù)防(prophylaxis)",或"預(yù)防(prevention)"指單獨或與本文所述的另外的化合物組合給予免疫調(diào)節(jié)序列，以預(yù)防疾病或病癥，或者疾病或病癥的一些或全部癥狀的出現(xiàn)或發(fā)作，或者減小疾病或病癥發(fā)作的可能性。本發(fā)明上下文J吏用的疾病或病癥的"預(yù)防(preventing)"、"預(yù)防(prophylaxis)",或"預(yù)防(prevention)"指將免疫調(diào)節(jié)序列與自身分子組合給藥，以預(yù)防疾病或病癥，或者疾病或病癥的一些或全部癥狀的出現(xiàn)或發(fā)作，或者減小疾病或病癥發(fā)作的可能性。本發(fā)明上下文使用的疾病或病癥的"預(yù)防(preventing)"、"預(yù)防(prophylaxis)"、或"預(yù)防(prevention)"指將免疫調(diào)節(jié)序列與免疫調(diào)節(jié)治療劑組合給藥，以預(yù)防疾病或病癥，或者疾病或病癥的一些或全部癥狀的出現(xiàn)或發(fā)作，或者減小疾病或病癥發(fā)作的可能性。本文使用的"免疫調(diào)節(jié)治療劑"指這樣的分子當給予個體時具有免疫調(diào)節(jié)或調(diào)控功能。這樣的免疫調(diào)節(jié)治療劑包括細胞因子、趨化因子、類固醇、或針對抗原或自身抗原的抗體。"個體，，指任何動物，例如，人、非人靈長類、馬、母牛、狗、貓、小鼠、大鼠、豚鼠或兔。自身免疫性疾病身分子相關(guān)的自身免疫性疾病的一些實例列于下表并在下文描述，所述自身分子包括自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽、糖蛋白或非生理學存在于動物中的自身分子衍生物。表1_自身免疫性疾病靶向的組織與自身免疫性疾病相關(guān)的自身蛋白多發(fā)性硬化中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓磷脂堿性蛋白、蛋白脂質(zhì)蛋白、髓磷脂結(jié)合的糖蛋白、環(huán)核普酸磷酸二酯酶、髓磷脂結(jié)合的糖蛋白、髓磷脂結(jié)合的少突細胞堿性蛋白、a-B-晶體蛋白、髓磷脂少突細胞糖蛋白、格-巴二氏(GuillianBarre)綜合征胰島素依賴的糖尿病外周神經(jīng)系統(tǒng)外周髓磷脂蛋白I及其他胰腺胰島內(nèi)的p細胞風濕性關(guān)節(jié)炎滑膜關(guān)節(jié)自身免疫性葡萄膜炎虹膜、葡萄膜原發(fā)性膽汁性肝硬化自身免疫性肝炎尋常天皰齊重癥肌無力肝的膽道系統(tǒng)肝皮膚酪氨酸磷酸酶IA2、IA-2(3;谷氨酸脫羧酶(65kDa和67kDa形式)、羧肽酶H、胰島i、胰島素原、熱激蛋白、膠質(zhì)瘤(glima)38、胰^細胞抗原69KDa、p52、胰島細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運體GLUT-2免疫球蛋白、纖維蛋白、微絲聚集蛋白、I、II、III、IV、V、IX和XI型膠原蛋白、GP-39、hnRNPS-抗原、感光細胞間維生素A類結(jié)合蛋白(IRBP)、視紫質(zhì)、視覺恢復(fù)蛋白丙酮酸脫氫酶復(fù)合物(2-酮酸脫氫酶)肝細胞抗原、細胞色素P450橋粒芯糖蛋白-1、橋粒芯糖蛋白-3及其他神經(jīng)-肌肉連接點乙酰膽堿受體自身免疫性疾病把向的組織與自身免疫性疾病相關(guān)的自身蛋白自身免疫性胃炎胃細力包/壁細月包H"7K+ATP酶、內(nèi)因子惡性貧血胃內(nèi)因子多肌炎肌肉組氨?；鵷RNA合成酶、其他合成酶、其他核抗原自身免疫性曱狀腺炎曱狀腺曱狀腺球蛋白、曱狀腺過氧化物酶格雷夫斯病曱狀腺促曱狀腺激素受體牛皮褲皮膚未知白瘋風皮膚酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白-2系統(tǒng)性紅斑狼掩全身性核抗原DNA、組蛋白類、核糖核蛋白類乳糜瀉小腸轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶/發(fā)^硬^:多發(fā)性硬化(MS)是最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)脫髓磷脂病癥，并且影響350,000名美國人和一百萬的世界人口。參見例如CohenandRudick(eds.2007)Mw/印/e5Werow、77zerapew"cs(多發(fā)性硬化治療)(第三版)InformaHealthcare,ISBN-10:1841845256,ISBN-13:978-1841845258;MatthewsandMargaretRice-Oxley(2006)Mw/^/e5Weras&:77zeFac"(多發(fā)性石更化現(xiàn)狀)(OxfordMedicalPublication第四版)OxfordUniversityPress,USA,ISBN-10:0198508980:ISBN-13:978-0198508984;Cook(ed.2006)Zfa"必ooA:o/MwWp/e5Weraws(多發(fā)性硬化手冊)(NeurologicalDiseaseandTherapy(神經(jīng)學疾病和治療)，第四版)InformaHealthcare,ISBN-10:1574448277，ISBN-13:978-1574448276;Compston，etal.(2005)Mc辟z力ekMw/一eSc/謹/s(麥卡爾平多發(fā)性硬化)(第四版)ChurchillLivingstone,ISBN-10:044307271X,ISBN-13:978-0443072710;BurksandJohnson(eds2000)Mw/印/e5Wems7's:MWca/MawagemewZ,We/^&7"a"ow(多發(fā)性硬化診斷、醫(yī)學治療及康復(fù))DemosMedicalPublishingISBN-10:1888799358，ISBN誦13:978-1888799354;Waxman(2005)Mw//z>/eSc/erawi爿s^iVewowa/D&eowe(作為神經(jīng)元疾病的多發(fā)性硬化)AcademicPressISBN-10:0127387617，ISBN-13:978國0127387611;Filippi，etal.(eds.)MagwWc^sow朋ce5^e"msco/^MW">/e6Wwoy^(多發(fā)性硬化中的-茲共振波譜分析)(神經(jīng)系統(tǒng)科學中的主題)Springer,ISBN畫10:8847001234，ISBN-13:978-8847001237;Herndon(ed.2003)Mw/印/e5Wems7's.'7mww"o/ogy'Pa/20/ogy戶W/w;/y^o/ogv(多發(fā)性硬化免疫學、病理性、病理生理學)DemosMedicalPublishing,ISBN-10:1888799625，ISBN-13:978-1888799620;Costello，etal.(2007)"Combinationtherapiesformultiplesclerosis:scientificrationale,clinicaltrials,andclinicalpractice(多發(fā)性硬化的組合療法科學原理、臨床試驗及臨床實踐)"O/wO//".TVewra/.20(3):281-285,PMID:17495621;BurtonandO'connor(2007)"NovelOralAgentsforMultipleSclerosis(多發(fā)性硬化的新口服劑)"Cm".7Vewra/.iVewros"..W印.7(3):223陽230，PMID:17488588;CorrealeandVilla(2007)"Theblood-brain-barrierinmultiplesclerosis:functionalrolesandtherapeutictargeting(多發(fā)性硬化的血腦屏障功能性作用及治療劑靶向)"」咖.麵畫Xv40(2):148隱60，PMID:17453713;DeStefano，etal.(2007)"Measuringbrainatrophyinmultiplesclerosis(多發(fā)性硬化中測量腦萎縮)"/A^wo/mag/"g17Suppl1:10S-15S，PMID:17425728;Neema，etal.(2007)"Tl-andT2-basedMRImeasuresofdiffusegraymatterandwhitematterdamageinpatientswithmultiplesclerosis(多發(fā)性硬化患者中彌漫性灰質(zhì)和白質(zhì)損傷的基于Tl和T2的MRI測量)"J臉畫謹g/Mg17Suppl1:16S-21S,PMID:17425729;DeStefanoandFilippi(2007)"MRspectroscopyinmultiplesclerosis(多發(fā)性硬化中的MR光譜學)"iVet/ra/magz'"g17Suppl1:31S-35S,PMID:17425732;以及ComabellaandMartin(2007)"Genomicsinmultiplesclerosis-Currentstateandfuturedirections(多發(fā)性硬化當前狀態(tài)和將來趨向的基因組學)"從7Veww>wmmo/.印刷前電子版]PMID:17400297。癥狀發(fā)作通常發(fā)生在20到40歲之間，并且表現(xiàn)為單側(cè)視覺損傷、肌無力、感覺異常、運動失調(diào)、眩暈癥、小便失禁、構(gòu)音障礙或精神障礙的(按頻率降低的順序)急性或亞急性發(fā)作。這些癥狀由脫髓磷脂的病灶性損害導致，其既造成歸因于軸突傳導放緩的負性傳導異常，還造成歸因于異位沖動產(chǎn)生的正性傳導異常(例如，萊爾米特(Lhermitte)癥)。對MS的診斷基于病史，包括至少兩次明顯的時間上隔開的神經(jīng)失調(diào)的發(fā)作、產(chǎn)生神經(jīng)失調(diào)的客觀臨床跡象、和涉及CNS白質(zhì)的分離區(qū)域。實驗室研究提供了支持MS診斷的另外的客觀證據(jù)，所述研究包括CNS白質(zhì)損害的核磁共振成像(MRI)、IgG腦脊液(CSF)寡克隆帶以及引起的異常反應(yīng)。雖然大多數(shù)患者會經(jīng)歷漸進的復(fù)發(fā)緩解病程，但是MS的臨床過程在個體間變化極大，其范圍可以從限于一生中的數(shù)次溫和發(fā)作到爆發(fā)性的持續(xù)進行性疾病。具有分泌IFN-y能力的髓磷脂-自身反應(yīng)性T細胞數(shù)量的增加與MS和EAE的發(fā)病機理相關(guān)。^濕^^，克'風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是慢性自身免疫性炎性滑膜炎，影響著世界人口的0.8%。它由造成侵蝕性關(guān)節(jié)破壞的慢性炎性滑膜炎來表征。參見，例如St.Clair,etal.(2004)i^ewwato^JW/zW^(風濕性關(guān)節(jié)炎)LippincottWilliams&Wilkins,ISBN-10:0781741491，ISBN-13:978-0781741491;Firestein，etal.(eds.2006)臉謂a/o/"W/z函(風濕性關(guān)節(jié)炎)(2dEd.)OxfordUniversityPress,USA,ISBN-10:0198566301,ISBN-13:978-0198566304;Emery,etal.(2007)"Evidence-basedreviewofbiologicmarkersasindicatorsofdiseaseprogressionandremissioninrheumatoidarthritis(生物標志物作為風濕性關(guān)節(jié)炎中疾病進展和緩解的指示劑的基于跡象的綜述)"i/2wmato/./".[印刷前電子版]PMID:17505829;Nigrovic,etal.(2007)"Synovialmastcells:roleinacuteandchronicarthritis(滑液肥大細胞在急性和慢性關(guān)節(jié)炎中的作用)"Immunol.Rev.217(1):19-37,PMID:17498049;andManuel,etal.(2007)"Dendriticcellsinautoimmunediseasesandneuroinflammatorydisorders(在自身免疫性疾病和神經(jīng)炎癥病癥中的樹突細胞)"12:4315-335,PMID:17485377。RA由T細胞、B細胞和巨噬細胞介導。證明T細胞在RA中起關(guān)4建作用的證據(jù)包括l)侵潤滑膜的CD4+T細胞的主導性，2)與使用諸如環(huán)孢霉素的藥物抑制T細胞功能相關(guān)的臨床改善，以及3)RA與某些HLA-DR等位基因間的相關(guān)性。與RA相關(guān)的所述HLA-DR等位基因包括與p鏈第三高變區(qū)的位點67-74相似的氨基酸序列，所述位點參與肽結(jié)合與呈遞到T細胞。RA由識別自身分子的自身反應(yīng)性T細胞介導，所述自身分子如自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白、或在宿主含滑液的關(guān)節(jié)內(nèi)或在別處存在的未鑒定的自身生物分子。RA中靶向的本發(fā)明的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽(也被稱為自身抗原)包括源自II型膠原蛋白的表位；hnRNP;A2/RA33;Sa;微絲聚集蛋白；角蛋白；瓜氨酸；包括gp39的軟骨蛋白；I、III、IV、V、IX、XI型膠原蛋白；HSP-65/60;IgM(風濕性因子)；RNA聚合酶；hnRNP-Bl;hnRNP-D;心磷脂；醛縮酶A;瓜氨酸修飾的微絲聚集蛋白和纖維蛋白。已在高比例的RA患者的血清中鑒定到識別微絲聚集蛋白肽的自身抗體，所述微絲聚集蛋白肽包含經(jīng)修飾的精氨酸殘基(脫亞胺基以形成瓜氨酸)。一些患者中，自身反應(yīng)性T和B細胞反應(yīng)都針對同樣的免疫顯性的II型膠原蛋白(CII)肽257-270。腐房f^謝的邀、豕病人I型或胰島素依賴的糖尿病(IDDM)的特征是郎格罕氏(Langerhans)胰島內(nèi)P細胞的自身免疫性破壞。去除(3細胞導致不能調(diào)節(jié)血糖水平。參見，例如Sperling(ed.2001)7>;e7Z)&6etey/"C7/"/ca/Prac"ce(臨床實踐中的I型糖尿病)(當代內(nèi)分泌學)HumanaPress,ISBN-10:0896039315,ISBN-13:978-0896039315;Eisenbarth(ed.2000);T^/e/D/a6efes:Mo/ecw/ar'CW/"/arC7/m'ca//mmww/ogy(I型糖尿病分子、細胞和臨床免疫學)(實驗醫(yī)學與生物學進展)Springer,ISBN隱10:0306478714，ISBN-13:978-0306478710;WongandWen(2005)"Bcellsinautoimmunediabetes(自身免疫性糖尿病中的B細胞)"觸他^.2(3):121-135，Epub2005Nov10,PMID:17491687;Sia(2004)"Autoimmunediabetes:ongoingdevelopmentofimmunologicalinterventionstrategiestargeteddirectlyagainstautoreactiveTcells(自身免疫性糖尿病直接靶向自身反應(yīng)性T細胞的免疫學干預(yù)策略的進展)"Z)zW)W.1(1):9-17，Epub2004May10,PMID:17491660;Triplitt(2007)"Newtechnologiesandtherapiesinthemanagementofdiabetes(治療糖尿病中的新技術(shù)和療法)"爿m.M朋ag.O^e13(2Suppl):S47-54，PMID:17417933;以及Skyler(2007)"Predictionandpreventionoftype1diabetes:progress,problems,andprospects(1型糖尿病的預(yù)測和預(yù)防進展、問題與展望)"C7/w.尸/z畫,/.81(5):768-71，Epub2007Mar28，PMID:17392722。血糖水平升高到特定水平(通常約250mg/dl)之上時，即發(fā)生顯著性糖尿病。人類糖尿病發(fā)作前有一段長的癥狀發(fā)生前時期。該時期內(nèi)，胰腺(3細胞功能會漸漸喪失。抗胰島素、谷氨酸脫羧酶和酪氨酸磷酸酶IA2(IA2)(每個為本發(fā)明自身蛋白、自身多肽或自身肽的實例)的自身抗體的存在暗示發(fā)生了疾病。癥狀發(fā)生前時期可被評價的標志物是胰腺內(nèi)胰島炎的存在；胰島細胞抗體、胰島細胞表面抗體的水平和頻率；MHCII類分子在胰腺卩細胞的異常表達；血糖濃度和胰島素的血漿濃度。如胰島素濃度的降低一樣，胰腺T淋巴細胞、胰島細胞抗體的數(shù)量增加和血糖升高指示所述疾病。非肥胖糖尿病(NOD)小鼠作為動物模型，具有許多與人IDDM相同的臨床上、免疫學上和組織病理學上的特征。NOD小鼠自發(fā)地發(fā)生胰島炎性和對所述P細胞的破壞，其導致高血糖和顯著性糖尿病。糖尿病的發(fā)生需要CD4+和CD8+兩種T細胞，盡管每一種的作用尚不清楚。已表明，在耐受條件下，給予NOD小鼠作為蛋白的胰島素或GAD,能預(yù)防疾病和下調(diào)針對其他一個或多個自身抗原的反應(yīng)。重要的是，NOD小鼠在清潔的無病原體的小鼠飼養(yǎng)室及在無菌環(huán)境中發(fā)生自身免疫性糖尿病。當前通過監(jiān)控血糖水平治療人IDDM，以指導重組胰島素的注射或基于泵的遞送。膳食和運動方式有助于達到對血糖的適當控制?！?^瘦^薪萄if^:自身免疫性葡萄膜炎是眼部自身免疫性疾病，據(jù)估計影響400,000人，并且美國發(fā)病率為每年新增43,000例。當前對自身免疫性葡萄膜炎的治療使用類固醇、諸如曱氨蝶呤和環(huán)孢霉素的免疫抑制劑、靜脈免疫球蛋白以及TNFa-拮抗物。參見，例如PleyerandMondino(eds.2004)UveitisandImmunologicalDisorders(葡43萄膜炎和免疫學病癥)(眼科學基礎(chǔ))Springer,ISBN-10:3540200452，ISBN-13:978-3540200451;Vallochi，etal.(2007)"Theroleofcytokinesintheregulationofocularautoimmuneinflammation(細月包因子在調(diào)節(jié)目艮睛自身免疫性炎癥中的作用)"G"raw/Z尸ac/or"ev.18(1-2):135-141,Epub2007Mar8,PMID:17349814;BoraandKaplan(2007)"Intraoculardiseases陽anterioruveitis(目艮內(nèi)疾病一前葡萄膜炎)"C7z縫/扁歸/.蓋，92:213-20,PMID:17264497;以及Levinson(2007)"Immunogeneticsofocularinflammatorydisease(目艮睛炎癥疾病的免疫遺傳學)"77扁"""'g綴69(2):105匿112，PMID:17257311。實驗性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)是T細胞介導的自身免疫性疾病，該疾病以神經(jīng)視網(wǎng)膜、葡萄膜及眼內(nèi)相關(guān)組織為靶點。EAU具有許多與人自身免疫性葡萄膜炎相同的臨床上和免疫學上的特征，并且由乳化于完全弗氏佐劑(CFA)的葡萄膜炎肽的外周給藥而引發(fā)。在人自身免疫性葡萄膜炎中，自身免疫反應(yīng)靶向的自身蛋白可以包括S-抗原、感光細胞間維生素A類結(jié)合蛋白(IRBP)、視紫質(zhì)和視覺恢復(fù)蛋白。^發(fā)^膽y,/i^f硬化原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)是器官特異性的自身免疫性疾病，主要影響40-60歲之間的女性。在該組中報導的發(fā)病率接近1/1000。PBC的特征是內(nèi)襯于小的肝內(nèi)膽管的肝內(nèi)膽管上皮細胞(IBEC)的進行性破壞。這導致對膽汁分泌的阻礙與干擾，造成最終的硬化。已報道由上皮襯里/分泌系統(tǒng)損壞表征的其他自身免疫性疾病的相關(guān)性，所述疾病包括斯耶格倫(氏)綜合征、CREST綜合征、自身免疫性曱狀腺疾病以及風濕性關(guān)節(jié)炎。對驅(qū)動一個或多個抗原的關(guān)注已集中在線粒體上超過50年，導致抗線粒體抗體(AMA)的發(fā)現(xiàn)(Gershwina/.，/mmww/Aev174:210-225,2000);(MackayW/附ww"o/i^v174:226-237，2000)。AMA很快成為實-瞼室診斷PBC的基礎(chǔ)，它存在于90-95%的臨床癥狀出現(xiàn)很久以前的患者血清中。線粒體內(nèi)的自身抗原性反應(yīng)性命名為Ml和M2。M2反應(yīng)性指向抗48-74kDa組分家族。M2代表2-酮酸脫氫酶復(fù)合體(2-OADC)的多種自身抗原性亞單位，并且是本發(fā)明所述自身蛋白、自身多肽或自身肽的另一實例。鑒定PBC發(fā)病機理中丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDC)抗原作用的研究支持了這樣的觀念PDC在所述疾病的引發(fā)中起中心作用(Gershwina/，/w廳wo/Wev174:210-225，2000);(Mackay"a/"/附聽加/iev174:226-237,2000))。在PBC中，95%的案例的最頻繁反應(yīng)性是E274kDa亞基，它屬于PDC-E2。所存在的相關(guān)但明顯不同的復(fù)合體包括2-酮戊二酸脫氬酶復(fù)合體(0GDC)和支化鏈(BC)2-OADC。三種組成型酶(E1、E2、E3)有助于催化功能，該催化功能為將2-酮酸底物轉(zhuǎn)換成?；o酶A(CoA)，同時將NAD+還原成NADH。哺乳動物PDC包括另外的組分，稱蛋白X或E-3結(jié)合蛋白(E3BP)。在PBC患者中，所述的主要的抗原反應(yīng)針對PDC-E2和E3BP。E2多肽包含兩個串聯(lián)重復(fù)的硫辛酰結(jié)構(gòu)域，而E3BP具有單一的硫辛酰結(jié)構(gòu)域。用糖皮質(zhì)激素和包括曱氨蝶呤和環(huán)孢霉素A的免疫抑制劑治療PBC。參見，例如SherlockandDooley(2002)iXse"s&yo/Ae丄z'vercS;Bz'/fary5^We附(肝月旦系統(tǒng)的疾病)(第11版)BlackwellPub.，ISBN-10:0632055820,ISBN-13:978-0632055821;Boyer,etal.(eds.2001)丄/verCz7r/zay^Z)eve/o戸e"f(肝石更化及其進展)(FalkSymposium,Volume115)Springer,ISBN-10:0792387600,ISBN-13:978-0792387602;Crispe(ed.2001)TZ^mp/zoqyfesZiver../mmimofe/o/ogy(肝中T淋巴細胞免疫生物學)，PathologyandHostDefenseWiley-Liss，ISBN-10:047119218X,ISBN-13:978-0471192183;Lack(2001)/W70/ogyo/尸薩固s,嚢、肝外膽道及壺腹區(qū)的病理學)(內(nèi)科學)OxfordUniversityPress,USA,ISBN-10:0195133927，ISBN-13:978-0195133929;Gong,etal.(2007)"UrsodeoxycholicAcidforPatientsWithPrimaryBiliaryCirrhosis:AnUpdatedSystematicReviewandMeta-AnalysisofRandomizedClinicalTrialsUsingBayesianApproachasSensitivityAnalyses(原發(fā)性膽汁性肝硬化患者的熊去氧膽酸使用貝葉斯方法對隨機化臨床試驗以敏感性分析的最新的系統(tǒng)性綜述和總和數(shù)據(jù)分析)"Jm.GasZraewera/.[印刷前電子版]PMID:17459023;LazaridisandTalwalkar(2007)"ClinicalEpidemiologyofPrimaryBiliaryCirrhosis:Incidence,Prevalence,andImpactofTherapy(原發(fā)性月旦汁性肝石更化的臨床流行病學發(fā)病率、影響及療效)"C//".G^Wraew^ra/.41(5):494-500,PMID:17450033;以及Sorokin，etal.(2007)"Primarybiliarycirrhosis,hyperlipidemia,andatheroscleroticrisk:Asystematicreview(原發(fā)性膽汁性肝硬化、高脂血癥及動脈粥樣硬化風險系統(tǒng)性綜述)"A/zemsc/ems^[印刷前電子版]PMID:17240380。實驗性自身免疫性膽管炎(EAC)的鼠模型采用在SJL/J雌性小鼠中使用哺乳動物PDC進行腹膜內(nèi)(i.p.)致敏化，引發(fā)非化膿的破壞性膽管炎(NSDC)及AMA的產(chǎn)生(Jones,/C7/"尸aAo/53:813-21,2000)。^勉々^"名瘦^^^與初^^一個成多個冷;#蛋冷、重癥肌無力的自身抗原可以包括乙酰膽堿受體內(nèi)的表位。尋常天皰瘡中靶向的自身抗原可以包括橋粒芯糖蛋白-3。斯耶格倫(氏)綜合征抗原可以包括SSA(Ro);SSB(La);以及胞襯蛋白。尋常天皰瘡的主要自身抗原可以包括橋粒芯糖蛋白-3。肌炎組可以包括tRNA合成酶(例如，蘇氨酰基、組氨?；?、丙氨?；?、異亮氨酰基和甘氨?；?；Ku;Scl;SSA;Ul-Sn-核糖核蛋白；Mi-l;Mi-l;Jo-l;Ku;以及SRP。硬皮病組可以包括Scl-70;著絲粒；Ul-Sn-核糖核蛋白；以及微絲聚集蛋白。惡性貧血組可以包括內(nèi)因子；以及胃H/KATP酶的糖蛋白p亞基。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的表位抗原可以包括DNA;磷脂；核抗原；Ul核糖核蛋白；Ro60(SS-A);Ro52(SS-A);La(SS-B);4丐網(wǎng)蛋白；Grp78;Scl-70;組蛋白；Sm蛋白；絲氨酸-精氨酸剪接因子以及染色質(zhì)，等等。在格雷夫斯病中，表位可以包括Na+A—同向轉(zhuǎn)運；促曱狀腺素受體；Tg;以及TPO。與非生理學存在于動物中的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)的其他疾病的一些實例列于下表并描述如下。f^，^^遂/f^^，病.'骨關(guān)節(jié)炎(OA)影響年齡為60歲人的30%，并且是最常見的人關(guān)節(jié)病。骨關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)為滑膜關(guān)節(jié)變性和衰退，并涉及關(guān)節(jié)軟骨的損壞。46軟骨主要由蛋白多糖和膠原質(zhì)組成，蛋白多糖提供了硬度和承受負荷的能力，膠原質(zhì)提供了張力和對純粹強度的抗性。軟骨細胞周轉(zhuǎn)并重新塑造正常的軟骨通過產(chǎn)生和分泌潛在活性膠原酶、潛在基質(zhì)降解酶、潛在明膠酶、組織纖溶酶原激活劑和其他相關(guān)的酶，它們中每一個單獨的或其組合是本發(fā)明的自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白。包括金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)和纖溶酶原激活物抑制劑(PAI-1)的一些抑制劑也通過軟骨細胞產(chǎn)生，并且限制中性金屬蛋白酶、組織型纖溶酶原激活劑和其他酶的降解活性。這些降解酶和抑制劑單獨的或其組合是本發(fā)明的一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽。這些降解酶和抑制劑協(xié)同重新塑造和維持正常軟骨。在OA中，該過程的調(diào)節(jié)異常導致軟骨的變質(zhì)和降解。大多數(shù)OA患者還具有某些程度的炎癥，包括關(guān)節(jié)溫熱和肺脹。早期OA中在膠原纖維的排列和大小上有異常改變。金屬蛋白酶、組織蛋白酶、纖溶酶和其他自身分子單獨的或其組合是本發(fā)明的自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白，造成顯著的軟骨基質(zhì)損失。最初增加的軟骨細胞產(chǎn)生蛋白聚糖和軟骨導致關(guān)節(jié)軟骨比正常的厚。關(guān)節(jié)軟骨隨后由于降解酶的作用變薄變軟，所述降解酶包括膠原酶、基質(zhì)降解酶、明膠酶、組織型纖溶酶原激活劑和其他相關(guān)的酶，這些降解酶單獨的或其組合是本發(fā)明的自身分子，如自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白。諸如IL-1、組織蛋白酶和纖溶酶的炎性分子促進軟骨的變性和降解，這或;個自身抗原、"自i蛋白、自身狀、、自身多狀、自身糖脂、、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白。較薄和較軟的軟骨及易受物理應(yīng)力的損傷。這些因子導致軟骨表面的降解和垂直裂縫的形成(纖維性顫動)。軟骨表面的侵蝕形成，并在末期疾病中延伸至骨。軟骨細胞最初復(fù)制并形成群，在末期軟骨是細胞過少的。骨改型和肥大是OA的顯著特征。OA的當前療法包括休息、增強肌肉支撐關(guān)節(jié)，吊帶和其他的支撐裝置以穩(wěn)固關(guān)節(jié)的物理治療、非類固醇抗炎劑、醋胺酚和其他止痛劑。對日常生活行為緊要的關(guān)節(jié)(如膝蓋或髖部)的骨上骨OA末期，進行外科關(guān)節(jié)復(fù)位。#體源^,據(jù)估計在美國每年有約11，000個脊髓損傷的新病例，目前在美國總的發(fā)病率為共183，000-230，000個病例(Stover"a/"Ac/j尸/^MWi^/w&7，80，1365-71,1999)。脊髓損傷的恢復(fù)非常困難，且導致破壞性的不可逆的神經(jīng)殘疾。急性脊髓損傷的當前治療包括損傷部位的機械穩(wěn)固，例如外科手術(shù)和腸胃外類固醇的給藥。這些手術(shù)幾乎很少能減少脊髓損傷后持久性癱瘓的發(fā)生率。慢性脊髓損傷的治療集中在生活品質(zhì)的維持，如疼痛、痙攣狀態(tài)和膀胱功能的治療。當前沒有可用的治療針對神經(jīng)機能的恢復(fù)。在損傷后緊接著的急性期，炎癥是主要的，與脊髓損傷相關(guān)的肺脹是發(fā)病率的主要原因。該炎癥在高劑量的全身性皮質(zhì)類固醇下被部分控制。移潛務(wù)戎涼蘭4;人組織和器官移植的最大限制之一是受者免疫系統(tǒng)的組織移植排斥。已經(jīng)確立供者和受者之間的I類和II類MHC(HLA-A、HLA-B和HLA-DR)等位基因匹配越好，移植物存活越好。移植物抗宿主病(GVHD)導致接受含有異源造血細胞的移植物的患者的顯著發(fā)病率和死亡率。這部分由于皮膚和其他靶器官的炎癥。造血細胞存在于骨髓移植物、干細胞移植物和其他移植物。接受來自HLA匹配的同胞的移植物的患者中約50%發(fā)生中度至嚴重的GVHD，發(fā)病率比在非HLA匹配的移植物中高很多。發(fā)生中度至嚴重的GVHD患者的1/3的結(jié)果是死亡。供者移植物中T淋巴細胞和其他免疫細胞攻擊受者細胞，所述受者細胞表達多肽在其氨基酸序列上的變體，尤其是蛋白變體，所述蛋白由人染色體6上的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)基因復(fù)合物編碼。在涉及異源造血細胞的移植物中對GVHD最有影響的蛋白是高度多態(tài)性(人之間的大量的氨基酸變化)的I類蛋白(HLA-A、HLA-B和HLA-C)和II類蛋白(DRB1、DQB1和DPB1)(Appelbaum,Nature411:385-389,2001)。甚至當I類MHC等位基因在供者和受者之間是血清學上"匹配的"，DNA測序顯示在提供I類指向的GVHD基礎(chǔ)的病例中30%、甚至在匹配的供者-受者對中具有等位基因水平的錯配(Appelbaum,Atowe，411，385-389,2001)。GVHD經(jīng)常引起皮膚、腸、肝、肺和胰腺的損傷。用糖皮質(zhì)激素、環(huán)孢霉素、曱氨蝶呤、氟達拉濱和OKT3治療GVHD。遂織移控WA^:包括肺、心臟、肝、腎、胰腺和其他器官和組織的組織移植物的免疫排斥由針對移植的器官的移植物受者的免疫反應(yīng)介導。異源移植的器官包含蛋白與其氨基酸序列變體，所述變體相比于移植物受者的氨基酸序列。因為移植的器官的氨基酸序列不同于移植物受者的氨基酸序列，它們經(jīng)常引發(fā)受者對移植的器官的免疫反應(yīng)。免疫反應(yīng)包括先天性和獲得性免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，并在靶器官中以炎癥為特征。移植的器官的排斥是組織移植的主要并發(fā)癥和限制，并能引起在受者中移植的器官失敗。由排斥引起的慢性炎癥經(jīng)常導致移植的器官功能異常。當前用多種免疫移植劑治療移植受者以預(yù)防和抑制排斥。這些藥劑包括糖皮質(zhì)激素、環(huán)孢素A、驍悉、FK-506和OKT3。免疫調(diào)節(jié)核酸和使用的方法在某些實施方案中，本發(fā)明提供了藥學上的組合物，包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5'-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶[2]-嘧啶w-3，，其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了X和Y不能是胞嘧啶-鳥嘌呤；當嘧啶[2]是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶，當嘧啶^是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G，并位于所述六聚物序列3'的2-5核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶m-[X]-[Y]-嘧啶,嘧咬[3]-3，，其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了X和Y不能是胞嘧啶-鳥噤呤；當嘧啶m是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶，當嘧啶w是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G，并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5'-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶w-嘧啶[3]-3'，其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了X和Y不能是胞嘧啶-鳥噤呤；當嘧啶[2]是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶，當嘧咬w是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的1-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-噤呤-嘧啶[『[X]-[Y]-嘧啶嘧啶[3]-3'，其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了X和Y不能是胞嘧啶-鳥。票呤；當嘧啶[2]是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶，當嘧啶w是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G，并位于所述六聚物序列3，的2核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶,嘧啶[31-3'，其中六聚物序列的X和Y是鳥嘌呤-鳥嘌呤，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于50所述六聚物序列3'的2-5核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶p]-嘧啶[3]-3'，其中X和Y是鳥嘌呤-鳥嘌呤，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶,嘧啶[3]-3'，其中X和Y是鳥嘌呤-鳥嘌呤，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶p廣嘧啶[3-3'，其中X和Y是鳥嘌呤-鳥嘌呤，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥噤呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶,嘧啶[3]-3'，其中六聚物序列是GTGGTT,以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-烏嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3'的2-5核香酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶[1]-[乂]-[￥]-嘧啶[2]-嘧啶[3]-3'，其中六聚物序列是GTGGTT，以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶m-[X]-[Y]-嘧啶,嘧咬[3]-3'，其中六聚物序列是GTGGTT,以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G，并位于所述六聚物序列3'的2核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶,嘧咬[3]-3，，其中六聚物序列是GTGGTT,以及免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸；以及(iii)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G，并位于所述六聚物序列3，的2核苷酸；以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸是CCATGTGGTTATGGGT;以及(b)藥學上可接受的載體。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括為寡核苷酸的本發(fā)明免疫調(diào)節(jié)核酸。在某些實施方案中，藥學上的組合物包括被并入載體的本發(fā)明免疫調(diào)節(jié)核酸。在某些實施方案中，在某些實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中治療疾病的方法，所述疾病與所述個體中與非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)，所述方法包括給予所述個體本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)序列。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中治療疾病的方法，所述疾病與所述個體中與非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)，所述方法包括給予所述個體本發(fā)明的藥學上的組合物。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的方法，所述方法包括給予所述個體本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)序列。在某些實施方案中，本發(fā)明提供了在個體中治療系統(tǒng)性紅斑狼瘠的方法，所述方法包括給予所述個體本發(fā)明的藥學上的組合物。一方面，本發(fā)明改進的免疫調(diào)節(jié)序列包括1)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶[2]-嘧啶w-3，；其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了a.X和Y不能是胞嘧啶-烏噤呤；b.當嘧啶[2]是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶c.當嘧啶w是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶2)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的1-5核苷酸；以及3)六聚物序列3'的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；其中所述免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列。作為選擇，本發(fā)明改進的免疫調(diào)節(jié)序列包括1)六聚物序列5'-嘌呤-嘧啶-[X]-[Y]-嘧啶-嘧啶-3';其中X和Y是鳥噪呤-鳥嘌呤；2)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的1-5核苷酸；以及3)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括a)2-10個鄰接G，并且b)位于六聚物序列3，的2-10核苷酸；其中所述免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列。在本發(fā)明的某些實施方案中，六聚物序列的X和Y是GpG。在某些實施方案中，六聚物序列是5，-GTGGTT-3，。在某些實施方案中，CC二核苷酸位于六聚物序列5，的2核苷酸。在某些實施方案中，多聚G區(qū)包括3個鄰接鳥噪呤堿基，并位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。在某些實施方案中，改進的免疫調(diào)節(jié)序列是5'-CCATGTGGTTATGGGT-3，。本發(fā)明的核心六聚物，在本文中被稱為免疫調(diào)節(jié)序列基序，包括二核香酸基序，其5，和/或3'可以側(cè)翼連接任何組合物或任意數(shù)目的核苷酸或核芬。在一些實施方案中，包括一個或多個免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸是大小為14-50、75-100、最通常為15-50個堿基對的寡核苷酸。免疫調(diào)節(jié)核酸也可以是更大片斷的DNA,例如100-100,000個堿基對，并且可以是表達載體和例如其他質(zhì)粒?？梢詷?gòu)建側(cè)翼于本發(fā)明免疫調(diào)節(jié)序列基序的序列，使其大體上匹配存在于任何已知免疫調(diào)節(jié)序列的側(cè)翼序列。例如，具有序列TGACTGTG-CCNN-嘌呤-嘧啶-X-Y-嘧啶-嘧啶-NNGGG-AGAGATGA(其中N為任意核苷酸)的IMS包括側(cè)翼序列TGACTGTG和AGAGATGA。另一優(yōu)選的側(cè)翼序列包括一連串嗜啶(C、T和U)，或者作為重復(fù)兩次或多次單一嘧啶，或者作為兩個或更長的不同嗜啶的混合物。不同的側(cè)翼序列被用于試驗的抑制性調(diào)節(jié)序列。抑制性核酸的側(cè)翼序列的另外實例包含在如下參考文獻中美國專利第6,225,292牙口6,339,068號；Zeunerda/,^W/n力、am/跑M畫"纖，46:2219-24,2002。本發(fā)明特定的IMS包括如下六聚物序列1.5，-噤呤-嘧啶-[X]-[Y]-嘧啶-嘧啶-3，IMS，其包含如下GG二核香酸核心GTGGTT、ATGGTT、GCGGTT、ACGGTT、GTGGCT、ATGGCT、GCGGCT、ACGGCT、GTGGTC、ATGGTC、GCGGTC、ACGGTC等等；2.5'-嘌呤-嘧。定-[X]-[Y]-嘧啶-嘧啶-3，IMS，其包含如下GC二核苷酸核心GTGCTT、ATGCTT、GCGCTT、ACGCTT、GTGCCT、ATGCCT、GCGCCT、ACGCCT、GTGCTC、ATGCTC、GCGCTC、ACGCTC等等；3.烏嘌呤和次黃噤呤取代腺嘌呤，和/或尿嘧。定取代胞嘧啶或胸腺嘧啶，并且基于上述方針可進行這些取代。前述免疫抑制序列或IIS顯示抑制包含核心二核苷酸CpG的免疫54刺激序列(ISS)。美國專利第6,225,292號。該IIS，在WO04/047734中顯示在無ISS的情況下，單獨的或與DNA多核苷酸療法組合，預(yù)防或治療自身免疫性疾病。該IIS包含具有序列AAGGTT的核心六聚物區(qū)域。包括在本發(fā)明的IMS內(nèi)的具有類似基序其他相關(guān)的IIS是1.5'-噪呤-嘌呤-[X]-[Y]-嘧啶-嘧啶-3，IMS,其包含如下GG二核苷酸核心GGGGTT、AGGGTT、GAGGTT、AAGGTT、GGGGCT、AGGGCT、GAGGCT、AAGGCT、GGGGTC、AGGGTC、GAGGTC、AAGGTC等等；2.5'-噤呤-嘌呤-[X]-[Y]-嘧啶-嘧啶-3，IMS，其包含如下GC二核苷酸核心GGGCTT、AGGCTT、GAGCTT、AAGCTT、GGGCCT、AGGCCT、GAGCCT、AAGCCT、GGGCTC、AGGCTC、GAGCTC、AAGCTC等等；3.鳥噤呤和次黃嘌呤取代腺噤呤，和/或尿嘧咬取代胞嘧啶或胸腺嘧啶，并且基于上述方針可進行這些取代。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述IMS核心六聚物區(qū)域通過多聚G區(qū)域側(cè)翼于所述5，或3，末端，或者同時位于該5，和3'末端。本文使用的"多聚G區(qū)域"或"多聚G基序"指由至少兩(2)個鄰接鳥嘌呤石成基組成的核酸區(qū)域，通常由2-30或2-20個鄰沖妄鳥噤呤組成。在一些實施方案中，所述多聚G區(qū)域具有2-10、4-10或4-8個鄰接鳥嘌呤堿基。在某些實施方案中，所述側(cè)翼多聚G區(qū)域鄰近(即鄰接)于所述核心六聚物。在某些實施方案中，所述多聚G區(qū)域通過非多聚G區(qū)域(非多聚G連接子)與所述核心六聚物連接。在一些實施方案中，所述非多聚G連接子區(qū)域具有不超過6個、更典型地不超過4個和最典型地不超過2個核香酸。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述IMS核心六聚物區(qū)域通過CC二核苷酸區(qū)域側(cè)翼于所述5，或3'末端，或者同時位于該5，和3'末端。本文使用的"CC二核苷酸區(qū)域"或"CC二核苷酸基序"指包括2個鄰接胞嘧啶堿基的核酸區(qū)域。在一些實施方案中，所述CC二核苷酸區(qū)域是長為2，3，4，5，6，7,8，9或IO個核苷酸堿基，但可以更長。在某些實施方案中，所述側(cè)翼CC二核苷酸區(qū)域鄰近(即鄰接)于所述核心六聚物。在某些實施方案中，所述CC二核苷酸區(qū)域通過非CC二核苷酸區(qū)域(非CC二核香酸連接子)與所述核心六聚物連接。在一些實施方案中，所述非CC二核苷酸連接子區(qū)域具有約8，7，6，5,4，3或2個核香酸。免疫調(diào)節(jié)核酸可獲自現(xiàn)有的核酸來源，包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、病毒DNA和cDNA。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸是寡核苷酸合成產(chǎn)生的合成寡核苷酸。IMS能是單鏈或雙鏈DNA、RNA和/或寡核苷酸的一部分。免疫調(diào)節(jié)核酸優(yōu)選地是具有一個或多個IMS區(qū)域的核酸，所述IMS區(qū)域包含未曱基化的GpG寡核苷酸。在可選擇的實施方案中，IMS區(qū)域的一個或多個腺。票呤或胞嘧啶殘基被曱基化。在真核細胞中，胞嘧啶和腺噤呤殘基通常能被曱基化。免疫調(diào)節(jié)核酸可以是穩(wěn)定的和/或不穩(wěn)定的寡核苷酸。穩(wěn)定的寡核苷酸指在體內(nèi)相對地抵抗降解的寡核苷酸，該降解通過核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶和其他降解途徑進行。優(yōu)選的穩(wěn)定的寡核苷酸具有經(jīng)修飾的磷酸鹽骨架，并且最為優(yōu)選的寡核苷酸具有硫代磷酸酯修飾的磷酸鹽骨架，其中至少一種所述磷酸根氧由硫替代。骨架磷酸鹽基團修飾包括磷酸曱酯、硫代磷酸酯、氨基磷酸酯和二硫代磷酸酯核苷酸間鍵，其能向IMS提供抗菌特性。免疫調(diào)節(jié)核酸優(yōu)選穩(wěn)定的寡核苷酸，優(yōu)選地使用硫代磷酸酯穩(wěn)定的寡核苷酸?？蛇x擇地，穩(wěn)定的寡核苷酸包括烷基磷酸三酯和磷酸二酯，其中帶電氧被烷化；芳基磷酸酯和烷基磷酸酯，它們是非離子DNA類似物，其中帶電磷酸根氧由芳香基或烷基替代；或/和在一端或兩端含六聚乙二醇或四聚乙二醇、或另一個二醇的寡核苷酸。可使用可選擇的空間構(gòu)型將糖部分附于IMS區(qū)域的核苦堿基上。側(cè)翼于所述調(diào)節(jié)二核苦酸的IMS區(qū)域的核苷酸堿基可以是已知天然存在的堿基或合成的非天然堿基。使用常規(guī)技術(shù)可以將寡核苷酸并入所述IMS-ON的內(nèi)部區(qū)域和/或端部作為其他化合物的附著點，即作為附著或連接包括自身分子的其他分子的手段，或作為另外的免疫調(diào)節(jié)治療劑的附著點。還可以以本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的任何方式修飾該IMS-ON的一個或多個堿基、糖部分、磷酸鹽基團和/或端部，以構(gòu)建具有除IMS-ON的調(diào)節(jié)性活性之外的所需性質(zhì)的IMS-ON。例如，糖部分可以以任何空間構(gòu)型連接于IMS-ON的核苷酸石威基。對寡核苦酸進行這些磷酸鹽基團修飾的技術(shù)為本領(lǐng)域公知，并不需要詳細的解釋。為回顧這樣的有用技術(shù)，制備用作靶核苷酸產(chǎn)物的磷酸三酯中間體，并且使用含水碘或諸如無水胺的其他試劑將其氧化為天然存在的磷酸三酯。產(chǎn)生的寡核苷酸氨基磷酸酯可使用硫處理以產(chǎn)生硫代磷酸酯?？梢詰?yīng)用同樣的常規(guī)技術(shù)(除硫處理步驟之外)以從磷酸曱酯產(chǎn)生甲基亞磷酰胺。關(guān)于磷酸基團修飾技術(shù)的更多細節(jié)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可參考美國專利第4，425，732、4,458,066、5,218,103和5,453,496號；和Tetrahedron丄e"，at21:414925(1995)，7:5575(1986)和25:1437(1984);以及Jowr"a/C7zem5"oc"93:6657(1987)，其公開內(nèi)容出于說明本領(lǐng)域關(guān)于免疫調(diào)節(jié)核酸的組合物和制備的知識水平的目的被并入本文。特別有用的磷酸鹽基團修飾是轉(zhuǎn)化為該IMS-ON寡核苷酸的硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯形式。硫代磷酸酯和二硫代磷酸酯較之其未經(jīng)修飾的寡核香酸對應(yīng)物，在體內(nèi)更能抵抗降解，這使所述宿主更能獲得本發(fā)明的IMS-ON。使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)和核酸合成設(shè)備能夠合成IMS-ON寡核苷酉臾。有關(guān)參考文獻參見，例如，Ausubel，C"/，Cwn-ew/尸,o/oco/sMo/ecw/ar仏o/ogy，Chs.2and4(分子生物學現(xiàn)行規(guī)范，第2和4章)(WileyInterscience，1989);Maniatis,"o/.，Mo/ecw/arC7om>7g:丄W0rato7Ma""a/(分子克隆實驗室手冊)(ColdSpringHarborLab.，NewYork,1982);美國專利第4,458,066號；和美國專利第4,650,675號，這些參考文獻出于說明本領(lǐng)域關(guān)于合成寡核苷酸的產(chǎn)生的知識水平的目的通過引用并入本文?？蛇x"t奪地，通過突變分離的4鼓生物ISS-ODN以用竟爭性二核苷酸取代所述天然存在的CpG基序和側(cè)翼核苷酸能夠獲得IMS-ON。依賴核酸雜交的篩選步驟實現(xiàn)了從任何有機體分離任何多核苷酸序列，前提是能獲得所述合適的探針或抗體。能夠化學合成寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針對應(yīng)編碼所述蛋白的序列的一部分。這需要已知氨基酸序列的寡肽小段。還能從遺傳密碼推導編碼該蛋白的DNA序列，盡管必須考慮所述密碼子的簡并度。例如，可以篩選cDNA文庫，所述cDNA文庫據(jù)信包括含ISS的多核苷酸，所述篩選通過向卵母細胞注射源自cDNA的各種mRNA,留出足夠時間，使所述cDNA基因產(chǎn)物開始表達，并通過測試所需cDNA表達產(chǎn)物的存在而完成，所述測試例如，通過使用特異于所關(guān)注多核芬酸編碼的肽的抗體，或者通過使用針對由所關(guān)注多核苷酸編碼的肽的重復(fù)基序和組織表達類型特征的探針。可選擇地，使用特異于該肽的抗體可以間接篩選cDNA文庫，尋找所關(guān)注的具有至少一種表位肽的表達。所述抗體可以是多克隆來源的或單克隆來源的，并且可用于檢測表達產(chǎn)物，該表達產(chǎn)物指示所關(guān)注cDNA的存在。一旦獲得所述包含ISS的多核苷酸，便可以使用常規(guī)技術(shù)通過例如酶消化將其縮短至所需的長度。隨后將該ISS-ODN寡核苷酸產(chǎn)物內(nèi)的CpG基序突變以用"抑制性，，二核苷酸(使用本發(fā)明方法鑒定的)取代該CpG基序。公知在具有已知序列DNA內(nèi)的特定位點進行取代突變的技術(shù)，例如通過PCR的M13引物誘變。該IMS是非編碼的，因此進行取代突變時，無需關(guān)心維持開放閱讀框。然而，為在體內(nèi)使用，應(yīng)給予基本上純的該多核苷酸起始材料、ISS-ODN寡核苷酸中間體或IMS突變產(chǎn)物(即使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知和選擇的可獲得的技術(shù)時，盡可能不含天然存在的污染物和LPS)。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)核酸可以包含單獨的IMS，或如下IMS:其被以順式或反式與其他核苷酸區(qū)域諸如例如并入重組自身載體(質(zhì)粒、粘粒、病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒)，接著可以編碼由重組表達載體遞送的任何一個或多個自身蛋白、自身多肽或自身肽。在某些實施方案中，給予未并入載體的該IMS。在某些實施方案中，IMS^皮并入載體，諸如例如表達載體，這可用例如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)實現(xiàn)(參見，例^口Ausubel，Cw/rew,7Vc^oco/sZ"Mo/ec"/ar'5Zo/og少，丄i^')。例如，重組表達載體的構(gòu)建使用標準連接技術(shù)。為了分析證實構(gòu)建的載體正確的序列，連接混合物被用于轉(zhuǎn)化宿主細胞，成功的轉(zhuǎn)化58體通過合適的抗生素抗性進行選擇。來自轉(zhuǎn)化體的載體被制備，并通過卩艮制斗生和/或測序分沖斤，例長口通過Messing,a/.，A^c/e/c^c/ds9:309，1981中的方法，Maxam,e/a/，AfeAo^s//五"27mo/ogy，65:499,1980中的方法，或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其他適合的方法。切割片斷的大小分離的進行使用常規(guī)的凝膠電泳，例如Maniatis,Wa/.,Mo/e//arC7om'"g,pp.133-134,1982中所描述的。宿主細胞被本發(fā)明的表達載體轉(zhuǎn)化，并在常規(guī)的營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基被改良以適于誘導啟動子、選擇轉(zhuǎn)化體或擴增基因。諸如溫度、pH等的培養(yǎng)條件是選擇表達的宿主細胞先前使用的，并對普通技術(shù)人員是顯而易見的。如果重組載體^i用作本發(fā)明IMS-ON的載體，質(zhì)粒和粘粒由于它們?nèi)狈χ虏⌒允翘貏e優(yōu)選的。然而，質(zhì)粒和粘粒比病毒易經(jīng)受更快速的體內(nèi)降解，因此不能遞送足夠劑量的IMS-ON以預(yù)防或治療炎性疾病或自身免疫性疾病。在相關(guān)方面，提供了核酸載體，其中非CpG二核苷酸被取代為化學式為5'-噤呤-嘧啶-C-G-嘧啶-嘧啶-3，或5'-嘌呤-嘌呤-C-G-嘧啶-嘧啶-3，的一種或多種CpG二核苷酸，由此產(chǎn)生IIS相關(guān)的免疫刺激性活性降低的載體。這樣的載體例如用于如下方法中給予免疫調(diào)節(jié)核酸和/或給予編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的自身載體。例如，CpG二核苷酸的胞嘧啶可用鳥噤呤取代，因而產(chǎn)生化學式為5，-噪呤-嘧咬-G-G-嘧啶-嘧啶-3，或5'-嘌呤-嘌呤-G-G-嘧啶-嘧啶-3，的具有GpG基序的IMS區(qū)域。該胞嘧啶還可用其他任何非胞嘧啶核苷酸取代?？梢允褂茫缍ㄎ煌蛔兺瓿伤鋈〈?。通常，被取代的CpG基序是沒有定位于該載體重要控制區(qū)域(例如，啟動子區(qū)域)的CpG。此外，如果CpG位于表達載體的編碼區(qū)域內(nèi)，通常選擇非胞嘧啶取代以產(chǎn)生沉默突變或?qū)?yīng)于編碼的氨基酸的保守取代的密碼子。例如，在某些實施方案中，提供修飾的pVAXl載體，其中化學式為5，-嘌呤-嘧啶-C-G-嘧啶-嘧啶-3，的一種或多種CpG二核苷酸通過用非胞嘧啶核苷酸if又代該CpG二核苷酸的胞嘧啶而發(fā)生突變。所述pVAXl載體為本領(lǐng)域公知，并且可從Invitrogen(Carlsbad,CA)商購。在一個示例性實施方案中，所述經(jīng)修飾的pVAXl載體在CpG基序內(nèi)具有下列胞嘧啶向非胞嘧啶的取代在核芬酸784、1161、1218和1966，胞嘧啶向鳥嘌呤；在核苦酸1264、1337、1829、1874、1940和1997,胞嘧咬向腺噤p令；以及在核香酸1963和1987,胞嘧啶向胸腺嘧啶；另外有在核香酸1831、1876、1942和1999，胞嘧啶向鳥噤呤的突變。(前述核苷酸編號指定根據(jù)Invitrogen提供的pVAXl的編號系統(tǒng)。)(參見下文實施例3。)在所述方法和組合物的一些實施方案中，會用到如本文所描述的許多(即兩個或多個)免疫抑制序列。許多IMS或IIS分子可分別地或例如一前一后或連續(xù)地連接到一起被給藥或配制。兩個或多個免疫抑制序列能是相同或不同的序列，并能被一起連接到相同的分子。在一個實施方案中，IMS或IIS包括兩個或多個M49序列。在一個實施方案中，IMS或IIS包括兩個或多個I18序列。IMS的功能特性存在一些解釋IMS的免疫調(diào)節(jié)特性的機制，這些包括不依賴ISS(CpG)-介導的免疫刺激的機制。本文使用的"免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)或改變免疫反應(yīng)"指對針對自身分子的現(xiàn)存的或潛在的免疫反應(yīng)的任何改變，所述自身分子包括但不限于核酸、脂質(zhì)、磷脂、糖類、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽、自身肽、蛋白復(fù)合體或核蛋白復(fù)合體，或它們的衍生物，所述改變是給予免疫調(diào)節(jié)核酸的結(jié)果。所述調(diào)節(jié)包括對任何免疫細胞的存在、能力或功能的改變，所述免疫細胞參與或能夠參與免疫反應(yīng)。免疫細胞包括B細胞、T細胞、NK細胞、NKT細胞、專職抗原呈遞細胞、非專職抗原呈遞細胞、炎性細胞或能夠參與或影響免疫反應(yīng)的任何其他細胞。調(diào)節(jié)包括對現(xiàn)存免疫反應(yīng)、正在發(fā)展的免疫反應(yīng)、潛在的免疫反應(yīng)造成的任何變化，或引發(fā)、調(diào)控、影響或反應(yīng)免疫反應(yīng)的能力。調(diào)節(jié)包括對作為免疫反應(yīng)一部分的免疫細胞內(nèi)基因、蛋白和/或其他分子的表達和/或功能的改變。免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)包括但不限于免疫細胞的清除、刪除或隔離；免疫細胞的誘導或產(chǎn)生，所述免疫細胞能調(diào)節(jié)諸如自身反應(yīng)性淋巴細胞、APC或炎性細胞的其他細胞的功能性能力；免疫細胞無反應(yīng)狀態(tài)的引發(fā)(即無反應(yīng)性)；免疫細胞活性或功能的提高、降低或改變或者這樣的能力，包括但不限于所述細胞表達的蛋白類型的改變。實例包括某些種類的分子的經(jīng)改變的生產(chǎn)和/或分泌，所述分子例如細胞因子、趨化因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激酶、協(xié)同刺激分子或其他細胞表面受體；或者所述調(diào)節(jié)性事件的任意組合。免疫反應(yīng)的特征為產(chǎn)生包括IL-12和IFNy的細胞因子的T輔助細胞和免疫反應(yīng)，并與產(chǎn)生某些同種型抗體(在小鼠中通常為IgG2a;在人中通常為IgGl和IgG3)的B細胞相關(guān)。Thl型免疫反應(yīng)在自身免疫型疾病中起主要作用，并與自身免疫介導的組織損傷相關(guān)。相反，Th2免疫反應(yīng)的特征為產(chǎn)生包括IL-4和IL-10的細胞因子的T輔助細胞和免疫反應(yīng)，并與產(chǎn)生某些同種型抗體(在小鼠中通常為IgGl;在人中通常為IgG2和IgG4)的B細胞相關(guān)。Th2型免疫反應(yīng)與防止嚙齒動物和人自身免疫中的自身免疫介導的組織損傷相關(guān)。免疫調(diào)節(jié)核酸能調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，其通過清除、隔離或斷開調(diào)節(jié)或能夠調(diào)節(jié)不希望免疫反應(yīng)的免疫細胞；誘導、產(chǎn)生或開啟調(diào)節(jié)或能夠調(diào)節(jié)保護性免疫反應(yīng)的免疫細胞；改變免疫細胞的生理性或功能特性(如抑制Thl型免疫反應(yīng)和/或誘導Th2型免疫反應(yīng))；或這些效果的組合。測量免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)的實例包含，但不限于，檢驗免疫細胞群的存在與否(使用流式細胞術(shù)、免疫組織化學、組織學、電子顯微術(shù)、聚合酶鏈式反應(yīng))；測量免疫細胞功能性能力，其包括在響應(yīng)信號時增殖或分裂的能力或抵抗力(例如使用基于3H-胸苷摻入跟蹤刺激的T細胞增殖試驗和肽掃描分析，其使用抗CD3抗體、抗T細胞受體抗體、抗CD28抗體、鉀離子載體、PMA、裝有肽或蛋白抗原的抗原呈遞細胞；B細胞增殖試-瞼)；測量殺死或裂解其他細胞的能力(例如細胞毒性T細胞試驗)；測量細胞因子、趨化因子、細胞表面分子、抗體和細胞的其他產(chǎn)物(例如，通過流式細胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗、蛋白印記分析、蛋白微陣列分析、免疫沉淀分析)；測量免疫細胞活化生化標志物或免疫細胞內(nèi)的信號傳導通路(對酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸磷酸化、多肽切割和蛋白復(fù)合體形成或解離的蛋白印記和免疫沉淀分析；蛋白陣列分析；使用DNA陣列或差減雜交的DNA轉(zhuǎn)錄圖譜)；測量凋亡、壞死或其他機制導致的細胞死亡(測量DNA梯狀條帶、組織學的微管連接蛋白V染色、TUNEL試—驗、凝月交電泳；焚光caspase試-險，caspase底物的蛋白印記分析)；測量免疫細胞產(chǎn)生的基因、蛋白和其他分子(Northern印記分析、聚合酶鏈式反應(yīng)、DNA微陣列、蛋白微陣列、雙向凝膠電泳、蛋白印記分析、酶聯(lián)免疫吸附試驗、流式細胞術(shù))；測量臨床后果，例如對自身免疫性疾病、神經(jīng)退化性疾病、和其他疾病后果的改善(臨床評分、使用附加療法的要求、功能性狀態(tài)、圖像研究)。其他研究者進行實驗以評價IIS的作用機制。那些研究者證實中和或抑制性IIS(GpG)基序阻斷ISS(CpG)免疫刺激(Krieg"/，95:12631,1998;美國專利第6，225，292和6，339，068號)。那些實驗中的IISs被用于中和、抑制、竟爭或克服ISS(來自這樣的來源細菌、病毒、寄生蟲和諸如在DNA疫苗或基因療法中的給定來源的DNA)的作用。已經(jīng)表明ISS和IIS進入同樣的細胞，提示IIS抑制ISS的一個機制是通過在相同細胞內(nèi)的直接竟爭(Yamada"fl/.,/www"o/ogy，2002，169:5590)。給藥方法免疫調(diào)節(jié)核酸被制備為包括藥學上可接受的載體的組合物。優(yōu)選的用于本發(fā)明免疫調(diào)節(jié)核酸的藥學上可接受的載體包括無菌水或無水溶液、懸浮液和乳劑。無水溶劑的實例是丙二醇，聚乙二醇，諸如橄欖油的植物油，以及諸如油酸乙酯的可注射有機酯。含水載體包括水、醇/水溶液、乳劑或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。腸胃外賦形劑包括氯化鈉溶液、林格(Ringer's)葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸化林格或非揮發(fā)油。靜脈內(nèi)賦形劑包括液體和營養(yǎng)補充物、電解液補充物(如基于林格葡萄糖的那些)等。還存在防腐劑和其他添加劑，諸如例如抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體等。還可以使用本領(lǐng)域公知的方法凍干免疫調(diào)節(jié)核酸的組合物，用于隨后本發(fā)明的再溶解和應(yīng)用。免疫調(diào)節(jié)核酸能被混和入藥學上的組合物，其包含多個拷貝的單一IMS、62不同IMS的組合、每個以相同的相對摩爾濃度存在的IMS的組合、每個以不同的相對摩爾濃度存在的IMS的組合，或者單一的和/或不同的IMS,其被并入重組表達載體質(zhì)粒、線性多核苷酸、病毒和病毒載體、細菌和其他含有寡核苷酸的活的、滅活的或合成的組合物。本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)核酸能配制成用作藥物的多核苷酸鹽?？梢允褂梅嵌拘詿o機或有機堿制備免疫調(diào)節(jié)核酸。無機堿鹽包括鈉、鉀、鋅、鈣、鋁、鎂等等。有機非毒性堿包括一級胺鹽、二級胺鹽和三級胺鹽等。能以凍干形式配制該免疫調(diào)節(jié)核酸，遞送前再溶解，例如無菌水或鹽溶液?？蛇x擇地，能在溶液、懸浮液或包含用于遞送的水基或油基載體的乳劑中配制免疫調(diào)節(jié)核酸。免疫調(diào)節(jié)核酸能被凍干，隨后在給藥前使用無菌水再溶解。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，存在將核酸遞送給個體的廣泛多樣的方法。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸作為棵核酸被給藥。例如，在某些實施方案中，病毒顆粒(例如腺病毒顆粒，參見例如Curiel"a/.,/iew/r.CW/iWo/.所o/，6:247-52，1992，上述)與棵核酸在給藥前混和以產(chǎn)生含有病毒顆粒的制劑，其不封裝核酸但仍促進核酸的遞送。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸與分子封裝或復(fù)合，所述分子結(jié)合至核酸，諸如例如陽離子物質(zhì)(例如，DEAE-葡聚糖或陽離子脂質(zhì))。例如，脂質(zhì)體代表配制和遞送寡核苷酸和/或自身多核苷酸的有效手段。參見Pack,Wa/.(2005)"DesignandDevelopmentofPolymersforGeneDelivery(設(shè)計和開發(fā)用于基因遞送的聚合物)"A^mMZ>wgZXsc0ve74:581-493。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸被并入病毒載體、病毒顆粒或細菌用于藥理學遞送。病毒載體能是減毒的(具有降低誘導疾病能力的突變)或復(fù)制缺陷的感染組分。在一些實施方案中，核酸被偶聯(lián)到固體載體，包括金顆粒、基于多糖的支持物，或能通過顆粒轟擊(基因槍遞送)被注射、吸入或遞送的其他顆?；騄朱。本領(lǐng)域已知用于遞送核酸制劑的方法。參見，例如，美國專利第5,399,346、5,580,859和5,589,466號。已開發(fā)了大量基于病毒的系統(tǒng)，用于轉(zhuǎn)移至哺乳動物細胞。例如，已描述了反轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)(美國專利第5,219,740號；(Millerda/，腸&c—腦7:980-990，1989;Miller,T/w廳wG聰772era/_y1:5-14，1990;Scarpaa/,/，180:849-852,1991;Burnsa/,尸rac.A^/.爿c^/.USA90:8033-8037,1993);和(Boris-LawrieandTemin,CW.O//".Deve/op.3:102-109，1993)。還已經(jīng)描述了大量腺病毒載體，參見，例如，(Haj-Ahmade,"/.，Wra/.57:267-274，1986;Bett"a/,/67:5911-5921，1993;MitterederWa/，/f謂"wG匿77^，5:717-729,1994;SethWa/,/腸/.68:933-940:1994;BarrWa/，Ge"e77zero^y1:51-58,1994;Berkner,Bz'orecAm々Mes6:616-629,1988;以及Rich"a/，//w廳wG匿77^，4:461-476,1993)。也已開發(fā)出腺相關(guān)病毒(AAV)載體系統(tǒng)用于核酸遞送。使用本領(lǐng)域公知技術(shù)可容易地構(gòu)建AAV載體。參見，例如，美國專利第5,173,414和5,139,941號；國際公開號WO92/01070(1992年1月23日公布)和WO93/03769(1993年3月4日公布)；LebkowskiWa/，Mo/ec,CW/.腸/.8:3988-3996，1988;Vincenta/，^cc/臘90(ColdSpringHarborLaboratoryPress)1990;Carter,B.J.,CwrewfQp/m'ow5/她c/wo/ogy3:533-539，1992;Muzyczka,N.，CWrew/7b//cs/"M"/cro6/o/.Jwt/Zwwwwo/.158:97-129,1992;Kotin，R.M.,GeweT7zera;^5:793-謝，1994);Shellingfl/.，G匿77jer，1:165-169,1994;和Zhou"a/.，/Med179:1867-1875，1994)。本發(fā)明IMSs也能在無載體的情況下被遞送。例如，所述分子在遞送給個體前被包裝在脂質(zhì)體中。通常使用能穩(wěn)固結(jié)合或捕獲及保留核酸的脂質(zhì)體實現(xiàn)脂質(zhì)封裝。脂質(zhì)體作為遞送核酸的載體的應(yīng)用的綜述參見(HugWa/，3z'oc/n附.腸//7,1097:1-17，1991);Straubingera/"inAfW/zot^o/￡"z>;wo/ogv，Vol.101,pp.512-527,1983)。侈寸^口，本發(fā)明使用的脂質(zhì)包括但不限于DOPE(二油酰基腦磷酯)、膽固醇和CUDMEDA(N-(5-膽固醇-3-醇3尿烷基)-N'，N'-二曱基乙基烯二胺)。作為實例，DNA能在含有下列陽離子脂質(zhì)體制劑之一的溶液中遞送Lipofectin(LTI艦L)、TransfastTM(PromegaCorp)、Tfx50TM(PromegaCorp)、TfxlO(PromegaCorp)或Tfx20TM(PromegaCorp)。還參見Pack,a/.(2005)"DesignandDevelopmentofPolymersforGeneDelivery(設(shè)計和開發(fā)用于基因遞送的多聚物)"7Va^reZ>"gZtocovery4:581-493。64免疫調(diào)節(jié)核酸的"治療有效量"根據(jù)本發(fā)明的教導被給藥，并足以治療或預(yù)防疾病，例如，通過改善或去除疾病的癥狀和/或病因。例如，治療有效量落在廣泛的范圍內(nèi)，并且由臨床試驗所決定，同時對每一位特殊的病人而言，其由有經(jīng)驗的臨床醫(yī)師公知的因素決定，包括疾病的嚴重性、患者體重、年齡和其他因素。治療有效量的免疫調(diào)節(jié)核酸為約0.001(ig到約1g的范圍。優(yōu)選的治療量的免疫調(diào)節(jié)核酸為約5嗎至約1000嗎的范圍。最為優(yōu)選的治療量的免疫調(diào)節(jié)核酸為約50-200(ig的范圍。免疫調(diào)節(jié)核酸治療的遞送在進行的基礎(chǔ)上可以每天一次、每隔一天一次、每周兩次、每周一次、每兩周一次、或每月一次。如果與編碼自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸療法聯(lián)合遞送，那么治療方案可在不同時期，如6-12個月，隨后每3-12個月，以維持劑量給藥。根據(jù)疾病的嚴重性、患者年齡、給予的編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的寡核苷酸和/或多核苷酸，以及普通治療醫(yī)師會考慮的此類其他因素，可以開發(fā)可選擇的治療方案。在某些實施方案中，通過肌肉內(nèi)注射遞送免疫調(diào)節(jié)核酸。在某些實施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)核酸的遞送通過鼻內(nèi)、口服、皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、按壓穿過皮膚、眼內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、葉鞘內(nèi)、直腸內(nèi)、粘膜，或者將其附著于金粒以遞送到或穿過真皮(參見，例如WO97/46253)?？蛇x擇地，可以通過使用或不使用脂質(zhì)體或帶電脂質(zhì)的局部施用將核酸遞送進皮膚細胞(參見，例如，美國專利第6,087,341號)。然而另一種選擇是將該核酸作為吸入劑遞送。在包括給予免疫調(diào)節(jié)核酸和編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸的組合療法的情況下，免疫調(diào)節(jié)核酸和多核苷酸可以在相同位點，或在不同位點，以及同時或在不同時間^^藥。在遞送免疫調(diào)節(jié)核酸之前，可以預(yù)處理該遞送位點，其通過使用布比卡因(bupivicane)、心臟毒素或可能增強隨后的多核苦酸治療遞送的其他試劑。此類預(yù)處理方案的遞送通常在遞送治療性多核普酸前12-96小時進行；更為頻繁地，在遞送治療性免疫調(diào)節(jié)核酸前24-48小時進行?？蛇x4奪地，IMS療法之前不進行預(yù)處理。免疫調(diào)節(jié)核酸和/或包括編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸的自身載體能與其他物質(zhì)組合或與編碼細胞因子的載體的遞送結(jié)合給藥，所述其他物質(zhì)如藥理學上的藥劑、佐劑、細胞因子、自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽、糖蛋白、基于DNA的療法。在本發(fā)明某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸與其他療法組合給藥。這樣的療法能包括例如給予的免疫調(diào)節(jié)核酸與自身分子組合，所述自身分子包括但不限于編碼表1所述的自身分子的DNA,例如在多核苷酸療法的情況下(參見，美國專利申請/>開20030148983);與如下物質(zhì)組合自身脂質(zhì)、一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身肽、自身多肽、自身糖脂、自身糖類、自身糖蛋白，和翻譯后修飾的一個或多個自身蛋白、肽、多肽或糖蛋白，或用于治療自身免疫性疾病的其他治療性化合物。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸與多核苷酸療法組合被給予SLE患者，所述多核苷酸療法使用與表1所述的與SLE相關(guān)的一個或多個自身分子。在某些實施方案中，本發(fā)明免疫調(diào)節(jié)核酸與用于治療狼瘡的藥物組合被給予SLE患者，所述藥物包括但不限于非類固醇抗炎藥物(NAIDS);抗癡藥、皮質(zhì)類固醇、細胞毒素和免疫抑制劑。在某些實施方案中，被給予SLE患者的免疫調(diào)節(jié)核酸是118。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸與多核苷酸療法組合被給予多發(fā)性硬化患者，所述多核苷酸療法使用與表1所述的與多發(fā)性硬化相關(guān)的一個或多個自身分子。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸與用于治療多發(fā)性硬化的藥物組合被給予多發(fā)性硬化患者，所述藥物包括但不限于a-干擾素、P-干擾素和Copaxone。在某些實施方案中，被給予多發(fā)性硬化患者的免疫調(diào)節(jié)核酸是I18。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)核酸與多核香酸療法組合被給予胰島素依賴的糖尿病患者，所述多核苷酸療法使用與表1所述的與胰島素依賴的糖尿病相關(guān)的一個或多個自身分子。在某些實施方案中，被給予胰島素依賴的糖尿病患者的免疫調(diào)節(jié)核酸是I18。對本發(fā)明的進一步了解可通過參考下述示例性實施方案的描述。實施例1:IMS在人外周血單核細胞(hPBMC)中抑制CpG-ODN資導的細胞增殖和細胞因子產(chǎn)生進行系列實驗以證實IMS能抑制PBMC響應(yīng)包含寡核苷酸的CpG(CpG-ODN)。抑制刺激性CpG-ODN直接作用于人B細胞和類漿細胞樹突細胞(pDC)，刺激B細胞中IL-6和IL-10的增殖和分泌，及pDC的IFN-a產(chǎn)生(Hartmannetal"PNAS96:9305;Krugetal"Eur.J.Immunol.31:2154;Vollmeretal"Eur.J.Immunol.34:251;Fearonetal.，Eur,J.Immunol.33:2114;Marshalletal.,J.Leuk.Biol.73:781;Hartmannetal.,Eur.J.Immunol.33:1633)。此外，在PBMC培養(yǎng)物中，"旁觀，，細胞(單核細胞、NK細胞、巨噬細胞)響應(yīng)由B和pDC細胞產(chǎn)生的細胞因子，并產(chǎn)生另外的免疫調(diào)節(jié)劑(Hornungetal.,J.Immunol.168:4531;Krugetal"Eur.J.Immunol.31:2154;Krieg，Ann.Rev.Immunol.20:709;Kranzer,Immunol.99:170)。列于表2的IMS組被合成，并檢測抑制這些CpG-ODN刺激的反應(yīng)的能力。所有IMS包含核心"RYGGYY"基序的至少一個拷貝，并且在長度上(約14-42個堿基)及在側(cè)翼于該核心基序的堿基的序列一致性上變化。一些寡核苷酸包含多聚G序列，其具有形成寡核苷酸多體或四重G的潛負fe(Gurseletal.,J.Immunol.171:1393;Petracconeetal.，InternationalJ.Biol.Macromolecules31:131;Wuetal"J.Biol.Chem.279:33071;Leeetal.，NAR8:4305;Phillipsetal.,J.Mol.Biol.273:171)。大多數(shù)寡核香酸具有完全硫代磷酸化的骨架，而其他被部分硫代磷酸化，在寡核苷酸5，和3'端具有一些修飾的堿基，如表2所示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>EMSIDIMS序列118.10C*C*A*G*T*G*G*C*C*T*G*G*G*T*118.11C*C*A*GTGGCCTGG*G*T*118.14A*A*AAGTGGCCTTTGGGTC*C*118.15C*C*A*A*G*T*G*G*T*T*A*T*G*G*G*T*118.16G*C*A*T*G*T*G*G*T*T*A*T*G*G*G*T*118.19A*A*A*A*G*T*G*G*T*T*A*T*G*G*G*T*多個RYGGYY基序18T*G*T*G*G*T*T*A*C*A*G*C*G*GTT*G*T*G*G*C*C*19T*G*G*T*G*G*T*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*T*T*G*T*G*G*C*C*noT*G*G*T*G*G*T*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*T*T*112T*G*T*G*G*TTACAGCGGTTGTG*G*T*T115T*G*T*G*G*T*T*ACAG*T*G*G*T*TGTG*G*T*T*122丁雄G承G先丁AG+GAT承"T^丁承丁承GATAG先G女T裔T承丁承丁豐GAT^GAGATAT來126G*G*TT*G*G*T*G*T*G*G*T*T*G*G*A*C*A*G*T*G*G*T*T*G*TtT*G*G*T*TtG*G*T*G*T*G*G*T*T*G*G*134T*G*G*T*G*G*T*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*C*C*G*T*G*G*C*C*B7T*G*C*T*G*C*T*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*C*C*G*T*G*G*C*C*多個RYGGYY基序+多聚G135T*G*G*T*G*G*T*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*C*C*T*G*G*G*T*138T*G*C*T*G*C*T*G*T*G*G*C*C*A*C*A*G*T*G*G*C*C*G*T*G*G*C*C*T*G*G*G*T*142C*C*A*GTGGCCCAGTGGCCTGG*G*T*143C*A*G*T*G*G*C*C*C*A*G*T*G*G*C*C*T*G*G*G*T*RYGGYY+G-四聯(lián)體124C*C*A*T*G*T*G*G*T*T*A*T*G*G*T*G*T*G*G*T*G*T*G*G*T*G*T*G*G*125T*G*G*T*G*G*T*G*T*G*G*C*C*T*G*G*T*G*T*G*G*T*G*T*G*G*T*G*T*G*G*從Stanford血庫的健康供者分離人PBMC。檸檬酸葡萄糖被用作抗凝血劑和白血球富集血沉棕黃層(約30mls)。在三個50ml錐形瓶的10mls中，每個血沉棕黃層用PBS1:4稀釋，以8mis的IsoPrep(1.077g/ml，pH6,8，9.6%w/v曱泛影鈉，5.6。/。w/v多糖)鋪于其下，不破碎的情況下室溫400g離心30分鐘。分裂間期細胞(淋巴細胞和單核細胞)被轉(zhuǎn)移至新的50ml錐形管，補充PBS，混合并在室溫200g離心IO分鐘。移除上清液，并重復(fù)洗滌步驟。最終的細胞沉淀被重懸浮在5mls珠緩沖液(PBSpH7.2,0.5%BSA，2mMEDTA)，所述細胞用ViCell(Beckman-Coulter)計數(shù)，并培養(yǎng)在具有10°/。FBS的RPMI-1640。為測定IMS是否能抑制CpGISSODN對細胞增殖的刺激，將PBMC與單一的IMS或存在5昭/mlISSODN的情況下劑量逐漸增加的IMS—起孵育4天。在孵育的最后24小時期間通過測定[3司胸腺嘧啶摻入分析細胞增殖。IMSODN(在5嗎/ml劑量約15-70%抑制，圖la,b)之間的抑制效力顯著不同，且劑量從1至25pg/ml逐漸增加的所測試的IMS增加了對ISS增殖性反應(yīng)的抑制。69為了描述IMS對CpG-ODN刺激的細胞因子產(chǎn)生的作用，將hPBMC與所示濃度的IMS和刺激物CpG-ODN孵育48小時，通過ELISA分析培養(yǎng)基中的細胞因子水平。如圖2所示，IMS以劑量依賴的方式抑制CpG刺激的IL-10和IL-12表達。相反，IMS通常增強CpG誘導的IFN-y表達，尤其是在25jig/ml劑量，然而觀察到不同的IMS影響。盡管IMS118通常抑制CpG對IFN-a的誘導，IMS如GpG.l增強表達(圖2c,d)。118和GpGl除了抑制CpG刺激的免疫反應(yīng)，還抑制在PBMC培養(yǎng)物中ConA依賴的細胞增殖和多聚I:C刺激的IFN-a表達(圖3)。ConA直接作用于T細胞，已顯示多聚I:C誘導IFN-a在人單核細胞子集中的表達。已公布的數(shù)據(jù)提出這些細胞不表達功能性TLR9受體(Hornungetal.,J.Immunol.168:4531)，提示了本發(fā)明IMS以TLR9非依賴性方式影響免疫反應(yīng)，這與小鼠免疫細胞中公布的結(jié)果一致(Shirotaetal.,J.Immunol.173:5002)。發(fā)表的研究證實硫代磷酸化的非CpGODN具有類似于CpGODN特性的免疫刺激性特性。特別地，這些寡核苷酸能引起B(yǎng)細胞激活，導致B細胞增殖和IL-6與IL-10的分泌(Vollmeretal.，Immunol.113:212;Liangetal.，J.Clin.Invest.98:1119;Vollmeretal.,2002，AntisenseNucleicAcidDrugDev.12:165-75)。為了測定本發(fā)明IMS是否能在PBMC培養(yǎng)物中刺激這些作用，我們將細胞在沒有CpG-ODN的情況下與濃度逐漸增加的IMS—起孵育。增殖(圖5)和IL-6、IL-10和IFN-y產(chǎn)生的分泌都被>25|ig/ml的IMS刺激(圖4a,b，d)。相反，在使用的任何寡核苷酸濃度沒有觀察到對IFN-a的誘導。實施例2:IMS-ODN抑制體內(nèi)CpGODN誘導的細胞因子和趨化因子產(chǎn)生為了測定IMS-ODN是否能在體內(nèi)抑制CpG-ODN作用，給小鼠注射CpG和IMS寡核苷酸的混合物。為了測試IMS作用的體內(nèi)動力學，將50昭的118經(jīng)腹膜內(nèi)注射入4組小鼠(D0-D3;n-3)。在組1(D0)，將刺激物CpG-ODN(mCpG)與118同時注射；在組2(Dl),注射118(mCpG);在組3(D2),注射118后48小時注射刺激物CpG-ODN(mCpG);在組4(D3)，注射118后72小時注射刺激物CpG-ODN(mCpG)。注射后24小時，血清被釆集，并用ELISA分析促炎蛋白IL-12和MCP-1的表達。圖6證實在1:1和1:3質(zhì)量比的IMS:CpGODN都觀察到對IL-12的顯著抑制。也觀察到對MCP-1水平的顯著抑制(數(shù)據(jù)未顯示)。實施例3:IMS生物效應(yīng)在體內(nèi)持續(xù)幾天體外研究顯示一些IMS對CpG-ODN的抑制效應(yīng)能持續(xù)16小時(Stunzetal.,Eur.J.Immunol.32:1212)。為了測試IMS作用在體內(nèi)的持續(xù)性，在第0天給小鼠注射IMS,隨后在第1、2或3天注射刺激物CpGODN。CpG注射后24小時，采集血清，并測量IL-12。圖6證實在第0天注射的IMS仍抑制3天后注射的CpG的作用。實施例4:IMS在SLE小鼠模型中延遲疾病發(fā)作測試IMS寡核苷酸在狼瘡動物模型中影響疾病發(fā)作的能力。NZB/WF1雌性小鼠自發(fā)發(fā)生蛋白尿、腎病理學和產(chǎn)生針對DNA的抗體，類似于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的個體。通過皮內(nèi)遞送(ID)每周一次給予NZB/WFl雌性小鼠50嗎的TpT和GpGIMS寡核苷酸?？蛇x擇地，通過口強飼法給予GpGIMS寡核苷酸(PO;50fig，QW)。對照動物接受每周一次的賦形劑PBS注射。當通過口強飼法給予寡核苷酸時，盡管在任何實驗組中都沒有觀察到在蛋白尿發(fā)作中的顯著延遲(圖7)，以及針對DNA的自身抗體反應(yīng)沒有以統(tǒng)計學上的顯著量降低(圖8),但對腎的分析顯示了GpG寡核苷酸在降低炎癥中的顯著效應(yīng)(圖9)。通過ID給藥遞送的GpG還降低分值，但沒有達到統(tǒng)計學上的顯著性?？紤]到50|agGpGIMS寡核苷酸對所述SLE小鼠模型中腎病理學的影響，我們進行了實驗以檢測劑量反應(yīng)。通過IP注射每周一次給予NZB/WFl雌性小鼠50、200和500的GpGIMS寡核芬酸。觀察到蛋白尿發(fā)作的劑量依賴性延遲和對DNA的自身抗體反應(yīng)的降低，在500GpGIMS寡核苷酸注射的小鼠中具有蛋白尿發(fā)作的高顯著性71延遲和最小的中值DNA自身抗體效價(圖10和11)。腎病理學在這些動物中進行。上述體外實驗證實了第三個寡核苷酸1-18性質(zhì)上不同于TpT和GpG寡核苷酸。為了比較這些不同的寡核苷酸在狼瘡中作用，通過IP注射每天一次給予NZB/WF1雌性小鼠50(ig的TpT、GpG和1-18(人和小鼠分別為I-18h和I-18m)、寡核苷酸。在第34周處死動物，該時間為對照組的約30%顯示蛋白尿。自身抗體分析顯示在相比于賦形劑處理的對照組的I-18m處理的組中抗DNA反應(yīng)的顯著降低(圖12)。腎病理學在這些動物中進行。實施例5:IIS寡核苷酸降低患實驗誘導的葡萄膜炎的小鼠中炎癥的嚴重度為了測定在狼瘡動物模型中觀察到的效力是否能普及到其他自身免疫性疾病，IMS寡核苷酸對葡萄膜炎(眼睛的自身免疫性疾病)的作用被測試。實驗誘導的葡萄膜炎(EAU)是與人類疾病有許多共同特征的葡萄膜炎小鼠模型(AnimalModelsforAutoimmuneandInflammatoryDisease(自身免疫性疾病和炎性疾病的動物模型)，Cw固,/Vo/oco/s/麵畫/，(現(xiàn)代免疫學實驗操作)，2003第15.6章)。通過用乳化于CFA中的人視網(wǎng)膜內(nèi)結(jié)合蛋白MRBP!6W8o的肽片段在B10.RIII小鼠中的免疫作用誘導EAU。隨后每周一次通過ID注射給予200嗎的每個IMS寡核苷酸，其與低劑量的類固醇曱基潑尼松龍(lmg/kg)(對人葡萄膜炎的標準護理)組合。在第21天通過眼窩病理學評價EAU的程度。觀察到GpGIMS寡核苷酸與低劑量類固醇的給藥降低疾病嚴重性的趨勢(圖13)，而TpT顯示與類固醇沒有協(xié)同效應(yīng)。對延伸到這些觀察，在沒有類固醇治療的IMS寡核苷酸和皮內(nèi)與腹內(nèi)給藥被測試。通過用乳化于CFA中的hIRBP161.180肽在BIO.RIII小鼠中的免疫作用誘導EAU。隨后每周一次通過IP或ID注射給予單獨的200嗎的每種IMS寡核香酸，或與其組合的低劑量的類固醇曱基潑尼松龍(lmg/kg)。作為陽性對照，從第O天開始通過IV給藥以每只動物5pg每天一次給予抗CD3抗體持續(xù)5天。然而每周一次GpGIMS72寡核香酸與類固醇的皮內(nèi)或腹膜內(nèi)遞送導致比僅類固醇更低的嚴重性分值，都沒有統(tǒng)計上顯著性(圖14)。相反，通過IP的GpG寡核苷酸單獨給藥比當其與類固醇治療組合時更有效，導致疾病嚴重度與未處理的對照相比有統(tǒng)計學上的顯著改善(pO.Ol)(圖l4)。所述作用與用抗CD3處理的陽性對照組是相當?shù)?p〈0.05)。為進一步分析IMS寡核香酸對EAU的作用和測定最低有效劑量，我們比較了50jigGpG、TpT、丫18h和118m寡核苦酸的IP給藥。與200嗎GpG每周一次的IP給藥(圖14)相反，每天50嗎劑量的GpG與任意其他IMS寡核苷酸的給藥沒有顯著改善疾病嚴重度(圖15)。因為EAU由CFA誘導，GpG寡核苷酸降低疾病嚴重度的一個可能的作用機制是通過在CFA的分枝桿菌組分中與CpG竟爭。為了測定GpGIMS寡核香酸在無CFA的情況下對疾病進程的影響，進行了過繼轉(zhuǎn)移實驗。hIRBP16M8Q肽/CFA處理的動物中誘導的致葡萄膜炎細胞被收集，并與MRBPww8。肽一起體外生長3天。在第4天，所述細胞被過繼轉(zhuǎn)移至首次接受實驗的受者，它們的一半接受每周一次200叱GpG寡核苷酸的IP注射，一半接受PBS賦形劑作為對照。用GpG寡核香酸處理的動物與賦形劑處理的組相比顯示較輕的嚴重性炎癥(圖16)，提示了GpG對與CpG阻斷效應(yīng)無關(guān)的疾病具有作用。實施例6:ISS寡核苷酸在關(guān)節(jié)炎動物模型中延遲發(fā)作并降低嚴重度接著在自身免疫性疾病的關(guān)節(jié)炎模型中測試本發(fā)明IMS寡核苷酸，其中是抗體而不是如EAU中的T細胞驅(qū)動炎癥。第0天通過單一IV注射200pg四種單克隆抗膠原致關(guān)節(jié)炎抗體在Balb/c小鼠中誘導膠原抗體誘導的關(guān)節(jié)炎(CIA)(Terato,K.etal.1992)，兩天后注射LPS使所述疾病同步。因此沒有分枝桿菌DNA或其他外生來源CpG被用來誘導疾病。隨后在第4天到第IO天通過IP給予50pgGpG和118hlMS寡核香酸。每天觀察一次動物，使用如下評分系統(tǒng)0=正常；1=限于足中段(跗骨)和踝關(guān)節(jié)的輕微腫脹的紅斑；2=紅斑和輕微腫脹，從踝延伸至足中段；3=紅斑和中度肺脹，從踝延伸至跖骨關(guān)節(jié)；4=紅斑和嚴重腫脹，包括踝、足和足趾。每個腳爪可以-沒定最大分值734，每個小鼠最大分值16。平均關(guān)節(jié)炎分值的測定通過對來自每個實驗組動物的每個腳爪的關(guān)節(jié)炎分值取平均值。然而，用50嗎GpG寡核苷酸的治療在疾病嚴重性和疾病發(fā)病率上顯示無疾病，但在用I18h寡核苷酸處理的動物中觀察到關(guān)節(jié)炎嚴重度的顯著降低和疾病發(fā)作的延遲(圖17和18)。實施例7:IIS寡核苷酸在結(jié)腸炎小鼠中抑制體重減輕已發(fā)表的研究提出，CpG寡核苷酸在結(jié)腸炎動物模型中最小化體重減輕(Rachmilewitz，D.etal.2002)。然而在一些研究中，定時給藥與預(yù)處理是關(guān)鍵的，其提供了顯著的保護效應(yīng)，但疾病發(fā)作后處理加重了疾病(Obermeier,Retal.，2003;Obermeier，F(xiàn).，2002)。為了測定本發(fā)明IMS寡核苷酸是否能類似的影響結(jié)腸炎，使用IL-2介導的炎性腸病動物模型、TNBS誘導的結(jié)腸炎模型(AnimalModelsofAutoimmuneDisease(自身免疫性動物模型)，CurrentProtocolsinImmunology(現(xiàn)代免疫學實驗操作)，第15.19章，2003)。在第-5天，用致結(jié)腸炎亞劑量的TNBS(0.5。/。)經(jīng)直腸處理C3H小鼠。在同一天開始用GpG、118h或118m寡核普酸IP處理，并持續(xù)5天。隨后通過第二次TNBS給藥(3.5。/0,經(jīng)直腸)誘導疾病，之后停止寡核苷酸處理。每天稱一次動物體重，初始體重(第0天)除以體重的變化被用于測定每個治療組的平均體重減輕。所有用寡核苷酸處理的動物當與賦形劑對照組相比時顯示降低的體重減輕(圖19、20和21)。也測試了炎性腸病的另外一個模型?？诜暇厶橇蛩徕c(DSS)誘導急性結(jié)腸炎，這不同于TNBS，是由先天性免疫系統(tǒng)專有介導的。從第-2天開始每天一次通過腹膜內(nèi)注射用50或200嗎的GpG、I-18h或I-18m寡核脊酸預(yù)處理雌性C3H小鼠，隨后通過飲用水飼以3.5%DSS7天(第0-7天)?？蛇x擇地，疾病誘導的當天開始寡核苷酸處理。每天稱一次動物體重，初始體重(第0天體重)除以體重的變化被用于測定。在預(yù)防和治療實^r中，IMS寡核苷酸當相比于賦形劑處理的對照組時都提供了顯著的體重減輕的保護(圖22，23，24和25)。在每個病例中，第0天開始的處理提供了最大的保護。實施例8:118裔變?yōu)檫M一步評價對118免疫調(diào)節(jié)負責的結(jié)構(gòu)性基序，I18誘變對CpG介導的人外周血單核細胞(PBMC)的增殖作用如上述被測定。多聚G區(qū)(I18.M3-6和8;圖26)和六聚物序列的5'(I18.M10-12;圖27)內(nèi)的突變顯著降低了含有六聚物序列5'-GTGGTT-3'的寡核苷酸抑制PBMC增殖的能力。而且，六聚物序列和多聚G之間核苷酸的增加適度地降低了PBMC增殖(I18.M13-16;圖27)。實施例9:118和通過Toll樣受體的信號傳導為了測定118調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的機制，118對Toll樣受體(TLR)激活的作用被評價。通過在表達TLR2，3,4，5,7,8和9的培養(yǎng)的HEK293細胞中的NF-kB激活檢測TLR信號傳導。為了篩選TLR激動劑，包括118的每個免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸以最高濃度(25lag/ml)被測試兩次，將TLR激活與對應(yīng)的TLR的對照配體(列于下文)相比較。類似的，通過比較免疫調(diào)節(jié)寡核苦酸和對照配體的混合物與單獨的對照配體的活性來鑒定TLR拮抗劑。118抑制TLR3,5，7和9由它們對應(yīng)的配體引起的激活。參見圖29。^使用的對照配體包^^:TLR2:HKLM(熱致死的單核細胞增多性李司式(氏)菌(丄/WeWa附o"oc少toge"w),108纟田胞/ml;TLR3:多聚(I:C)，100ng/ml;TLR4:大腸桿菌K12LPS，10ng/ml;TLR5:S.2>//n>MWMw鞭毛蛋白，10ng/ml;TLR7:洛索立賓，1mM;TLR8:ssPolyU/LyoVec，50嗎/ml;TLR9:CpGODN2006，1fxg/ml。實施例10:118抑制TLR7和TLR3配體誘導的IFN-a產(chǎn)生類漿細胞樹突細胞(pDC)是IFN-a的主要內(nèi)生來源以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者中升高的IFN-a水平的來源。為了測定IMSII8是否能影響響應(yīng)于TLR7激動劑的pDC的IFN-a產(chǎn)生，pDC被分離，并在有或無118的情況下與TLR7激動劑一起孵育。通過密度梯度離心使用IsoPrep從兩個不同的供者分離的PBMC中分離人pDC。細胞懸浮液在300g離心10分鐘，棄去上清。所述細胞沉淀-故重懸浮，400uL珠緩沖液(PBSpH7.2、0.5%BSA和2mMEDTA)/108細胞。100uL非-PDC生物素抗體雞尾酒一皮添加至每108細胞，混合并在4-8。C溫育IO分鐘。細胞用5-10ml珠緩沖液/l()S細胞洗滌，在300g離心10分鐘，移除上清。所述細胞沉淀被重懸浮在混合充分的珠緩沖液(400uL/108總細胞)和抗生物素微珠(IOOuL/108總細胞)中，并在4-8。C溫育15分鐘。所述細胞隨后用添加的5-10ml珠緩沖液/108細胞洗滌，在300g離心10分鐘，移除上清。所述細胞被重懸浮，終體積500uL/108細胞，并被添加至LS柱，該柱被預(yù)先通過漂洗用3mL珠緩沖液洗滌，并定位在MACS,茲柱架。所述柱子用3x3mL珠緩沖液洗滌，含有未標記的類漿細胞樹突細胞富集的餾分的全部流出物-陂收集。從供者1分離的pDC與TLR7激動劑洛索立賓(Invivogen;Cat#tlrl-lox)和咪喹莫特(R-837;Invivogen;Cat#tlrl-imq)單獨的或具有5fig/mL或25|Lig/mL118的情況下孵育，根據(jù)廠商的實驗操作通過EUSA(PBLBiomedicals;Cat#41105-2)測定IFN-a產(chǎn)生。任一濃度的118完全消除pDC的IFN-a產(chǎn)生(圖30A)。從供者2分離的pDC在沒有寡核苷酸的情況下與TLR7激動劑洛索立賓和洛索立賓加5pg/mLI18孵育。同樣，118完全阻斷TLR7的IFN-a產(chǎn)生(圖30B)。類似地，PBMC與TLR3激動劑多聚I:C的孵育導致IFN-a產(chǎn)生，其在兩個不同供者中被25|ig/mLI18阻斷(圖31)。實施例11:118抑制CpG誘導的pDC的IFN-a產(chǎn)生SLEH患者血清中的內(nèi)生核酸免疫復(fù)合物中存在的CpG介導類漿細胞樹突細胞(pDC)的IFN-a產(chǎn)生。為了測定IMSI18是否能影響響應(yīng)于CpG序列的pDC的IFN-a產(chǎn)生，pDC被分離，并在有或無118的情況下與CpG免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸一起孵育。如上述分離的pDC與單獨的CpG或具有增加量的118情況下一起孵育。如上述通過ELISA測量IFN-a產(chǎn)生。當存在等摩爾比率的CpG寡核苷酸時118顯著降低IFN-a產(chǎn)生，并且在較高比率幾乎消除來自兩個不同供者pDC的IFN-a產(chǎn)生(圖32A,B)。引入CpG寡核苷酸前將pDC與118預(yù)孵育24小時完全消除來自兩個供者的IFN-a產(chǎn)生(圖32C，D)。實施例12:118在pDC中抑制SLE-免疫復(fù)合物i秀導IFN-aSLE患者血清中含有抗dsDNA抗體和免疫復(fù)合物，其促進pDC在這些患者中通過TLR9和FcyRIIa的IFN-a生產(chǎn)過剩。為了測定118是否影響IFN-a產(chǎn)生，分離的pDC與來自四個不同患者的SLE血清或SLE-IC—起孵育，檢測118的抑制。首先通過ELISA與正常對照相比評價從SLE患者分離的血清中抗ds-DNA抗體和免疫復(fù)合物的存在?；颊?9558和22914具有高水平的抗DNA抗體，而患者KP491和KPS(M接近正常(圖33A)。通過在5cm層析柱(Pharmacia)中的蛋白A瓊脂糖速流珠(2ml;SigmaP3476),從人血清分離免疫復(fù)合物。所述柱用含0.02。/。疊氮化鈉的10mlPBS洗滌。人血清(l-2mL)以1:3被稀釋在PBS中，并經(jīng)0.2um注射器式濾器過濾。稀釋的血清被施用到柱，所述柱用10-15mLPBS洗滌，用10mL0.1M杵檬酸pH2.6洗脫，收集至含有2mL1MTris緩沖液pH7.5的50mL錐形瓶中。洗脫液對PBS透析過夜，無菌過濾，測量OD280以測定蛋白濃度，使用1.5作為消光系數(shù)。所有SLE患者比正常對照具有更高水平的免疫復(fù)合物(圖33B)。而且，來自SLE患者的1嗎/mL純化的Ig與分離的pDC的孵育僅在有抗dsDNA抗體的患者中誘導IFN-a產(chǎn)生(圖33C)。接著測試了118抑制pDC響應(yīng)SLE患者免疫復(fù)合物的IFN-a產(chǎn)生，所述SLE患者血清含有抗dsDNA抗體。來自SLE患者和正常對照的純化的Ig在有或無II8的情況下與分離的pDC—起孵育24小時。分離的pDC或與正常對照的免疫復(fù)合物一起孵育的pDC產(chǎn)生很少的IFN-a(圖34)。相反，與SLE患者的免疫復(fù)合物一起孵育的pDC產(chǎn)生顯著量的IFN-a，并且IFN-a的產(chǎn)生被118抑制。實施例13:118抑制正常外周B細胞(CD19+)的CpG激活為了測定118對免疫刺激性CpG序列激活的B細胞的作用，CD19+外周B細胞被從人外周血分離，并且在有或無免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸118的情況下測試細胞因子產(chǎn)生和細胞增殖。使用添加到107個總細胞的20nLCD19微珠，將CD19+外周B細胞從人血PBMC分離并將其在4。C孵育15分鐘。細胞用2mLs/107細胞洗滌，在3O0xg離心IO分鐘，移除上清。所述細胞沉淀被重懸浮在珠緩沖液(500u1/108細胞)，并上樣至放置在MACS分離器中的LS柱。所述柱用3x3mL緩沖液洗滌，隨后添加洗脫緩沖液，磁性標記的細胞通過穩(wěn)固應(yīng)用所述柱提供的柱塞從所述柱沖洗。洗脫的CD19+細胞在3O0xg離心10分鐘，并被重懸浮在10mlRPMI-1640(具有10%FBS)。為了測定118對CpG-ODN刺激的IL-6和IL-10細胞因子產(chǎn)生的作用，CD19+B細胞與單獨的5(ig/mL刺激性CpG-ODN或存在5嗎/mL118的情況下一起聘育48小時。培養(yǎng)基中的細胞因子水平根據(jù)廠商的實驗操作通過ELISA(Pharmingen，人IL-6，Cat#555220;人IL-10，Cat#555157)分析。如圖35所示，118抑制CpG刺激的IL-6(圖35A)和IL-10(圖35B)表達。為了測定118是否能抑制CpG-ODN刺激細胞增殖，CD19+B細胞與單獨的5[ig/mL刺激性CpG-ODN或存在5嗎/mL或25嗎/mL118的情況下一起孵育4天。在孵育的最后24小時期間，通過[3司胸腺嘧啶摻入分析細胞增殖。118在兩個劑量都顯著抑制CpG刺激的C細胞增殖(圖35C)。實施例14:118抑制狼掩患者外周B細胞(CD19+)的CpG激活為了測定118對免疫刺激性CpG序列激活的狼瘡B細胞的作用，CD19+外周B細胞被從SLE患者中分離，并且在有或無118的情況下測試細胞因子產(chǎn)生和增殖。所述患者是診斷為接受硫酸羥氯喹片少于一年的SLE的23歲女性。CD19+B細胞如上所詳述被分離。118對CpG-ODN刺激的狼瘡CD19+B細胞的IL-6和IL-10細胞因子產(chǎn)生的作用被測試，其通過與單獨的5(ig/mL刺激性CpG-ODN或存在5嗎/mL或25(ig/mL118的78情況下一起孵育細胞48小時。培養(yǎng)基中的細胞因子水平如上述通過ELISA分析。如圖36所示，118抑制CpG刺激的IL-6(圖36A)和IL-10(圖36B)表達。為了測定I18是否能抑制CpG-ODN刺激的CD19+B細胞的增殖，細胞與單獨的5|ig/mL刺激性CpG-ODN或存在1pg/mL、5嗎/mL或25|ig/mLI18的情況下一起孵育4天。在孵育的最后24小時期間，通過卩H]胸腺嘧啶摻入分析細胞增殖。118在所有劑量都顯著抑制CpG刺激的C細胞增殖(圖36C)。實施例15:118激活正常細胞和狼瘡B細胞將118對外周B細胞的激活作用與免疫刺激性CpG序列比較。分離的CD19+CD27-初始B細胞與5)ig/mL或25ng/mL118的孵育誘導IL-6表達到類似于如CpG序列所誘導的程度(圖37B)。相反，與分離的CD19+CD17+記憶B細胞孵育的5嗎/mL或25嗎/mL118誘導IL-6表達到比CpG序列所誘導的更低的程度(圖37A)。在5pg/mL和25|ig/mL的118還誘導IL-10在初始和記憶B細胞中表達，但比CpG-ODN所誘導的水平低(圖38)。類似的，118以氯喹敏感的方式激活B細胞共刺激性標志物CD80和CD86表達，比CpG序列激活的水平低，如FACS所測定的(圖39)。然而，當有或無寡核苷酸的情況下B細胞#皮培養(yǎng)在10%FBS中13天時，118不增加B細胞存活或增殖，CpG序列也如此(圖40)。最后，118是SLE患者B細胞的IL-6(圖41A)、IL-10(圖41B)和細胞增殖(圖41C)的較弱的激活劑。實施例16:118在SLE小鼠模型中延遲疾病發(fā)作測試IT8寡核香酸在狼瘡動物模型中影響疾病發(fā)作的能力。NZB/WF1雌性小鼠自發(fā)發(fā)生蛋白尿、腎病理學和產(chǎn)生針對DNA的抗體，類似于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的個體。每周一次通過皮內(nèi)注射給予NZB/WF1雌性小鼠I18IMS寡核苷酸IO嗎、50(ig和250pg。具有抗dsDNA抗體的動物的百分比在統(tǒng)計學上小于接受每周一次50pg(p《17)和250嗎(p岣.04)劑量的118的組(圖42)。接著測試不同的給藥頻率。NZB/WFl雌性鼠一皮每天一次、每周三次或每周一次共45周給予10jig、50Hg或250jig118,評價蛋白尿發(fā)作。10|ig118的給藥不影響疾病發(fā)作(圖43A)。相反，所有50pg和250(ig的給藥方案相比于PBS對照顯示降j氐疾病發(fā)作的趨勢(圖"B，C)。重要的是，每周三次(圖"B)和每周一次(圖"C)的250^118的給藥相比于10嗎和50嗎I18顯示統(tǒng)計學上的顯著趨勢(時序檢驗分別為p=0.31和p=0.03)。實施例17:用I18對人SLE的治療免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸118被用于治療人SLE患者。診斷為SLE的患者首先通過ELISA一皮篩選在其血清中的抗dsDNA抗體的存在。存在抗dsDNA抗體的的患者隨后用治療有效量的118約0.001微克至約1克治療。優(yōu)選的118治療量是約5微克至約500孩吏克。最優(yōu)選的118治療量是約50-200微克。118治療在進行的基礎(chǔ)上被每天一次、每隔一天一次、每周兩次、每周一次、每兩周一次、或每月一次遞送。在優(yōu)選的治療方案中，118治療是在6-12個月每月一次被遞送，隨后每3-12個月，以維持劑量給藥。監(jiān)測人SLE患者的疾病活性。實施例18:118和相關(guān)的寡核普酸抑制CpG對人B細胞的IL-6刺激免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸118的誘變鑒定出5個相關(guān)的寡核苷酸具有增強的免疫調(diào)節(jié)活性。118的系統(tǒng)性改變產(chǎn)生相關(guān)的寡核苷酸I18.M7(CCATGTGGAAATGGGT);I18.M49(CCATGTGGCCCTGGGT);I18.M51(CCATGTGGAAAAGGGT);I18.M52(CCATGTGGAAAAGGGA);I18.M53(CCATGTGCCCAAGGGA)。為了測定118衍生的寡核苷酸-對CpG-力DN刺激的IL-6細胞因子產(chǎn)生的作用，人B細胞與單獨的5嗎/mL刺激性CpG-ODN或118衍生的寡核香酸或存在5pg/mL118或118衍生的寡核香酸的情況下與5嗎/mLCpG-ODN—起孵育(圖45)。根據(jù)廠商的實驗操作通過ELISA(Pharmingen，人IL隱6，Cat#555220)分析培養(yǎng)基中細胞因子水平。然而人B細胞與118的孵育導致導致對IL-6產(chǎn)生的小刺激，沒有118衍生的寡核香酸觸發(fā)可檢測的80細胞因子產(chǎn)生(圖1，左邊的柱)。類似地，118衍生的寡核苷酸抑制CpG-ODN的IL-6產(chǎn)生優(yōu)于118。盡管所有的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸導致統(tǒng)計學上的顯著抑制(圖45，右邊的柱)。實施例19:具有顯著不同水平的免疫抑制性和刺激性特性的寡核苷酸的表征篩選分析中的抑制性寡核苷酸以測定每個寡核苷酸所具有的免疫抑制性和刺激性活性的相對水平。為了測定抑制性活性，小鼠脾細胞與單獨的TLR7和TLR9激動劑和存在抑制性寡核苷酸的情況下一起孵育，炎性細胞因子如IL-6的激活被測量(圖47)。為了測試免疫刺激性特性的存在，人B細胞與重組CD40配體和寡核苦酸的組合一起稃育，B細胞激活的測定通過檢測短期培養(yǎng)物或存活物中細胞因子產(chǎn)生和長期培養(yǎng)物中免疫球蛋白產(chǎn)生(圖49)。選擇具有顯著不同水平的激活和抑制活性的寡核苷酸用于在動物模型中的進一步測試。使用NZB/WFl品系進行動物研究。每周一次通過IP或皮下途徑遞送寡核苷酸，評價動物的存活、蛋白尿水平和抗dsDNA抗體水平(圖48)。前述實施例是實現(xiàn)本發(fā)明的特定實施方案。提供的所述實施例僅出于示例性目的，并不是旨在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的其他變化對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見的，并包括在所附權(quán)利要求中。本文引用的所有公開物、專利、專利申請和其他參考文獻因此通過引用并入。權(quán)利要求1.藥學上的組合物，包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5’-嘌呤-嘧啶[1]-[X]-[Y]-嘧啶[2]-嘧啶[3]-3’；其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了a.X和Y不能是胞嘧啶-鳥嘌呤；2.如權(quán)利要求1所述的藥學上的組合物，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。3.如權(quán)利要求1所述的藥學上的組合物，其中所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。4.如權(quán)利要求1所述的藥學上的組合物，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。5.如權(quán)利要求1所述的藥學上的組合物，其中所述六聚物序列的X和Y是烏嘌呤-鳥嘌呤。6.如權(quán)利要求1所述的藥學上的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸是寡核苷酸。7.如權(quán)利要求1所述的藥學上的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸被并入載體。8.如權(quán)利要求7所述的藥學上的組合物，其中所述載體是表達載體。9.藥學上的組合物，包括(a)包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)核酸，包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶p]-嘧啶w-3，其中X和Y是鳥嘌呤-鳥噤呤；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；其中所述免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-烏嘌呤序列；以及(b)藥學上可接受的載體。10.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。11.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。12.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5'的2核苷酸，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。13.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述六聚物序列是GTGGTT。14.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述六聚物序列是GTGGTT，所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5'的2核苷酸，并且所迷多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。15.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述六聚物序列是GTGGTT，并且所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。16.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述六聚物序列是GTGGTT，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。17.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)序列是CCATGTGGT丁ATGGGT。18.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸是寡核苷酸。19.如權(quán)利要求9所述的藥學上的組合物，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸被并入載體。20.如權(quán)利要求19所述的藥學上的組合物，其中所述載體是表達載體。21.在個體中治療疾病的方法，所述疾病與個體中非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)，所述方法包括給予所述個體包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)序列，所述免疫調(diào)節(jié)序列包括(i)六聚物序列5'-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶p-嘧啶w-3，；其中X和Y為任意天然存在或合成的核苷酸，除了d.X和Y不能是胞嘧啶-鳥嘌呤；e.當嘧啶[2]是胸腺嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胞嘧啶；f.當嘧啶w是胞嘧啶時，X和Y不能是胞嘧啶-胸腺嘧啶；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的1-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；其中所述免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列。22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述CC二核普酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。23.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3'的2核苷酸。24.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。25.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述六聚物序列的X和Y是鳥嘌呤-鳥噤呤。26.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT。27.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT，所述CC二核苦酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。28.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT，并且所述CC二核香酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。29.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3'的2核苷酸。30.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述核苷酸序列是CCATGTGGTTATGGGT。31.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸是寡核苷酸。32.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸被并入載體。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述載體是表達載體。34.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述與個體中非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)的疾病是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。35.在個體中治療疾病的方法，所述疾病與個體中非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)，所述方法包括給予所述個體包含免疫調(diào)節(jié)序列的免疫調(diào)節(jié)序列，所述免疫調(diào)節(jié)序列包括(i)六聚物序列5，-嘌呤-嘧啶w-[X]-[Y]-嘧啶w-嘧啶,3，其中X和Y是鳥嘌呤-鳥嘌呤；(ii)六聚物序列5，的CC二核苷酸，其中所述CC二核苷酸位于六聚物序列5，的l-5核苷酸；以及(iii)六聚物序列3，的多聚G區(qū)，其中所述多聚G包括至少三個鄰接G,并位于所述六聚物序列3，的2-5核苷酸；其中所述免疫調(diào)節(jié)序列不包含胞嘧啶-鳥嘌呤序列。36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。37.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。38.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。39.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT。40.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT，并且所述CC二核苷酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸。41.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3'的2核苷酸。42.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述六聚物序列是GTGGTT，所述CC二核香酸位于所述六聚物序列5，的2核苷酸，并且所述多聚G區(qū)位于所述六聚物序列3，的2核苷酸。43.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述核苷酸序列是CCATGTGGTTATGGGT。44.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸是寡核苷酸。45.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)核酸被并入載體。46.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述載體是表達載體。47.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述與個體中非生理學存在的一個或多個自身分子相關(guān)的疾病是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。全文摘要本發(fā)明涉及治療或預(yù)防疾病的方法和組合物，包括給予具有一個或多個免疫調(diào)節(jié)序列(IMS)的免疫調(diào)節(jié)核酸。本發(fā)明還涉及鑒定IMS的手段和方法，用于預(yù)防或治療疾病，更特別的是治療和預(yù)防自身免疫性疾病或炎性疾病。本發(fā)明還涉及疾病的治療和預(yù)防，包括免疫調(diào)節(jié)核酸的單獨給藥，或?qū)⑵渑c編碼一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽的多核苷酸的組合給藥。本發(fā)明還涉及用于在個體中治療疾病的方法和組合物，所述疾病與所述個體中一個或多個自身抗原、自身蛋白、自身多肽或自身肽相關(guān)并與非生理學狀態(tài)有關(guān)。文檔編號A61K31/70GK101484176SQ200780024912公開日2009年7月15日申請日期2007年6月13日優(yōu)先權(quán)日2006年6月13日發(fā)明者內(nèi)尼特·蘇瓦山,海德基·葛元,邁克爾·勒維騰申請人:貝希爾治療學股份有限公司