本發(fā)明涉及堿性成纖維細胞生長因子囊泡及其制備方法、含有堿性成纖維細胞生長因子囊泡的制劑及其制備方法，屬于藥物制劑領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

堿性成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor,bfgf)是一類具有多種生理功能的生長因子，主要存在于表皮基底的角質(zhì)形成細胞內(nèi),是重要的促細胞有絲分裂因子和血管生成因子,對來源于外胚層和中胚層的細胞，如上皮細胞、成纖維細胞、軟骨細胞、成骨細胞、真皮細胞、血管內(nèi)皮細胞等具有促進修復(fù)和再生作用，能促進細胞增殖、生長、分化，改善細胞生活微環(huán)境,促進受損神經(jīng)再生及血管、肌肉、皮膚等修復(fù)，減少紫外線輻射對皮膚造成的損害。同時bfgf也是神經(jīng)細胞營養(yǎng)和再生因子,能增加皮膚自身的免疫功能,改善循環(huán),促進皮膚新陳代謝,修復(fù)受損皮膚。

例如，由我公司研發(fā)的重組牛堿性成纖維細胞生長因子(recombinantbovinebasicfibroblastgrowthfactor,rb-bfgf)，其使用基因工程重組的大腸桿菌作為表達載體，經(jīng)過發(fā)酵并高度純化后得到了高活性bfgf產(chǎn)品。其相關(guān)產(chǎn)品貝復(fù)舒，貝復(fù)濟，貝復(fù)新系列已通過國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)上市。

非離子表面活性劑囊泡(non-ionicsurfactantbasedvesicles，niosomes)。它是以各種非離子表面活性劑為載體材料，通過自身閉合形成的雙分子層微型或多室囊泡狀載體。利用非離子表面活性劑囊泡包裹藥物可以減少藥物在達到有效部位前被破壞，延長藥物的半衰期，進而達到延長藥物的作用時間，降低毒副作用，改變藥物在體內(nèi)的分布，被動靶向作用等，以及主動靶向(在加入適當(dāng)特殊輔料后)等作用。囊泡具有雙層膜結(jié)構(gòu)，成為理想的體內(nèi)藥物載體，它既可以將水溶性藥物(如氨基酸、多肽、蛋白類藥物)包封在微水相內(nèi)，作為水溶性藥物載體；也可以將脂溶性藥物增溶在雙層膜中，作為脂溶性藥物載體。與脂質(zhì)體相比，非離子表面活性劑囊泡的載體材料不含磷脂，避免了磷脂的氧化降解，生產(chǎn)和貯存皆不需特殊條件，可使工藝簡化、成本降低，是一種極有希望的新型藥物載體。由于非離子表面活性劑毒性較小，具有生物相容性和可降解性，不解離，不發(fā)生氧化水解，易大量生產(chǎn)，且可根據(jù)用途設(shè)計其結(jié)構(gòu)，近年來對其研究的人越來越多，囊泡技術(shù)已經(jīng)成為化學(xué)、藥學(xué)和生命科學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點之一。

重組蛋白、多肽、單抗類藥物由于本身化學(xué)結(jié)果特點，一般無法采用口服方式給藥。而注射給藥存在注射操作不便且存在安全性問題等缺陷。相比之下，采取經(jīng)皮給藥的外用制劑劑型具有安全、方便等優(yōu)勢。但傳統(tǒng)的外用制劑無法透過完整的皮膚。應(yīng)用新型囊泡給藥系統(tǒng)，可以達到蛋白藥物的透皮吸收，為重組蛋白、多肽、單抗類藥物給藥提供了一條新的安全、方便、有效的途徑，將具有廣闊的應(yīng)用前景，會產(chǎn)生良好的社會效益和可觀的經(jīng)濟效益。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供重組堿性成纖維細胞生長因子囊泡制劑及其制備方法。

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題，本發(fā)明的優(yōu)點和技術(shù)優(yōu)勢為：

堿性成纖維細胞生長因子(basicfibroblastgrowthfactor,bfgf)是一類具有多種生理功能的多肽生長因子，有利于創(chuàng)傷愈合和組織再生，目前國內(nèi)上市的相關(guān)產(chǎn)品的劑型主要包括：外用溶液，外用凍干制劑，滴眼液和凝膠劑，這些傳統(tǒng)劑型在臨床上存在一些不便，限制了bfgf相關(guān)產(chǎn)品的進一步應(yīng)用。靶向制劑是繼一代普通制劑、二代緩釋制劑和前體制劑、三代控釋制劑之后的第四代制劑。目前，脂質(zhì)體是研究的最多靶向藥物載體，但脂質(zhì)體存在如下缺點：(1)其化學(xué)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性，制備及貯藏要求高，一般需要惰性氣體保護；(2)藥物包裹率不高且易發(fā)生滲漏從而失去靶向性；(3)所用原料磷脂難以純化，且易氧化變質(zhì)從而降低膜流動性導(dǎo)致被包裹藥物的滲漏；(4)所用原料磷脂價格昂貴。

隨著脂膜模擬化學(xué)的發(fā)展，人們在研究中發(fā)現(xiàn)，表面活性劑在水溶液可自組裝成和脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)類似雙層封閉結(jié)構(gòu)囊泡，其殼層內(nèi)外均是親水基團，空的中心可容納水性介質(zhì)，夾在兩層親水基團中間的是疏水基團。許多表面活性劑都具有自我組裝形成囊泡結(jié)構(gòu)的能力，但由于非離子型表面活性劑毒性較小，具有生物相容性和可降解性，不解離，不發(fā)生氧化水解，易大量生產(chǎn)，且可根據(jù)用途設(shè)計其結(jié)構(gòu)，因此對其研究較為深入。

非離子型表面活性劑囊泡(niosomes)也可稱為非離子型表面活性劑脂質(zhì)體(因為磷脂也是一種表面活性劑，且一直將liposomes譯為脂質(zhì)體)，它是由非離子表面活性劑自身閉合形成的雙分子層微型或多室囊泡載體，與脂質(zhì)體相比，非離子型表面活性劑囊泡的載體材料不含磷脂，不存在磷脂氧化降解的問題，生產(chǎn)和貯存皆不需特殊條件，可使工藝簡化、成本降低，是一種極有希望的新型藥物載體。

囊泡所具有的雙層膜結(jié)構(gòu)使其成為潛在的理想的體內(nèi)藥物載體,既可以攜帶水溶性藥物(如氨基酸、多肽、蛋白類藥物),將藥物包封在微水相內(nèi),也可以攜帶油溶性藥物,將藥物增溶在雙層膜中，與膠束、微乳液相比,囊泡體系作為藥物載體有如下特點：(1)比表面大，更大的增溶量；(2)雙層膜具有更強的牢固性和穩(wěn)定性；(3)可通過組成、ph、鹽來調(diào)節(jié)粒徑的大小和藥物分子的滲透率。由于組成囊泡的表面活性劑的高度化學(xué)穩(wěn)定性，囊泡比脂質(zhì)體的穩(wěn)定性要高很多，且表面活性劑又具有很好的促滲透作用，因此在經(jīng)皮給藥系統(tǒng)中具有特殊的優(yōu)勢。

目前，提高藥物透過皮膚角質(zhì)層的方法包括微粒載體(泡囊、類脂毫微囊等)，化學(xué)促進劑(氮酮、揮發(fā)油等)，物理促滲技術(shù)(離子導(dǎo)入、電穿孔、超聲波等)。脂質(zhì)體經(jīng)皮給藥研究已較多，但傳統(tǒng)脂質(zhì)體透皮效率并不理想，它們傾向于在皮膚角質(zhì)層表層，與皮膚發(fā)生融合而產(chǎn)生蓄積作用，無法穿透進入皮膚深層，而泡囊載體以其毒性小、刺激性小、不對皮膚造成傷害，促進各種性質(zhì)藥物(脂溶性、水溶性、大分子)穿透皮膚角質(zhì)層、可達到循環(huán)系統(tǒng)等優(yōu)勢而備受注目。

囊泡比脂質(zhì)體更穩(wěn)定，具有增加藥效，減少毒副作用的優(yōu)點，提供了一種可與脂質(zhì)體選擇使用的新型藥物載體。采用制劑新技術(shù)手段，將不穩(wěn)定的生長因子包裹于囊泡的親水內(nèi)核中，再將生長因子囊泡分散與水凝膠中，這樣不僅提高了生長因子的穩(wěn)定性，而且能夠使藥物在水凝膠中形成儲存庫，從而達到緩釋的目的。

本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案完成的：

本發(fā)明所提出的堿性成纖維細胞生長因子囊泡，包括下列重量份組分：

生長因子0.5-40份

非離子表面活性劑2-700份

附加劑0.3-600份。

進一步優(yōu)選為：

生長因子1-20份

非離子表面活性劑5-400份

附加劑0.3-300份。

更進一步優(yōu)選為：

生長因子5-10份

非離子表面活性劑20-200份

附加劑0.5-200份。

非離子表面活性劑為司盤、吐溫、聚氧乙烯脂肪酸酯、泊洛沙姆、聚乙二醇單硬脂酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚甘油烷基醚、冠醚、葡萄糖烷基醚、聚氧乙烯烷基醚、蔗糖酯、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯聚養(yǎng)丙烯共聚物中的一種或多種。

其中，司盤包括：司盤20、司盤40、司盤60、司盤65、司盤80、司盤85等；吐溫包括吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80、吐溫85等；聚氧乙烯脂肪酸酯，別名賣澤(myrij)，包括聚氧乙烯(40)脂肪酸酯、聚氧乙烯(8)脂肪酸酯、聚氧乙烯(50)脂肪酸酯。非離子表面活性劑優(yōu)選為：聚氧乙烯(40)脂肪酸酯、吐溫40、吐溫60、司盤40、司盤60中的一種或一種以上。

所述的附加劑為膽固醇、膽固醇聚乙二醇聚合物、硬脂酸鈉、硬脂酰胺、二鯨蠟磷酸酯、十八胺、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇、泊洛沙姆188、羥丙基倍它環(huán)糊精、殼聚糖、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、n-十六酰-l-高半胱胺酸中的一種或一種以上；其中聚乙二醇種類包括4000、6000、2000、400、300。

附加劑優(yōu)選為：膽固醇或者膽固醇與十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鈉中的一種或一種以上的混合物。

本發(fā)明所述囊泡可采取乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸發(fā)法、水化法、擠出法、機械法、ph梯度法等方法，優(yōu)選以下制備方法：

取非離子表面活性劑、附加劑、溶于適量有機溶劑，加熱或超聲溶解，溶液備用；在15-80℃恒溫攪拌下，取上述溶液勻速注入含生長因子的水溶液中，加完后繼續(xù)攪拌，至有機溶劑揮盡，過濾，灌裝或冷凍干燥，即得。

本發(fā)明所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡制備方法也可以為：取非離子表面活性劑、附加劑、溶于適量有機溶劑，減壓蒸發(fā)至干燥薄膜，真空干燥去殘余溶媒，然后加入含生長因子的水溶液，25-90℃恒溫水合，水合時間10-60分鐘，水合后超聲處理，即得。

本發(fā)明所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡制備方法還可以為：將非離子表面活性劑、附加劑加入適量有機溶劑溶解，溶液加入1/2有機溶劑量以下的水溶液，超聲2-20分鐘，25-65℃旋轉(zhuǎn)至膠態(tài)，再加入含生長因子的水溶液，40-80℃旋轉(zhuǎn)至干，加入水溶液，旋轉(zhuǎn)10-30分鐘，放置1-12小時，充分水合，即得。

本發(fā)明所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡制備方法還可以為：取非離子表面活性劑、附加劑溶于適量有機溶劑，加熱或超聲溶解，溶液備用；在15-80℃恒溫攪拌下，取上述溶液勻速加入加有含生長因子的磷酸鹽緩沖液，加完后繼續(xù)攪拌，至有機溶劑揮盡，加入適量的堿調(diào)節(jié)ph至7，繼續(xù)攪拌1h，灌裝或冷凍干燥，即得；

其中，堿是指氫氧化鈉、氨水、三乙醇胺、三乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉中的一種或一種以上。

本發(fā)明所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡制備方法還可以為：取非離子表面活性劑、附加劑溶于適量有機溶劑，加熱或超聲溶解，溶液備用；在15-80℃恒溫攪拌下，取上述溶液勻速注入加有銨鹽的溶液，加完后繼續(xù)攪拌，至有機溶劑揮盡，通過透析或過柱除去囊泡其中的酸根離子，加入含生長因子的溶液，繼續(xù)攪拌0.5h，過濾，灌裝或冷凍干燥，即得；

其中，銨鹽是指硫酸銨、碳酸銨、氯化銨、醋酸銨、磷酸二氫銨中的一種或一種以上。

本發(fā)明所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡制備方法中附加劑根據(jù)其溶解性的不同，可溶于有機溶劑中，也可溶于水或不同類型的緩沖液中。堿性成纖維細胞生長因子可溶于水中或緩沖液中。

本發(fā)明堿性成纖維細胞生長因子囊泡制備方法中磷酸鹽緩沖液也可以為硫酸銨緩沖液、三羥甲基氨基緩沖液、檸檬酸緩沖液、酒石酸緩沖液、水；有機溶劑包括無水乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙醚、異戊醇、乙酸乙酯的一種或任意比例的混合物。

實驗所涉及的凍干工藝其特征在于經(jīng)過下列工藝步驟：a.預(yù)處理待凍干囊泡液；b.開啟冷凍干燥機，調(diào)節(jié)冷凍干燥室內(nèi)溫度至-30～-40℃以下，將經(jīng)過預(yù)處理的囊泡液放入冷凍干燥機內(nèi)快速冷凍；c.調(diào)節(jié)冷凍干燥室內(nèi)溫度至-40℃，保持冷凍干燥室溫度-40±2℃，產(chǎn)品預(yù)凍1～3小時；d.調(diào)節(jié)冷凝器溫度至-45℃以下，開啟真空系統(tǒng)，待冷凍干燥室內(nèi)真空度降至10.0pa～20.0pa時，開始升溫干燥，調(diào)節(jié)冷凍干燥室溫度逐漸至0±2℃，每小時回溫不超過2℃，維持冷凍干燥室內(nèi)真空度為5～20pa，然后在冷凍干燥室內(nèi)溫度為0±2℃、真空度為10～20pa條件下，保持1～3小時；e.繼續(xù)調(diào)節(jié)冷凍干燥室溫度至15℃，每小時回溫不超過5℃，并維持冷凍干燥室內(nèi)真空度為10～20pa，然后在冷凍干燥室溫度15℃左右，真空條件下，保持1～4小時；f.關(guān)閉冷凍干燥機，調(diào)節(jié)冷凍干燥室內(nèi)環(huán)境至常壓、常溫后，取出囊泡凍干品。

本發(fā)明所述的堿性成纖維細胞生長因子囊泡可以制備為注射劑、口服液、液體膠囊等口服劑型或者外用制劑等，優(yōu)選外用制劑，進一步優(yōu)選凝膠劑、軟膏劑、貼劑等，進一步優(yōu)選為凝膠劑。

重組牛堿性成纖維細胞生長因子囊泡凝膠由以下重量份組分組成：生長因子0.5-40、非離子表面活性劑2-700、附加劑0.3-600、增稠劑0.1-150、保濕劑1-1500、ph調(diào)節(jié)劑0-60、透皮劑0-60、防腐劑0-300。

可優(yōu)選為：生長因子1-20、非離子表面活性劑5-400、附加劑0.3-300、增稠劑0.5-120、保濕劑1-1100、ph調(diào)節(jié)劑0-50、透皮劑0-50、防腐劑0.5-200。

增稠劑可為交聯(lián)聚丙烯樹脂類，包括卡波姆941，974，934p，980，981，934、940、1342及交聯(lián)聚丙烯樹脂不同鹽及衍生物，還可為羥丙甲基纖維素、黃原膠、阿拉伯膠、明膠、海藻酸納等一種或一種以上混合物。

保濕劑可為甘油、丙二醇、異丙醇、透明質(zhì)酸中的一種或一種以上。

ph調(diào)節(jié)劑可為有機胺類如三乙醇胺、三乙胺、二乙胺，也可為氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉。

透皮劑可為氮酮、薄荷醇、精油、二甲基亞砜、丙二醇、肉豆蔻異丙基酸酯、n-甲基吡咯烷酮、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯、油酸聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一種或一種以上。

防腐劑可為山梨酸鉀、山梨酸、羥苯乙酯、羥苯丙酯、羥苯甲酯、苯酚中的一種或一種以上。

所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡凝膠的制備方法為：

取增稠劑、抗氧化劑、抑菌劑、保濕劑，ph調(diào)節(jié)劑，加入水，制成凝膠基質(zhì)，和所制得的生長因子囊泡液混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

更具體地，所述堿性成纖維細胞生長因子囊泡凝膠的制備方法為：

增稠劑加水溶脹，抑菌劑用保濕劑分散，抗氧化劑加水溶解后，均加入到增稠劑中，共同溶脹過夜，加適量的ph調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)ph至6.5-7.5，得凝膠基質(zhì)；將所制得的堿性成纖維細胞生長因子囊泡液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得堿性成纖維細胞生長因子囊泡凝膠。

以下通過實施例來進一步闡述本發(fā)明所述組合物的有益效果。

一、工藝研究

制備囊泡的成功與否主要取決于形成的雙層膜封閉體系是否能夠?qū)⑺幬锇d在其中，所以其包封率是重要的評價指標(biāo)。只有將藥物包載在囊泡的雙分子層結(jié)構(gòu)中才能借助囊泡的優(yōu)勢發(fā)揮藥物的作用，如果包封率過低則囊泡的意義不大，這種情況下與游離藥物的水介質(zhì)溶液在透皮、緩釋等各方面性能基本相同。本發(fā)明從囊泡處方組成及工藝條件進行了實驗研究，具體如下：

1、囊材處方

(1)采用不同非離子表面活性劑與膽固醇作為囊材制備空白囊泡，觀察成囊泡后性狀及靜置后的性狀，初步篩選囊材種類，結(jié)果見表1：

表1不同囊材制備的囊泡的性狀比較

由表1可知，不同的非離子表面活性劑作為囊材制備囊泡時的性狀不同，其中司盤、吐溫、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、蔗糖酯能夠制備出效果較好的囊材。

(2)對囊材進一步篩選

對空白囊泡成囊較好的囊材，進一步考察其包載藥物的能力及載藥囊泡的穩(wěn)定性，本實驗中，保持囊材濃度一致，結(jié)果見表2：

表2不同囊材制備的囊泡的包封率比較

由表2可知，選用吐溫40、吐溫60、司盤40、司盤60、聚氧乙烯(40)脂肪酸酯、brij72、brij721能夠制備出包封率相對較高的囊泡。

(3)附加劑篩選

采用不同附加劑與司盤40作為囊材制備囊泡，觀察囊泡的性狀，結(jié)果見表3：

表3不同囊材制備的囊泡的性狀比較

由表3可知，不同的附加劑作為囊材制備囊泡時的性狀不同，附加劑優(yōu)選膽固醇，或者膽固醇與二鯨蠟磷酸酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鈉、月桂酰甲基?；撬徕c中的一種或一種以上的混合物。

2、囊泡制備方法

囊泡的制備方法很多，主要有注入法、薄膜分散片、冷凍干燥法、熔融法、硫酸銨梯度法、ph梯度法等，以司盤40和膽固醇作為囊材，分別考察以上方法制備的堿性成纖維細胞生長因子囊泡，以囊泡溶液的性狀和包封率作為考察指標(biāo)，考察其制備方法。結(jié)果見表4：

表4不同的制備方法制備的囊泡比較

由表4可知，采用不同的制備方法均可以制備得到形狀良好的囊泡。但綜合考慮包封率及制備工藝工業(yè)化程度，優(yōu)選注入法。

二、透皮實驗

1鼠皮的制備

sd雄性大鼠，240-260g，脫頸椎處死，將腹部及周邊的毛用剃毛刀脫干凈，用解剖剪將褪毛部分的大鼠皮整塊剝離，置于生理鹽水中舒展開(需要2-3min)，用在濾紙上將鼠皮自然鋪展開，將透皮杯上蓋置于剝離的皮膚上，將鼠皮連同濾紙(以保證鼠皮的自然形態(tài))剪成與透皮杯外層稍大的小圓片，將小圓片放入準(zhǔn)備好的生理鹽水中，用眼科彎剪將鼠皮內(nèi)層的脂肪組織及粘膜組織剪去(也可用刀片刮)，處理好的鼠皮用生理鹽水洗凈，存放于墊放了生理鹽水潤濕的濾紙的表面皿內(nèi)，用保鮮膜包封，置于4℃冷藏保存，24h內(nèi)使用。

2.試驗方法

將離體的大鼠皮膚自然固定在改良的franz擴散池上,有效擴散面積為2.8cm2，使皮膚表面面向供藥室，皮膚里層與接收液剛好接觸(接收液用量大約為6.5ml)，共12個樣，供給室中分別加入下文實施例1的堿性成纖維細胞生長因子囊泡凝膠(0.267g)和上市凝膠(商品名貝復(fù)新，珠海億勝生物制藥有限公司生產(chǎn))(用量為0.2g左右)，接收液為37℃預(yù)熱的生理鹽水溶液。接收室水浴溫度為37℃，磁力攪拌轉(zhuǎn)速為500rpm。供給室加入藥液后用封口膜封閉，按設(shè)定取樣時間取樣，取樣方式可為將接收液全部取出，再加滿，也可定量取樣，并補加等量新鮮接收液。

3.試驗結(jié)果

表5生長因子囊泡凝膠與貝復(fù)新透皮試驗累積透過量(n＝6)

由表5和圖1可知，與貝復(fù)新的透皮吸收進行比較，實施例1所制得成纖維細胞生長因子囊泡凝膠透皮效果明顯強于上市凝膠。

本發(fā)明實施例7均按照上述方法進行了相似的試驗，結(jié)果與上述結(jié)果相同。

本發(fā)明所述的堿性成纖維細胞生長因子，根據(jù)實際需要，可以為天然產(chǎn)物或人工重組產(chǎn)物，同時也可以從人源及牛源等不同生物來源獲取。

本發(fā)明所述囊泡中所包裹的藥學(xué)活性成份為堿性成纖維細胞生長因子，根據(jù)實際需要，也可用于包裹其他細胞因子類物質(zhì)，如結(jié)締組織生長因子或表皮生長因子等。

附圖說明

圖1為囊泡凝膠與上市凝膠累積透皮釋放曲線(n＝6)；

圖2為實施例1的生長因子囊泡的粒徑分布圖；

圖3為實施例1的生長因子囊泡的zeta電位圖；

圖4為實施例1的生長因子囊泡的透射電鏡圖。

具體實施方式

實施例1

取堿性成纖維細胞生長因子2×10⁶iu，司盤6045mg，聚乙二醇單硬脂酸酯225mg，硬脂酸鈉37.5mg，膽固醇131.25mg，加入到適量95％乙醇中，至85℃水浴熱溶，全部溶解后，注入到適量的水中，在37℃恒溫攪拌30min，揮盡乙醇，加水至處方量，搖勻，即得囊泡混懸液。

卡波姆980100mg加水溶脹，尼泊金乙酯10mg用1000mg的10％甘油分散，無水亞硫酸鈉50mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶脹過夜，加適量氫氧化鈉溶液調(diào)ph至7.3，得凝膠基質(zhì)。

將囊泡混懸液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

實施例2

取堿性成纖維細胞生長因子2.5×10⁶iu，司盤6080mg，聚乙二醇單硬脂酸酯220mg，硬脂酸鈉50mg，膽固醇200mg，加入到適量95％乙醇中，至85℃水浴熱溶，全部溶解后，注入到適量的水中，在85℃恒溫攪拌30min，將溫度降至55℃繼續(xù)攪拌水合，揮盡乙醇，加水至處方量，搖勻，即得囊泡混懸液。

卡波姆980200mg加水溶脹，尼泊金乙酯40mg用2000mg的5％甘油分散，無水亞硫酸鈉60mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶脹過夜，加適量氫氧化鈉溶液調(diào)ph至7.5，得凝膠基質(zhì)。

將囊泡混懸液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

實施例3

取堿性成纖維細胞生長因子1×10⁶iu，司盤6040mg，聚乙二醇單硬脂酸酯160mg，硬脂酸鈉25mg，膽固醇75mg，加入到適量的95％乙醇中，至75℃水浴熱溶，全部溶解后，注入到適量的1％丙二醇中，在75℃恒溫攪拌40min，將溫度降至40℃繼續(xù)攪拌水合，揮盡乙醇，加水至處方量，搖勻，即得囊泡混懸液。

卡波姆98060mg加水溶脹，尼泊金甲酯30mg用800mg的3％甘油分散，無水亞硫酸鈉10mg加水溶解后，均加入到卡波姆980中，共同溶脹過夜，加適量氫氧化鈉溶液調(diào)ph至6.5，得凝膠基質(zhì)。

將囊泡混懸液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

實施例4

取堿性成纖維細胞生長因子1.2×10⁶iu，司盤60100mg，吐溫20100㎎，聚乙二醇單硬脂酸酯200mg，硬脂酸鈉60mg，膽固醇140mg，加入到適量無水乙醇中，至100℃水浴熱溶，全部溶解后，注入到適量的3％丙二醇中，在100℃恒溫攪拌10min，將溫度降至80℃繼續(xù)攪拌水合，揮盡乙醇，加水至處方量，搖勻，即得囊泡混懸液。

卡波姆974300mg加水溶脹，尼泊金乙酯10mg用1500mg的丙二醇分散，焦亞硫酸鈉120mg加水溶解后，均加入到卡波姆974中，共同溶脹過夜，加適量三乙醇胺溶液調(diào)ph至7.0，得凝膠基質(zhì)。

將囊泡混懸液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

實施例5

取堿性成纖維細胞生長因子4×10⁶iu，司盤20250mg，吐溫80350㎎，膽固醇聚乙二醇聚合物450mg，加入到適量的甲醇中，至30℃水浴熱溶，全部溶解后，注入到適量的5％丙二醇中，在30℃恒溫攪拌60min，將溫度降至25℃繼續(xù)攪拌水合，揮盡甲醇，加水至處方量，搖勻，即得囊泡混懸液。

卡波姆941350mg加水溶脹，加入甘油3000mg，再加入加水溶解后的硫代硫酸鈉100㎎，共同溶脹過夜，加適量碳酸氫鈉溶液調(diào)ph至6.8，得凝膠基質(zhì)。

將囊泡混懸液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

實施例6

取適量磷酸鹽緩沖液(ph6.8)，加入到已熔融的400mg聚乙二醇單硬脂酸酯、280mg膽固醇，高速剪切，混勻后，加入堿性成纖維細胞生長因子4×10⁵iu，水浴攪拌50分鐘，即得囊泡混懸液。

卡波姆934p400mg加水溶脹，山梨酸鉀：三氯叔丁醇(1:1)混合物100mg用500mg的5％異丙醇分散，亞硫酸氫鈉200mg加水溶解后，均加入到卡波姆934p中，共同溶脹過夜，加適量碳酸氫鈉溶液調(diào)ph至6.8，得凝膠基質(zhì)。

將囊泡混懸液與凝膠基質(zhì)混合，攪拌均勻，即得囊泡凝膠。

實施例7

取適量硫酸銨緩沖液(ph7.0)，加入到已熔融的司盤40400mg、蔗糖硬脂酸酯s-3400mg、600mg硬脂酰胺、取堿性成纖維細胞生長因子4×10⁴iu，高速剪切，混勻后，倒入25℃的硫酸銨緩沖液(ph7.0)，水浴攪拌75分鐘，即得囊泡混懸液。

實施例8

取適量三羥甲基氨基緩沖液(ph7.0)，加入到已熔融的200mg吐溫80、300mgbrij30、250mg二鯨蠟磷酸酯、堿性成纖維細胞生長因子4×10⁴iu，高速剪切，混勻后，倒入55℃的三羥甲基氨基緩沖液(ph7.0)，水浴攪拌100分鐘，即得囊泡混懸液。取囊泡混懸液，按常規(guī)方法制備成各種口服固體制劑。

實施例9

取聚氧乙烯(8)脂肪酸酯750mg，膽固醇800mg，聚乙二醇500mg超聲或加熱溶于二氯甲烷中，在40℃恒溫攪拌下，將上述溶液勻速注入ph6.0的醋酸銨溶液中，繼續(xù)攪拌至有機溶劑揮盡，通過透析或過柱除去囊泡中的醋酸根，加入含堿性成纖維細胞生長因子8×10⁵iu的水溶液，繼續(xù)攪拌0.5h，過濾即得堿性成纖維細胞生長因子囊泡。

取卡波姆1342500mg，甘油700mg，丙二醇150mg，山梨酸鉀100mg，加入純化水500ml，過夜充分溶脹，加入碳酸鈉調(diào)節(jié)ph至6.8即得空白凝膠。把空白凝膠基質(zhì)和囊泡混懸液混勻，即得囊泡凝膠。

實施例10

取堿性成纖維細胞生長因子2×10⁴iu，葡萄糖烷基醚500mg，聚甘油烷基醚200mg，羥丙基倍它環(huán)糊精400mg溶于適量乙醇中，勻速注入酒石酸緩沖液中，30℃攪拌除去溶劑后，即得堿性成纖維細胞生長因子囊泡。

實施例11

取堿性成纖維細胞生長因子9×10⁵iu，聚氧乙烯(40)脂肪酸酯300mg，吐溫20900mg，硬脂酸鈉100mg，膽固醇800mg溶于適量異戊醇中，勻速注入ph6.8的檸檬酸緩沖液中，50℃攪拌至異戊醇揮盡，超聲或用高壓均質(zhì)機處理，即得堿性成纖維細胞生長因子囊泡混懸液。

實施例12

取吐溫20100mg，司盤60500mg，二鯨蠟磷酸酯20mg，十八胺50mg，膽固醇400mg溶于適量甲醇：氯仿(3:1)，60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，真空干燥過夜，加入含堿性成纖維細胞生長因子6×10⁶iu的水溶液，水合溫度60℃，水合時間55min，超聲45min，即得囊泡混懸液。

取卡波姆981600mg，海藻酸鈉400mg，甘油800mg，氮酮100mg，三乙胺500mg，山梨酸180mg，加入純化水800ml制得空白凝膠基質(zhì)。將囊泡混懸液和空白凝膠基質(zhì)混合均勻，即得堿性成纖維細胞生長因子囊泡凝膠。

實施例13

取囊泡混懸液，按常規(guī)方法制備成軟膏劑、貼劑、噴霧劑。

以上所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施例，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明所述原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。