本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種多組分注射液及其制備工藝和用途。
背景技術(shù)：
：膿毒癥(Sepsis)是針對(duì)感染的宿主反應(yīng)失調(diào)引起的致命性器官功能障礙，其院內(nèi)病死率高達(dá)10％以上，已經(jīng)對(duì)人類健康造成了巨大威脅，成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)[參見JAMA.2016Feb23；315(8):801-10]。經(jīng)大數(shù)據(jù)回顧性分析，結(jié)合微陣列技術(shù)和白細(xì)胞基因表達(dá)分析，人們逐漸認(rèn)識(shí)到膿毒癥不僅是一個(gè)全身炎癥反應(yīng)或免疫失調(diào)的過程，而且是一個(gè)持續(xù)炎癥、免疫抑制、分解代謝3者相結(jié)合的復(fù)雜慢性危重病。[參見JTraumaAcuteCareSurg.2012June；72(6):1491-501、BMJ.2016May23；353:i1585和Medicine(Baltimore).2015Dec；94(50):e2044.]。多年以來，抗生素、抗病毒藥物、血管升壓藥物等均用于膿毒癥傳統(tǒng)治療，但尚未有足夠的針對(duì)膿毒癥發(fā)病機(jī)制的特異性藥物投入臨床實(shí)踐。[參見CritCareMed.2013Feb；41(2):580-637]如何及時(shí)糾正膿毒癥發(fā)生發(fā)展過程中的全身性炎癥反應(yīng)、凝血功能障礙和免疫功能紊亂，盡早恢復(fù)機(jī)體促炎-抗炎動(dòng)態(tài)平衡，有效改善患者預(yù)后，成為了膿毒癥治療藥物研發(fā)中亟待解決的重要課題。70年代，中國(guó)著名急救醫(yī)學(xué)專家王今達(dá)教授就提出了治療急性危重病中醫(yī)治則：清熱解毒法治療毒熱證，活血化瘀法治療血瘀證，扶正固本法治療急性虛癥，即“三證三法”，并以此作為治療膿毒癥的基本大法，用于臨床實(shí)踐[參見中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，18(11)：643-4]。1975年，他首次證實(shí)內(nèi)毒素血癥是感染性多臟衰的始動(dòng)病因，提出了“菌毒并治”的治療新對(duì)策，隨著認(rèn)為內(nèi)毒素對(duì)于機(jī)體危害是誘導(dǎo)體內(nèi)炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，從而發(fā)揮毒性作用，進(jìn)一步提出細(xì)菌、內(nèi)毒素、炎性介質(zhì)并治，即“菌毒炎并治”[參見中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2012，18(6)：553-554]。血必凈注射液是依據(jù)“三證三法”的辨證原則，在“菌毒炎并治”的理論指導(dǎo)下，以清代王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》所載“血府逐瘀湯”為基礎(chǔ)，研制而成的一種靜脈注射液，由紅花、赤芍、川芎、丹參、當(dāng)歸五味藥材經(jīng)提取、精制、干燥、調(diào)配等現(xiàn)代工藝制備而成，屬于化瘀解毒類中藥，用于溫?zé)犷惣膊?，癥見發(fā)熱、喘促、心悸、煩躁等瘀毒互結(jié)癥；適用于因感染誘發(fā)的全身炎癥反應(yīng)綜合征；也可配合治療多器官功能失常綜合征的臟器功能受損期。血必凈注射液具有拮抗細(xì)菌內(nèi)毒素[參見中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，18(11)：643-4]、抑制炎癥因子過度釋放[參見中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，18(11)：643-4、EvidBasedComplementAlternatMed.2015；2015:860259和ChinJIntegrMed.2009；15(1):13-5]、克服凝血功能障礙[參見中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2010，27(1)：32-4和中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2009，16(4)：218-22]、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞[參見中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2009，16(4)：218-22]、改善組織微循環(huán)[參見JSurgRes.2016May1；202(1):147-54]、改善免疫功能紊亂[參見中華外科雜志，2009，47(1)：58-61和EvidBasedComplementAlternatMed.2015；2015:352642]等藥理作用，充分體現(xiàn)了中藥多成分、多環(huán)節(jié)、多渠道、多靶點(diǎn)的整合調(diào)節(jié)作用。大樣本量多中心臨床研究和薈萃分析(Meta)分析結(jié)果表明，在常規(guī)綜合治療基礎(chǔ)上聯(lián)合使用血必凈注射液能降低膿毒癥患者28d病死率、并發(fā)癥發(fā)生率，縮短平均住院時(shí)間，有效改善患者全身炎癥反應(yīng)、凝血功能和急性生理學(xué)與慢性健康狀況評(píng)分系統(tǒng)Ⅱ(APACHEⅡ)評(píng)分等臨床指標(biāo)，保護(hù)器官功能，顯著提高臨床療效[參見中華危重病急救醫(yī)學(xué)，2015，27(6)：465-76、中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2013，22(2)：130-5和解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2010，35(1)：9-12]。2003年，中國(guó)專利03104977.X公開了“一種治療膿毒癥的中藥制劑及其制備方法”，即血必凈注射液的制備方法，其制備工藝已經(jīng)非常成熟。隨著科技的進(jìn)步、技術(shù)的創(chuàng)新，我們對(duì)工藝過程進(jìn)行優(yōu)化和工藝參數(shù)細(xì)化，如變更原來制劑過程1％活性炭除熱原為超濾，保障了成品的安全和質(zhì)量均一穩(wěn)定。發(fā)明人借助先進(jìn)研究理念及先進(jìn)儀器設(shè)備，已實(shí)現(xiàn)該注射液的全成分檢測(cè)，通過血必凈注射液物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，我們得到了一種全新的多組分注射液，保留了原血必凈注射液中有效成分。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種多組分注射液，其特征在于，含有以下重量份的活性成分芍藥內(nèi)酯苷8.66-35.26份，芍藥苷1000.0-1700.0份，氧化芍藥苷11.13-68.07份，苯甲酰芍藥苷12.20-52.98份，苯甲酰氧化芍藥苷0.667-1.617份，牡丹皮苷J(rèn)1.915-3.202份，沒食子酰芍藥苷10.63-20.13份，牡丹皮苷C0.804-1.338份，苯甲酸10.0-200.0份，沒食子酸0.21-15.88份，沒食子酸乙酯0.2396-0.6860份，兒茶素1.31-12.60份。上述所述的多組分注射液，其特征在于，制備方法如下：取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏；取上述干膏適量，用注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。在以上多組分注射液的基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種多組分注射液，其特征在于，含有以下重量份的活性成分芍藥內(nèi)酯苷8.66-35.26份，芍藥苷1000.0-1700.0份，氧化芍藥苷11.13-68.07份，苯甲酰芍藥苷12.20-52.98份，苯甲酰氧化芍藥苷0.667-1.617份，牡丹皮苷J(rèn)1.915-3.202份，沒食子酰芍藥苷10.63-20.13份，牡丹皮苷C0.804-1.338份，苯甲酸10.0-200.0份，沒食子酸0.21-15.88份，沒食子酸乙酯0.2396-0.6860份，兒茶素1.31-12.60份，山柰素-3-O-葡萄糖苷1.232-3.547份，野黃芩苷0.0500-0.4184份，槲皮素-3-O-葡萄糖苷0.755-2.570份，山柰素-3-O-蕓香糖苷8.42-29.40份，山柰素-3-O-槐糖苷4.036-7.695份，槲皮素-3-O-蕓香糖苷1.517-5.598份，羥基紅花黃色素A200.0-500.0份，尿嘧啶0.316-0.774份，腺嘌呤13.77-30.56份，苯丙氨酸20.50-44.99份，尿苷11.44-27.13份，腺苷5.07-12.63份，鳥苷8.00-24.11份，丁二酸4.96-16.86份，對(duì)羥基苯甲酸2.384-5.404份，對(duì)香豆酸3.00-17.98份，咖啡酸4.837-7.806份，綠原酸3.83-8.59份。上述所述的多組分注射液，其特征在于制備方法如下：取紅花飲片100g，加入8倍量的30％乙醇浸提8小時(shí)，濾取4～6倍量藥液，加入95％乙醇使含醇量至70％，冷存48小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至100ml；濃縮液加入95％乙醇使含醇量至80％，冷存48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥制成紅花干膏；取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏；取兩種干膏各適量，用注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。在以上多組分注射液的基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種多組分注射液，其特征在于含有以下重量份的活性成分芍藥內(nèi)酯苷8.66-35.26份，芍藥苷1000.0-1700.0份，氧化芍藥苷11.13-68.07份，苯甲酰芍藥苷12.20-52.98份，苯甲酰氧化芍藥苷0.667-1.617份，牡丹皮苷J(rèn)1.915-3.202份，沒食子酰芍藥苷10.63-20.13份，牡丹皮苷C0.804-1.338份，苯甲酸10.0-200.0份，沒食子酸0.21-15.88份，沒食子酸乙酯0.2396-0.6860份，兒茶素1.31-12.60份，山柰素-3-O-葡萄糖苷1.232-3.547份，野黃芩苷0.0500-0.4184份，槲皮素-3-O-葡萄糖苷0.755-2.570份，山柰素-3-O-蕓香糖苷8.42-29.40份，山柰素-3-O-槐糖苷4.036-7.695份，槲皮素-3-O-蕓香糖苷1.517-5.598份，羥基紅花黃色素A200.0-500.0份，尿嘧啶0.316-0.774份，腺嘌呤13.77-30.56份，苯丙氨酸20.50-44.99份，尿苷11.44-27.13份，腺苷5.07-12.63份，鳥苷8.00-24.11份，丁二酸4.96-16.86份，對(duì)羥基苯甲酸2.384-5.404份，對(duì)香豆酸3.00-17.98份，咖啡酸4.837-7.806份，綠原酸3.83-8.59份，洋川芎內(nèi)酯I(42)6.51-69.39份，洋川芎內(nèi)酯H1.55-18.27份，洋川芎內(nèi)酯N4.30-14.22份，開環(huán)洋川芎內(nèi)酯I2.460-5.648份，洋川芎內(nèi)酯G1.55-10.74份，3-羥基-3-丁基苯酞1.43-8.67份，洋川芎內(nèi)酯A0.10-0.961份，阿魏酸7.66-47.15份。上述所述的多組分注射液，其特征在于制備方法如下：取紅花飲片100g，加入8倍量的30％乙醇浸提8小時(shí)，濾取4～6倍量藥液，加入95％乙醇使含醇量至70％，冷存48小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至100ml；濃縮液加入95％乙醇使含醇量至80％，冷存48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥制成紅花干膏；取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏；取川芎、當(dāng)歸飲片各100g，按赤芍工藝方法處理，每次濃縮液為300ml,萃取用水飽和正丁醇每次為150ml，制成干膏；取三種干膏各適量，用適量注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。在以上多組分注射液的基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種多組分注射液，其特征在于含有以下重量份的活性成分芍藥內(nèi)酯苷8.66-35.26份，芍藥苷1000.0-1700.0份，氧化芍藥苷11.13-68.07份，苯甲酰芍藥苷12.20-52.98份，苯甲酰氧化芍藥苷0.667-1.617份，牡丹皮苷J(rèn)1.915-3.202份，沒食子酰芍藥苷10.63-20.13份，牡丹皮苷C0.804-1.338份，苯甲酸10.0-200.0份，沒食子酸0.21-15.88份，沒食子酸乙酯0.2396-0.6860份，兒茶素1.31-12.60份，山柰素-3-O-葡萄糖苷1.232-3.547份，野黃芩苷0.0500-0.4184份，槲皮素-3-O-葡萄糖苷0.755-2.570份，山柰素-3-O-蕓香糖苷8.42-29.40份，山柰素-3-O-槐糖苷4.036-7.695份，槲皮素-3-O-蕓香糖苷1.517-5.598份，羥基紅花黃色素A200.0-500.0份，尿嘧啶0.316-0.774份，腺嘌呤13.77-30.56份，苯丙氨酸20.50-44.99份，尿苷11.44-27.13份，腺苷5.07-12.63份，鳥苷8.00-24.11份，丁二酸4.96-16.86份，對(duì)羥基苯甲酸2.384-5.404份，對(duì)香豆酸3.00-17.98份，咖啡酸4.837-7.806份，綠原酸3.83-8.59份，洋川芎內(nèi)酯I(42)6.51-69.39份，洋川芎內(nèi)酯H1.55-18.27份，洋川芎內(nèi)酯N4.30-14.22份，開環(huán)洋川芎內(nèi)酯I2.460-5.648份，洋川芎內(nèi)酯G1.55-10.74份，3-羥基-3-丁基苯酞1.43-8.67份，洋川芎內(nèi)酯A0.10-0.961份，阿魏酸7.66-47.15份，原兒茶醛1.43-17.25份，原兒茶酸2.361-4.030份，丹參素2.776-6.845份，迷迭香酸5.07-12.78份，丹酚酸D0.0697-0.4005份，丹酚酸C1.123-4.732份，丹酚酸A0.366-2.505份，紫草酸0.429-0.945份，丹酚酸B4.00-11.00份。上述所述多組分注射液，其特征在于制備方法如下：取紅花飲片100g，加入8倍量的30％乙醇浸提8小時(shí)，濾取4～6倍量藥液，加入95％乙醇使含醇量至70％，冷存48小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至100ml；濃縮液加入95％乙醇使含醇量至80％，冷存48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥制成紅花干膏；取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏；取川芎、丹參、當(dāng)歸飲片各100g，按赤芍工藝方法處理，每次濃縮液為300ml,萃取用水飽和正丁醇每次為150ml，制成干膏；取三種干膏各適量，用適量注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。本發(fā)明所述任一種多組分注射液，其特征在于給藥方式為注射給藥。本發(fā)明所述任一種多組分注射液，用于制備治療膿毒癥藥物的用途。由于本發(fā)明的多組分注射液中的活性成分均屬于已知物質(zhì)，可以通過已知方法得到，因此本發(fā)明的以上多組分注射液其制備方法還包括，將購買或制備得到的上述多種活性成分經(jīng)過混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成注射劑。通過如下實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說明本發(fā)明專利的技術(shù)方案：本發(fā)明的多組分注射液，對(duì)膿毒癥細(xì)胞模型及膿毒癥小鼠模型均存在治療作用，提示，本發(fā)明所述多組分注射液，對(duì)于哺乳動(dòng)物的膿毒癥具有治療作用，進(jìn)而對(duì)人體的膿毒癥具有治療作用。以下通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果：實(shí)驗(yàn)一多組分注射液對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)膿毒癥小鼠死亡的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Balb/C雄性小鼠(購自中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，清潔級(jí)，6-8周齡，體重19-23g，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。藥物與試劑本發(fā)明藥物按照實(shí)施例2-5制備,；內(nèi)毒素購自美國(guó)Sigma公司。實(shí)驗(yàn)方法3.1分組與干預(yù)280只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12，每組各20只。實(shí)驗(yàn)前12h禁食，稱重并按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組。模型組僅進(jìn)行內(nèi)毒素攻毒造模；實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在內(nèi)毒素攻毒造模后，分別接受實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液(從實(shí)施例2第一批至實(shí)施例5第三批依次給予實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12)注射給藥干預(yù)；正常組不做額外干預(yù)。內(nèi)毒素攻毒造模過程如下：麻醉藥物選用鹽酸氯胺酮:速眠新II:PBS(磷酸鹽緩沖液)＝1:1.5:2.5混合液，以2mL/kg劑量肌肉注射麻醉。麻醉滿意后，固定小鼠在手術(shù)臺(tái)，腹腔內(nèi)注射內(nèi)毒素10mg/kg。實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在內(nèi)毒素攻毒前30min、60min及內(nèi)毒素攻擊后30min各自耳緣靜脈分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液，劑量為4mL/kg體重；模型組在此前30min、60min及內(nèi)毒素攻擊后30min各自耳緣靜脈再注射生理鹽水4mL/kg體重。3.2觀察與死亡率統(tǒng)計(jì)每24h觀察計(jì)數(shù)死亡小鼠，Kaplan-Merer法做統(tǒng)計(jì)分析(統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0)，p<0.05為存在顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，注射內(nèi)毒素后7天內(nèi)，膿毒癥模型組的死亡率為100％，而實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12的死亡率如下表所示，十二組的死亡率均明顯低于膿毒癥模型組(p<0.05)。上述發(fā)現(xiàn)提示，提示實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠具有保護(hù)作用。表1實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠死亡的影響注：*表示與模型組相比p<0.05。實(shí)驗(yàn)二多組分注射液對(duì)盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)介導(dǎo)的膿毒癥小鼠死亡的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Balb/C雄性小鼠(購自中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，清潔級(jí)，6-8周齡，體重19-23g，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。藥物與試劑本發(fā)明藥物按照實(shí)施例2-5制備。實(shí)驗(yàn)方法3.1分組與干預(yù)280只小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12，每組各20只。實(shí)驗(yàn)前12h禁食，稱重并按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組。對(duì)照組僅進(jìn)行同樣手術(shù)過程，但是盲腸既不結(jié)扎也不穿刺；模型組進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)造模；實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在CLP造模后，分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液(從實(shí)施例2第一批至實(shí)施例5第三批依次給予實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12)給予藥物干預(yù)。CLP造模過程如下：麻醉藥物選用鹽酸氯胺酮:速眠新II:PBS＝1:1.5:2.5混合液，以2mL/kg劑量肌肉注射麻醉。麻醉滿意后，固定小鼠在手術(shù)臺(tái)，胸腹部常規(guī)消毒鋪巾，劍突下lcm處做腹正中切口，切口長(zhǎng)度1.5cm。暴露盲腸，于1/2處結(jié)扎，并用21G針頭避開血管貫穿結(jié)扎的盲腸一次。確認(rèn)無活動(dòng)出血后，將盲腸還納腹腔，縫合腹壁切口。術(shù)后頸后皮膚常規(guī)消毒，皮下注射生理鹽水lmL液體復(fù)蘇，麻醉蘇醒后單籠飼養(yǎng)。小鼠行CLP手術(shù)后，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在術(shù)后0.5h，12h，24h，36h，48h，60h，72h，84h，96h自耳緣靜脈分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液，劑量為4mL/kg；模型組和對(duì)照組在相應(yīng)時(shí)間自耳緣靜脈注射生理鹽水4mL/kg體重。3.2觀察與死亡率統(tǒng)計(jì)每24h觀察計(jì)數(shù)各組死亡小鼠，Kaplan-Merer法做統(tǒng)計(jì)分析(統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS16.0)，p<0.05為存在顯著差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，CLP手術(shù)后7天內(nèi)，膿毒癥模型組的死亡率為70％，而實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12的死亡率如下表所示。其中，實(shí)驗(yàn)組7-12的死亡率均明顯低于膿毒癥模型組(p<0.05)，提示實(shí)施例4(實(shí)驗(yàn)組7-9)和實(shí)施例5(實(shí)驗(yàn)組10-12)，多個(gè)個(gè)批次多組分注射液對(duì)內(nèi)毒素所致膿毒癥小鼠具有保護(hù)作用。表2實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)CLP介導(dǎo)的膿毒癥小鼠死亡的影響注：*表示與膿毒癥模型組相比P<0.05。實(shí)驗(yàn)三多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠高遷移率族蛋白B1表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠(購自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，清潔級(jí)，體重180-220g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。藥物與試劑本發(fā)明藥物按照實(shí)施例2-5制備；高遷移率族蛋白B1(HMGB1)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒(日本Shino-Test公司)。實(shí)驗(yàn)方法3.1分組與干預(yù)140只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12，每組各10只。實(shí)驗(yàn)前12h禁食，稱重并按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組。對(duì)照組僅開腹暴露盲腸后縫合皮膚，皮下注射10ml生理鹽水復(fù)蘇；膿毒癥模型組進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)造模；實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在CLP造模后，分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液(從實(shí)施例2第一批至實(shí)施例5第三批依次給予實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12)給予藥物干預(yù)。CLP造模過程如下：用氯胺酮注射液+速眠新II注射液2:1混合液肌肉注射麻醉大鼠，采用CLP制備膿毒癥動(dòng)物模型。結(jié)扎盲腸與回腸連接處，用18號(hào)針頭貫通盲腸2次形成腸瘺，并留置2條引流條(0.5cm×2.0cm)防止針孔愈合，后逐層縫合皮膚，術(shù)畢立即皮下注射10mL生理鹽水復(fù)蘇。大鼠行CLP手術(shù)后，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在術(shù)后2h，12h，24h，36h，48h和60h經(jīng)陰莖背靜脈注射分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液，劑量為4mL/kg；模型組和對(duì)照組在相應(yīng)時(shí)間經(jīng)陰莖背靜脈注射生理鹽水4mL/kg體重。3.2采血與檢測(cè)CLP后2h，8h，24h，48h和72h，將各組動(dòng)物麻醉后腹主動(dòng)脈無菌采血3mL，利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，檢測(cè)血漿HMGB1含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，對(duì)照組血漿中含有少量HMGB1；CLP手術(shù)后早期，模型組HMGB1含量即明顯增加，8hHMGB1水平進(jìn)一步提高，于24h逐漸下降，但術(shù)后72h仍高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。而實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12分別經(jīng)實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液注射干預(yù)治療，術(shù)后2h后血漿含量均明顯低于模型組(p<0.05)，24h后HMGB1下降更為明顯(p<0.01)，接近對(duì)照組水平。上述發(fā)現(xiàn)提示，提示實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)膿毒癥時(shí)HMGB1的表達(dá)具有抑制作用。表3實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠血漿HMGB1水平的影響(n＝10)單位：μg/L注：#表示與對(duì)照組相比p<0.05；*表示與模型組相比p<0.05。實(shí)驗(yàn)四多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠單核細(xì)胞蛋白酶激活受體-1與組織因子表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠(購自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，清潔級(jí)，體重180-220g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。藥物與試劑本發(fā)明藥物按照實(shí)施例2-5制備；組織因子(TF)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒(美國(guó)USCN公司)；異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗大鼠單核細(xì)胞蛋白酶激活受體-1(PAR-1)抗體(美國(guó)SantaCruz公司)。實(shí)驗(yàn)方法3.1分組與干預(yù)140只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12，每組各10只。實(shí)驗(yàn)前12h禁食，稱重并按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組。對(duì)照組僅開腹暴露盲腸后縫合皮膚，皮下注射10mL生理鹽水復(fù)蘇；膿毒癥模型組進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)造模；實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在CLP造模后，分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液(從實(shí)施例2第一批至實(shí)施例5第三批依次給予實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12)給予藥物干預(yù)。CLP造模過程如下：用氯胺酮注射液+速眠新II注射液2:1混合液肌肉注射麻醉大鼠，采用CLP制備膿毒癥動(dòng)物模型。結(jié)扎盲腸與回腸連接處，用18號(hào)針頭貫通盲腸2次形成腸瘺，并留置2條引流條(0.5cm×2.0cm)防止針孔愈合，后逐層縫合皮膚，術(shù)畢立即皮下注射10mL生理鹽水復(fù)蘇。大鼠行CLP手術(shù)后，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在術(shù)后2h，12h，24h，36h，48h和60h經(jīng)陰莖背靜脈注射分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液，劑量為4mL/kg；模型組和對(duì)照組在相應(yīng)時(shí)間經(jīng)陰莖背靜脈注射生理鹽水4mL/kg體重。3.2采血與檢測(cè)CLP后12h，24h，48h和72h，將各組動(dòng)物麻醉后腹主動(dòng)脈無菌采血3mL。利用流式免疫熒光法，檢測(cè)血漿單核細(xì)胞蛋白酶激活受體-1(PAR-1)表達(dá)；利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，檢測(cè)血漿組織因子(TF)含量。PAR-1表達(dá)檢測(cè)：取2mL肝素抗凝血，采用大鼠淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞。用10％胎牛血清-RPMI1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液重懸單個(gè)核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為4×106/mL，孵育2h后用細(xì)胞培養(yǎng)液沖洗細(xì)胞培養(yǎng)板。加0.25％胰蛋白酶-EDTA消化液消化3min，待大部分細(xì)胞脫落后，加10％胎牛血清-RPMI1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液2mL，終止消化。磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，以獲得外周血單核細(xì)胞。于細(xì)胞懸液中加入1μg/1×106細(xì)胞異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗大鼠PAR-1抗體，4℃避光孵育15min，加入2mLPBS洗滌1次，加入0.4mLPBS，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)其平均熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明，對(duì)照組單核細(xì)胞PAR-1存在一定表達(dá)；模型組在術(shù)后12hPAR-1表達(dá)量與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在術(shù)后24h，48h和72h其平均熒光強(qiáng)度則顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，且隨術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增高。實(shí)驗(yàn)組1-3在24h和48hPAR-1平均熒光強(qiáng)度低于模型組，但無顯著差異；在72h熒光強(qiáng)度顯著低于模型組(p<0.05)。實(shí)驗(yàn)組4-實(shí)驗(yàn)組12九個(gè)干預(yù)組的PAR-1平均熒光強(qiáng)度在24h、48h和72h與模型組相比均出現(xiàn)顯著降低(p<0.05)。而對(duì)照組單核細(xì)胞TF存在一定表達(dá)；模型組在術(shù)后12h，24h，48h和72hTF表達(dá)均顯著高于對(duì)照組(p<0.05)，且隨術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增高，在48h達(dá)到頂點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)組1-3在12h和72hTF表達(dá)低于模型組，但無顯著差異；在24h和48h表達(dá)強(qiáng)度顯著高于模型組(p<0.05)。實(shí)驗(yàn)組4-實(shí)驗(yàn)組12九個(gè)干預(yù)組的TF表達(dá)在24h、48h和72h與模型組相比均出現(xiàn)顯著降低(p<0.05)。上述發(fā)現(xiàn)提示，實(shí)施例3-5，9個(gè)批次多組分注射液可下調(diào)膿毒癥誘導(dǎo)的單核細(xì)胞PAR-1的表達(dá)，明顯減少TF的分泌，改善單核細(xì)胞介導(dǎo)的凝血功能紊亂。表4-1多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠PAR-1表達(dá)的影響(n＝10)注：#表示與對(duì)照組相比p<0.05；*表示與模型組相比p<0.05。表4-2多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠血漿TF表達(dá)的影響(n＝10)單位：ng/L注：#表示與對(duì)照組相比p<0.05；*表示與模型組相比p<0.05。實(shí)驗(yàn)五多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠調(diào)節(jié)T細(xì)胞凋亡與輔助性T細(xì)胞漂移的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar雄性大鼠(購自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，清潔級(jí)，體重180-220g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。藥物與試劑本發(fā)明藥物按照實(shí)施例2-5制備；藻紅蛋白(PE)-抗大鼠CD25、異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗大鼠CD4、別藻藍(lán)蛋白(APC)標(biāo)記膜聯(lián)蛋白V(AnnexinV)凋亡試劑盒(美國(guó)BD公司)；大鼠抗-PE試劑盒、CD4磁珠、MiniMACS磁性分離儀以及分選柱(德國(guó)MiltenyiBiotec公司)；PE標(biāo)記叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3)試劑盒、PE標(biāo)記T淋巴細(xì)胞毒性相關(guān)抗原4(CTLA-4)、抗大鼠CD3單克隆抗體、抗大鼠CD28單克隆抗體(美國(guó)eBioscience公司)；干擾素(IFN)-7、IL-4、IL-10酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒(美國(guó)Biosource公司)；IL-17ELISA試劑盒(美國(guó)UsenlifeScience公司)；錐蟲藍(lán)(美國(guó)Sigma公司)。實(shí)驗(yàn)方法3.1分組與干預(yù)140只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12，每組各10只。實(shí)驗(yàn)前12h禁食，稱重并按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組。對(duì)照組僅開腹暴露盲腸后縫合皮膚，皮下注射10mL生理鹽水復(fù)蘇；膿毒癥模型組進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)造模；實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在CLP造模后，分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液(從實(shí)施例2第一批至實(shí)施例5第三批依次給予實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12)給予藥物干預(yù)。CLP造模過程如下：用氯胺酮注射液+速眠新II注射液2:1混合液肌肉注射麻醉大鼠，采用CLP制備膿毒癥動(dòng)物模型。結(jié)扎盲腸與回腸連接處，用18號(hào)針頭貫通盲腸2次形成腸瘺，并留置2條引流條(0.5cm×2.0cm)防止針孔愈合，后逐層縫合皮膚，術(shù)畢立即皮下注射10mL生理鹽水復(fù)蘇。大鼠行CLP手術(shù)后，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組12在術(shù)后經(jīng)陰莖背靜脈注射分別注射實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液，劑量為4mL/kg；模型組和對(duì)照組在相應(yīng)時(shí)間經(jīng)陰莖背靜脈注射生理鹽水4mL/kg體重。3.2細(xì)胞分離及培養(yǎng)各組大鼠分別經(jīng)斷頸處死后無菌取脾臟，研磨后過400目濾網(wǎng)，細(xì)胞懸液離心后加入淋巴細(xì)胞分離液離心取中層白色細(xì)胞。加入PE-抗CD25和PE磁珠，陽性選擇(陽選)獲得CD25+T細(xì)胞，陰性選擇(陰選)獲得CD25-T細(xì)胞。用CD25+T細(xì)胞解離試劑解離后，陰選細(xì)胞以FITC-抗CD4和CD4磁珠陽選即得CD4+CD25+Treg；CD25-T細(xì)胞以FITC-抗CD4和CD4磁珠陽選即得CD4+CD25-T細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)雙陽性細(xì)胞的純度。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.4％錐蟲藍(lán)對(duì)CD4+CD25+Treg進(jìn)行染色，觀察細(xì)胞存活率。用含體積分?jǐn)?shù)20％小牛血清的RPMll640培養(yǎng)液于48孔培養(yǎng)板中，在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。各組于第3日分離CD4+CD25+Treg培養(yǎng)12h，再以培養(yǎng)液調(diào)整CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T細(xì)胞濃度為1:1培養(yǎng)，刀豆素A(ConA，5mg/L)進(jìn)行刺激，37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68h后離心取上清液，于-70℃冰凍待檢。3.3檢測(cè)與分析Treg凋亡率檢測(cè)：分離細(xì)胞后培養(yǎng)12h，懸浮CD4+CD25+Treg(1×109/L)用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次，加入100μL結(jié)合緩沖液和APC標(biāo)記的AnnexinV(20mg/L)10μL，室溫避光30min，再加入放線菌素D(7-AAD)10μL，避光反應(yīng)5min后，加入400μL結(jié)合緩沖液，流式細(xì)胞儀選擇7-AAD陰性AnnexinV陽性細(xì)胞為凋亡細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。Foxp3和CTLA-4表達(dá)檢測(cè)：100μL制備好的CD4。CD25+Treg(1×109/L)加1m1新配制的破膜液，4℃避光孵育2h，再用2mL破膜緩沖液洗滌；加PE-抗Foxp3，暗處4℃孵育30min后用2mL破膜緩沖液洗滌，離心棄上清液，加入0.5mLPBS，流式細(xì)胞儀檢測(cè)Foxp3的平均熒光強(qiáng)度。重懸細(xì)胞(1×109/L)中直接加PE-CTLA-4，4℃避光孵育30min，檢測(cè)CTLA-4平均熒光強(qiáng)度。細(xì)胞因子檢測(cè)：包括Treg分泌的主要抑制性細(xì)胞因子IL-10，Thl分泌的IFN-γ，Th2分泌的IL-4。IL-10標(biāo)本來源于各組分離的Treg培養(yǎng)12h后收集的上清液，IFN-γ、IL-4標(biāo)本來源于CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T細(xì)胞共培養(yǎng)68h后的上清液。用ELISA試劑盒檢測(cè)，嚴(yán)格按說明書操作，分別計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程，將樣品吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣品中細(xì)胞因子的蛋白濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明：模型組Treg凋亡率明顯低于對(duì)照組(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組4-實(shí)驗(yàn)組12均顯著高于模型組(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組3趨勢(shì)相近，但無顯著差異。模型組Foxp3、CTLA-4表達(dá)明顯高于對(duì)照組(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組4-實(shí)驗(yàn)組12均顯著低于模型組(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組3趨勢(shì)相近，但無顯著差異。模型組IL-10分泌水平明顯高于對(duì)照組(p<0.05)，而實(shí)驗(yàn)組4-實(shí)驗(yàn)組12均顯著低于模型組(p<0.05)，實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組3趨勢(shì)相近，但無顯著差異。模型組IFN-γ和IL-4水平較對(duì)照組大幅度升高，實(shí)驗(yàn)組4-實(shí)驗(yàn)組12的IFN-γ和IL-4水平均進(jìn)一步增加，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；實(shí)驗(yàn)組1-實(shí)驗(yàn)組3趨勢(shì)相近，但無顯著差異。上述發(fā)現(xiàn)提示，實(shí)施例3-5，9個(gè)批次多組分注射液可促進(jìn)膿毒癥Treg凋亡，改善Treg、效應(yīng)T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌，有助于糾正機(jī)體細(xì)胞免疫抑制狀態(tài)。表5-1實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠Treg凋亡率及Foxp3、CTLA-4表達(dá)的影響(n＝10)單位：％注：#表示與對(duì)照組相比p<0.05；*表示與模型組相比p<0.05。表5-2實(shí)施例2-5，12個(gè)批次多組分注射液對(duì)膿毒癥大鼠Treg、效應(yīng)T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平的影響(n＝10)單位：ng/L注：#表示與對(duì)照組相比p<0.05；*表示與模型組相比p<0.05。經(jīng)過相關(guān)檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所述的多組分注射液具有質(zhì)量穩(wěn)定，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，便于生產(chǎn)，安全有效等特點(diǎn)。本申請(qǐng)中提到相關(guān)化合物簡(jiǎn)表：附圖說明圖1組間內(nèi)毒素誘導(dǎo)膿毒癥小鼠生存率的比較注：實(shí)驗(yàn)組1-12與模型組相比均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。圖2組間盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)介導(dǎo)的膿毒癥小鼠生存率的比較注：實(shí)驗(yàn)組7-12與模型組相比均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。具體實(shí)施方式通過以下具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不作為限制。實(shí)施例1注射液中有效成分的檢測(cè)方法方法1：用于紅花和赤芍成分分析的色譜分離條件色譜柱：WatersHSST3UPLCC18色譜柱(100mm×2.1mm；1.8μM，Waters，USA)；柱溫：45℃；流動(dòng)相：A：H2O(含25mMHCOOH，B：MeOH(含25mMHCOOH)；梯度洗脫見表6；流速：0.35mL/min；進(jìn)樣量：5μL；分析時(shí)間：13min。表6紅花和赤芍成分液相梯度洗脫條件方法2：用于丹參成分分析的色譜分離條件色譜柱：WatersHSST3UPLCC18色譜柱(100mm×2.1mm；1.8μM，Waters，USA)；柱溫：45℃；流動(dòng)相：A：H2O(含25mMHCOOH)，B：MeOH(含25mMHCOOH)；梯度洗脫見表7；流速：0.35mL/min；進(jìn)樣量：5μL；分析時(shí)間：20min。表7丹參成分液相梯度洗脫條件時(shí)間(min)溶劑A溶劑B0.098％2％1.098％2％15.030％70％17.02％98％20.098％2％方法3：用于川芎和當(dāng)歸成分、腺嘌呤及腺苷分析的色譜分離條件色譜柱：WatersHSST3UPLCC18色譜柱(100mm×2.1mm；1.8μM，Waters，USA)；柱溫：45℃；流動(dòng)相：A：MeOH-H2O(v/v，1:99)，其中包含1mMHCOOH和25μM，CH3COOLi；B：MeOH-H2O(v/v，99:1)，其中包含1mMHCOOH和25μM，CH3COOLi；梯度洗脫見表8；流速：0.35mL/min；進(jìn)樣量：5μL；分析時(shí)間：8min。表8川芎和當(dāng)歸成分、腺嘌呤及腺苷液相梯度洗脫條件時(shí)間(min)溶劑A溶劑B0.094％6％7.05％95％8.094％6％實(shí)施例2多組分注射液的制備取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏。取上述干膏適量，用注射用水溶解，稀釋至200ml，冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。按此工藝制備三批注射液，有效成分檢測(cè)結(jié)果如下：實(shí)施例3多組分注射液的制備工藝取紅花飲片100g，加入8倍量的30％乙醇浸提8小時(shí)，濾取4～6倍量藥液，加入95％乙醇使含醇量至70％，冷存48小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至100ml；濃縮液加入95％乙醇使含醇量至80％，冷存48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥制成紅花干膏。取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏。取兩種干膏各適量，用注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。按此工藝制備三批注射液，有效成分檢測(cè)結(jié)果如下：實(shí)施例4多組分注射液的制備工藝取紅花飲片100g，加入8倍量的30％乙醇浸提8小時(shí)，濾取4～6倍量藥液，加入95％乙醇使含醇量至70％，冷存48小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至100ml；濃縮液加入95％乙醇使含醇量至80％，冷存48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥制成紅花干膏。取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏。取川芎、當(dāng)歸飲片各100g，按赤芍工藝方法處理，每次濃縮液為300ml,萃取用水飽和正丁醇每次為150ml，制成干膏。取三種干膏各適量，用適量注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。按此工藝制備三批注射液，有效成分檢測(cè)結(jié)果如下：實(shí)施例5多組分注射液的制備工藝取紅花飲片100g，加入8倍量的30％乙醇浸提8小時(shí)，濾取4～6倍量藥液，加入95％乙醇使含醇量至70％，冷存48小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至100ml；濃縮液加入95％乙醇使含醇量至80％，冷存48小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，濃縮，真空干燥制成紅花干膏。取赤芍飲片100g，加入10倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸兩小時(shí)，濾過，收集濾液I，藥渣繼續(xù)用8倍量工藝用水加熱煮沸，保持微沸一小時(shí)，棄去藥渣，收集濾液II，合并藥液I和II，濃縮至100ml；第一次濃縮液攪拌下加入適量明膠溶液，加入95％乙醇使含醇量達(dá)70％，冷存24小時(shí)，濾過，濾液濃縮至100ml；第二次濃縮液加入水飽和正丁醇萃取四次，每次50ml，合并萃取液，回收正丁醇至無醇味，真空干燥制成赤芍干膏。取川芎、丹參、當(dāng)歸飲片各100g，按赤芍工藝方法處理，每次濃縮液為300ml,萃取用水飽和正丁醇每次為150ml，制成干膏。取三種干膏各適量，用適量注射用水溶解，稀釋至200ml,冷存；取冷存液，按注射液總量4.5％比例加入無水葡萄糖，加入注射用水至1000ml，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，冷存，取冷存液超濾，取適量增溶輔料加適量注射用水溶解，加入上述超濾液中，用10％氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至5.5-7.0，過濾，灌封，滅菌即得注射液。按此工藝制備三批注射液，有效成分檢測(cè)結(jié)果如下：當(dāng)前第1頁1 2 3