技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及3,5-二羥基-4-異丙基-二苯乙烯的治療性應(yīng)用。

背景技術(shù)：

3,5-二羥基-4-異丙基-二苯乙烯(DHIS)是一個(gè)很多年前發(fā)現(xiàn)的天然存在的化合物。其是存在于土壤中的共生微生物的代謝產(chǎn)物；其結(jié)構(gòu)式如下：

已知的是，DHIS具有抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性。但是DHIS的精確和完全的生物學(xué)活性是未知的，DHIS作為局部制劑已進(jìn)行臨床測(cè)試以治療炎癥皮膚疾病，例如牛皮癬和特應(yīng)性皮炎，并且DHIS取得了明顯的療效和極小的副作用(Bissonnette et al.Arch Dermatol,146(4):446-449(2010)；Bissonnette et al.Br J Dermatol,166(4):853-860(2012).)。

由于DHIS在化學(xué)合成中的非甾體特性和立即可用性，DHIS的治療性應(yīng)用將是顯著的。因此有必要探索DHIS的生物學(xué)活性和有效的治療性應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)3,5-二羥基-4-異丙基-二苯乙烯(DHIS)作為殺螨劑的治療性應(yīng)用，本發(fā)明提供了多種實(shí)施方案。

一個(gè)實(shí)施方案提供了一種用于治療被宿主皮膚寄生蟲(chóng)群體過(guò)剩影響的皮膚的方法，所述方法包含對(duì)受影響的皮膚施用有效治療劑量的DHIS。

進(jìn)一步地實(shí)施方案提供了在有此需要的受試者上治療玫瑰痤瘡和痤瘡的方法，所述方法包含對(duì)所述受試者施用有效治療劑量的DHIS。

再一個(gè)實(shí)施方案提供用于在宿主上消除螨蟲(chóng)或降低螨蟲(chóng)數(shù)量的方法，所述方法用3,5-二羥基-4-異丙基-二苯乙烯(DHIS)接觸螨蟲(chóng)。

附圖說(shuō)明

圖1顯示了患有酒渣鼻(有名玫瑰痤瘡)丘疹膿皰個(gè)體(N＝10)的治療結(jié)果。

圖2顯示了患有痤瘡個(gè)體(N＝10)的治療結(jié)果。

圖3A和3B分別顯示了酒渣鼻患者治療前和施用DHIS治療4周后的照片。

圖4A和4B分別顯示了痤瘡(臉頰部)患者治療前和施用DHIS治療4周后的照片。

圖5A和5B分別顯示了痤瘡(前額部)患者治療前和施用DHIS治療4周后的照片

具體實(shí)施方式

以下描述了DHIS作為抗寄生蟲(chóng)藥劑的治療性應(yīng)用，以及用于治療皮膚病癥(例如玫瑰痤瘡和尋常痤瘡)的方法。特別地，本發(fā)明在此揭示了DHIS是強(qiáng)效的殺螨劑，以用于減少或根除蠕形螨。

I.皮膚寄生蟲(chóng)和相關(guān)皮膚情況

蠕形螨是人類皮膚的共生皮外寄生蟲(chóng)。其有兩種主要類型，包括D.folliculorum和D.bravis。它們通常以低密度(0.7個(gè)/cm²)存在于皮膚上并且寄住在發(fā)囊中(Jarmuda et al,J Med Microbiol,61(Pt 11):1504-1510(2012))。它們通常喜歡具有豐富皮脂腺的皮膚區(qū)域，例如面部，前額，鼻子和外耳。在這些部位，螨蟲(chóng)可以交配和繁殖。蠕形螨的壽命范圍為14-18天。繁殖率取決于成蟲(chóng)螨的成功交配，這通常發(fā)生在位于皮膚表面的皮脂腺的卵泡開(kāi)口處。交配后，雌性螨退回到位于表皮表面正下方的皮脂腺中，在那里它們產(chǎn)卵并開(kāi)始下一代的生命周期。

研究表明，這些生物體以低數(shù)量存在于人類皮膚上，特別是面部。對(duì)于幼兒來(lái)說(shuō)蠕形螨的密度更是非常之低。蠕形螨的密度在人青春期開(kāi)始增加，并且到成年期繼續(xù)增加。

在一些皮膚病癥中，例如玫瑰痤瘡、尋常痤瘡、瞼緣炎、口周皮炎和脫發(fā)，與沒(méi)有皮膚病癥的那些相比，螨密度可以顯著增加。在一個(gè)對(duì)860個(gè)人的調(diào)查中，具有正常面部皮膚的個(gè)體僅有5％的機(jī)會(huì)具有大于5個(gè)/cm²的螨蟲(chóng)密度，相比之下，玫瑰痤瘡的機(jī)率為38.5％，痤瘡性玫瑰痤瘡的機(jī)率為9.3％(Zhao et al.J Zhejiang Univ Sci B,12(12):1008-1015(2011).)。非專利文獻(xiàn)Forton et al.Br J Dermatol,128(6):650-659(1993)還公開(kāi)了正常面部皮膚的螨蟲(chóng)密度為0.7個(gè)/cm²，而玫瑰痤瘡的密度為10.8個(gè)/cm²。在其他研究中，除了玫瑰痤瘡之外，已經(jīng)顯示一些其它皮膚病癥與增加的蠕形螨侵襲存在關(guān)聯(lián)，包括瞼緣炎和脫發(fā)(Garcia-Vargas et al.J Am Acad Dermatol 57(2Suppl):S19-21(2007).)。

一般認(rèn)為，雖然皮膚中低密度的螨蟲(chóng)對(duì)皮膚無(wú)害，但螨蟲(chóng)密度的增加可能對(duì)皮膚的健康有害。已經(jīng)得出結(jié)論的是，當(dāng)蠕形螨破壞上皮屏障時(shí)，它們的抗原影響宿主的免疫系統(tǒng)并誘導(dǎo)IV型超敏反應(yīng)(Jarmuda et al,同上)。

下面進(jìn)一步詳細(xì)描述玫瑰痤瘡和尋常痤瘡。

1、玫瑰痤瘡

玫瑰痤瘡(又名酒糟鼻)是常見(jiàn)的面部疾病，其影響約6％的一般人群。受影響的個(gè)體表現(xiàn)為皮膚發(fā)紅、擴(kuò)張的表面血管、丘疹、以及頰、鼻子和前額上的膿皰。有些人眼睛也可能受到影響，特別是瞼緣炎。而在其他患者中，特別是男性，可以發(fā)展為鼻子肥大，導(dǎo)致肥大性酒渣鼻。

玫瑰痤瘡的確切病因和發(fā)病機(jī)制尚未清楚了解。現(xiàn)有理論推測(cè)其與血管超敏反應(yīng)導(dǎo)致的免疫激活增加的作用相關(guān)。

高密度的蠕形螨與玫瑰痤瘡病原性相關(guān)。研究表明，在玫瑰痤瘡皮膚中，蠕形螨數(shù)量大大增加，密度為10.7個(gè)/cm²，至少是正常面部皮膚的蠕形螨密度(0.7個(gè)/cm²)的13倍(Jarmuda et al,同上)。玫瑰痤瘡沒(méi)有既有效又無(wú)副作用的理想療法。目前的選擇包括口服抗炎藥物(例如多西環(huán)素)和全身用異維甲酸。然而，這些藥物的作用是暫時(shí)的，并且通常導(dǎo)致一定的副作用，例如致畸性、過(guò)敏反應(yīng)、GI不耐受以及光敏性等。因此，這些療法在其長(zhǎng)期臨床應(yīng)用性和安全性方面受到限制。局部療法也是存在，其包括甲硝唑(殺螨劑)，伊維菌素(殺螨劑)和沉淀硫(殺螨劑和抗炎劑)。然而，這些藥物對(duì)皮膚高度刺激，它們的治療作用僅是輕度至中度的。

2、尋常痤瘡

尋常痤瘡是另一種基于小囊的皮膚病，其以臉部、胸部和上背部為中心。在發(fā)生丘疹和膿皰方面，表現(xiàn)與玫瑰痤瘡相似。然而，痤瘡患者的年齡更加年輕，并且他們通常不會(huì)發(fā)生面部潮紅或血管擴(kuò)張。雖然有報(bào)道表明尋常痤瘡與皮脂產(chǎn)生增加和毛囊開(kāi)口阻塞相關(guān)，但其發(fā)病機(jī)理仍不清楚。最近的多項(xiàng)研究表明，尋常痤瘡發(fā)病部位的蠕形螨密度顯著增加。特別地，與沒(méi)有痤瘡的個(gè)體相比，更高百分比的痤瘡患者具有顯著的蠕形螨密度(Zhao et al.同上)。

痤瘡的治療涉及全身治療或局部治療。痤瘡的系統(tǒng)治療類似于玫瑰痤瘡。然而，局部治療是不同的，其包括視黃酸、過(guò)氧化苯甲酰和抗生素。這些治療是適度有效的，或與顯著的副作用相關(guān)。因此需要有效和安全的新療法。

II.DHIS的殺螨活性

不同的實(shí)施方案均涉及DHIS的殺螨活性，其被證明可有效治療皮膚病癥，例如玫瑰痤瘡和尋常痤瘡。

DHIS具有強(qiáng)效的殺螨活性。如本發(fā)明所述，按照非專利文獻(xiàn)胡燁等.秀山海泥浸液對(duì)人體蠕形螨的殺滅作用[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志,2011,29(4):258-263.公開(kāi)的方法，通過(guò)使用壓力刮擦法制備的蠕形螨進(jìn)行體外殺螨試驗(yàn)來(lái)測(cè)定DHIS的殺螨活性，隨后在顯微鏡下觀察蠕形螨的存活時(shí)間。實(shí)施例1進(jìn)一步證明DHIS顯示劑量依賴性的殺螨活性。

如本文所用，螨包括所有蠕形螨種屬，例如毛囊蠕形螨(Demodex folliculorum)、皮脂蠕形螨(D.brevis)和嗜動(dòng)物性蠕形螨(Zoophilic demodex)，例如犬蠕形螨(D.canis)、牛蠕形螨(D.bovis)、馬蠕形螨(D.equi)、綿羊蠕形螨(D.ovis)、貓蠕形螨(D.cati)、豬蠕形螨(D.phyloides)和山羊蠕形螨(D.caprae)。蠕形螨種屬包括但不限于毛囊蠕形螨(D.folliculorum)和皮脂蠕形螨(D.brevis)。

因此，一個(gè)實(shí)施方案提供了用于消除螨蟲(chóng)或減少螨蟲(chóng)數(shù)量的方法，其包含使螨與DHIS接觸。

在具體實(shí)施方案中，螨蟲(chóng)存在于宿主(例如，人)的皮膚上，包括面部、胸部或上背部。在更具體的實(shí)施方案中，螨蟲(chóng)以大于0.7個(gè)/cm²，或大于1.0個(gè)/cm²，或大于2.0個(gè)/cm²，或大于5.0個(gè)/cm²，或大于8.0個(gè)/cm²，或大于10個(gè)/cm²，或大于15個(gè)/cm²的密度存在于皮膚上。

III.皮膚病癥的治療

蠕形螨與一些皮膚病癥的發(fā)病機(jī)理有密切關(guān)系，包括玫瑰痤瘡和尋常痤瘡。與在體外觀察到的DHIS殺螨活性一致，DHIS的局部施用進(jìn)一步證明其在治療與蠕形螨增加有關(guān)的皮膚病癥(例如，玫瑰痤瘡和尋常痤瘡)中是有效的(參見(jiàn)實(shí)施例2-5)。

因此，不同的實(shí)施方案提供了用于治療受皮膚寄生蟲(chóng)過(guò)度影響的宿主皮膚的方法，其中所述方法包括使所述受影響的皮膚與有效治療劑量的DHIS接觸。

如本文所用，宿主是指人或動(dòng)物。

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，皮膚寄生蟲(chóng)是螨。在其它實(shí)施方案中，皮膚寄生蟲(chóng)是虱病(虱子)。

如本文所用，皮膚寄生蟲(chóng)(例如螨)的種群或密度是指每單位面積皮膚表面的寄生蟲(chóng)數(shù)量。通常，在0.7個(gè)/cm²或更小的密度下，螨對(duì)宿主是無(wú)害的或無(wú)致病性的。從這種正常水平的螨密度增加(即，大于0.7個(gè)/cm²)可導(dǎo)致螨過(guò)度繁殖或過(guò)度侵染。

除了玫瑰痤瘡和尋常痤瘡，受螨密度過(guò)高或過(guò)度感染影響的皮膚與病癥相關(guān)，例如眼部蠕形螨感染、瞼緣炎、瞼板腺異常、慢性結(jié)膜炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎、疥瘡、動(dòng)物疥瘡和動(dòng)物螨病等。

在不同實(shí)施方案中，DHIS可以通過(guò)各種方式施用，包括靜脈注射、口服、腹膜給藥、舌下給藥、局部和眼內(nèi)給藥。

如果用作口服制劑，可以將DHIS配制成片劑或膠囊，其可以使用輔料如淀粉、半乳糖，潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑等制備?？诜┯眠€可以采取液體或懸浮液的形式，其還可以包括本領(lǐng)域已知的添加劑。

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，DHIS直接施用于皮膚，例如直接施用于受影響的皮膚。DHIS可以配制成霜?jiǎng)⑾磩?、軟膏劑、混懸劑、粘合劑、泡沫劑、噴霧劑、清潔劑或凝膠劑。

在更具體的實(shí)施方案中，經(jīng)皮或局部制劑可以包括一種或多種皮膚病學(xué)可接受的賦形劑或添加劑，以促進(jìn)經(jīng)皮遞送(即通過(guò)皮膚吸收)。DHIS通常以約0.2％至20％的濃度以及其間的任何百分比或范圍存在于局部制劑中。復(fù)方制劑或局部制劑可以以0.5mg至1g的量進(jìn)行施用。應(yīng)當(dāng)理解，DHIS的確切劑量或濃度可以根據(jù)個(gè)體的皮膚病癥嚴(yán)重程度而改變。

當(dāng)用于治療玫瑰痤瘡、尋常痤瘡以及瞼緣炎時(shí)，可以將DHIS制備為0.1％至20％(w/w)的復(fù)合制劑，施用于受影響的皮膚區(qū)域，每天一次至兩次，實(shí)現(xiàn)臨床癥狀的改善或解決。

DHIS還可以配制為速釋、延遲釋放或持續(xù)釋放制劑。

DHIS可以以相同的方式用于治療動(dòng)物的蠕形螨感染。

實(shí)施例1DHIS的體外殺螨活性

按照非專利文獻(xiàn)《胡燁等.秀山海泥浸液對(duì)人體蠕形螨的殺滅作用[J].中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志,2011,29(4):258-263.》描述的方法，用壓力刮擦法制備的人蠕形螨進(jìn)行體外殺螨測(cè)定，隨后在顯微鏡下檢查蠕形螨的存活時(shí)間。

在分離螨蟲(chóng)后，將30只螨蟲(chóng)放置在含有200μl生理鹽水或含有各種濃度的DHIS(10μM，100μM和1mM)的生理鹽水的載玻片上。將載玻片在室溫(20℃)和70％濕度下孵育。隨后每60分鐘在顯微鏡下檢查載玻片一次，共計(jì)8小時(shí)。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，記錄每種處理濃度的死螨百分比(1分鐘沒(méi)有移動(dòng))。每個(gè)濃度測(cè)試一式三份，記錄三個(gè)實(shí)驗(yàn)的平均值，結(jié)果如表1所示。毛囊蠕形螨(Demodex folliculorum)、皮脂蠕形螨(D.brevis)

表1DHIS體外殺螨活性

實(shí)施例2DHIS減輕了丘疹膿皰性玫瑰痤瘡患者的蠕形螨數(shù)量和皮膚病癥

鑒于DHIS在體外的已證實(shí)的殺螨效果，進(jìn)行以下觀察，(1)檢查DHIS在玫瑰痤瘡皮膚(已證明所述皮膚上蠕形螨數(shù)量增加)上的局部應(yīng)用是否可以導(dǎo)致蠕形螨的減少或根除，和(2)是否伴隨著玫瑰痤瘡臨床癥狀的改善或緩解。

招募總共20名志愿者(其中，10名志愿者具有丘疹膿皰性玫瑰痤瘡，10名志愿者具有丘疹膿皰性尋常痤瘡)用于本觀察。

針對(duì)每個(gè)志愿者，記錄其病癥的持續(xù)時(shí)間、基線體征、面部癥狀以及病癥的嚴(yán)重程度。對(duì)于癥狀狀況，對(duì)每個(gè)個(gè)體的丘疹和膿皰總數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。紅斑評(píng)分分為嚴(yán)重(3，深紅色至紫色)，中度(2，紅色)，輕度(1，粉紅色)或無(wú)(0，正常顏色)。對(duì)于燒傷和瘙癢，使用視覺(jué)模擬標(biāo)度(10cm線)，記錄從0(無(wú)癥狀)至10cm(最嚴(yán)重)的評(píng)分。此外，使用改進(jìn)的壓力刮擦技術(shù)測(cè)量了鼻竇皮膚的基線蠕形螨密度。

為了本研究的目的，對(duì)毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨一起進(jìn)行計(jì)數(shù)。然后對(duì)每個(gè)志愿者使用0.75％濃度的DHIS局部乳膏，每天對(duì)臉部受影響的區(qū)域給藥兩次。4周后對(duì)志愿者進(jìn)行檢查，記錄當(dāng)時(shí)的臨床體征和癥狀。此外，使用改進(jìn)的壓力/刮擦技術(shù)再次評(píng)估蠕形螨密度。

具有丘疹膿皰性玫瑰痤瘡(圖1，N＝10)和痤瘡(圖2，N＝10)的個(gè)體每天給予DHIS0.75％霜?jiǎng)┒?，持續(xù)4周。在基線和給藥4周后，分別評(píng)估個(gè)體的蠕形螨密度(個(gè)/cm²)和臨床體征/癥狀。對(duì)每個(gè)個(gè)體的丘疹和膿皰進(jìn)行計(jì)數(shù)，或計(jì)算整個(gè)面部感染面積。紅斑分為輕度(1，粉紅色)，中度(2，紅色)或重度(3，紫紅色)，而瘙癢和灼燒感覺(jué)根據(jù)10厘米視覺(jué)模擬評(píng)分分級(jí)(*表示p<0.05(t檢驗(yàn)))。

如圖1所示，與基線相比，第4周時(shí)蠕形螨密度顯著降低。同樣，圖2顯示了與痤瘡患者的基線相比，第4周時(shí)的蠕形螨密度顯著降低。蠕形螨密度的降低與玫瑰痤瘡和痤瘡患者的丘疹和膿皰的損傷計(jì)數(shù)顯著減少相關(guān)。減少的紅斑也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其他癥狀例如瘙癢和燒灼感減少。

實(shí)施例3玫瑰痤瘡患者病例研究

病例1:男76歲,患玫瑰痤瘡11年。臨床表現(xiàn)：面部紅斑,丘疹和膿皰，伴有輕度毛細(xì)血管擴(kuò)張；皮膚感覺(jué)偶有灼熱感(這與輕度的肥大性酒糟鼻有關(guān))；眼睛有異物感。用四環(huán)素口服,外用硫磺軟膏等無(wú)效。皮檢發(fā)現(xiàn)螨蟲(chóng)明顯增加。臨床診斷:玫瑰痤瘡二期(丘疹膿皰期).經(jīng)含量0.75％(w/w)的DHIS藥膏一天兩次應(yīng)用,持續(xù)4周,治療結(jié)束時(shí)，其蠕形螨密度顯著降低。更重要的是，玫瑰痤瘡的體征和癥狀顯著改善。參見(jiàn)治療前(圖3A)和治療4周后玫瑰痤瘡患者的照片(圖3B)。

實(shí)施例4痤瘡患者病歷研究

病例2:女,21歲，病程3年5個(gè)月。臨床病征:黑頭粉刺、紅丘疹、小膿皰、但只有輕微的紅斑。癥狀:皮膚油脂分泌旺盛,局部有腫脹感,疼痛感。經(jīng)過(guò)外用維甲酸，硫磺軟膏等治療,口服四環(huán)素,避孕藥,中藥等,無(wú)顯效。皮膚膠貼顯微鏡檢查,發(fā)現(xiàn)螨蟲(chóng)增生明顯。經(jīng)含量0.75％(w/w)的DHIS藥膏一天兩次治療4周后,療效顯著。膿皰丘疹消失，黑頭粉刺減少。皮檢發(fā)現(xiàn)螨蟲(chóng)密度顯著降低。參見(jiàn)治療前(圖4A和5A)和治療4周后(圖4B和5B)的痤瘡患者(臉頰和前額)的照片。

本發(fā)明內(nèi)容僅僅舉例說(shuō)明了要求保護(hù)的一些具體實(shí)施方案，其中一個(gè)或更多個(gè)技術(shù)方案中所記載的技術(shù)特征可以與任意的一個(gè)或多個(gè)技術(shù)方案相組合，這些經(jīng)組合而得到的技術(shù)方案也在本申請(qǐng)保護(hù)范圍內(nèi)，就像這些經(jīng)組合而得到的技術(shù)方案已經(jīng)在本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容中具體記載一樣。