一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，具體涉及一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽及其制 備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] Judah folkman于1971年提出腫瘤的生長依賴于血管新生的理論，從而開創(chuàng)了腫 瘤依賴性血管新生治療的新紀(jì)元。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤生長依賴于血管新生，以血管 相關(guān)抗原為靶點(diǎn)的疫苗可以引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性細(xì)胞或體液免疫反應(yīng)，抑制血管的形成， 從而起到阻止腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移的作用。
[0003] 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF)、血小板衍生生長因子（PDGF)和刺激促紅細(xì)胞生 成素（EPO)是促進(jìn)腫瘤血管生長作用的關(guān)鍵因子，是誘導(dǎo)血管生成的重要調(diào)節(jié)因素。在腫 瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤組織的缺氧環(huán)境會誘導(dǎo)VEGF和TOGF的表達(dá)，釋放的VEGF和 I3DGF等血管生成刺激因子反過來刺激血管生成并為腫瘤組織供氧，其中，I3DGF與其受體結(jié) 合后，又可刺激EPO的分泌，EPO可促進(jìn)紅細(xì)胞生成，從而進(jìn)一步為腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移提供 足夠的氧氣。
[0004] 目前，同時針對VEGF、TOGF和EPO三種靶點(diǎn)的疫苗還未見報道，因此，有必要提供 一種能同時針對VEGF、TOGF和EPO三種靶點(diǎn)的疫苗及治療方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，該抗腫瘤血管 生成免疫復(fù)合肽包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子 I3DGF的免疫原性表位和促紅細(xì)胞生成素 EPO的免疫原性表位，具有靶向VEGF、TOGF和EPO 三種靶向位點(diǎn)的能力，從而更有效地抑制腫瘤生長；此外，該抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽能 作為主動免疫疫苗,能有效降低抗體藥物免疫原性反應(yīng)；本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤血管 生成免疫復(fù)合肽的制備方法和應(yīng)用。
[0006] 第一方面，本發(fā)明提供了一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，所述抗腫瘤血管生成 免疫復(fù)合肽包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子TOGF 的免疫原性表位和促紅細(xì)胞生成素 EPO的免疫原性表位。
[0007] 優(yōu)選地，所述血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述血小板衍生生長因子TOGF的免疫原性表位選自如SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO:4所示氨基酸序列中的至少一種，所述促紅細(xì)胞生成素 EPO的免疫原性 表位選自如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示氨基酸序列中的至少一種。
[0008] 優(yōu)選地，所述血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子 I3DGF的免疫原性表位和促紅細(xì)胞生成素 EPO的免疫原性表位之間通過連接肽連接。
[0009] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述連接肽的氨基酸序列為GGGGS或GGGGSCGGGGS。
[0010] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:7 所示。
[0011] 具體地，SEQ ID N0:7 為：
[0012] MLSDHSIRSGGGGSQVRKIEIVRKKPIFKKATGGGGSRTVRVRRPPKGKHRKFKGGGGSCGGGGSPLGL PVLGAPPRLICDGGGGSPKKDRARQEKKSVRGKGGGGSNITVPDTKVNF。
[0013] 該序列組成分別標(biāo)示如下：
[0014]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，其特征在于，所述抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽包 括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子TOGF的免疫原性表 位和促紅細(xì)胞生成素EPO的免疫原性表位。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，其特征在于，所述血管內(nèi)皮 細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述血小板衍生生 長因子I3DGF的免疫原性表位選自如SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO:4所示氨基 酸序列中的至少一種，所述促紅細(xì)胞生成素EPO的免疫原性表位選自如SEQ ID NO: 5和SEQ ID N0:6所示氨基酸序列中的至少一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，其特征在于，所述血管內(nèi)皮 細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子TOGF的免疫原性表位和促紅細(xì) 胞生成素EPO的免疫原性表位之間通過連接肽連接。
4. 如權(quán)利要求3所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，其特征在于，所述連接肽的 氣!基Ife序列為 GGGGS 或 GGGGSCGGGGS。
5. 如權(quán)利要求1所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，其特征在于，所述抗腫瘤血 管生成免疫復(fù)合肽的氨基酸序列如SEQ ID N0:7所示。
6. -種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的制備方法，其特征在于，所述制備抗腫瘤血管生 成免疫復(fù)合肽的方法為如下所述方法中的任--種： a. 采用固相合成法合成復(fù)合肽，所述復(fù)合肽包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫 原性表位、至少一種血小板衍生生長因子I3DGF的免疫原性表位和至少一種促紅細(xì)胞生成 素EPO的免疫原性表位，得到所述抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽； b. 采用原核表達(dá)載體或真核表達(dá)載體表達(dá)具有編碼抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的目 的基因，經(jīng)蛋白質(zhì)純化后，得到抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，所述抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合 肽包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子TOGF的免疫原 性表位和促紅細(xì)胞生成素EPO的免疫原性表位。
7. 如權(quán)利要求6所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的制備方法，其特征在于，所 述血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述血 小板衍生生長因子I3DGF的免疫原性表位的氨基酸序列如SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3或SEQ ID NO:4所示，所述促紅細(xì)胞生成素EPO的免疫原性表位的氨基酸序列如SEQ ID NO: 5或 SEQ ID NO:6 所示。
8. 如權(quán)利要求6所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的制備方法，其特征在于，所 述血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子TOGF的免疫原性表 位和促紅細(xì)胞生成素EPO的免疫原性表位之間通過連接肽連接。
9. 如權(quán)利要求8所述的一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的制備方法，其特征在于，所 述連接肽的氨基酸序列為GGGGS或GGGGSCGGGGS。
10. 如權(quán)利要求1所述的抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽在制備預(yù)防或治療癌癥的藥物中 的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽，所述抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽包括血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF的免疫原性表位、血小板衍生生長因子PDGF的免疫原性表位和促紅細(xì)胞生成素EPO的免疫原性表位。該抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽具有靶向VEGF、PDGF和EPO三種靶向位點(diǎn)的能力，從而更有效地抑制腫瘤生長；此外，該抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽能作為主動免疫疫苗，能有效降低抗體藥物免疫原性反應(yīng)；本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤血管生成免疫復(fù)合肽的制備方法和應(yīng)用。
【IPC分類】C12N15-12, C07K1-06, C12N15-63, A61P35-00, A61K38-18, C07K19-00
【公開號】CN104744593
【申請?zhí)枴緾N201310726540
【發(fā)明人】萬曉春, 呂衛(wèi)東
【申請人】深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2013年12月25日