專利名稱：茚并吲哚化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的茚并吲哚化合物，它們是疏水的抗氧化劑，并對還原(即驟冷)在脂類及脂類雙相中的自由基非常有效，因此能終止脂類的過氧化作用過程，避免由這種及有關(guān)過程引起的疾病。本發(fā)明還涉及組合物，尤其是成分中包含至少一種發(fā)明化合物或其鹽，尤其是其治療中可接受的鹽作為活性成分的藥物組合物。進(jìn)一步說，本發(fā)明涉及這些化合物的制備方法，活性化合物在醫(yī)學(xué)治療和預(yù)防以及在非醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。在非醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中特別重要的應(yīng)用是控制或終止自由基的中介過程。
一些生物過程或多或少地產(chǎn)生一些穩(wěn)定的中間物，這些中間物內(nèi)含有未成對電子，它們或者提供出去，或者與周圍其它電子配對。這樣的中間物稱為自由基。它們可能是各種酶催化反應(yīng)或非酶催化反應(yīng)的產(chǎn)物，其中一些對身體機(jī)能(例如為合成DNA還原核苷二磷酸，在前列腺素合酶反應(yīng)中生成前列腺素)非常重要。后者對細(xì)胞破壞后的發(fā)炎以及其它幾個機(jī)能是必需的。其它基團(tuán)的反應(yīng)包括能殺死細(xì)菌和其它入侵粒子的嗜中性白血球和巨噬細(xì)胞中的髓過氧化物酶反應(yīng)及在線粒體呼吸鏈上電子的轉(zhuǎn)移。大多數(shù)有機(jī)體內(nèi)含有化學(xué)抗氧化劑，如α-生育酚(維生素E)，抗壞血酸，其它基和過氧化鈍化酶如過氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶。
各種類型的自由基與許多疾病有著日益廣泛的聯(lián)系，這些疾病如局部缺血損份，動脈粥樣硬化、血栓形成和栓塞，過敏性/發(fā)炎性老化如支氣管哮喘、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、與早老性癡呆有關(guān)的疾病、帕金森氏病和衰老、白內(nèi)障、糖尿病、腫瘤、抗腫瘤藥物中毒、免疫抑制劑中毒、化學(xué)物質(zhì)中毒等。對這些疾病的一種可能的尚未知的解釋是抵抗基破壞的內(nèi)生保護(hù)劑的活性不足以保護(hù)組織抵抗基的破壞。在上述疾病中，由基的過量產(chǎn)生引起的脂類過氧化可能構(gòu)成了一個重要的破壞途徑。另外，服用能抑制基反應(yīng)(如脂類過氧化)的抗氧化劑可預(yù)防和治愈上述疾病。本發(fā)明描述了茚并吲哚類的新的抗氧化劑，它們既能滿足膜中積累的需要即它們有足夠的疏水性，又是脂類過氧化作用的有效抑制劑。這些新的抗氧化劑可以很好地與其它抗氧化劑如α-維生素E比較。本發(fā)明化合物也可在非醫(yī)學(xué)方面用于穩(wěn)定對氧化變質(zhì)敏感的化合物，如護(hù)膚品，食品防腐，食品添加劑及其它物品的保護(hù)。本發(fā)明提供了一種用四氫茚并吲哚和所得的穩(wěn)定物合物進(jìn)行穩(wěn)定化的方法。
我們以前的專利申請PCT/GB 90/00949(在1990年12月27日的國際專利說明書(International Specification)wo 90/15800上發(fā)表)是關(guān)于一組四氫茚并吲哚類化合物，它們是脂類過氧化過程中的一種有效的抑制劑，并可用作抗氧化劑。
根據(jù)本發(fā)明，它提供了通式Ⅰ的順式稠合化合物，對映體及其鹽。
Ⅰ其中R是甲氧基或乙氧基，當(dāng)R是甲氧基時，R1是甲基且R2和R3都是氫或都是甲基;當(dāng)R是乙氧基時，R1是氫且R2和R3都是甲基。
已發(fā)現(xiàn)，具有通式Ⅰ的四氫茚并吲哚結(jié)構(gòu)的順式融熔化合物是脂類過氧化過程的高效抑制劑，也是一種有用的抗氧化劑。具有通式Ⅰ的化合物可以是一種外消旋混合物，純對映體或其混合。
本發(fā)明化合物可特別用作醫(yī)療中的抗氧化劑。
本發(fā)明的吲哚結(jié)構(gòu)環(huán)中編號如下
順式-4b，5，9b，10-四氫茚并[1，2-b]吲哚(THII)包含在本發(fā)明中的具有通式Ⅰ的四氫茚并吲哚如下順式-4b，5，9b，10-四氫-4b，6，7，9，9b-五甲基-8-甲氧基-茚并[1，2-b]吲哚順式-4b，5，9b，10-四氫-8-乙氧基-4b，7，9，9b-四甲基-茚并[1，2-b]吲哚順式-4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基-茚并[1，2-b]吲哚根據(jù)本發(fā)明，通式Ⅰ的順式稠合化合物以其游離堿或藥學(xué)上可接受的無毒酸加成鹽為活性成分的藥物制劑或其它藥學(xué)上可接受的劑型通常通過口、直腸、皮膚或注射給藥，其酸加成鹽的例子有鹽酸鹽、氫溴酸鹽、乳酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、氨基磺酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、草酸鹽等。其制劑可以含有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
劑型可以是固體、半固體或液體制劑。通?；钚晕镔|(zhì)將占制劑重量的0.1至99%。具體地說，注射時，活性物質(zhì)占制劑重量的0.5至22%，口服時，活性物質(zhì)占制劑重量的0.2至50%。皮膚給藥服用時，通?；钚猿煞菡贾苿┲亓康?.1至5%，并使用適宜的載體。
欲配制口服用的含發(fā)明化合物劑量單位形式的藥物制劑，可先將所選擇的化合物與一種固體賦形劑，一種粘合劑以及一種潤滑劑混合，然后壓成片劑，所用的賦形劑如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉如土豆淀粉、玉米淀粉或支鏈淀粉、纖維素衍生物;粘合劑如明膠或聚乙烯吡咯烷酮，潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、聚乙二醇、蠟、石蠟等。如果需涂漬片劑，可將上述方法制取的芯涂敷濃糖溶液，糖液可含涂膠、明膠、滑石、二氧化肽以及同類物。另外，片劑亦可涂敷本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的易溶于揮發(fā)性有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑混合物的聚合物。涂層中可添加顏料以便于區(qū)分活性物質(zhì)不同的片劑和活性化合物含量不同的片劑。
對于軟膠囊制劑，活性物質(zhì)可與如植物油或聚乙二醇混和。硬膠囊可含活性物質(zhì)顆粒并使用上述片劑中使用的任一種賦形劑如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉如土豆淀粉、玉米淀粉或支鏈淀粉、纖維素衍生物或凝膠。液體或半固態(tài)藥品亦可放入硬膠囊中。
用于直腸給藥的劑量單位可以是溶液、懸浮液、也可以制成將活性物質(zhì)與中性脂肪堿混合的栓劑形式或?qū)⒒钚晕镔|(zhì)與植物油或石蠟油混和的直腸膠囊。
用于口服的制劑可以是漿液或懸浮液，如含約0.2%到20%(重量百分比)的活性物質(zhì)，余下物質(zhì)是糖和乙醇、水、甘油和丙二醇混合物的溶液。這些液體制劑可含著色劑，加味劑，糖精和羧甲基纖維素增稠劑或其它本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的賦形劑。
用于非腸道注射的溶液可用活性物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的水溶性鹽的水溶液來制備，伏選濃度約為0.5%至10%(重量百分比)。這些溶液還可以含有穩(wěn)定劑和/或緩沖劑并可方便地盛在各種劑量單位的安瓿中。
本發(fā)明化合物用于人體治療時適宜的日劑量約為每次口服用藥約0.01-100mg/kg體重，非腸道用藥，0.001-100mg/kg體重。
本發(fā)明化合物可按以下方法制備，但發(fā)明不僅僅限于這些方法，這些化合物可用已知技術(shù)描述的方法制備。
a.R2和R3都是氫的4b，5，9b，10-四氫茚并[1，2-b]吲哚(ⅠA)可通過還原相應(yīng)的5，10-二氫茚并[1，2-b]吲哚(DHII)制備。
其中R和R1如通式Ⅰ定義。
DHII原料通過與硼基還原劑如氰基硼氫鈉在一種溶劑通常是乙酸中反應(yīng)或與四氫呋喃中的BH3反應(yīng)而被還原。在有強(qiáng)酸如鹽酸存在的情況下可使用在溶劑通常是四氫呋喃或二惡烷中的嗎啉代甲硼烷。此外，還可用三烷基硅烷。反應(yīng)結(jié)束時，通過用水稀釋反應(yīng)混合物，中和及過濾或溶液萃取的方法分離出產(chǎn)物。也可以通過在催化劑如鈀作用下的氫化來完成反應(yīng)。在這種情況下DHII化合物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┤缫掖?、乙酸或乙酸乙酯中。上述情況中，通過去掉催化劑，減壓狀態(tài)下蒸發(fā)溶劑分離出產(chǎn)品。
THII化合物可通過從適當(dāng)?shù)娜軇┲薪Y(jié)晶來提純或用硅膠柱層析法提純。
b 4b，9b-二甲基-4b，5，9b，10-四氫茚并[1，2-b]吲哚(ⅠB)可直接通過將通式為Ⅲ的假吲哚與甲基鋰(CH3Li)在對質(zhì)子隋性的溶劑如無水四氫呋喃中反應(yīng)加以制備。
c 4b，9b-二甲基-4b，5，9b，10-四氫茚并[1，2-b]吲哚(ⅠB)還可由相應(yīng)的4b-未取代的類似物通過一系列金屬取代，如使用丁基鋰，用二氧化碳碳化，再用丁基鋰直接進(jìn)行金屬取代及用甲基鹵或硫酸甲酯進(jìn)行烷基取代，最后將所得的N-羧化中間物水解制得。
通式Ⅱ的DHII原料可由通式為Ⅳ的苯肼與通式Ⅴ的1-2，3-二氫-1-茚酮(R4為氫)進(jìn)行費(fèi)歇爾吲哚合成反應(yīng)制得。
通式為Ⅲ的假吲哚原料可由通式為Ⅳ的苯肼與通式為Ⅴ的2-甲基-2，3-二氫-1-茚酮-(R4為甲基)反應(yīng)制備。
其中R和R1定義如通式Ⅰ，R4分別為氫或甲基。
通式為Ⅴ的1-或2-甲基-2，3-二氫-1-茚酮可與通式為Ⅳ的苯肼反應(yīng)該苯肼既可以是游離堿，也可以是鹽，通常是鹽酸鹽。通常反應(yīng)物溶解于溶劑中，優(yōu)選醇溶劑如乙醇或丙醇。在某些情況下不需加熱，但在另外一些情況下必須給反應(yīng)混合物加熱1小時或1小時以上使其回流。
通式為Ⅴ的化合物與通式為Ⅳ的苯肼反應(yīng)通過通式為Ⅵ的苯腙中間體形成通式為Ⅱ或Ⅲ的化合物。
Ⅵ其中R和R1定義如通式Ⅰ，R4是氫或甲基。
苯腙中間體有時可以通過用水稀釋反應(yīng)混合物并過濾分離出來或用適當(dāng)溶劑用萃取的方法分離出來。進(jìn)一步的提純可通過結(jié)晶或?qū)游龇?。最后，用硅膠柱層析并用一系列洗脫溶劑可獲得滿意的效果。
苯腙環(huán)化成通式為Ⅱ的DHII或通式為Ⅲ的假吲哚可通過以下步驟實(shí)現(xiàn)將它們重新溶解于一種適當(dāng)?shù)娜軇┲?，最好是一種醇如乙醇或丙醇，用一種酸如鹽酸、乙酸或三氟乙酸處理溶液?？赡苄杓訜嵋部赡懿恍杓訜?。其它的環(huán)化試劑包括路易斯酸如氯化鋅或含有磷原子的試劑如三氯化磷、三氯氧化磷、多磷酸或多磷酸鹽。
在與2，3-二氫-1-茚酮進(jìn)行的反應(yīng)中，應(yīng)該用苯肼鹽代替苯肼，中間物苯腙環(huán)化成DHII或假吲哚的反應(yīng)可自然發(fā)生。
式為ⅠB的化合物的4b-未被取代的類似物，即通式為Ⅶ的化合物可由通式為Ⅳ的苯肼和通式為Ⅴ的2-甲基-2，3-二氫-1-茚酮(R4為甲基)進(jìn)行費(fèi)歇爾吲哚合成反應(yīng)繼而將通式Ⅲ的中間物假吲哚還原制得。
Ⅶ通式為Ⅲ的假吲哚還原成在C-9b位被取代的衍生物的反應(yīng)可以用標(biāo)準(zhǔn)還原劑如溶于適宜溶劑(如乙醇)中的硼氫化鈉完成。然后產(chǎn)物用通常方法分離和提純。
諸如5，10-二氫茚并[1，2-b]吲哚(DHII)和含官能團(tuán)的類似物這樣的原料的制備方法在我們的申請EP-A-0404536中描述。
以下說明本發(fā)明的原理和適用性，然而并不限于此。給出的溫度是攝氏度。
實(shí)施例1順式-4b，5，9b，10-四氫-4b，6，7，9，9b-五甲基-8-甲氧基茚并[1，2-b]吲哚ⅰ)2，3，6-三甲基苯甲醚將在500ml乙腈中的50克(0.367mol)2，3，6-三甲基苯酚、55克(0.4mol)碳酸鉀和36ml(0.38mol)硫酸二甲酯的混合物加熱回流過夜。再加入35ml濃氨水，混合物回流1小時。過濾并蒸發(fā)后，殘余物溶于乙醚，用氫氧化鈉溶液洗滌兩次，再用碳酸氫鈉溶液洗滌兩次。干燥(MgSO4)并蒸發(fā)得50.8克產(chǎn)物(92%)。
ⅱ)4-硝基-2，3，6-三甲基苯甲醚向攪拌并加熱(70-80℃)的在200ml乙酸中的20.3克(0.135mol)2，3，6-三甲基苯甲醚溶液中滴入9.65ml在20ml乙酸中的濃HNO3水溶液。添加后將混合物倒入冰中，所得的混合物用二氯甲烷萃取三次。將有機(jī)相蒸發(fā)以去除乙酸和二氯甲烷;殘余物溶于乙醚中并用氫氧化鈉溶液洗滌兩次，再用碳酸氫鈉溶液清洗兩次。干燥(MgSO4)并蒸發(fā)后可得19.0克(72%)產(chǎn)物。產(chǎn)物在下一步中不經(jīng)提純即可使用。
ⅲ)4-氨基-2，3，6-三甲基苯甲醚將在200ml乙醇中的19.0克(0.097mol)4-硝基-2，3，6-三甲基苯甲醚和兩小勺pd/c(5%)的混合物在帕爾裝置中氫化4小時。過濾除去催化劑并蒸發(fā)溶劑。殘余物溶于乙醚中并用鹽酸水溶液(2M)萃取。
混合水相用氫氧化鈉水溶液堿化到PH值為14。所得的堿溶液用乙醚萃取。干燥(MgSo4)后，加入Hcl(克)的乙醚溶液，產(chǎn)物以其Hcl鹽析出。過濾后得10.1克(63%)產(chǎn)物。
ⅳ)4-肼基-2，3，6-三甲基苯甲醚將5.17克(0.0256mol)4-氨基-2，3，6-三甲基苯甲醚鹽酸化物在30ml濃鹽酸水溶液和35ml水的懸浮液加熱(80℃)直至鹽酸化物溶解。冷卻至-5℃，鹽酸化物細(xì)小晶體再次析出。將在15ml水中的1.77克(0.0256mol)NaNo2在30分鐘內(nèi)加入攪拌的混合物中，同時反應(yīng)溫度保持在-5℃至0℃。在此溫度下繼續(xù)攪拌15分鐘后，將14.46克(0.064mol)Sncl2X2H2O在12ml濃Hcl水溶液中的溶液在15分鐘內(nèi)滴入，同時溫度保持在零度。然后，慢慢讓反應(yīng)混合物的溫度達(dá)到室溫再用氫氧化鈉溶液將反應(yīng)混合物堿化至PH值為14。將所得混合物用乙醚萃取，干燥(MgSo4)后，加入Hcl(克)的乙醚溶液，產(chǎn)物以其鹽酸化物析出。過濾后可得3.8克(69%)產(chǎn)物。
ⅴ)9b，10-二氫-6，7，9，9b-四甲基-8-甲氧基茚并[1，2-b]吲哚將2.2克(0.012mol)4-肼基-2，3，6-三甲基苯甲醚，1.9克(0.013mol)2-甲基-2，3-二氫-1-茚酮和2ml濃Hcl水溶液在20ml乙醇中的混合物在氬氣下回流1小時。冷卻后蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物分配在水和二氯甲烷的混合物中。在水相中加入NaHCo3水溶液中和并將各相分離。干燥(MgSo4)并蒸發(fā)有機(jī)相后，剩余的粗產(chǎn)品用硅膠層析提純并用二氯甲烷作洗脫劑。由此可得1.1克31%的產(chǎn)品，下一步可直接使用。
ⅵ)順式-4b，5，9b，10-四氫-4b，6，7，9，9b-五甲基-8-甲氧基茚并[1，2-b]吲哚氬氣氛下，向冷卻(-80℃)的1.1克(0.0038mol)9b，10-二氫-6，7，9，9b-四甲基-8-甲氧基茚并[1，2-b]吲哚的20ml無水THF溶液中加入4ml在乙醚中的1.6M的甲基鋰?；旌衔镌?78℃下攪拌1小時，-20℃下攪拌1小時。溫度達(dá)到0℃后加入NH4Cl水溶液和乙醚。將各相分離，有機(jī)相用水洗滌一次，干燥(MgSo4)并蒸發(fā)。所得粗產(chǎn)品用硅膠層析提純，并用乙酸乙酯/異辛烷(2/10)作洗脫劑。由此可得0.3克(25%)的希望制備的產(chǎn)品。
1HNMR(CDCl3)1.41(3H，S);1.43(3H，S);1.96(3H，S);2.07(3H，S);2.35(3H，S);3.0(1H，d);3.55(3H，S);3.65(1H，d);7.1(3H，m);7.25(1H，m)。
實(shí)施例2順式-4b，5，9b，10-四氫-8-乙氧基-4b，7，9，9b-四甲基茚并[1，2-b]吲哚ⅰ)4-硝基-2，6-二甲基-1-乙氧基苯將10克(0.0598mol)4-硝基-2，6-二甲基苯酚、16.5克(0.1196mol)K2CO3和18.6克(0.1196mol)乙基碘在100ml乙腈中的混合物回流2.5小時。固體物質(zhì)通過熱過濾除去，然后用熱乙腈洗滌。將合并的有機(jī)相蒸發(fā)，所得殘余物溶于乙醚。乙醚相用水洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)后可得11.4克(98%)的產(chǎn)品，M.P.56℃。
ⅱ)3，5-二甲基-4-乙氧基苯胺將11.4克(0.058mol)4-硝基-2，6-二甲基-1-乙氧基苯的115ml乙醇(95%)溶液用pd/c催化劑氫化過夜。過濾去除催化劑，蒸發(fā)掉溶劑可得9.2克(96%)產(chǎn)品，M.P.74℃。
ⅲ)3，5-二甲基-4-乙氧基苯肼在30分鐘內(nèi)向冷卻的(+5℃)攪拌的9.2克(0.0557mol)3，5-二甲基-4-乙氧基苯胺在50ml6NHCl(溶液)的懸浮液中加入在15ml水中的3.8克(0.0557mol)NaNo2。在+5℃下進(jìn)一步攪拌30分鐘后，將所得混合物在氬氣氛并攪拌下加入溶于150ml水的29.1克(0.167mol)連二硫酸鈉中。+5℃下攪拌20分鐘后，加入250ml乙醚，然后用10N的氫氧化鈉溶液將混合物堿化至PH為9。分離有機(jī)相并用氯化鈉溶液洗滌。干燥(Na2So4)后加入HCl(克)/乙醚(到PH值為3)。產(chǎn)品以鹽酸化物的形式沉淀出。過濾并用乙醚洗滌后可得9.4克(78%)的產(chǎn)品。
ⅳ)9b，10-二氫-8-乙氧基-7，9，9b-三甲基茚并[1，2-b]吲哚將2.16克(0.01ml)3.5-二甲基-4-乙氧基苯肼的鹽酸化物和1.46克(0.01mol)2-甲基-2，3-二氫-1-茚酮的20ml乙酸溶液在室溫下攪拌過夜，然后回流三小時。用水稀釋混合物，然后用10N的氫氧化鈉溶液堿化并用二氯甲烷萃取三次，合并的有機(jī)相用水洗滌，干燥(Na2So4)后蒸發(fā)可得2.8克粗產(chǎn)品，用石油醚/乙酸乙酯(5/1)重結(jié)晶，可得2.1克產(chǎn)物(72%)。M.P.164℃。
ⅴ)順式-4b，5，9b，10-四氫-8-乙氧基-4b，7，9，9b-四甲基茚并[1，2-b]吲哚在氬氣氛并攪拌下向2.0克(0.0063mol)9b，10-二氫-8-乙氧基-7，9，9b-三甲基茚并[1，2-b]吲哚的20ml無水四氫呋喃的冷(-78℃)溶液中滴加10ml甲基鋰(1.6N)乙醚溶液。添加完成后在-20℃下繼續(xù)攪拌1小時，然后在室溫下再攪拌1小時。加入20ml飽和氯化銨溶液使反應(yīng)混合物驟冷。加入100ml乙醚后，將有機(jī)相分離，并用氯化銨溶液洗滌反應(yīng)混合物兩次，干燥(Na2So4)并蒸發(fā)可得2.0克(96%)產(chǎn)品。1HNMR(CDCl3)1.35(3H，t);1.4(6H，d);2.1(3H，S);2.35(3H，S);2.95-3.05(1H，d);3.55-3.75(3H，m);6.1(1H，S);7.0-7.3(4H，m)。
實(shí)施例3順式-4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基茚并[1，2-b]吲哚ⅰ)5，10-二氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基茚并[1，2-b]吲哚將在20ml乙醇中的1.95克(0.009mol)4-肼基-2，3，6-三甲基苯甲醚的鹽酸化物(其制備見實(shí)施例1)和1.06克(0.008mol)1-2，3-二氫-1-茚酮溶液和2ml濃鹽酸的混合物回流1小時。蒸發(fā)去掉溶劑，剩余物分配在乙醚和水之間。水相用氫氧化鈉溶液堿化。分出有機(jī)相并用水洗滌。干燥(Na2So4)并蒸發(fā)可得粗產(chǎn)品，將其用色譜法提純，用二氯甲烷/石油醚(20/80)作洗脫劑。最后重結(jié)晶可得1.08克(49%)產(chǎn)品。
ⅱ)順式-4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基茚并[1，2-b]吲哚向0.65克(0.00234mol)5，10-二氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基茚并[1，2-b]吲哚和0.95克(0.00957mol)嗎啉甲硼烷在4ml二惡烷溶液中滴入1ml濃鹽酸。將混合物回流30分鐘，冷卻至室溫，加入3ml6N的鹽酸?；旌衔镌倩亓?0分鐘。冷卻至室溫后，將粗混合物分配于乙醚和氫氧化鈉水溶液之間。分出有機(jī)相并用氫氧化鈉水溶液和水洗滌。干燥(MgSo4)并蒸發(fā)后可得粗產(chǎn)品。將其再從乙酸乙酯/石油醚中重結(jié)晶即得0.46克(70%)產(chǎn)品。1HNMR(CDCl3)2.0(3H，S);2.14(3H，S);2.28(3H，S);3.17(1H，dd);3.55(1H，dd);3.64(1H，S);4.28(1H，ddd);5.38(1H，d);7.20-7.27(3H，m);7.39(1H，d)。
本發(fā)明所涉及的茚并吲哚化合物具有疏水性和穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)可形成陽離子，穩(wěn)定的陽離子基或氧化基團(tuán)。通過測量對體外Fe2+-抗壞血酸鹽引起的脂類過氧化作用的抑制可知，它們是有效的抗氧化劑，其IC50值低至10nm。通式Ⅰ的化合物可有效地防止兔子平滑肌細(xì)胞或小鼠腹膜巨噬細(xì)胞中的人血漿脂肪蛋白的氧化。它們也可防止局部缺血/再灌注對分離灌注大鼠心臟的損害，并可防止四氯化碳、醋氨酚、甲基烷磺胺，甲萘醌、叔-丁基過氧化氫以及N-甲基-N1-氮-N-氮-Soguanidine所引起的對小鼠肝或分離大鼠肝的損壞。
這些性質(zhì)表明，本發(fā)明化合物可用于防止或治療局部缺血或再灌注損傷，特別是臉部和心臟局部缺血或梗塞，動脈粥樣硬化，血栓，栓塞，帕金森氏病，衰老，早衰癡呆病，腫瘤，和抗腫瘤藥物中毒，免疫抑制劑以及包括如支氣管哮喘和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等過敏或發(fā)炎引起的炎癥。其它潛在的用途包括防治化學(xué)品中毒和放射性損傷。茚并吲哚化合物不易為紫外線激活，從而可以用于制造護(hù)膚用品。本發(fā)明茚并吲哚化合物的另一項(xiàng)有趣的主要特性是具有膜穩(wěn)定能力。
本發(fā)明化合物最顯著的特性是其作為自由基凈化劑或抗氧化劑的功效。采用一個測定將脂類過氧化作用抑制50%(IC50)所需通式Ⅰ化合物濃度的分析系統(tǒng)。脂類過氧化作用的測定見下面1中描述，數(shù)據(jù)見表1。此外巨噬細(xì)胞引起的LDL-過氧化作用的抑制試驗(yàn)見下面2中描述，數(shù)據(jù)見表2。
1、抗壞血酸鹽/Fe2+依賴的脂類過氧化作用對于亞鐵/抗壞血酸鹽脂類過氧化作用系統(tǒng)，6.25ml0.1M磷酸鉀緩沖液(KPi)(PH值7.4)，加入12.5ml大豆磷酸脂之中。用氬氣沖洗兩分鐘后，將懸浮液用五層Para film密封并經(jīng)聲學(xué)處理直至懸浮液透明為止。最終的反應(yīng)混合物由200μg/ml磷脂，10μmFeNH4(SO4)2或Fe(NH4)2(SO4)2和在0.1mKPi(PH值7.4)中的100μm抗壞血酸及經(jīng)測試在丙酮或DMSO中的抗氧化物組成。賦形劑的體積不超過總體積的1%。反應(yīng)由加入抗壞血酸和鐵開始，繼而在室溫下于水浴中繼續(xù)進(jìn)行30分鐘，然后通過加入10μm在DMSO中的0.5M2，6-二叔丁基對甲酚停止。上述過程和后續(xù)的2-硫代巴比土酸一反應(yīng)性物質(zhì)的測定在Shertzer，H.G et al，Biochem，Pharmacol.37，333(1988)中描述。表1給出了茚并吲哚和α-維生素E對抗壞血酸鹽/Fe2+依賴脂類過氧化作用。
表1化合物 PIC50順式-8-甲氧基-6，7，9-三甲基-THII 8.0順式-8-乙氧基-4b，7，9，9b-四甲基-THII 7.9順式-8-甲氧基-4b，6，7，9，9b-五甲基-THII 7.62、巨噬細(xì)胞引起的LDL過氧化作用的抑制小鼠腹膜巨噬細(xì)胞在每毫升巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基中含25μg人體低密度脂蛋白(LDL)的Ham氏F10培養(yǎng)基上培養(yǎng)。本發(fā)明化合物溶于乙醇中并加入至最終濃度10-5至10-10M。將三倍量的細(xì)胞培養(yǎng)24小時。然后移走細(xì)胞培養(yǎng)基。用Steinbrecher et al in Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81，3883(1984)中描述的方法通過測定硫代巴比土酸反應(yīng)性物質(zhì)(TBARS)的形成來分析過氧化作用。結(jié)果在表2中，用濃度的對數(shù)形式給出，此濃度是與對照組相比脂類過氧化作用減少50%所必要的濃度(PIC50)。
表2化合物 PIC50順式-8-甲氧基-4b，6，7，9，9b-五甲基-THII 7.9
順式-8-乙氧苯-4b，7，9，9b-四甲苯-THII 7.8順式-8-甲氧基-6，7，9-三甲基-THII 7.9
權(quán)利要求
1.一種制備通式Ⅰ的順式稠合化合物、對映體或其鹽的方法。
Ⅰ這里R為甲氧基或乙氧基，R為甲氧基時，R1為甲基且R2和R3都是氫或都是甲基；R為乙氧基時，R1為氫且R2和R3都是甲基，該方法包括a，5，10-二氫茚并[1，2-b]吲哚(DHII)的還原
其中R和R1的定義見權(quán)利要求1。b、用甲基鋰(CH3Li)還原通式Ⅲ的假吲哚
c、對于4b，9b-二甲基化合物，可由通式為Ⅶ的相應(yīng)4b-未被取代類似物通過一系列金屬取代，再通過二氧化碳碳化、金屬取代和用甲基鹵或硫酸甲烷基取代，最后水解制備。
Ⅶ
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，制備順式-4b，5，9b，10-四氫-8-乙氧基-4b，7，9，9b-四甲基茚并[1，2-b]吲哚，對映體或其鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，制備順式-4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基茚并[1，2-b]吲哚，對映體或其鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，制備順式-4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-4b，6，7，9，9b-五甲基茚并[1，2-b]吲哚、對映體或其鹽。
5.一種制備藥物組合物的方法，它包括將藥學(xué)上可接受的載體和稀釋劑與通式為Ⅰ的順式稠和化合物、對映體或其藥學(xué)上可接受的鹽配制在一起。
Ⅰ這里R為甲氧基或乙氧基，當(dāng)R為甲氧基時，R1為甲基且R2和R3或都是甲基;當(dāng)R為乙氧基時，R1為氫且R2和R3都是甲基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中通式為Ⅰ的順式稠合化合物是順式-4b，5，9b，10-四氫-8-乙氧基-4b，7，9，9b-四甲基茚并[1，2-b]吲哚。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中通式為Ⅰ的順式稠合化合物是順式-4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-6，7，9-三甲基茚并[1，2-b]吲哚。
8.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中通式為Ⅰ的順式稠合化合是順式4b，5，9b，10-四氫-8-甲氧基-4b，6，7，9，9b-五甲基茚并[1，2-b]吲哚。
9.通過用權(quán)利要求1-4中定義的任一個化合物或?qū)τ丑w或其鹽接觸敏感化合物從而穩(wěn)定對氧化變質(zhì)敏感的化合物的方法。
全文摘要
通式為I的順式稠合化合物、對映體及其鹽是新的、在醫(yī)學(xué)和非醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)都有效的抗氧化劑。這里R為甲氧基或乙氧基，當(dāng)R為甲氧基時，R
文檔編號A61K31/40GK1061962SQ9111083
公開日1992年6月17日 申請日期1991年10月15日 優(yōu)先權(quán)日1990年10月16日
發(fā)明者M·塞恩斯伯里, H·舍特澤 申請人:巴斯大學(xué), 辛辛那提大學(xué)