本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，具體是涉及一種抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥抗腫瘤藥物、制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38)是臨床抗腫瘤藥物伊立替康(CPT-11)的活性產(chǎn)物。SN38以拓?fù)洚悩?gòu)酶為靶向部位，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA復(fù)合物結(jié)合，從而阻止斷裂單鏈的再連接，使DNA雙鏈結(jié)構(gòu)解旋而發(fā)揮抗腫瘤作用。SN38在體外顯示較高的活性，是CPT-11活性的100～1000倍。因此，直接利用SN38分子，避開對CPT-11進(jìn)行酶解從而釋放SN38的途徑，可望有效提高藥物的抗腫瘤效果。但是SN38的水溶性很差，且不溶于藥劑學(xué)上可以接受的溶劑(如吐溫或者聚氧乙烯蓖麻油)，因此無法直接用于臨床注射。

此外，腫瘤治療臨床研究表明，長時(shí)間使用單一的抑制腫瘤細(xì)胞生長的化療藥物會(huì)產(chǎn)生耐藥性。隨著抗血管治療腫瘤相關(guān)研究方案的不斷深入，抗血管生成藥物聯(lián)合應(yīng)用抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物的抗癌策略，為腫瘤的治療提供了新的思路和方向。

惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管，隨著腫瘤血管新生機(jī)制研究的深入以及以腫瘤血管為靶點(diǎn)的藥物在臨床治療腫瘤時(shí)取得較好的療效，證實(shí)了通過抑制腫瘤血管新生來抑制腫瘤生長的理念。

康普瑞汀A4(Combretastatin，CA4)是從非洲灌木Combretum Caffrum 的樹皮分離的一種順式二苯乙烯類天然產(chǎn)物，屬于秋水仙堿樣的微管組裝抑制劑，能夠特異性地靶向腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞，破壞內(nèi)皮細(xì)胞骨架引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而導(dǎo)致腫瘤血管的減少，引起腫瘤中央?yún)^(qū)域發(fā)生壞死。CA4結(jié)構(gòu)式如下式所示：

但是我們前期的實(shí)驗(yàn)顯示，SN38由于其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，難以直接與兩親性高分子材料共組裝形成納米粒。而CA4則在高分子材料納米粒中存在快速釋放的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥的抗腫瘤藥物，實(shí)現(xiàn)抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥的抗癌策略，提高聯(lián)合用藥的療效。

本發(fā)明還提供了一種抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥的抗腫瘤藥物制劑。

本發(fā)明同時(shí)公開了一種抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥的抗腫瘤藥物制劑的制備方法。

本發(fā)明中將采用先進(jìn)的納米制備技術(shù)，將難溶于水的抗腫瘤藥物和抗血管生成藥物包載于兩親性高分子材料中，形成載藥納米體系，同時(shí)克服了，SN38難以直接與兩親性高分子材料共組裝形成納米粒的問題。

針對現(xiàn)有納米技術(shù)制備抗血管生成藥物聯(lián)合應(yīng)用抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物存在的問題，本發(fā)明將提出一種康普瑞汀前體聯(lián)合應(yīng)用喜樹堿抗腫瘤藥物前體的抗癌方法，并將該聯(lián)合用藥方法與先進(jìn)納米技術(shù)結(jié)合，制備抗腫瘤治療的聯(lián)合用藥的納米釋放體系，實(shí)現(xiàn)抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合應(yīng)用的價(jià)值，改善臨床抗腫瘤治療的療效。

一種聯(lián)合用藥抗腫瘤藥物，包括抗血管生成藥物、抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物和兩親性高分子材料；所述抗血管生成藥物為康普瑞汀A4的藥物前體，所述抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物為喜樹堿類抗腫瘤藥物。

作為優(yōu)選，所述康普瑞汀A4的藥物前體結(jié)構(gòu)如下：

所述R為C1～C10的烷?；?/p>

作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述康普瑞汀A4的藥物前體為康普瑞汀A4(CA4)與丁酸或庚酸或其對應(yīng)的酰氯、酸酐酯化得到的藥物前體。

作為優(yōu)選，所述康普瑞汀A4的藥物前體結(jié)構(gòu)如下：

上述康普瑞汀A4的藥物前體可由康普瑞汀A4(CA4)與丁酸或庚酸酯化得到。

作為優(yōu)選，所述的抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物為7-乙基-10-羥基喜樹堿與不飽和脂肪酸連接形成的藥物前體。反應(yīng)過程中，可根據(jù)需要添加催化劑，縮合劑等，比如可采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺的鹽酸鹽作為縮合劑，4-二甲氨基吡啶作為催化劑，同時(shí)可利用N,N-二異丙基乙胺中和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺的鹽酸鹽中的鹽酸。作為進(jìn)一步優(yōu)選，所述康普瑞汀A4與羧酸、催化劑、縮合劑的摩爾比為1:(1～1.5):(0.5～1.5):(1～1.5)。

作為優(yōu)選，所述不飽和脂肪酸選自二十二碳六烯酸、全反式維甲酸、亞麻酸、油酸或亞油酸。

作為優(yōu)選，所述兩親性高分子材料選自聚乙二醇-聚乳酸(PEG-PLA)、聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸(PEG-PLGA)、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸(mPEG-PLA)或甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸(mPEG-PLGA)中的任意一種。其中，PEG或mPEG的分子量為2k～8k，PLA的分子量為2k～16k，PLGA的分子量為2k～16k。優(yōu)選為mPEG_5k-PLA_16k。

本發(fā)明還提供了一種聯(lián)合用藥抗腫瘤藥物制劑，所述抗腫瘤藥物為上述任一項(xiàng)所述的抗腫瘤藥物。所述制劑可為常見的劑型，比如可為粉劑或片劑、注射劑、丸劑等等。

本發(fā)明還提供了一種上述聯(lián)合用藥抗腫瘤藥物制劑的制備方法，包括：將抗血管生成藥物、抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物和兩親性高分子材料溶于有機(jī)溶劑中，然后加入到水中，得到所述抗腫瘤藥物制劑。

具體講，包括：

第一步：對喜樹堿衍生物7-乙基-10-羥基喜樹堿(SN38)進(jìn)行分子改性，偶聯(lián)不飽和脂肪酸，選自二十二碳六烯酸(DHA)、全反式維甲酸(RA)、亞麻酸(LNA)、油酸或亞油酸(LA)，賦予藥物分子親脂性。而親脂性SN38衍生物能夠在體內(nèi)釋放具有抗癌活性的SN38分子；對康普瑞汀A4(CA4)進(jìn)行分子改性，偶聯(lián)飽和脂肪酸(丁酸或庚酸)，減緩藥物從納米粒中的釋放速度；

第二步：構(gòu)建同時(shí)負(fù)載第一步SN38前藥和CA4前藥的納米粒，該納米粒由CA4前藥、SN38前藥和兩親性高分子組成。

本發(fā)明提供了一種上述任一方案所述聯(lián)合用藥抗腫瘤藥物在抗腫瘤中的應(yīng)用。

本發(fā)明的載抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥納米粒，在體外能夠抑制腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和侵襲、抑制血管管腔的形成。本發(fā)明的聯(lián)合用藥納米粒在體內(nèi)也顯示了較好的抑制腫瘤增長的能力，進(jìn)一步證實(shí)本發(fā)明中抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥納米粒在抗腫瘤治療中具有廣闊的應(yīng)用價(jià)值和應(yīng)用范圍。

而且，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明中的納米?？梢燥@著抑制腫瘤細(xì)胞(HT-29)和人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的增殖，且有劑量依賴關(guān)系；劃痕損傷和管腔形成實(shí)驗(yàn)也證實(shí)本發(fā)明中制備的納米粒能抑制HUVEC的遷移和血管形成。對比單獨(dú)用藥體系，本發(fā)明中提供的聯(lián)合用藥納米粒在體內(nèi)顯示了較好的抑瘤效果，具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值和應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為實(shí)施例9中納米粒電鏡和粒徑圖；

圖2為實(shí)施例10中納米粒電鏡和粒徑圖；

圖3為實(shí)施例11中納米粒電鏡和粒徑圖；

圖4為實(shí)施例8、9、10、11中不同濃度納米粒對腫瘤細(xì)胞HT-29生存率的影響曲線；

圖5為實(shí)施例8、9、10、11中不同濃度納米粒對人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC生存率的影響曲線；

圖6為實(shí)施例9、10、11中納米粒對人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC遷移率的影響；

圖7為實(shí)施例9、10、11中納米粒對人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC侵襲能力的影響；

圖中，SN38表示7-乙基-10-羥基喜樹堿，CA4或1表示康普瑞汀A4，丁酸-CA4或2表示丁酸與CA4的偶聯(lián)物，庚酸-CA4或3表示庚酸與CA4的偶聯(lián)物，1/4-NP、2/4-NP、3/4-NP分別表示CA4、丁酸-CA4、庚酸-CA4與LNA-SN38與兩親性高分子共組裝形成的納米粒。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不受其限制。

實(shí)施例1

取丁酸(51.7μL，0.57mmol)，CA4(180mg，0.57mmol)，EDC·HCl(163mg，0.855mmol)，DMAP(76.6mg，0.627mmol)，DIEA(188.9μL,1.14mmol)溶于4ml DCM中，室溫下攪拌過夜，加入乙酸乙酯，依次利用5％檸檬酸、飽和NaHCO₃、飽和食鹽水洗滌有機(jī)相，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，收集濾液后減壓除去溶劑；固體用柱層析色譜分離純化(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)，得到目標(biāo)產(chǎn)物丁酸-CA4偶聯(lián)物化合物2(280mg，收率93％)。

產(chǎn)物丁酸-CA4的¹H NMR核磁數(shù)據(jù)以及質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ1.00-1.04(t,3H),1.73-1.78(m,2H),2.49-2.53(t,2H),3.71(s,6H),3.80(s,3H),3.83(s,3H),6.45-6.45(d,2H,J＝1.2),6.51(s,2H),6.83-6.85(d,1H,J＝8.4),7.00-7.01(d,1H,J＝1.6),7.10-7.12(q,1H).

HR-ESI Qq-LTMS：計(jì)算值：[C₂₂H₂₆O₆]⁺[M+H]⁺＝387.1802；檢測值：387.1811。

實(shí)施例2

取庚酸(80.8μL，0.57mmol)，CA4(180mg，0.57mmol)，EDC·HCl(163mg，0.855mmol)，DMAP(76.6mg，0.627mmol)，DIEA(188.9μL，1.14mmol)溶于4mL DCM中，室溫下攪拌過夜，加入乙酸乙酯，依次利用5％檸檬酸、飽和NaHCO₃、飽和食鹽水洗滌有機(jī)相，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，收集濾液后減壓除去溶劑；固體用柱層析色譜分離純化(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)，得到目標(biāo)產(chǎn)物庚酸-CA4偶聯(lián)物化合物3(260mg，收率85％)。

產(chǎn)物庚酸-CA4的¹H NMR核磁數(shù)據(jù)以及質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ0.88-0.91(t,3H),1.26-1.41(m,6H),1.70-1.74(t,2H),2.51-2.54(t,2H),3.71(s,6H),3.80(s,3H),3.84(s,3H),6.45-6.45(d,2H,J＝1.6),6.51(s,2H),6.83-6.85(d,1H,J＝8.4),7.00-7.00(d,1H,J＝1.6),7.10-7.12(q,1H).

HR-ESI Qq-LTMS：計(jì)算值[C₂₅H₃₂O₆]⁺[M+H]⁺＝429.2212；檢測值：429.2282。

實(shí)施例3

LNA-SN38偶聯(lián)物化合物4合成方法參考專利文獻(xiàn)“7-乙基-10-羥基喜樹堿藥物前體及其制備方法和應(yīng)用”中SN38前體藥物7的合成，專利申請?zhí)枮?01410295432.X。

實(shí)施例4

LA-SN38合成方法參考專利文獻(xiàn)“7-乙基-10-羥基喜樹堿藥物前體及其制備方法和應(yīng)用”中SN38前體藥物6的合成，專利申請?zhí)枮?01410295432.X。

實(shí)施例5

OA-SN38合成方法參考專利文獻(xiàn)“7-乙基-10-羥基喜樹堿藥物前體及其制備方法和應(yīng)用”中SN38前體藥物5的合成，專利申請?zhí)枮?01410295432.X。

實(shí)施例6

RA-SN38合成方法參考專利文獻(xiàn)“一種全反式維甲酸-喜樹堿類抗癌藥物偶聯(lián)物及其制備方法和應(yīng)用”中ATRA-SN38偶聯(lián)物(C10羥基)的制備，專利申請?zhí)柣驅(qū)＠枮?01410692682.7。

實(shí)施例7

DHA-SN38合成方法，具體方法如下：

SN38(119.3mg，0.304mmol)、DMAP(40.8mg，0.334mmol)、DHA(100mg，0.304mmol)、EDC·HCl(64mg，3.334mmol)溶于4mL DMF，加入DIEA(43.1mg，0.334mmol)，反應(yīng)過夜，除去反應(yīng)溶劑后，固體溶于二氯甲烷，水洗7次，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液、5％檸檬酸及飽和食鹽水各洗1次，無水硫酸鈉干燥，過濾，收集濾液后減壓除去溶劑；固體用柱層析色譜分離純化(乙酸乙酯：正己烷＝1:1)，得到產(chǎn)物DHA-SN38偶聯(lián)物，產(chǎn)率57.5％。

DHA-SN38偶聯(lián)物核磁和質(zhì)譜數(shù)據(jù)如下：

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)：δ0.88-0.91(t,3H),0.91-0.99(t,3H),1.31-1.35(t,3H),1.77-1.88(m,2H),1.96-2.02(m,2H),2.50-2.55(m,2H),2.65-2.85(m,12H),3.06-3.12(m,2H),3.75(br,1H),5.20-5.35(m,13H),5.43-5.46(m,2H),5.66-5.70(d,1H,J＝16.4),7.47-7.50(m,1H),7.61(s,1H),7.75-7.76(d,1H,J＝2),8.17-8.20(d,1H,J＝8.8).

HR-ESI Qq-LTMS：計(jì)算值[C₄₄H₅₀N₂O₆]⁺[M+H]⁺＝703.3742；檢測值：703.3741.

實(shí)施例8

將實(shí)施例1制備的丁酸-CA4偶聯(lián)物化合物2(CA4含量0.5mg)、實(shí)施例3制備的LNA-SN38(SN38含量0.5mg)分別和mPEG_5k-PLA_16k(藥物質(zhì)量的20倍)溶解于1mL丙酮中，溶解均勻后滴加到10mL水中，滴加完畢后，減壓去除丙酮，即可得到丁酸-CA4和LNA-SN38納米藥物(分別標(biāo)記為2-NP、4-NP)。

實(shí)施例9

將CA4化合物1(0.5mg)、實(shí)施例3中制備的LNA-SN38化合物4(1.67mg)和mPEG_5k-PLA_16k(43.4mg)溶解于3mL丙酮中，溶解均勻后滴加到10mL水中，滴加完畢后，減壓去除丙酮，即可得到負(fù)載抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物的納米藥物(記為1/4-NP)。電鏡下納米粒形貌如圖1所示，DLS測得粒徑大小31±4nm。

實(shí)施例10

將實(shí)施例1中純化得到的丁酸-CA4化合物2(0.6mg)、實(shí)施例3中制備的LNA-SN38化合物4(1.67mg)和mPEG_5k-PLA₁₆(45.4mg)溶解于3mL丙酮中，溶解均勻后滴加到10mL水中，滴加完畢后，減壓去除丙酮，即可得到負(fù)載抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物的納米藥物(記為2/4-NP)。電鏡下納米粒形貌如圖2所示，DLS測得粒徑大小38±17nm。

實(shí)施例11

將實(shí)施例2中純化得到的庚酸-CA4化合物3(0.63mg)、實(shí)施例3中制備的LNA-SN38化合物4(1.67mg)和mPEG_5k-PLA_8k(46mg)溶解于3mL丙酮中，溶解均勻后滴加到10mL水中，滴加完畢后，減壓去除丙酮，即可得到負(fù)載抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物的納米藥物(記為3/4-NP)。電鏡下納米粒形貌如圖3所示，DLS測得粒徑大小38±14nm。

以下通過測試?yán)M(jìn)一步闡明本發(fā)明所述納米粒對腫瘤的治療效果：

測試?yán)?體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

取對數(shù)生長期細(xì)胞(HT-29、HUVEC)，胰酶消化后，種板(96孔板，5×10³個(gè)細(xì)胞/孔)，37℃孵育24h使細(xì)胞貼壁，以SN38為對照組，加入不同濃度的實(shí)施例8、9、10、11中制備的納米粒(100μL/孔)，培養(yǎng)48h后，每孔加入30μL噻唑藍(lán)(MTT，5mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4h后去除上清，每孔加入100μL二甲基亞砜(DMSO)，振蕩，使結(jié)晶產(chǎn)物充分溶解，492nm處于酶標(biāo)儀上檢測各孔吸光度，繪制出細(xì)胞存活曲線，并計(jì)算各組納米粒對細(xì)胞的半抑制濃度(IC₅₀)值?？鼓[瘤藥物脂質(zhì)體對各種腫瘤細(xì)胞的體外毒性結(jié)果見圖4和圖5和表1。

表1：實(shí)施例8、9、10、11中納米粒對腫瘤細(xì)胞的IC₅₀(μM)

從圖4和圖5和表1可看出，由SN38前藥組成的納米粒4-NP與自由的SN38具有相似的細(xì)胞毒性，但與CA4前藥1、2、3構(gòu)成的聯(lián)用納米粒1/4-NP、2/4-NP、3/4-NP細(xì)胞毒性明顯增強(qiáng)，證明了兩藥聯(lián)用的有效性。

測試?yán)?：遷移實(shí)驗(yàn)

靜止的HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)于6孔板中，用槍頭在孔中間位置對細(xì)胞做一個(gè)筆直的劃痕，去掉培養(yǎng)基，加入自由CA4藥物組以及實(shí)施例9、10、11中分別制備的1/4-NP、2/4-NP、3/4-NP(以CA4計(jì)，其濃度為5nM)，以空白未加藥組做對照組。各組細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，拍照，并對劃痕的寬度量化處理。結(jié)果顯示(圖6)，與空白對照組相比，自由CA4藥物組以及實(shí)施例9、10、11中制備的納米粒均能顯著性抑制HUVEC細(xì)胞的遷移能力。

測試?yán)?：侵襲實(shí)驗(yàn)

取對數(shù)生長期HUVEC細(xì)胞，按4×10⁴個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種至鋪有30μL Matrigel的Transwell小室的上室，下室加入700μL培養(yǎng)基，均勻搖晃使細(xì)胞分布均勻，將細(xì)胞置于37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h，細(xì)胞貼壁后進(jìn)行下一步操作。取出上室培養(yǎng)基，加入200μL含有藥物(自由CA4藥物組以及實(shí)施例9、10、11中制備的納米粒，藥物濃度以CA4濃度5nM計(jì)算)的培養(yǎng)基，下室加入700μL含20％胎牛血清的培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h后，棄上室培養(yǎng)基，PBS清洗兩次，甲醇固定，結(jié)晶紫染色，用棉簽擦去上室膠和細(xì)胞，顯微鏡下觀察穿透上室的細(xì)胞，拍照，計(jì)數(shù)。

結(jié)果如圖7所示，各加藥組HUVEC細(xì)胞的侵襲得到明顯抑制，空白組侵細(xì)胞數(shù)目為834，而自由CA4藥物組以及實(shí)施例9、10、11中制備的納米粒組中HUVEC細(xì)胞侵襲數(shù)目分別為252、330、325、308個(gè)，各組均與空白對照組有非常顯著性差異(p<0.01)。

測試?yán)?：血管管腔形成能力實(shí)驗(yàn)

Matrigel加入96孔板中，30μL/孔，37℃凝固1h，加入100μL含2×10⁴個(gè)HUVEC的培養(yǎng)基，加入自由CA4藥物組以及實(shí)施例9、10、11中分別制備的1/4-NP、2/4-NP、3/4-NP(以CA4計(jì)，其濃度為5nM)，以DMSO為空白對照組。培養(yǎng)4h后，顯微鏡下觀察細(xì)胞形成的管腔形貌，分析藥物對管腔形成的影響?？瞻捉M細(xì)胞形成明顯的管腔圓形，而加藥組CA4及1/4-NP、2/4-NP、3/4-NP細(xì)胞散亂，較少形成管腔形貌。證實(shí)本發(fā)明中制備的納米粒能夠抑制HUVEC形成血管管腔的能力。

測試?yán)?：體內(nèi)抗腫瘤效果評價(jià)

5周齡Balb/c裸鼠皮下注射含5×10⁶HT-29細(xì)胞懸液200μL，待瘤體長至70mm³大小后，分成4組(每組7只)：生理鹽水、實(shí)施例8中制備的2-NP(CA4等同劑量為15mg/kg)和4-NP(SN38等同劑量為15mg/kg)、實(shí)施例10制備的2/4-NP(CA4和SN38等同劑量均為15mg/kg)。每隔三天一次尾靜脈給藥，總共3次。以第一次給藥為0天，間隔一定時(shí)間測量瘤體體積，并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示，4-NP、2/4-NP相對于生理鹽水組對抑制腫瘤生長具非常顯著的效果，且抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合組(2/4-NP)優(yōu)于由單獨(dú)用藥的2-NP和4-NP組。體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，本發(fā)明中制備的抗血管生成藥物和抗腫瘤細(xì)胞增殖藥物聯(lián)合用藥納米粒具有較強(qiáng)的抑制腫瘤增長的能力。