本發(fā)明屬于基因治療藥物領域，具體涉及GBP1基因及其抑制劑在制備治療肺鱗癌的藥物中的應用。

背景技術：

肺癌是全球最常見的惡性腫瘤，死亡率居惡性腫瘤之首。我國肺癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢，年平均增長近2％。肺癌根據(jù)病理學特點的不同分為多種組織類型，肺癌組織類型不同，其治療措施也不同。根據(jù)2004版WHO分類，常見肺癌組織病理學分型分為非小細胞癌(NSCLC)和小細胞癌(SCLC)。非小細胞癌又分為鱗狀細胞癌(SCC)、腺癌(AC)和大細胞癌(LCC)。不同肺癌臨床治療方案不同，預后效果也不同。因此，為了提高治療效果，肺癌的治療策略已經從傳統(tǒng)的以分期為基礎的治療模式轉變?yōu)橐越M織學類型和基因突變?yōu)橹笇У膫€體化、精準的多學科治療模式。個體化治療提高了肺癌的治療和預后效果。

診斷的肺癌患者中約80％-85％為非小細胞肺癌，其中肺鱗癌約占20％-30％，屬于一種常見的肺癌病理類型。肺鱗癌治療除傳統(tǒng)手術及放化療外，靶向治療成為其目前治療的重要手段。隨著表皮生長因子受體酪氨酸激酶受體抑制劑(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)問世，給肺腺癌患者帶來巨大獲益后，肺腺癌的各種靶向藥物也已相繼進入臨床，其治療效果、生存期得到明顯改善。相比肺腺癌，肺鱗癌的研究較滯后，仍無有效的靶向藥物指導臨床實踐，原因可能是由于缺乏對其生物學特征的了解。隨著對基因學的深入研究為認識肺鱗癌分子生物學特征提供了可能。在肺鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中，相關分子靶點表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亞單位α(phosphoin-3-kinase catalytic alphapolypeptide,PIK3CA)、成纖維細胞生長因子受體1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)、盤狀結構域受體2(discoidin domain receptor 2,DDR2)、第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、BRAF、MET、胰島素樣生長因子1受體(insulin-like growth factor 1receptor,IGF-1R)等發(fā)揮著重要作用。

GBP1(guanylate-bindingprotein 1)是一類由593個氨基酸組成的單體發(fā)動蛋白，隸屬于干擾素誘導的GTPase超家族。正常人類皮膚組織中不存在GBP1的表達，但當皮膚受到炎癥的侵襲GBP1的表達明顯增高，并抑制炎癥性疾病的加劇，GBP1可能是潛在的炎癥預警信號。在內皮細胞中，GBP1可被IFN-γ、IFN-α、IFN-β、TNF-α、ILs等炎癥因子強烈誘導，并抑制炎癥性疾病中內皮細胞増殖、侵襲。近年來，GBP1的抗腫瘤作用成為關注的熱點，多個體內外實驗已經證實GBP1可以抑制結腸癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤的形成和發(fā)展。

申請人前期研究中發(fā)現(xiàn)，與正常肺組織相比，肺鱗癌病理組織中GBP1基因表達顯著升高，但截至目前尚未有研究證實GBP1與肺鱗癌之間的關系。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供GBP1基因及其抑制劑在制備治療肺鱗癌的藥物中的應用。

上述目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的：

GBP1基因作為藥物靶標在篩選制備治療肺鱗癌的藥物中的應用。

GBP1基因的抑制劑在制備治療肺鱗癌的藥物中的應用。

優(yōu)選地，所述抑制劑選自siRNA、shRNA、dsRNA、miRNA、cDNA或其表達載體，或選自小分子化合物。

優(yōu)選地，所述抑制劑為包含有miR-335-3p基因片段的表達載體。

優(yōu)選地，所述小分子化合物為西貝母堿。

優(yōu)選地，所述小分子化合物為輪環(huán)藤堿。

優(yōu)選地，所述小分子化合物為黃楊堿。

一種用于治療肺腺癌的藥物，含有上述抑制劑。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)miR-335-3p可以明顯下調肺鱗癌NCI-H520細胞中GBP1基因的表達水平，雙熒光素酶報告基因檢測結果表明miR-335-3p可以直接調控GBP1基因。細胞增殖活力檢測結果表明，miR-335-3p通過下調GBP1基因表達顯著抑制肺鱗癌NCI-H520細胞的體外增殖，miR-335-3p是GBP1基因表達的抑制劑。西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿對肺鱗癌NCI-H520移植瘤的生長具有明顯的抑制作用，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿給藥處理后的腫瘤組織中GBP1 mRNA和蛋白表達水平顯著下調，表明GBP1基因的表達可以促進肺鱗癌的生長增殖，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿通過下調GBP1基因的表達實現(xiàn)體內抑瘤作用。

附圖說明

圖1為轉染后各組miR-335-3p表達量變化及各組GBP1 mRNA和蛋白表達水平變化；

圖2為各轉染組肺腺癌NCI-H520細胞增殖活力比較。

具體實施方式

下面結合具體實施例和附圖詳細介紹本發(fā)明的技術方案和技術效果。未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如教科書和實驗指南中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件，為本領域普通技術人員熟知或易于獲知。

實施例1 miR-335-3p靶向下調GBP1基因表達

一、實驗材料

miR-335-3p模擬物miR-335-3p mimics、阻遏物miR-335-3p inhibitor、miR-335-3p模擬物陰性對照miR-335-3p mimics negative control和阻遏物陰性對照miR-335-3p inhibitor negative control購自廣州市銳博生物科技有限公司。

PCR引物委托廣州市銳博生物科技有限公司設計合成。

TRIzol試劑和轉染試劑Lipofectamine 2000購于Invitrogen公司。

肺鱗癌NCI-H520細胞株為本公司長期凍存，用于轉染質粒載體的Hela細胞株購于中國科學院上海細胞生物學研究所細胞庫。RPMI1640培養(yǎng)基和胎牛血清購于Gibco公司。肺鱗癌NCI-H520細胞株和Hela細胞株用含有10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基按常規(guī)方法培養(yǎng)。

BCA蛋白濃度測定試劑盒購自西安赫特生物技術有限公司。

GBP1一抗購于Abnova公司，β-actin一抗購于Abcam公司，HRP標記的二抗購于北京中杉金橋生物科技有限公司。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒購于美國Promega公司。CCK-8試劑盒購于南京凱基生物有限公司。miRcute miRNA提取分離試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司，RNeasy Mini Kit總RNA提取試劑盒購自杭州沃森生物技術有限公司，RNA逆轉錄試劑盒購自TaKaRa公司，Real-time PCR試劑盒購自TaKaRa公司。

二、實驗方法

1、細胞培養(yǎng)及轉染

肺鱗癌NCI-H520細胞株用含有10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基按常規(guī)方法培養(yǎng)。將NCI-H520細胞分為5組，即miR-335-3p模擬物轉染組、阻遏物轉染組、模擬物陰性對照轉染組、阻遏物陰性對照轉染組和只加轉染試劑的空白對照組。轉染在六孔細胞培養(yǎng)板內、待細胞結合度約60％-70％時進行，每孔板加入25pmol的模擬物或阻遏物或陰性對照和10μL的轉染試劑，使模擬物或阻遏物或陰性對照的終濃度為10pmol/mL，轉染后5h換液。

轉染過程嚴格按照轉染試劑Lipofectamine 2000的操作說明進行。

2、RT-PCR法檢測miR-335-3p表達水平

在轉染后48h收獲細胞，按照miRcute miRNA提取分離試劑盒所提供的步驟提取miRNA。用紫外分光光度儀測定所提取RNA的濃度及純度，之后按照TaKaRa逆轉錄試劑盒所提供的步驟將其逆轉錄為cDNA，反應條件：25℃×30min，42℃×30min，85℃×5min。以cDNA為模板，按照TaKaRa RT-PCR試劑盒提供的步驟加入相關試劑及miR-335-3p引物，以U6為內參，在ABI-7300實時熒光定量儀上進行PCR擴增。反應條件：95℃×3min，(95℃×12s，62℃×40s)×40循環(huán)。實驗結果采用2^-ΔΔCt法進行表達量相對定量分析。

miR-335-3p序列：5'-UUUUUCAUUAUUGCUCCUGACC-3'

miR-335-3p逆轉錄引物：5'-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACGGTCAGGA-3'

miR-335-3p RT-PCR上游引物：5'-ACACTCCAGCTGGGTTTTTCATTATTGCTCC-3'

miR-335-3p RT-PCR下游引物：5'-CGCCGCAGTGCGTGTCGTGGAGT-3'

3、RT-PCR法檢測GBP1 mRNA表達水平

在轉染后48h收獲細胞，采用Trizol法提取總RNA，用紫外分光光度儀測定所提取RNA的濃度及純度，結果濃度均在300ng/μL以上，OD260/OD280比值均在1.8左右。按照TaKaRa逆轉錄試劑盒所提供的步驟將其逆轉錄為cDNA，反應條件：25℃×30min，42℃×30min，85℃×5min。以cDNA為模板，按照TaKaRa RT-PCR試劑盒提供的步驟加入相關試劑及引物，以GAPDH為內參，在ABI-7300實時熒光定量儀上進行PCR擴增。反應條件：95℃×3min，(95℃×12s，62℃×40s)×40循環(huán)。實驗結果采用2^-ΔΔCt法進行表達量相對定量分析。

RT-PCR引物序列設計如下：

GBP1 RT-PCR上游引物：5'-TGGAACGTGTGAAAGCTGAG-3'；

GBP1 RT-PCR下游引物：5'-TGACAGGAAGGTCTGGTCT-3'

GAPDH RT-PCR上游引物：5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'；

GAPDH RT-PCR下游引物：5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3'

4、Western blot法檢測GBP1蛋白表達水平

在轉染后48h收獲細胞，以β-actin為內參，步驟如下：用裂解液裂解各組細胞，勻漿后離心取上清，采用BCA試劑盒測蛋白含量。按50μg蛋白上樣行SDS-PAGE電泳。濕轉印法將蛋白質轉印至PVDF膜；50g/L脫脂奶粉溶液室溫封閉2h，加入GBP1一抗稀釋液和β-actin一抗稀釋液，室溫搖床輕搖過夜；TBST洗膜，加入HRP標記的二抗，室溫搖床輕搖1.5h；TBST充分漂洗，加入ECL顯色液，自動凝膠分析儀照相，以相應蛋白條帶灰度值除以內參β-actin灰度值校正得到相應蛋白的相對表達量。

5、雙熒光素酶報告基因檢測

克隆擴增GBP1基因的3'UTR區(qū)全長，將引物重組到psiCHECK-2質粒，生物信息學預測miR-335-3p與GBP1基因的靶結合位點，并針對該點進行定點突變，表達海腎熒光素酶的pRL-TK質粒用來作為內參照調整細胞數(shù)量和轉染效率的差異，miR-335-3p模擬物及其陰性對照和miR-335-3p阻遏物及其陰性對照分別和火螢熒光素酶報告載體共轉染進Hela細胞，雙熒光素酶活性檢測按試劑盒說明書操作。該部分實驗外包給江蘇凱基生物科技有限公司。

6、細胞增殖活力檢測

采用CCK-8方法檢測轉染細胞的增殖活力，分別在轉染1d-6d內檢測。細胞接種在96孔板內，每孔內加入5000個細胞、100μL培養(yǎng)液和10μL檢測試劑。于添加CCK-8試劑2h后上酶標儀在450nm處檢測各孔OD值，每組重復4次。

相對增殖活力(％)＝轉染組OD值/空白對照組OD值×100％。

三、實驗結果

1、轉染后各組miR-335-3p表達水平比較

與空白對照組比，miR-335-3p模擬物轉染組細胞miR-335-3p表達水平顯著上調(P＜0.05)，miR-335-3p阻遏物轉染組細胞miR-335-3p表達水平顯著下調(P＜0.05)，模擬物陰性對照轉染組和阻遏物陰性對照轉染組細胞miR-335-3p表達水平無顯著變化(P＞0.05)。

結果如表1和圖1所示。

表1轉染后各組miR-335-3p表達水平比較

2、轉染后各組GBP1 mRNA表達水平比較

與空白對照組比，miR-335-3p模擬物轉染組細胞GBP1 mRNA表達水平顯著下調(P＜0.05)，miR-335-3p阻遏物轉染組細胞GBP1 mRNA表達水平顯著上調(P＜0.05)，模擬物陰性對照轉染組和阻遏物陰性對照轉染組細胞GBP1 mRNA表達水平無顯著變化(P＞0.05)。

結果如表2和圖1所示。

表2轉染后各組GBP1 mRNA表達水平比較

3、轉染后各組GBP1蛋白表達水平比較

與空白對照組比，miR-335-3p模擬物轉染組細胞GBP1蛋白表達水平顯著下調(P＜0.05)，miR-335-3p阻遏物轉染組細胞GBP1蛋白表達水平顯著上調(P＜0.05)，模擬物陰性對照轉染組和阻遏物陰性對照轉染組細胞GBP1蛋白表達水平無顯著變化(P＞0.05)。結果如圖1。

4、雙熒光素酶報告基因檢測結果

對miR-335-3p和GBP1的野生型結合位點進行定點突變。miR-335-3p模擬物和野生型GBP1共轉染組的Hela細胞熒光素酶活性下降55％，而突變型轉染組中熒光素酶活性無明顯變化，同時在miR-335-3p阻遏物和陰性對照組中也未觀察到有熒光素酶活性的改變。上述結果表明miR-335-3p可以直接調控GBP1基因。

5、細胞增殖活力檢測結果

與空白對照組比，miR-335-3p模擬物轉染組細胞增殖緩慢，miR-335-3p阻遏物轉染組細胞增殖活力增強，模擬物陰性對照轉染組和阻遏物陰性對照轉染組細胞增殖活力無顯著變化。

結果如圖2所示。

上述結果表明，miR-335-3p可以明顯下調肺鱗癌NCI-H520細胞中GBP1基因的表達水平，雙熒光素酶報告基因檢測結果表明miR-335-3p可以直接調控GBP1基因。細胞增殖活力檢測結果表明，miR-335-3p通過下調GBP1基因表達顯著抑制肺鱗癌NCI-H520細胞的體外增殖，miR-335-3p是GBP1基因表達的抑制劑。

實施例2靶向下調GBP1基因表達的小分子化合物的發(fā)現(xiàn)

一、實驗材料

西貝母堿(CAS編號：61825-98-7)、輪環(huán)藤堿(CAS編號：518-94-5)和黃楊堿(CAS編號：860-79-7)為本公司標準品庫中儲存的化合物。將西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿分別用二甲基亞砜溶解配成濃度為1mg/mL的母液，使用時用培養(yǎng)基稀釋至所需濃度。

其他實驗材料同實施例1。

二、實驗方法

1、細胞培養(yǎng)及化合物給藥處理

肺鱗癌NCI-H520細胞株用含有10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基按常規(guī)方法培養(yǎng)。將NCI-H520細胞分為7組，即西貝母堿低劑量組和高劑量組、輪環(huán)藤堿低劑量組和高劑量組、黃楊堿低劑量組和高劑量組和只加等量溶劑的空白對照組。取對數(shù)生長期的細胞，傳到24孔板中，貼壁培養(yǎng)過夜。吸去培養(yǎng)基，加入含藥培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h，其中，低劑量組含藥培養(yǎng)基中藥物濃度為5μM，高劑量組含藥培養(yǎng)基中藥物濃度為10μM。

2、RT-PCR法檢測GBP1 mRNA表達水平

給藥培養(yǎng)24h收獲細胞，采用Trizol法提取總RNA，用紫外分光光度儀測定所提取RNA的濃度及純度，結果濃度均在300ng/μL以上，OD260/OD280比值均在1.8左右。按照TaKaRa逆轉錄試劑盒所提供的步驟將其逆轉錄為cDNA，反應條件：25℃×30min，42℃×30min，85℃×5min。以cDNA為模板，按照TaKaRa RT-PCR試劑盒提供的步驟加入相關試劑及引物，以GAPDH為內參，在ABI-7300實時熒光定量儀上進行PCR擴增。反應條件：95℃×3min，(95℃×12s，62℃×40s)×40循環(huán)。實驗結果采用2^-ΔΔCt法進行表達量相對定量分析。

RT-PCR引物序列設計如下：

GBP1 RT-PCR上游引物：5'-TGGAACGTGTGAAAGCTGAG-3'；

GBP1 RT-PCR下游引物：5'-TGACAGGAAGGTCTGGTCT-3'

GAPDH RT-PCR上游引物：5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'；

GAPDH RT-PCR下游引物：5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3'

3、Western blot法檢測GBP1蛋白表達水平

給藥培養(yǎng)24h收獲細胞，以β-actin為內參，步驟如下：用裂解液裂解各組細胞，勻漿后離心取上清，采用BCA試劑盒測蛋白含量。按50μg蛋白上樣行SDS-PAGE電泳。濕轉印法將蛋白質轉印至PVDF膜；50g/L脫脂奶粉溶液室溫封閉2h，加入GBP1一抗稀釋液和β-actin一抗稀釋液，室溫搖床輕搖過夜；TBST洗膜，加入HRP標記的二抗，室溫搖床輕搖1.5h；TBST充分漂洗，加入ECL顯色液，自動凝膠分析儀照相，以相應蛋白條帶灰度值除以內參β-actin灰度值校正得到相應蛋白的相對表達量。

4、細胞增殖活力檢測

給藥培養(yǎng)24h收獲細胞，采用CCK-8方法檢測各組細胞的增殖活力。細胞接種在96孔板內，每孔內加入5000個細胞、100μL培養(yǎng)液和10μL檢測試劑。于添加CCK-8試劑2h后上酶標儀在450nm處檢測各孔OD值，每組重復4次。

相對增殖活力(％)＝給藥組OD值/空白對照組OD值×100％。

三、實驗結果

1、給藥處理后各組GBP1 mRNA表達水平比較

與空白對照組比，各藥物低劑量和高劑量組細胞GBP1 mRNA表達水平顯著下調(P＜0.05)，且呈一定的濃度依賴關系。結果如表3所示。

表3給藥處理后各組GBP1 mRNA表達水平比較

2、給藥處理后各組GBP1蛋白表達水平比較

與空白對照組比，各藥物低劑量和高劑量組細胞GBP1蛋白表達水平顯著下調(P＜0.05)，且呈一定的濃度依賴關系。結果如表4所示。

表4給藥處理后各組GBP1蛋白表達水平比較

3、細胞增殖活力檢測結果

與空白對照組比，各藥物低劑量和高劑量組細胞增殖活力顯著降低，且呈一定的濃度依賴關系。結果如表5所示。

表5西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿處理對肺腺癌NCI-H520細胞增殖活力的影響

上述結果表明，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿可以明顯下調肺鱗癌NCI-H520細胞中GBP1基因的表達水平。細胞增殖活力檢測結果表明，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿通過下調GBP1基因表達顯著抑制肺鱗癌NCI-H520細胞的體外增殖，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿是GBP1基因表達的有效抑制劑。

實施例3靶向下調GBP1基因表達的小分子化合物對肺鱗癌的體內抑瘤作用

一、實驗材料

SPF級BALB/c裸鼠購自上海斯萊克實驗動物有限公司，7周齡，體重19.5～22.5g。所有小鼠置于溫度(22±2)℃、濕度(60±5)℃、12h明暗交替環(huán)境中飼養(yǎng)。

二、實驗方法

1、動物模型的建立、分組和給藥

取對數(shù)生長期肺鱗癌NCI-H520細胞用0.25％胰蛋白酶消化制成單細胞懸液，臺盼藍拒染法記數(shù)活細胞數(shù)占95％以上，將細胞密度調至1×10⁷/ml，每只裸鼠取0.2ml細胞懸液接種于右大腿背側皮下，術前測量體重。接種后每日觀察，待出現(xiàn)肉眼可見移植瘤后，用游標卡尺測量移植瘤，待移植瘤體積達100mm³左右將裸鼠按瘤體積和荷瘤鼠體重均衡原則隨機分為空白對照組、西貝母堿組、輪環(huán)藤堿組和黃楊堿組，空白對照組給予等體積生理鹽水，給藥組給藥劑量為10mg/kg/d，經皮下注射給藥，隔天一次，連續(xù)十次。藥物處理結束后一天，頸椎脫臼法處死裸鼠，照相，觀察記錄裸鼠包塊形態(tài)大小，將腫塊剝出、稱重，-80℃冷藏備用。

抑瘤率的測定：

用游標卡尺測量腫瘤的最大縱徑(a)及最大橫徑(b)1次，腫瘤體積＝0.5×a×b²，按照如下公式計算各化合物的體內抑瘤率：

抑瘤率(％)＝(對照組腫瘤體積-給藥組腫瘤體積)/對照組腫瘤體積×100％。

2、RT-PCR法檢測腫瘤組織中GBP1 mRNA表達水平

液氮磨組織提取RNA，取100mg組織加入1mL Trizol，提取總RNA。紫外分光光度計測定A260及A280，分析RNA純度并調整濃度。按照TaKaRa逆轉錄試劑盒所提供的步驟將其逆轉錄為cDNA，反應條件：25℃×30min，42℃×30min，85℃×5min。以cDNA為模板，按照TaKaRaRT-PCR試劑盒提供的步驟加入相關試劑及引物，以GAPDH為內參，在ABI-7300實時熒光定量儀上進行PCR擴增。反應條件：95℃×3min，(95℃×12s，62℃×40s)×40循環(huán)。實驗結果采用2^-ΔΔCt法進行表達量相對定量分析。

RT-PCR引物序列設計如下：

GBP1 RT-PCR上游引物：5'-TGGAACGTGTGAAAGCTGAG-3'；

GBP1 RT-PCR下游引物：5'-TGACAGGAAGGTCTGGTCT-3'

GAPDH RT-PCR上游引物：5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3'；

GAPDH RT-PCR下游引物：5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3'

3、Western blot法檢測腫瘤組織中GBP1蛋白表達水平

液氮磨組織提取蛋白質，取100mg組織加入0.75mL細胞裂解液，提取總蛋白。運用BCA法測定蛋白量。每例取50μg，上樣行SDS-PAGE電泳。濕轉印法將蛋白質轉印至PVDF膜；50g/L脫脂奶粉溶液室溫封閉2h，加入GBP1一抗稀釋液和β-actin一抗稀釋液，室溫搖床輕搖過夜；TBST洗膜，加入HRP標記的二抗，室溫搖床輕搖1.5h；TBST充分漂洗，加入ECL顯色液，自動凝膠分析儀照相，以相應蛋白條帶灰度值除以內參β-actin灰度值校正得到相應蛋白的相對表達量。

三、實驗結果

1、各化合物對腫瘤生長的影響

與空白對照組相比，西貝母堿組、輪環(huán)藤堿組和黃楊堿組腫瘤體積明顯較小，表明西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿具有體內抑瘤作用，各組抑瘤率如表6所示。

表6各化合物對腫瘤生長的影響

2、各化合物對腫瘤組織中GBP1 mRNA和蛋白表達水平影響

與空白對照組相比，西貝母堿組、輪環(huán)藤堿組和黃楊堿組腫瘤組織中GBP1 mRNA和蛋白表達水平顯著下調(P＜0.05)。結果如表7所示。

表7各化合物對腫瘤組織中GBP1 mRNA和蛋白表達水平影響

上述結果表明，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿對肺鱗癌NCI-H520移植瘤的生長具有明顯的抑制作用，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿給藥處理后的腫瘤組織中GBP1 mRNA和蛋白表達水平顯著下調，表明GBP1基因的表達可以促進肺鱗癌的生長增殖，西貝母堿、輪環(huán)藤堿和黃楊堿通過下調GBP1基因的表達實現(xiàn)體內抑瘤作用。