專利名稱：非肽類新生血管生成抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一類以N-取代鄰苯二甲酰亞胺為分子骨架的非肽類新生血管生成抑制劑，通過在分子骨架上引入相應(yīng)的酸性和堿性取代基，從而使這類非肽化合物具有與Arg-Gly-Asp(RGD)三肽相似的空間結(jié)構(gòu)。該類化合物具有顯著的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及抗新生血管生成活性。
血管生成(angiogenesis)是指從已存在的血管床中產(chǎn)生新生血管系統(tǒng)的過程。在正常生理情況下，血管生成被嚴(yán)格控制于某些短暫的、特定的生理過程，如生殖過程、發(fā)育過程及傷口愈合過程等，而存續(xù)的血管生成是某些病變?nèi)缒[瘤組織的惡性生長、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松等的特性。研究表明，腫瘤誘導(dǎo)的新生血管生成與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，一方面，腫瘤通過誘導(dǎo)新生血管生成為其提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，另一方面，新生血管的形成提供了腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)位轉(zhuǎn)移的通道。因此有效地抑制腫瘤誘導(dǎo)的新生血管生成，切斷腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)供應(yīng)和轉(zhuǎn)移途徑，將能有效地防治癌癥；另外與傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物相比，抗腫瘤新生血管生成藥物是通過減少或阻斷腫瘤組織的血液供應(yīng)而使腫瘤細(xì)胞增殖周期延長，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞壞死而起作用，而不是直接殺死腫瘤細(xì)胞，故無明顯毒副作用，并且可克服化療過程中的抗藥性問題，而抗藥性是目前化療手段失敗的重要原因之一。
目前對(duì)于腫瘤誘導(dǎo)的新生血管生成機(jī)制已有了一些了解，Brooks等人發(fā)現(xiàn)，新生血管生成依賴于血管內(nèi)皮細(xì)胞之間、血管內(nèi)皮細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)間的相互粘附，該粘附過程是經(jīng)αvβ3整合素介導(dǎo)的，該整合素在新生血管組織中顯著表達(dá)。新生血管生成過程中血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的增殖、侵潤和遷移都受到αvβ3整合素受體的調(diào)節(jié)。整合素αvβ3受體的配基為纖連蛋白(fibronectin)、層連蛋白(laminin)等細(xì)胞外基質(zhì)成分中的RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)三肽序列，當(dāng)整合素αvβ3與RGD結(jié)合后，可激活Ca2+依賴的信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移；使用抗αvβ3單抗(LM609)可阻止堿性成纖維生長因子(Basic fibroblast growth factor，bFGF)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和人各種腫瘤片段誘導(dǎo)的新生血管生成，而對(duì)已存在的血管無影響。近年國外學(xué)者做了大量的以外源性的含RGD序列的短肽，如GRGDS、RGD三聚肽polyRGD、環(huán)肽(cRGDfV)等來競(jìng)爭(zhēng)性抑制αvβ3受體與內(nèi)源性配基結(jié)合的研究工作，發(fā)現(xiàn)了一些具有明顯抗新生血管生成的短肽。SAR研究表明，RGD序列中的精氨酸(Arg)側(cè)鏈中的胍基和天冬氨酸(Asp)側(cè)鏈的羧基為與整合素受體配合的藥效基團(tuán)。由于肽類藥物都存在體內(nèi)易降解、生物利用度低、需靜脈給藥、大量制備困難等不足，給進(jìn)一步研究帶來困難，并且抑制腫瘤新生血管生成需長期用藥，以口服方式給藥將是非常重要的?；谏鲜霰锥耍Y選具有高活性，高選擇性，可以口服給藥的非肽類新生血管生成抑制劑具有非常重要的意義。
反應(yīng)停(沙利度胺，thalidomide)是五十年代上市的鎮(zhèn)靜、催眠藥物，后又被推薦用于治療婦女的妊娠反應(yīng)，由于其強(qiáng)烈的致畸作用，至六十年代中期撤出市場(chǎng)時(shí)，已使近萬名海豹肢畸形胎兒出生，釀成近代藥物史上規(guī)模最大、危害最嚴(yán)重的藥害事件。根據(jù)最近的一些研究結(jié)果提示，其致畸作用可能是抑制了胎兒四肢新生血管的形成。D’amato等用兔角膜微囊篩選發(fā)現(xiàn)，當(dāng)給兔口服反應(yīng)停(200mg/kg)可抑制bFGF誘導(dǎo)的角膜新生血管生成，其抗新生血管生成活性與致畸性具有相關(guān)性。Neubert等發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)停及其類似物(EM-12)能顯著下調(diào)靈長類哺乳動(dòng)物胚胎四肢芽細(xì)胞上的一些粘附受體分子，使一些粘附受體消失或以低密度在胚胎上表達(dá)，細(xì)胞表面粘附受體的下調(diào)可能改變了細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)β3整合素的下調(diào)作用最為顯著。另一些研究還顯示，反應(yīng)?？梢种茊魏思?xì)胞或巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α，而TNF-α為血管生成因子，可誘導(dǎo)新生血管生成。
經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)檢索，與本發(fā)明相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道如下[1]Harris AL.Antiangiogenesis for cancer therapy.The Lancet，1997，349(Suppl II)13-15[2]Brooks PC，Clark RAF，Cheresh DA.Repuirement of vascular integrinαvβ3for angiogenesis.Science，1994，264569-571.Brooks Pc，Montgomery AMP，Rosenfeld M，et al.Integrin αvβ3antagonists promote tumor regression by inducing apoptosis ofangiogenic blood vessels.Cell，1994，791157-1164.Amato RJD，Loughnan MS，F(xiàn)lynn E，et al.Thalidomide is aninhibitor of angiogenesis.Proc Natl Acad Sci USA，1994，914082-4085.
本發(fā)明的目的在于提供一類具有高活性，高選擇性，可以口服給藥的非肽類小分子新生血管生成抑制劑，使之能克服肽類藥物存在的體內(nèi)易降解、生物利用度低需靜脈給藥、大量制備困難等弊端，可望進(jìn)一步開發(fā)成為臨床治療藥物。該類化合物具有顯著的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和抗新生血管生成活性，這對(duì)因新生血管生成而引起的疾病如腫瘤組織的惡性生長、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松等的治療，將會(huì)取得突破性效果。
本發(fā)明的技術(shù)方案用RGD三肽優(yōu)勢(shì)構(gòu)象為模板，以反應(yīng)停為先導(dǎo)化合物，合成了N-取代鄰苯二甲酰亞胺分子骨架，在相應(yīng)鍵距部位引入陽離子基因(如胍基、哌嗪基等)和陰離子基因(如羧基)。該化合物的特點(diǎn)為一方面保留有RGD配體與整合素αvβ3受體的選擇性親合作用，抑制其與內(nèi)源性配基的結(jié)合；另一方面又保留反應(yīng)停的某些作用，即下調(diào)整合素β3的表達(dá)，減少新生血管部位受體數(shù)目和抑制TNF-α的產(chǎn)生，通過這種雙重作用達(dá)到具有強(qiáng)的抑制新生血管生成活性。經(jīng)文獻(xiàn)檢索和專利查新，目前尚未見有與本發(fā)明的化合物類型相同的報(bào)道。
本發(fā)明設(shè)計(jì)的化合物結(jié)構(gòu)通式如下所示 其中X1-X2為C(O)-N；C(O)-CH；CHR1-N；-CHR1-CH；O-CH；S-CH；R1為H，C1～6烷基或芐基；R2為H，C1～6烷基，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3，C3～6環(huán)烷基-R3，(CH2)mCOR4；R3為H，C1～4烷基，鹵素，OR1，SR1，NR1，NO2，CN，CF3，COR4等；R4為OR1，SR1，NR1；R5為W-U-，Y-(CHR6)m-U-或Z-C(O)-；R6為H，C1～6烷基，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3，C3～6環(huán)烷基-R3；m為0～2；n為0～4；U為NR1C(O)，C(O)-NR1，O-CH2，S-CH2，CH2-O，CH2-S，CH2CH2-，CH＝CH，C≡C；W為 Ra為H，OH，NO2，N(R6)2，C(O)N(R6)2，CH2N(R6)2，R6HN-C(＝NH)，R6HN-C(＝NH)NH；Y為NH2，NHR6，N(R6)2，C(O)N(R6)2，OH，＝N-OR6， X3為O，S，NH；Z為 Rb為H，C1～4烷基，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3；RC為H，N(R1)2，C1～4烷基，C(O)N(R1)2，OH，OR1，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3；本發(fā)明目標(biāo)化合物的制備本發(fā)明中化學(xué)結(jié)構(gòu)通式中所包含的部分化合物可用下述的兩種通法制備。
方法1 a.)CH3COOH，reflux；b.)Et3N/toluene；c)150～200℃；d.)B-NH2，THF(DMF)，DCC(EDCI)，DMAP，HOBT；e.)SOCl2，reflux；f.)B-NH2，Py(Et3N)，CH2Cl2；g.)CH3COOH，5％Pd/C；h.)CF3COOH/CH2Cl2；or HCl/CH2Cl2。
中間體(2)與(3)的縮合反應(yīng)常用三種方法進(jìn)行，即以乙酸為溶劑，將酸酐與氨基物混合，加熱回流反應(yīng)；以甲苯回流帶水進(jìn)行縮合；不加溶劑，將酸酐與氨基物混合，升溫到150～200℃直接將生成的水蒸除。前兩種方法反應(yīng)條件較溫和，收率高，并且當(dāng)氨基物(3)為手性化合物時(shí)，在反應(yīng)過程中消旋程度??；而最后一種方法由于反應(yīng)溫度高，產(chǎn)品顏色較深而影響質(zhì)量，使收率也大大降低，當(dāng)與手性氨基物(3)反應(yīng)時(shí)，因反應(yīng)條件激烈而發(fā)生部分消旋。中間體(4)與氨基物縮合形成酰胺需將羧基活化，常用活化方法有酰氯法、混合酸酐法、DCC(EDCI)法等，當(dāng)中間體(4)和氨基物中含有其它影響反應(yīng)的基團(tuán)時(shí)，應(yīng)加以保護(hù)。中間體(5)的脫保護(hù)基條件依保護(hù)基性質(zhì)而定，當(dāng)保護(hù)基為芐基或類似物時(shí)，用催化氫解脫保護(hù)基；當(dāng)保護(hù)基為叔丁酯或類似物時(shí)，用CF3COOH、HCl等脫保護(hù)基。方法2 a.)(1)KOH/C2H5OH，(2)ClCOOC2H5/DMF；b.)ClCOOC2H5/Et3N/DMF；c.)ClCOOC2H5/toluene/PTC/K2CO3；d.)Na2CO3/CH3CN；e.)NaOH/HCl；f.)Ac2O，reflux；g.)(1)CH3COOH，reflux or(2)Et3N/toluene；h.)RaneyNi/H2；or Pd/C。i.)B-COOH，DMF，DCC(EDCI)，DMAP，HOBT；j.)CH3COOH，5％Pd/C；k.)CF3COOH/CH2Cl2；or HCl/CH2Cl2。
中間體(6)的制備可通過兩條路線進(jìn)行合成，即以N-乙氧羰基-4-硝基鄰苯二甲酰亞胺(3)與相應(yīng)氨基物反應(yīng)，或以酸酐(5)與相應(yīng)氨基物縮合而成。方法1反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)速度快，一般室溫反應(yīng)0.5～2小時(shí)即可以較高收率得到(6)；而方法2與Scheme(1)中方法相同。硝基的還原方法可根據(jù)底物的性質(zhì)，采用Pd/C還原或RaneyNi還原，后者在底物中存在芐基或類似物時(shí)，一般不會(huì)發(fā)生氫解。目標(biāo)物的合成與Scheme 1中的方法類似。本發(fā)明化合物的生物學(xué)活性研究血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖是血管生成的重要步驟，因而能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的化合物就有可能抑制新生血管生成。本發(fā)明中目標(biāo)化合物的生物學(xué)活性研究采用抑制臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV304)增殖的藥理模型來進(jìn)行初步篩選，篩選實(shí)驗(yàn)中以RGDS四肽作為陽性對(duì)照物，細(xì)胞增殖的檢測(cè)方法采用四氮唑鹽還原法(MTT法)，篩選結(jié)果用血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖百分抑制率作為衡量目標(biāo)物生物學(xué)活性的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，部分化合物具有顯著的抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性，并且其活性強(qiáng)于RGDS四肽。為了排除目標(biāo)物因細(xì)胞毒活性對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的殺滅而導(dǎo)致的假陽性結(jié)果，本發(fā)明還研究了化合物對(duì)乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)的細(xì)胞毒作用，結(jié)果表明，目標(biāo)物的細(xì)胞毒作用不顯著。
實(shí)施例實(shí)施例一5-[[(2-苯并咪唑)甲胺基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸的合成 1.β-氨基丙酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽(2)的制備β-氨基丙酸20.0克，苯甲醇90.0mL、對(duì)甲苯磺酸51.3克、苯500mL加入反應(yīng)瓶中，回流攪拌反應(yīng)8.0小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓回收溶劑，殘余物用乙醇-乙醚(v/v＝1∶1)重結(jié)晶，得白色片狀結(jié)晶70.0克，mp137～139℃，收率89.0％。2.5-羧基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸芐酯(3)的制備中間體(2)35.2克、4-羧基鄰苯二甲酸酐19.3克、三乙胺32.0mL、甲苯500mL加入反應(yīng)瓶中，回流攪拌反應(yīng)5.0小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓回收甲苯，殘余物用乙酸重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶30.0克，mp108～110℃，收率85.0％。1HNMR(CDCl3)8.46(2H，m，Ar-H6，Ar-H4)，7.93(1H，d，J＝7.7Hz，Ar-H7)，7.30(5H，s，CH2Ph)，5.1(2H，s，CH2Ph)，4.1(2H，t，J＝7.0Hz，CH2)，2.80(2H，t，J＝7.0Hz，CH2)；MS(EI)354(M+1)。3.5-[[(2-苯并咪唑)甲胺基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸芐酯(4)的制備2-胺甲基苯并咪唑3.3克、中間體(3)3.53克、三乙胺7.7mL、二氯甲烷60.0mL加入反應(yīng)瓶中，置冰浴中冷卻至0℃，分批加入DCC3.0克，0～5℃保溫反應(yīng)1.0小時(shí)后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜；反應(yīng)結(jié)束后，濾除生成的DCU，濾液依次用25mL×2飽和Na2CO3水溶液、25mL去離子水、20mL飽和NaCl水溶液洗滌，無水Na2SO4干燥；減壓蒸除溶劑得(4)粗品，所得粗品經(jīng)甲醇-乙醚重結(jié)晶，得白色粉末結(jié)晶3.8克，mp164～166℃，收率85.0％。1HNMR(DMSO-d6)12.39(1H，brs，imidazole-NH)，9.62(1H，t，J＝5.4Hz，NHCH2)，8.41(1H，s，Ar-H4)，8.36(1H，d，J＝7.8Hz，Ar-H6)，8.00(1H，d，J＝7.8Hz，Ar-H7)，7.51(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.32(5H，s，CH2Ph)，7.17(2H，m，benzimidazole-H5，6)，5.07(2H，s，CH2Ph)，4.95(2H，d，J＝5.4Hz，NHCH2)，3.89(2H，t，J＝7.0Hz，CH2)，2.78(2H，t，J＝7.0Hz，CH2)。4.5-[[(2-苯并咪唑)甲胺基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸的合成化合物(4)3.80克、甲醇50mL、催化量5％Pd/C加入反應(yīng)瓶中，于常溫常壓下通H2反應(yīng)24小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，過濾，少量甲醇洗滌，濾液減壓蒸除溶劑，得白色粉末固體1.50克，mp272～275℃，收率85.0％。1HNMR(DMSO-d6)12.34(1H，brs，imidazole-NH)，9.59(1H，t，J＝5.4Hz，NHCH2)，8.41(1H，s，Ar-H4)，8.36(1H，d，J＝7.8Hz，Ar-H6)，8.02(1H，d，J＝7.8Hz，Ar-H7)，7.50(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.15(2H，m，benzimidazole-H5，6)，4.74(2H，d，J＝5.4Hz，NHCH2)，3.82(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，2.64(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)。
實(shí)施例二(±)-5-[[2-(2-苯并咪唑)乙胺基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(3-苯基)丙酸的合成 1.(±)-3-氨基-3-苯基丙酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽(2)的制備(±)-3-氨基-3-苯基丙酸19.0克、芐醇46.4mL、對(duì)甲苯磺酸26.3克、苯700mL加入反應(yīng)瓶中，回流攪拌反應(yīng)8.0小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓回收溶劑，殘余物用乙醇-乙醚(v/v＝1∶1)重結(jié)晶，得白色片狀結(jié)晶47.0克，mp154～156℃，收率96.0％。2.(±)-5-羧基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(3-苯基)丙酸芐酯(3)的制備4-羧基鄰苯二甲酸酐9.61克、化合物(2)21.4克、乙酸500mL加入反應(yīng)瓶中，回流攪拌反應(yīng)6.0小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，蒸除乙酸，殘余物溶于100mL乙酸乙酯中，有機(jī)層依次用50mL×2去離子水、50mL飽和食鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥、減壓蒸除溶劑，得淺黃色固體，所得粗品經(jīng)乙醇-水重結(jié)晶，得白色顆粒結(jié)晶17.0克，mp136～138℃，收率80.0％。1HNMR(DMSO-d6)13.71(1H，brs，COOH)，8.36(1H，m，Ar-H6)，8.18(1H，s，Ar-H4)，7.96(1H，d，J＝8.0Hz，Ar-H7)，7.44～7.28(5H，m，Ph)，7.23～7.17(5H，m，CH2Ph)，5.74(1H，dd，J1＝6.4Hz，J2＝9.4Hz，CH)，5.00(2H，s，CH2Ph)，3.66(1H，dd，J1＝9.4Hz，J2＝16.4Hz，CH2)，3.45(1H，dd，J1＝6.4Hz，J2＝16.4Hz，CH2)；MS(EI)430(M+1)。3.(±)-5-[[2-(2-苯并咪唑)乙胺基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(3-苯基)丙酸芐酯(4)的制備中間體(3)4.29克、氯化亞砜80.0mL加入反應(yīng)瓶中，回流攪拌反應(yīng)3.0小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除過量的氯化亞砜，得淺黃色油狀物，不經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。
將2-苯并咪唑乙胺二鹽酸鹽3.51克、二氯甲烷200.0mL、三乙胺6.7mL、吡啶10.0mL加入反應(yīng)瓶中，置冰浴中冷卻至0℃，滴加上步反應(yīng)所制得的酰氯溶于100mL二氯甲烷的溶液，自然升溫至室溫，攪拌反應(yīng)過夜；反應(yīng)結(jié)束后，有機(jī)層依次用75mL飽和Na2CO3水溶液、50mL去離子水、50mL飽和NaCl水溶液洗滌，無水Na2SO4干燥；減壓蒸除溶劑，得類白色固體3.0克，mp147～149℃，收率52.5％。1HNMR(DMSO-d6)12.35(1H，s，imidazole-NH)，9.07(1H，t，J＝5.1Hz，NHCH2)，8.25(H，m，Ar-H6，Ar-H4)，7.92(1H，d，J＝7.6Hz，Ar-H7)，7.42(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.36(5H，m，Ph)，7.19(5H，s，CH2ph)，7.14(2H，m，benzimidazole-H5，6)，5.74(1H，dd，J1＝6.4Hz，J2＝9.4Hz，CH)，5.03(2H，s，CH2Ph)，3.75(2H，m，NHCH2)，3.65(1H，dd，J1＝9.4Hz，J2＝16.4Hz，CH2)，3.46(1H， dd，J1＝6.4Hz，J2＝16.4Hz，CH2)3.12(2H，t，J＝6.70Hz，CH2)。4.(±)-5-[[2-(2-苯并咪唑)乙胺基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(3-苯基)丙酸的合成參照實(shí)施例一中目標(biāo)物合成方法進(jìn)行催化氫解，得白色粉末固體，mp142～145℃，收率68.0％。1HNMR(DMSO-d6)12.36(1H，brs，imidazole-NH)，9.09(1H，t，J＝5.1Hz，NHCH2)，8.28(1H，s，Ar-H4)，8.26(1H，d，J＝8.16Hz，Ar-H6)，7.95(1H，d，J＝8.16Hz，Ar-H7)，7.46(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.37(5H，m，Ph)，7.12(2H，m，benzimidazole-H5，6)，5.70(1H，t，J＝7.18Hz，CH)，3.73(2H，q，NHCH2)，3.42(2H，m，CH2)，3.11(2H，t，J＝7.0Hz，CH2)。
實(shí)施例三(-)-5-[[(2-苯并咪唑)甲胺基-N-甲基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-羧基)丁酸的合成 1.(-)-谷氨酸雙芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽(2)的制備按照實(shí)施例一中間體(2)所述方法進(jìn)行，得白色針狀結(jié)晶，mp140～142℃，收率97.0％。2.N-甲基-1H-苯并咪唑-2-甲胺(3)的制備在反應(yīng)瓶中加入甲胺乙醇溶液90.0mL，冷卻至0℃，分批加入2-氯甲基苯并咪唑3.0克，然后升溫至室溫，攪拌反應(yīng)過夜；反應(yīng)結(jié)束后，減壓蒸除溶劑，得黃色油狀物，加入20.0mL乙醚，室溫靜置，抽濾、干燥，得白色針狀結(jié)晶1.8克，mp131～133℃，收率62.1％。1HNMR(DMSO-d6)12.20(1H，brs，imidazole-NH)，7.48(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.12(2H，m，benzimidazole-H5，6)，3.85(2H，s，CH2)，2.32(3H，s，CH3)；MS(EI)161(M+)。3.(-)-5-羧基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-芐氧羰基)丁酸芐酯(4)的制備按照實(shí)施例一中間體(3)所述方法進(jìn)行，得白色針狀結(jié)晶，mp162～164℃，收率64.0％。1HNMR(CDCl3)8.50(2H，m，Ar-H6，Ar-H4)，7 96(1H，d，J＝7.8Hz，Ar-H7)，7.36～7.27(10H，m，2×CH2Ph)，5.20(2H，s，CH2Ph)，5.06(2H，s，CH2Ph)，5.02(1H，m，CH)，2.72～2.55(2H，m，CH2)，2.45(2H，m，CH2)；MS(EI)503(M+1)。4.(-)-5-[[(2-苯并咪唑)甲胺基-N-甲基]羰基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-芐氧羰基)丁酸芐酯(5)的制備在反應(yīng)瓶中加入中間體(3)2.42克、中間體(4)5.01克、二氯甲烷200.0mL，攪拌至固體全溶后，置冰浴中冷卻至0℃，加入DMAP 0.16克、DCC3.0克，于0～5℃攪拌反應(yīng)2.0小時(shí)后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過夜；反應(yīng)結(jié)束后，過濾，少量二氯甲烷洗滌濾餅，有機(jī)層依次用35mL×2飽和Na2CO3水溶液、50mL去離子水、50mL飽和NaCl水溶液洗滌，無水Na2SO4干燥；減壓蒸除二氯甲烷，得白色泡沫體4.6克，mp56～59℃，收率71.5％。1HNMR(DMSO-d6)12.44(1H，brs，imidazole-NH)，8.00(3H，m，Ar-H4，Ar-H6，Ar-H7)，7.56(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.28(10H，m，2×CH2Ph)，7.18(2H，m，benzimidazole-H5，6)，5.17(2H，s，CH2Ph)，5.15(1H，m，CH)，4.99(2H，s，CH2Ph)，4.93，4.65(2H，2s，CH2N)，3.03，2.98(3H，2s，CH3N)，2.48(2H，m，CH2)，2.37(2H，m，CH2)；MS(EI)644(M+)。5.(-)-5-[[(2-苯并咪唑)甲胺基-N-甲基]羰基J-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-羧基)丁酸的合成參照實(shí)施例一目標(biāo)物合成方法進(jìn)行催化氫解，得白色粉末固體，mp190～192℃，收率76.0％。1HNMR(DMSO-d6)12.47(1H，brs，imidazole-NH)，8.00(3H，m，Ar-H4，Ar-H6，Ar-H7)，7.56(2H，m，benzimidazole-H4，7)，7.19(2H，m，benzimidazole-H5，6)，4.83(1H，m，CH)，4.94，4.66(2H，2s，CH2N)，3.03，3.00(3H，2s，CH3N)，2.32(2H，m，CH2)，2.28(2H，m，CH2)；MS(FAB)465.0(M++1)。
實(shí)施例四5-[(胍乙?；?氨基]-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸鹽酸鹽的合成 1.N-乙氧羰基-4-硝基鄰苯二甲酰亞胺(2)的制備將4-硝基鄰苯二甲酰亞胺11.52克，溶于60mLDMF中，冷卻至0℃，加入三乙胺9.5mL，滴加氯甲酸乙酯7.3mL，控制反應(yīng)溫度為0～5℃，約90分鐘加完；自然升溫至室溫，繼續(xù)反應(yīng)4.0小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液慢慢傾入400mL冰水中并快速攪拌，析出淺黃色固體，室溫靜置10分鐘后，抽濾，少量冰水洗滌，將固體溶于90.0mL氯仿中，用30mL×2冰水洗滌，氯仿層用無水Na2SO4干燥過夜，過濾，濾液減壓濃縮至有固體析出，加入40.0mL石油醚，抽濾、干燥，得類白色粗品，經(jīng)丙酮-異丙醚(v/v＝1∶1)重結(jié)晶后，得白色針狀結(jié)晶12.40克，mp120～121.5℃，收率78.3％。1HNMR(CDCl3)8.79(1H，d，J＝2.0Hz，Ar-H4)，8.70(1H，dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.0Hz，Ar-H6)，8.19(1H，d，J＝8.0Hz，Ar-H7)，4.53(2H，q，J＝7.2Hz，CH2)，1.47(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)；MS(EI)264(M+)。2.5-硝基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸(3)的制備β-氨基丙酸3.61克，Na2CO3·10H2O 11.37克，100mL去離子水加入反應(yīng)瓶中，攪拌至固體全溶，分批加入中間體(2)10.72克，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)30分鐘后，過濾除去少量固體，濾液用2N鹽酸調(diào)溶液pH至1～2，靜置15分鐘后過濾，少量冰水洗滌，抽干；所得粗品經(jīng)水重結(jié)晶，得白色顆粒晶體8.0克，mp208～210℃，收率74.7％。3.5-氨基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸(4)的制備中間體(3)5.1克，丙酮100mL，催化量10％Pd(OH)2/C加于反應(yīng)瓶中，常溫常壓下催化氫化8.0小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，濾餅用少量丙酮洗滌，濾液減壓濃縮至干，殘余物中加入50mL乙醚，過濾干燥，得黃色粉末固體3.5克，mp200～202℃，收率77.43％。1HNMR(DMSO-d6)12.31(1H，brs，COOH)，7.49(1H，d，J＝8.0Hz，Ar-H7)，6.90(1H，d，J＝2.0Hz，Ar-H4)，6.78(1H，dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.0Hz，Ar-H6)，6.47(2H，brs，NH2)，3.70(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，2.51(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)；MS(EI)235(M+1)。4.5-氨基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸芐酯(5)的制備將芐醇40.0mL加入反應(yīng)瓶中，冷卻到-5℃，滴加入SOCl23.6mL，0～5℃反應(yīng)30分鐘后，室溫繼續(xù)反應(yīng)1.5小時(shí)，加入上步中間體(4)克，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3.5小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，加入適量乙醚-石油醚混合溶劑，攪拌均勻，過濾；所得固體懸浮在50mL冰水中，用飽和Na2CO3水溶液調(diào)溶液pH至9～10，100mL×2乙酸乙酯萃取，乙酯層依次用20mL×2冰水、20mL飽和NaCl水溶液洗滌，無水Na2SO4干燥，減壓蒸出乙酯后，得黃綠色固體，所得粗品經(jīng)乙醇-乙醚重結(jié)晶，得黃綠色晶體3.63克，mp109～110℃，收率56.0％。1HNMR(DMSO-d6)7.47(1H，d，J＝8.2Hz，Ar-H7)，7.30(5H，s，CH2Ph)，6.90(1H，d，J＝2.0Hz，Ar-H4)，6.78(1H，dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.2Hz，Ar-H6)，6.47(2H，brs，NH2)，5.00(2H，s，CH2Ph)，3.76(2H，t，J＝7.1Hz，CH2)，2.68(2H，t，J＝7.1Hz，CH2)；MS(EI)324(M+)。5.5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸芐酯鹽酸鹽(6)的制備上步中間體(5)324.0mg，胍基乙酸鹽酸鹽230.3mg，DMAP 15.0mg，DMF20.0mL加于反應(yīng)瓶中，冷卻至0℃，慢慢滴加313mgDCC溶于5.0mLDMF的溶液，約2小時(shí)加完，0～5℃攪拌反應(yīng)1.0小時(shí)后，升溫至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，過濾，濾餅用少量DMF洗滌，濾液減壓濃縮至干，殘余物經(jīng)柱層析純化(洗脫液為CHCl3∶CH3OH＝10∶1(v/v))，得白色固體300.0mg，mp199～201℃，收率65.0％。1HNMR(DMSO-d6)11.05(1H，brs，＝NH)，8.19(1H，m，Ar-H4)，7.87(2H，m，Ar-H6，Ar-H7)，7.55(1H，t，J＝12.4Hz，NHCH2)，7.31(5H，s，CH2Ph)，7.34～7.27(4H，brs，NH3+，NH)，5.05(2H，s，CH2Ph)，4.15(2H，d，J＝6.3Hz，NHCH2)，3.83(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，2.74(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)；MS(EI)423(M-HCl)。6.5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-丙酸鹽酸鹽的合成中間體(6)300.0mg，溶于50mL甲醇中，加入催化量的5％Pd/C，常溫常壓下催化氫解5.0小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，濾餅用少量甲醇洗滌，濾液減壓濃縮至干，殘余物中加入適量乙醚，過濾干燥，得淺黃色粉末固體188.0mg，mp168～170℃，收率78.0％。1HNMR(DMSO-d6)12.35(1H，brs，COOH)，11.15(1H，brs，＝NH)，8.21(1H，d，J＝1.5Hz，Ar-H4)，7.94(1H，dd，J1＝1.5Hz，J2＝8.2Hz，Ar-H6)，7.84(1H，d，J＝8.2Hz，Ar-H7)，7.69(1H，brs，NHCH2)，7.40(4H，brs，NH3+，NH)，4.17(2H，d，J＝6.2Hz，NHCH2)，3.79(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)，2.59(2H，t，J＝7.4Hz，CH2)。
實(shí)施例五(±)-5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-[3-(4-甲氧基)苯基]丙酸鹽酸鹽的合成 1.(±)-3-氨基-3-(4-甲氧基)苯基丙酸芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽(2)的制備在反應(yīng)瓶中加入(±)-3-氨基-3-(4-甲氧基)苯基丙酸30.0克，苯甲醇62.0mL，對(duì)甲苯磺酸36.0克，苯300mL，升溫回流攪拌反應(yīng)16小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓回收苯，殘余物中加入100mL乙醚，過濾干燥，所得粗品用乙醇-乙醚(1∶1)重結(jié)晶，得白色片狀結(jié)晶48.0克，mp170～172℃，收率68.6％。2.(±)-5-硝基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-[3-(4-甲氧基)苯基]丙酸芐酯(3)的制備中間體(2)2.29克、Na2CO3·10H2O 0.53克、15.0mL水加入反應(yīng)瓶中，滴加1.32克N-乙氧羰基-4-硝基鄰苯二甲酰亞胺溶于10.0mL乙腈的溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1.5小時(shí)后，減壓蒸除乙腈，水層用20mL×2乙酸乙酯萃取，酯層經(jīng)無水Na2SO4干燥后，減壓蒸出乙酯，得淺黃色油狀物粗品，所得粗品經(jīng)柱層析純化(洗脫液為CHCl3)，得淺黃色油狀物1.64克，收率71.0％。1HNMR(CDCl3)8.51(2H，m，Ar-H4，Ar-H6)，7.92(1H，d，J＝7.9Hz，Ar-H7)，7.44(2H，d，J＝6.8Hz，Ar-OCH3)，7.21(5H，s，CH2Ph)，6.84(2H，d，J＝6.8Hz，Ar-OCH3)，5.78(1H，dd，J1＝5.4Hz，J2＝10.8Hz，CH)，5.00(2H，s，CH2Ph)，3.88(1H，dd，J1＝10.8Hz，J2＝16.3Hz，CH2)，3.21(1H，dd，J1＝5.4Hz，J2＝16.3Hz，CH2)；MS(EI)460(M+)。3.(±)-5-氨基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-[3-(4-甲氧基)苯基1丙酸芐酯(4)的制備中間體(3)1.64克、乙酸乙酯30mL加于反應(yīng)釜中，加入適量RaneyNi催化劑，在2～10大氣壓條件下還原反應(yīng)10.0小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，過濾，少量乙酸乙酯洗滌濾餅，濾液減壓蒸出溶劑，殘余物經(jīng)柱層析純化(洗脫液為CHCl3)，得黃綠色油狀物1.23克，收率80.0％。1HNMR(CDCl3)7.46(1H，d，J＝8.0Hz，Ar-H7)，7.42(2H，d，J＝6.8Hz，Ar-OCH3)，7.22(5H，m，CH2Ph)，6.90(1H，d，J＝2.0Hz，Ar-H4)，6.81(2H，d，J＝6.8Hz，Ar-OCH3)，6.70(1H，dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.0Hz，Ar-H6)，5.74(1H，dd，J1＝6.2Hz，J2＝9.8Hz，CH)，5.05(2H，s，CH2Ph)，3.75(3H，s，OCH3)，3.73(1H，dd，J1＝9.8Hz，J2＝16.2Hz，CH2)，3.28(1H，dd，J1＝6.2Hz，J2＝16.2Hz，CH2)；MS(EI)431(M++1)。4.(±)-5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-[3-(4-甲氧基)苯基]丙酸芐酯鹽酸鹽(5)的制備參照實(shí)施例四中間體(6)的制備方法進(jìn)行，得淺黃色粉末固體，mp82～85℃，收率53.1％。1HNMR(DMSO-d6)11.13(1H，brs，＝NH)，8.16(1H，d，J＝2.8Hz，Ar-H4)，7.90(1H，dd，J1＝2.8Hz，J2＝8.0Hz，Ar-H6)，7.80(1H，d，J＝8.0Hz，Ar-H7)，7.60(1H，m，NHCH2)，7.40～7.20(4H，brs，NH3+，NH)，7.32(2H，d，J＝7.6Hz，Ar-OCH3)，7.22(5H，m，CH2Ph)，6.88(2H，d，J＝7.6Hz，Ar-OCH3)，5.62(1H，dd，J1＝7.2Hz，J2＝9.2Hz，CH)，5.03(2H，s，CH2Ph)，4.16(2H，d，J＝5.6Hz，NHCH2)，3.71(3H，s，OCH3)，3.62(1H，dd，J1＝9.2Hz，J2＝16.0Hz，CH2)，3.35(1H，dd，J1＝7.2Hz，J2＝16.0Hz，CH2)；MS(EI)529(M+-HCl)。5.(±)-5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-[3-(4-甲氧基)苯基]丙酸鹽酸鹽的合成參照實(shí)施例四中目標(biāo)物的制備方法進(jìn)行，得類白色粉末固體，mp130～132℃(dec)，收率66.1％。1HNMR(DMSO-d6)12.36(1H，brs，COOH)，11.15(1H，s，＝NH)，8.20(1H，d，J＝2.8Hz，Ar-H4)，7.95(1H，dd，J1＝2.8Hz，J2＝8.4Hz，Ar-H6)，7.83(1H，d，J＝8.4Hz，Ar-H70)，7.66(1H，brs，NHCH2)，7.50～7.20(4H，brs，NH3+，NH)，7.32(2H，d，J＝9.6Hz，Ar-OCH3)，6.89(2H，d，J＝9.6Hz，Ar-OCH3)，5.59(1H，dd，J1＝7.2Hz，J2＝9.2Hz，CH)，4.16(2H，d，J＝6.0Hz，NHCH2)，3.70(3H，s，OCH3)，3.42(1H，dd，J1＝9.2Hz，J2＝16.4Hz，CH2)，3.23(1H，dd，J1＝7.2Hz，J2＝16.4Hz，CH2)。
實(shí)施例六(-)-5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-羧基)丁酸鹽酸鹽的合成 1.(-)-5-硝基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-芐氧羰基)-丁酸芐酯(2)的制備(-)-谷氨酸雙芐酯對(duì)甲苯磺酸鹽3.1克、Na2CO3·10H2O 1.78克、20.0mL水加入反應(yīng)瓶中，冷卻至0℃，滴加1.64克N-乙氧羰基-4-硝基鄰苯二甲酰亞胺溶于15.0mL乙腈的溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2.0小時(shí)后，減壓蒸除乙腈，水層用25mL×2乙酸乙酯萃取，酯層經(jīng)無水Na2SO4干燥后，減壓蒸出乙酯，得淺黃色油狀物粗品，所得粗品經(jīng)柱層析純化(洗脫液為CHCl3)，得淺黃色油狀物2.50克，收率80.0％。1HNMR(CDCl3)8.61(1H，d，J＝1.24Hz，Ar-H4)，8.57(1H，d，J＝7.4Hz，Ar-H7)，8.00(1H，dd，J1＝1.24Hz，J2＝7.4Hz，Ar-H6)，7.31(10H，m，2×CH2Ph)，5.18(2H，S，CH2Ph)，5.03(2H，s，CH2Ph)，5.01(1H，m，CH)，2.65(2H，m，CH2)，2.47(2H，m，CH2)；MS(EI)502(M+)。2.(-)-5-氨基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-芐氧羰基)-丁酸芐酯(3)的制備中間體(2)2.50克、丙酮50.0mL、乙酸乙酯20mL、催化量RaneyNi催化劑加于反應(yīng)釜中，在2～10大氣壓條件下還原反應(yīng)12.0小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，過濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，減壓蒸除溶劑，殘余物經(jīng)柱層析純化(洗脫液為CHCl3)，得黃色油狀物2.10克，收率89.4％。1HNMR(CDCl3)7.59(1H，d，J＝8.20Hz，Ar-H7)，7.34(10H，m，2×CH2Ph)，7.00(1H，d，J＝2.0Hz，Ar-H4)，6.82(1H，dd，J1＝2.0Hz，J2＝8.2Hz，Ar-H6)，5.19(2H，s，CH2Ph)，5.06(2H，s，CH2Ph)，4.93(1H，m，CH)，2.63(2H，m，CH2)，2.46(2H，m，CH2)；MS(EI)472(M+)。3.(-)-5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-芐氧羰基)-丁酸芐酯鹽酸鹽(4)的制備胍基乙酸鹽酸鹽307.0mg，中間體(3)472.0mg，DMAP 15.0mg，DMF20.0mL加于反應(yīng)瓶中，冷卻至0℃，慢慢滴加313mgDCC溶于5.0mLDMF的溶液，約2小時(shí)加完，0～5℃攪拌反應(yīng)2.0小時(shí)后，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，濾餅用少量DMF洗滌，濾液減壓濃縮至干，得黃色固體，所得粗品經(jīng)柱層析純化(洗脫液為CHCl3∶CH3OH＝10∶1(v/v))，得白色粉末固體300.0mg，mp90～92℃，收率49.4％。1HNMR(DMSO-d6)11.22(1H，s，＝NH)，8.23(1H，d，J＝2.6Hz，Ar-H4)，7.96(1H，dd，J1＝2.6Hz，J2＝7.8Hz，Ar-H6)，7.88(1H，d，J＝7.8Hz，Ar-H7)，7.66(1H，brs，NHCH2)，7.45～7.20(4H，brs，NH3+，NH)，7.28(10H，m，2×CH2Ph)，5.16(2H，s，CH2Ph)，5.01(1H，m，CH)，4.97(2H，s，CH2Ph)，4.18(2H，d，J＝6.0Hz，NHCH2)，2.45(2H，m，CH2)，2.34(2H，m，CH2)；MS(EI)571(M-HCl)。4.(-)-5-胍乙酰胺基-1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-(4-羧基)丁酸鹽酸鹽的合成中間體(4)300.0mg，溶于40mL甲醇中，加入催化量5％Pd/C，常溫常壓下催化氫解10.0小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，抽濾，濾餅用少量甲醇洗滌，濾液減壓濃縮至干，得一白色泡沫體152.0mg，mp110～112℃，收率72.0％。1HNMR(DMSO-d6)12.45(1H，brs，COOH)，11.13(1H，s，＝NH)，8.24(1H，d，J＝2.5Hz，Ar-H4)，7.97(1H，dd，J1＝2.5Hz，J2＝8.4Hz，Ar-H6)，7.88(1H，d，J＝8.4Hz，Ar-H7)，7.67(1H，brs，NHCH2)，7.40(4H，brs，NH3+，NH)，4.76(1H，m，CH)，4.17(2H，d，J＝6.2Hz，NHCH2)，2.33(1H，m，CH)，2.28(2H，m，CH2)，2.23(1H，m，CH)。
實(shí)施例七目標(biāo)化合物對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV304)的抑制活性研究將待測(cè)樣品溶于DMSO中，配成濃度為2×10-3mol/L的溶液，然后用含5％新生小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋至所需濃度，供生物學(xué)活性篩選。本發(fā)明藥理篩選用RGDS四肽作為陽性對(duì)照物。
凍存的ECV304血管內(nèi)皮細(xì)胞株經(jīng)復(fù)蘇后，將之培樣于含10％新生小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，細(xì)胞增殖傳代培養(yǎng)至一定數(shù)量后，將細(xì)胞懸浮在含5％新生小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，接種至96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔接種2～3萬個(gè)細(xì)胞，在37℃、5％CO2孵箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，吸去培養(yǎng)液；加入待測(cè)樣品(濃度為10-6mol/L)100μL/孔；然后于37℃、5％CO2孵箱中孵育72小時(shí)，加入MTT溶于PBS的溶液(濃度為5mg/mL)10μL/孔，在孵箱中繼續(xù)孵育4.0小時(shí)，移去液體，加入DMSO 100μL/孔，振搖10分鐘后，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定各孔的光密度(OD值)，各待測(cè)樣品對(duì)ECV304血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制率按照下式進(jìn)行計(jì)算
各待測(cè)樣品對(duì)ECV304血管內(nèi)皮細(xì)胞的百分抑制率如表所示化合物的結(jié)構(gòu)及其對(duì)ECV304血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制活性
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化學(xué)結(jié)構(gòu)通式中所包含的部分化合物對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV304)的增殖具有顯著的抑制活性，并且部分化合物的抑制活性較對(duì)照品RGDS顯著增強(qiáng)。
結(jié)果表明在濃度為10-5～10-10mol/L范圍內(nèi)，化合物Entry1和Entry10對(duì)乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)沒有抑制作用。
權(quán)利要求
1.一種非肽類新生血管生成抑制劑，其特征在于以精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽和沙利度胺為先導(dǎo)化合物，合成了N-取代鄰苯二甲酰亞胺類化合物，該類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下 其中X1-X2為C(O)-N；C(O)-CH；CHR1-N；CHR1-CH；O-CH或S-CH；R1為H，C1～6烷基或芐基；R2為H，C1～6烷基，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3，C3～6環(huán)烷基-R3，(CH2)mCOR4；R3為H，C1～4烷基，鹵素，OR1，SR1，NR1，NO2，CN，CF3，COR4等；R4為OR1，SR1，NR1；R5為W-U-，Y-(CHR6)m-U-或Z-C(O)-；R6為H，C1～6烷基，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3，C3～6環(huán)烷基-R3；m為0～2；n為0～4；U為NR1C(O)，C(O)-NR1，O-CH2，S-CH2，CH2-O，CH2-S，CH2CH2-，CH＝CH，C≡C；W為 Ra為H，OH，NO2，N(R6)2，C(O)N(R6)2，CH2N(R6)2，R6HN-C(＝NH)，R6HN-C(＝NH)NH；Y為NH2，NHR6，N(R6)2，C(O)N(R6)2，OH，＝N-OR6， X3為O，S，NH；Z為 Rb為H，C1～4烷基，芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3；Rc為H，N(R1)2，C1～4烷基，C(O)N(R1)2，OH，OR1或芳環(huán)-R3，芳雜環(huán)-R3；
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于當(dāng)分子中存在手性碳時(shí)，化合物為消旋體或光學(xué)活性體；
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于該化合物可制備為在治療上可接受的鹽類，如鈉、鉀鹽等；
4.據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于該化合物具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和抗新生血管生成活性；
5.據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4所述的化合物，其特征在于該化合物可用于治療腫瘤、骨質(zhì)疏松、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、動(dòng)脈粥樣硬化等由于新生血管過度增生引起的疾病。
全文摘要
本發(fā)明提供的是一類非肽類新生血管生成抑制劑,以RGD(Arg－Gly－Asp)三肽和沙利度胺為先導(dǎo)化合物,合成了N－取代鄰苯二甲酰亞胺類化合物,該類化合物具有顯著的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及抗新生血管生成活性,其化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如上，其中:X
文檔編號(hào)A61P35/00GK1349983SQ01129040
公開日2002年5月22日 申請(qǐng)日期2001年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月7日
發(fā)明者鐘裕國, 鄧勇, 劉紹華, 楊大成 申請(qǐng)人:四川大學(xué)