本發(fā)明涉及黃酮類化合物的應用技術，尤其涉及一種黃酮化合物三葉豆紫檀苷Trifolirhizin作為降糖藥物以及治療糖尿病腎病藥物的應用。

背景技術：

糖尿?。―M）是一種由胰腺中遺傳或獲得性地胰島素生成缺陷引起的慢性內分泌疾病。到2025年，全世界糖尿病人數(shù)將增加到3億。糖尿病最常見的并發(fā)癥是糖尿病性神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病變、腎病和心血管疾病，其中糖尿病性腎?。―N）是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，它也是腎臟疾病末期一系列腎臟結構異常的主要原因，例如腎小球膜擴張、腎小球硬化、基底膜增厚、氧化應激和炎性反應因子失衡。糖尿病腎病也是腎功能障礙患者死亡和發(fā)病的主要原因，因此迫切需要找到治療糖尿病腎病更安全的藥物。

幾個世紀以來，中藥在世界各地廣泛使用，一直以來都是藥物的主要來源。三葉豆紫檀苷Trifolirhizin可以從苦豆子莖葉或者苦豆子根部提取分離得到，現(xiàn)有報道其具有多種生物活性，包括抗微生物、抗病毒、抗瘧疾和抗炎，然而沒有三葉豆紫檀苷Trifolirhizin對糖尿病腎病保護作用的相關報道。

技術實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種下式化合物三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體作為制備治療糖尿病腎病的藥物組合物中的用途:

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最優(yōu)的，其中所述的組合物還包含藥學上可接受的載體。

最優(yōu)的，其中將所述的組合物通過口服、胃腸外、吸入或皮下施用。

一種下式化合物三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體作為制備用于降低血糖的藥物組合物中的用途:

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最優(yōu)的，其中所述的組合物還包含藥學上可接受的載體。

最優(yōu)的，其中將所述的組合物通過口服、胃腸外、吸入或皮下施用。

一種含有下式化合物三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體的藥物組合物，

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一種含有下式化合物三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體與另一活性物質的藥物組合物，

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一種含有下式化合物三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體、一種或多種藥用賦形劑和/或藥學上可接受的載體的藥物組合物，

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最優(yōu)的，上述的藥物組合物通過口服、胃腸外、吸入或皮下施用。

由上述技術方案可知，本發(fā)明提供了三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體在制備用于治療糖尿病腎病的藥物組合物中的用途，和降低血糖的藥物組合物中的用途，為降低血糖并治療糖尿病腎病提供了新的藥物選擇。

附圖說明

附圖1為空白對照組大鼠腎臟組織病理切片圖。

附圖2為模型對照組大鼠腎臟組織病理切片圖。

附圖3為二甲雙胍組大鼠腎臟組織病理切片圖。

附圖4為低劑量三葉豆紫檀苷組大鼠腎臟組織病理切片圖。

附圖5為高劑量三葉豆紫檀苷組大鼠腎臟組織病理切片圖。

具體實施方式

結合本發(fā)明的附圖，對發(fā)明實施例的技術方案做進一步的詳細闡述。

三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）在制備降糖藥物、治療糖尿病腎病藥物的應用及含有三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）的降糖、治療糖尿病腎病的藥物組合物，是發(fā)明人在研究三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）過程中，測定誘導糖尿病大鼠的血糖和胰島素含量，及血清和腎臟組織中炎癥細胞因子，還有血清和腎臟組織中SOD、MDA含量及觀察組織病理學變化，證實了三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）具有降糖、治療糖尿病腎病的作用，并制備出含有三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）的降糖、治療糖尿病腎病的藥物組合物。

一種含有三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體的降糖、治療糖尿病腎病的藥物組合物，該藥物組合物包括活性成分：三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體，還有輔助成分：一種或多種藥用賦形劑的組合、藥學上可接受的載體、另一活性物質。一種含有三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體的降糖、治療糖尿病腎病的藥物組合物是由活性成分和至少一種輔助成分組成。

其中藥用賦形劑可以是淀粉、乳糖、微晶纖維素、糊精、羥丙纖維素、交聯(lián)聚維酮、預膠化淀粉、滑石粉、硬脂酸鎂、微粉硅膠、十二烷基硫酸鈉、吐溫80、氫化植物油等起到賦形作用的試劑。該藥物組合物是利用三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體作為活性成分來降糖、治療糖尿病腎病，亦即利用三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體來降低血清胰島素、IL-6、IL-1β、TNF-α和血糖水平，增加SOD的活性，降低腎臟組織中MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量，改善腎臟病理組織學狀況達到降糖、治療糖尿病腎病的目的。

三葉豆紫檀苷，英文名Trifolirhizin（TR），化學式是C₂₂H₂₂O₁₀。

本發(fā)明的方案是經(jīng)過實驗得到的，具體實驗過程和實驗結果如下。

實驗對象為成年雄性SD大鼠，體重在180g到200g之間，新環(huán)境下適應5天。動物在恒溫恒濕環(huán)境下飼養(yǎng)，12小時光/暗循環(huán)，自由飲食。所有實驗程序均按照實驗動物護理和使用指南操作。

1.糖尿病模型的造模

糖尿病模型組是向大鼠腹腔注射的PH4.4濃度0.1M的檸檬酸鹽緩沖液中配置有35mg/kg鏈脲佐菌素STZ以誘導糖尿病模型。同時，10只對照組大鼠腹腔注射相同體積的PH4.4濃度0.1M的檸檬酸鹽緩沖液。鏈脲佐菌素STZ誘導的糖尿病模型組7天后眼眶取血并用試劑盒測定血糖水平。血糖水平≥11.1mmol/L的大鼠模型建立成功，用于進一步的實驗研究。

2.給藥治療及樣本采集

造模1周后，將造模成功的40只糖尿病大鼠隨機分為四組，每組10只：鏈脲佐菌素STZ組（模型對照組）、鏈脲佐菌素STZ+二甲雙胍MET（150mg/kg）組（二甲雙胍組）、鏈脲佐菌素STZ+三葉豆紫檀苷TR（20mg/kg）組（低劑量三葉豆紫檀苷組）和鏈脲佐菌素STZ+三葉豆紫檀苷TR（40mg/kg）（高劑量三葉豆紫檀苷組）,還有不做任何處理的正常大鼠做空白對照組。糖尿病模型確立后，給藥組大鼠分別灌胃給予MET（150mg/kg）、TR（20mg/kg）和TR（40mg/kg），每天一次，連續(xù)30天。模型對照組大鼠和空白對照組大鼠接受相同體積的蒸餾水灌胃。實驗結束時，20%氨基甲酸乙酯麻醉、處死大鼠。心臟取血并在實驗室溫度下靜置20分鐘，3000rpm/min離心10分鐘。切除三塊腎組織樣本于10%中興福爾馬林中固定，用于組織病理學評價，其他腎組織保存在-70℃?zhèn)溆谩?/p>

3.血糖和胰島素含量測定

為了檢測三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（TR）對糖尿病的影響，我們用葡萄糖試劑盒和ELISA試劑盒分別測定了大鼠血糖和胰島素水平。

結果如表1所示，與空白對照組相比，糖尿病大鼠中血糖和胰島素水平顯著高于空白對照組大鼠的水平，模型對照組大鼠血糖和胰島素含量顯著增加，具有統(tǒng)計學意義；與模型對照組相比，二甲雙胍組、低劑量三葉豆紫檀苷組、高劑量三葉豆紫檀苷組血糖和胰島素含量有顯著降低，且具有統(tǒng)計學意義。相比之下，20mg/kg TR（P＜0.001）能降低糖尿病大鼠血糖和胰島素含量，40mg/kg TR 和二甲雙胍MET能有效抑制鏈脲佐菌素STZ刺激大鼠的血糖和胰島素水平的升高（P＜0.001）。結果表明，三葉豆紫檀苷Trifolirhizin對STZ誘導的糖尿病大鼠有降糖作用。

4.血清和腎臟組織中炎癥細胞因子的測量

血漿3000rpm離心10分鐘，然后將血清樣品儲存在-70℃下待測。腎臟樣品在冷生理鹽水中進行組織勻漿，4℃12000rpm離心10分鐘后取上清，儲存于-70℃冰箱中。用BCA蛋白測定試劑盒（Beyotime，南京，中國）測定蛋白質含量。運用ELISA試劑盒分析血清和腎臟組織中白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的濃度，選取了這參與炎癥反應的三個細胞因子，白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α），它們的表達量上調暗示著相關組織器官功能的惡化，它們與許多疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關，重新建立其與抗炎性細胞因子之間的動態(tài)平衡是治療疾病的關鍵。結果見表2、表3。

如表2所示，與空白對照組相比，模型對照組大鼠血清中炎性細胞因子水平顯著增加，且具有統(tǒng)計學意義；與模型對照組相比，二甲雙胍組、高劑量三葉豆紫檀苷組能顯著降低血清中炎性細胞因子水平，且具有統(tǒng)計學意義，低劑量三葉豆紫檀苷組也能明顯降低血清中IL-1β這個炎性細胞因子水平，這些數(shù)據(jù)說明三葉豆紫檀苷Trifolirhizin對STZ誘導大鼠的降糖作用與降低血清中炎性細胞因子有關。

如表3所示，與空白對照組相比，模型對照組的炎癥細胞因子水平顯著增加，且具有統(tǒng)計學意義；與模型對照組相比，二甲雙胍組明顯降低此類炎癥細胞因子水平，高劑量三葉豆紫檀苷組降低IL-6、IL-1β這兩個腎臟炎性細胞因子水平，即三葉豆紫檀苷Trifolirhizin對STZ誘導的腎臟損傷具有保護作用，且降低腎臟中炎性細胞因子水平是其發(fā)揮保護作用的機制。

5.血清和腎臟組織中SOD和MDA的含量

使用南京建成生物工程研究所（中國，南京）提供的試劑盒測定腎組織中SOD和MDA水平。MDA和SOD水平是評估脂質過氧化的指標，間接反映組織損傷程度，在糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色。

如表4所示， STZ誘導能顯著降低SOD的活性（P＜0.001）。但是TR（20mg/kg、40mg/kg）和MET（150mg/kg）治療后，SOD活性有恢復趨勢（P＜0.001）。相反地，STZ誘導后，MDA水平顯著升高（P＜0.01），經(jīng)TR（20mg/kg、40mg/kg）和MET（150mg/kg）治療后MDA水平明顯降低（P值分別為P＜0.001、P＜0.001、 P＜0.001）,且TR（40mg/kg）比TR（20mg/kg）有更好的治療效果。我們的研究結果表明三葉豆紫檀苷Trifolirhizin對STZ誘導的氧化應激具有減毒效果。

6.組織病理觀察

實驗結束時切除腎組織，10%中性福爾馬林固定48小時，然后將樣品在梯度乙醇中脫水、石蠟包埋、蘇木精-伊紅（H&E）染色。最后在 光學顯微鏡下盲法觀察腎組織中的病理變化。

參照附圖1至5所示：

空白對照組腎組織的組織學檢查顯示有正常的細胞結構。相比之下，糖尿病大鼠的腎臟有嚴重的腎小管變性或壞死、中度腎小球擴張、血管壁增厚和腎間質炎癥現(xiàn)象。經(jīng)三葉豆紫檀苷Trifolirhizin（20mg / kg，40mg / kg）和二甲雙胍（150mg / kg）治療后，腎損傷的程度有所緩解。分析結果表明三葉豆紫檀苷Trifolirhizin能顯著改善STZ誘導的糖尿病腎病的組織病理變化。

7.統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)均以平均值±SD表示。采用Tukey多重比較檢驗的單因素方差分析（one-way ANOVA）進行組間比較，P值小于0.05表示差異顯著。

綜上所述，三葉豆紫檀苷或其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物、對映異構物、立體異構體或互變異構體可以制備用于治療糖尿病腎病的藥物組合物，和降低血糖的藥物組，為降低血糖并治療糖尿病腎病提供了新的藥物選擇。