本發(fā)明涉及一種具有協(xié)同作用的抗炎/抗病毒組合物，及以該組合物為有效成分的藥物。
背景技術(shù)：
α-蒎烯，分子式為C10H16，分子量為136.23，是一種無色透明液體，為松節(jié)油的主要成分，廣泛存在于許多其它天然植物精油當(dāng)中。已有研究表明，α-蒎烯可具有包括抗菌、抗病病、抗腫瘤、抗炎、抗胃潰瘍、抗氧化、抗郁抑癥等方面的藥物活性。甲基正壬酮的分子式為C11H22O2，分子量為170.30，也是一種無色透明液體，其用途目前主要是作為日化香精，用于玫瑰以及鳶尾草香精等，還可作為牛奶，椰子香精等食用香精；有文獻(xiàn)報道，甲基正壬酮還可具有能使單純性皰疹1型病毒（HSV-1）、流感病毒和人體免疫缺乏1型病毒（HIV-1）失活等作用。
雖然α-蒎烯和甲基正壬酮兩成分可具有多方面的藥物活性，能在醫(yī)藥領(lǐng)域具有應(yīng)用前景，但與一些相應(yīng)的市售藥物相比，二者表現(xiàn)出的藥物活性都相對較弱，且α-蒎烯和甲基正壬酮還均為油（脂）溶性成分，也導(dǎo)致了注射給藥的不方便，也使其臨床應(yīng)用受限，因此目前都尚無其單一成分的相應(yīng)藥物/制劑正式使用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
鑒于此，本發(fā)明提供了一種由上述兩種成分組成的組合物，并通過實驗證明了其組合后能在抗炎和/或抗病毒方面具有顯著的協(xié)同增效作用。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)進(jìn)一步還提供了以該組合物為有效成分的具有抗炎和/或抗病毒作用的藥物。
本發(fā)明具有抗炎/抗病毒作用的組合物，是由重量份比例為1:(1~5)的α-蒎烯和甲基正壬酮共同組成的。其中，所述的α-蒎烯和甲基正壬酮兩組分的進(jìn)一步優(yōu)選重量份比例可為1:(2~4)；其更好的重量份比例可為1:3。
實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明由α-蒎烯和甲基正壬酮共同組成的上述組合物，在綜合抗病毒和/或抗炎作用方面，能產(chǎn)生明顯的互補(bǔ)和協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于單一成分形式的α-蒎烯或甲基正壬酮。
以上述的組合物為基礎(chǔ)，本發(fā)明所述的具有抗炎/抗病毒作用的藥物，是以上述任一種形式的組合物作為有效成分，與藥學(xué)中可以接受的溶劑、填充劑等相應(yīng)的輔助成分共同組成。例如，根據(jù)不同使用需要，可以按目前的常規(guī)方式，將本發(fā)明上述組合物形式的有效成分，與藥物中可以接受的如甘油、乙醇、大豆油、乳化劑、防腐劑、調(diào)味劑等附加成分，制備成可供咽喉部黏膜噴霧或呼吸道吸入給藥的滴鼻劑、噴霧劑、氣霧劑等外用型藥物制劑；或可與適當(dāng)常用的崩解劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、填充劑等輔助/添加成分（輔料），制備成可供內(nèi)服用的含片、滴丸、口崩片等口服型制劑。其中，作為優(yōu)選的藥物劑型是噴霧劑或氣霧劑，經(jīng)咽喉部黏膜和呼吸道局部用藥，用于治療急慢性咽喉炎和上呼吸道感染。
由于本發(fā)明上述由α-蒎烯和甲基正壬酮組成的組合物，在抗炎和抗病毒作用方面具有顯著的協(xié)同增效作用，進(jìn)一步深入研究發(fā)現(xiàn)二者組合物經(jīng)咽喉部黏膜和呼吸道局部給藥具有十分理想的抗炎、抗病毒作用，在治療急慢性咽喉炎和上呼吸道感染方面具有良好的應(yīng)用前景。
以下通過實施例的具體實施方式再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
具體實施方式
實施例1
取α-蒎烯6g、甲基正壬酮18g，加入大豆油100g，混勻，加熱至70℃，備用。另取大豆卵磷脂25g加蒸餾水500ml分散，加入甘油25g、卡波姆10g、尼泊金乙酯1g和食用香精適量，攪拌使溶解，加熱至70℃，并繼續(xù)攪拌，同時緩慢加入上述α-蒎烯和甲基正壬酮，高速均質(zhì)8分鐘制得初乳，將初乳過高壓乳勻機(jī)循環(huán)6次，在低速攪拌下加蒸餾水至1000ml，過濾、分裝，置專用噴霧瓶中，即得噴霧劑藥物。
實施例2
取α-蒎烯12g、甲基正壬酮12g，加入大豆油150g和大豆卵磷脂25g，混勻，作為油相備用。另取甘油25g、α-生育酚1g、山犁酸1g、卡波姆10g溶于適量的蒸餾水中作為水相。分別加熱至55℃，混勻，先在組織搗碎機(jī)中分散乳化3-4分鐘，再加蒸餾水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值6.0-7.0，經(jīng)高速乳勻機(jī)乳化至油滴粒徑小于5um。分裝，置耐壓容器中，加閥門、封帽，壓入拋射劑，搖勻，即得氣霧劑藥物。
實施例3
取α-蒎烯2g、甲基正壬酮10g，加入95%乙醇100ml和PEG 400 300g，攪拌混勻，再加蒸餾水至1000ml，混勻。分裝，置專用噴霧瓶中，即得噴霧劑藥物。
實施例4
取α-蒎烯10g、甲基正壬酮20g，加入PEG 10000 360g，攪勻，在水浴上加熱，使熔融。將熔融物倒入置于冰浴中的不銹鋼盤中，使成薄層，吹以冷風(fēng)，令其迅速冷卻固化，置干燥器內(nèi)干燥，粉碎過篩，加入乳糖、糖粉和糊精適量，混合均勻，干法制粒，再加入適量硬脂酸鎂混勻，壓制成1000片，即得片劑口服藥物。
對本發(fā)明上述各例的藥物進(jìn)行了下述的抗病毒和抗炎作用的藥效學(xué)試驗。
一、抗病毒作用試驗
以α-蒎烯與甲基正壬酮配制成不同比例形式的本發(fā)明藥物組合物作為試驗藥物，以病毒唑為陽性對照藥物，進(jìn)行抗病毒作用的藥效學(xué)試驗。經(jīng)預(yù)試驗顯示，α-蒎烯與甲基正壬酮對RSV病毒的半數(shù)有效濃度分別為0.001mg/ml和0.003mg/ml，以10倍的上述半數(shù)有效濃度分別按1:0（Ⅰ組）、1:1（Ⅱ組）、1:2（Ⅲ組）、1:3（Ⅳ組）、1:4（Ⅴ組）、1:5（Ⅵ組）和0:1（Ⅶ組）的比例，配制成各試驗的藥物組。
（一）實驗方法
采用組織細(xì)胞半數(shù)感染量（TCID50）的方法，根據(jù)藥物對細(xì)胞病變的抑制效果，以確定試驗藥物對HSV-I和RSV的抗病毒效果。
1. 藥液配制：用RPMI-1640對上述各試驗藥物進(jìn)行對倍稀釋，稀釋倍數(shù)為1:2、1:4、1:8、1:16和1:32。病毒唑的濃度分別為0.062，0.031，0.015和0.008 mg/ml。
2. 對Vero細(xì)胞和Hep-2細(xì)胞的最大無毒濃度測定：在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的Vero單層細(xì)胞和Hep-2單層細(xì)胞中分別加入不同濃度的試驗藥物，置37℃和5% CO2培養(yǎng)箱中96小時，觀察細(xì)胞病變，測定其對Vero細(xì)胞和Hep-2單層細(xì)胞的最大無毒濃度。
3. 對HSV-I病毒致Vero細(xì)胞病變的抑制試驗：在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的Vero單層細(xì)胞內(nèi)，每孔感染HSV-I 10TCID50(7LgTCID50)病毒液，2小時后傾去病毒液，每孔內(nèi)再加入不同濃度的試驗藥物或病毒唑，培養(yǎng)96小時后觀察細(xì)胞病變。
4、對RSV病毒致Hep-2細(xì)胞病變的抑制試驗：在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的Hep-2單層細(xì)胞內(nèi)，每孔感染RSV 10TCID50(6LgTCID50)病毒液，2小時后傾去病毒液，每孔內(nèi)再加入不同濃度的試驗藥物或病毒唑，培養(yǎng)96小時后觀察細(xì)胞病變。
（二）實驗結(jié)果
1. 各試驗組藥物對Vero細(xì)胞的最大無毒濃度，經(jīng)CPE法測定均小于1:2。正式藥物試驗中則采用小于1:2的藥物進(jìn)行體外抗病毒試驗。
2. 各試驗組藥物對HSV-I病毒致Vero細(xì)胞病變的抑制作用，對RSV病毒致Hep-2細(xì)胞病變的抑制作用。試驗結(jié)果如表1所示。其中，試驗藥物中的Ⅱ～Ⅵ組為不同比例的以本發(fā)明組合物的藥物，Ⅰ、Ⅶ兩組分別為以單一α-蒎烯和甲基正壬酮為有效成分的藥物組。
表1結(jié)果表明：本發(fā)明藥物組中各種組成比例的α-蒎烯/甲基正壬酮組合物（Ⅱ～Ⅵ組）對HSV-1和RSV均具有顯著的抑制作用，且強(qiáng)于單獨使用形式的α-蒎烯（Ⅰ組）和甲基正壬酮（Ⅶ組），其中優(yōu)選的比例為1:3（Ⅳ組）。
二、抗炎作用試驗
對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響：
以上述實施例1的方法按α-蒎烯/甲基正壬酮1:0（Ⅰ組）、1:1（Ⅱ組）、1:3（Ⅲ組）、1:5（Ⅳ組）、0:1（Ⅴ組）的比例配制成本發(fā)明的各試驗組藥物，進(jìn)行了抗炎作用的藥效學(xué)試驗，部分試驗結(jié)果如下：
（一）實驗材料
1．實驗動物 雄性昆明種小鼠，18-20g。
2．藥物與試劑 空白基質(zhì)噴霧劑（缺α-蒎烯和甲基正壬酮），α-蒎烯/甲基正壬酮Ⅰ～Ⅴ試驗藥物組（含量2.4%）；醋酸氟輕松軟膏（天津藥業(yè)集團(tuán)有限公司）；二甲苯（天津市紅巖化學(xué)試劑廠，分析純）
（二）實驗方法和結(jié)果
選健康雄性昆明種小鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只?？瞻讓φ战M小鼠左耳廓上均勻涂抹空白基質(zhì)噴霧劑 0.2g，實驗組分別涂抹2.4%的本發(fā)明Ⅰ～Ⅴ試驗組藥物0.2g，陽性對照組給予氟輕松軟膏0.1g。給藥30min后輕輕拭干凈小鼠左耳，并前后兩面均勻涂以二甲苯0.1ml，右耳為對照，致炎15min后，再按照上述方法給藥一次。末次給藥后1h頸椎脫臼處死小鼠，用6mm打孔器于雙耳對稱部位取耳片，電子天平稱重，左右耳片質(zhì)量差值為炎癥腫脹度。按下式計算腫脹抑制率：
抑制率（%）=（對照組平均腫脹度-用藥組平均腫脹度）/對照組平均腫脹度×100%。
結(jié)果如表2所示，本發(fā)明的Ⅰ～Ⅴ試驗組藥物噴霧劑對二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳片腫脹有明顯的抑制作用，與空白對照組比較各給藥組均有顯著的抗炎作用，其中，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組藥物的效果明顯優(yōu)于Ⅰ和Ⅴ組藥物。
上述表1和表2的實驗結(jié)果證明，本發(fā)明的α-蒎烯和甲基正壬酮的組合物，以及以該組合物為有效成分的藥物，在綜合抗病毒和抗炎作用方面能產(chǎn)生明顯的互補(bǔ)和協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于單一成分α-蒎烯或甲基正壬酮。