本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種吳茱萸總生物堿的提取方法。
背景技術(shù)：
吳茱萸是蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa (Juss) Benth．、石虎Evodia rutaecarpa (Juss)．vat．officinalis (Dode) Huang Benth．、疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa (Juss) Benth．vat, bodinieri (Dode) Huang干燥近成熟果實，其味苦辛、性溫?zé)?、有小毒；能溫中散寒、疏肝止痛。用于厥陰頭痛、腹脘冷痛、嘔吐泄瀉、痛經(jīng)、高血壓等癥。主要含多種生物堿、揮發(fā)油、苦味素等化學(xué)成分。
研究表明吳茱萸的提取物主要為生物堿、揮發(fā)油、苦味素等化學(xué)成分，而且也有研究表明這些化學(xué)物質(zhì)在抗實驗性胃潰瘍、鎮(zhèn)痛和抑制體溫上升、抗血栓形成、抗腫瘤作用等方面起著重要的作用。但是，目前的吳茱萸生物堿的提取方法主要存在產(chǎn)量低、流程時間長等不足，而且對于吳茱萸生物堿的抑菌相關(guān)的作用尚沒有報道。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種提物產(chǎn)量高、生產(chǎn)流程短的吳茱萸總生物堿的提取方法。
為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種吳茱萸總生物堿的提取方法，包括以下步驟：
⑴將吳茱萸粉碎成200~300目的粗粉后，加水配置成吳茱萸濃度為20~30%wt的混懸液；
⑵將所述混懸液進(jìn)行均質(zhì)，得到吳茱萸均質(zhì)液；
⑶將所述吳茱萸均質(zhì)液在50~70℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5~1.5h后過濾，得到上清液A；所述上清液A在40~60℃經(jīng)減壓濃縮0.5~1h后過濾，得到濾液，該濾液冷卻至室溫后，按所述濾液體積的2~10倍加入體積濃度為75%乙醇，經(jīng)密閉冷藏36~60 h，得到上清液B；
⑷所述上清液B經(jīng)50~70℃減壓干燥24~60h，即得吳茱萸總生物堿提取物。
所述步驟⑵中的均質(zhì)是指使用低溫冷卻循環(huán)系統(tǒng)將均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃；之后在均質(zhì)機料斗中加入清水，開機，調(diào)節(jié)均質(zhì)工作壓力為300~500 bar，流量為10~20 L/h，當(dāng)清水流到料斗底部時，往料斗中加入所述混懸液，并及時補料，循環(huán)，經(jīng)1~3 h完成均質(zhì)，即得吳茱萸均質(zhì)液。
如上所述的一種吳茱萸總生物堿的提取方法所獲得的吳茱萸總生物堿提取物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于：該吳茱萸總生物堿提取物作為有效成分按常規(guī)方法與藥學(xué)上可接受的任何載體制成各類抗金黃色葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、綠膿桿菌、耐藥表皮葡萄球菌和大腸桿菌的藥用制劑。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點：
1、本發(fā)明均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃，有利于保證原料中有效成分的活性。同時，吳茱萸混懸液濃度在（20~30）%wt更有利于保持一種理想的均質(zhì)環(huán)境。
2、經(jīng)濾紙片法抑菌實驗測試，本發(fā)明所得提取物對于金黃色葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、綠膿桿菌、耐藥表皮葡萄球菌和大腸桿菌有明顯的抑制作用。
⑴供試菌的活化及菌懸液的制備：
取6支試管倒入一定量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，制備斜面培養(yǎng)基，分別取金黃色葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、綠膿桿菌、耐藥表皮葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌各一環(huán)，于有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的試管（斜面培養(yǎng)基）中劃線，37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h后，即得活化好的菌種；分別挑取一環(huán)已活化好的菌種接種于相應(yīng)營養(yǎng)液體培養(yǎng)基中，于37 ℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24 h后獲得菌懸液，然后將菌懸液于3000 rmp離心20 min，棄去上清液，沉淀用0.9 %無菌生理鹽水重懸并進(jìn)行適當(dāng)稀釋，制成濃度約為5×106~5×107 CFU/mL的菌懸液。
⑵濾紙片法測定抑菌活性：
無菌操作下取經(jīng)干熱滅菌的濾紙（直徑為6 mm），浸入?yún)擒镙强偵飰A溶液（50 mg/mL）及無菌生理鹽水中，浸泡30min；分別取0.l mL不同菌懸液注入相應(yīng)的平板，放置5 min左右后涂布均勻獲得含菌平板；將浸過吳茱萸總生物堿溶液以及無菌生理鹽水的濾紙片貼于含菌平板上，每種菌的平板上貼兩片浸過吳茱萸總生物堿溶液濾紙和兩片浸過無菌生理鹽水的濾紙，對稱放置，置于37℃恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)24 h~48 h后觀察培養(yǎng)結(jié)果，每組3次平行實驗，測量抑菌圈直徑，取其平均值，比較抑菌活性。
⑶結(jié)果參見表1：
表1 吳茱萸生物堿提取物對幾種微生物的抑菌活性測定結(jié)果
從表1中可以看出，吳茱萸總生物堿提取物對于金黃色葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、綠膿桿菌、耐藥表皮葡萄球菌和大腸桿菌有著明顯的抑制作用。
3、本發(fā)明所得提取物產(chǎn)量高，生產(chǎn)流程短，易于工業(yè)化。
具體實施方式
實施例1 一種吳茱萸總生物堿的提取方法，包括以下步驟：
⑴將100g吳茱萸粉碎成200目的粗粉后，加水配置成吳茱萸濃度為20%wt的混懸液。
⑵將混懸液進(jìn)行均質(zhì)，得到吳茱萸均質(zhì)液。
其中：均質(zhì)是指使用低溫冷卻循環(huán)系統(tǒng)將均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃；之后在均質(zhì)機料斗中加入清水，開機，調(diào)節(jié)均質(zhì)工作壓力為300 bar，流量為10 L/h，當(dāng)清水流到料斗底部時，往料斗中加入混懸液，并及時補料，循環(huán)，經(jīng)1 h完成均質(zhì)，即得吳茱萸均質(zhì)液。
⑶將吳茱萸均質(zhì)液在50℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)0.5h后過濾，得到上清液A；上清液A在40℃經(jīng)減壓濃縮0.5h后過濾，得到濾液，該濾液冷卻至室溫后，按濾液體積的2倍加入體積濃度為75%乙醇，經(jīng)密閉冷藏36 h，促進(jìn)析出沉淀的沉降，得到上清液B。
⑷上清液B經(jīng)50℃減壓干燥60h，即得吳茱萸總生物堿提取物0.38 g。
實施例2 一種吳茱萸總生物堿的提取方法，包括以下步驟：
⑴將100 g吳茱萸粉碎成200目的粗粉后，加水配置成吳茱萸濃度為30%wt的混懸液。
⑵將混懸液進(jìn)行均質(zhì)，得到吳茱萸均質(zhì)液。
其中：均質(zhì)是指使用低溫冷卻循環(huán)系統(tǒng)將均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃；之后在均質(zhì)機料斗中加入清水，開機，調(diào)節(jié)均質(zhì)工作壓力為400 bar，流量為15 L/h，當(dāng)清水流到料斗底部時，往料斗中加入混懸液，并及時補料，循環(huán)，經(jīng)2 h完成均質(zhì)，即得吳茱萸均質(zhì)液。
⑶將吳茱萸均質(zhì)液在60℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1 h后過濾，得到上清液A；上清液A在50℃經(jīng)減壓濃縮0.8h后過濾，得到濾液，該濾液冷卻至室溫后，按濾液體積的6倍加入體積濃度為75%乙醇，經(jīng)密閉冷藏48 h，促進(jìn)析出沉淀的沉降，得到上清液B。
⑷上清液B經(jīng)60℃減壓干燥48 h，即得吳茱萸總生物堿提取物0.43 g。
實施例3 一種吳茱萸總生物堿的提取方法，包括以下步驟：
⑴將100 g吳茱萸粉碎成300目的粗粉后，加水配置成吳茱萸濃度為20%wt的混懸液。
⑵將混懸液進(jìn)行均質(zhì)，得到吳茱萸均質(zhì)液。
其中：均質(zhì)是指使用低溫冷卻循環(huán)系統(tǒng)將均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃；之后在均質(zhì)機料斗中加入清水，開機，調(diào)節(jié)均質(zhì)工作壓力為500 bar，流量為20 L/h，當(dāng)清水流到料斗底部時，往料斗中加入混懸液，并及時補料，循環(huán)，經(jīng)3 h完成均質(zhì)，即得吳茱萸均質(zhì)液。
⑶將吳茱萸均質(zhì)液在70℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1.5 h后過濾，得到上清液A；上清液A在60℃經(jīng)減壓濃縮1h后過濾，得到濾液，該濾液冷卻至室溫后，按濾液體積的10倍加入體積濃度為75%乙醇，經(jīng)密閉冷藏60 h，促進(jìn)析出沉淀的沉降，得到上清液B。
⑷上清液B經(jīng)70℃減壓干燥24h，即得吳茱萸總生物堿提取物0.41 g。
實施例4 一種吳茱萸總生物堿的提取方法，包括以下步驟：
⑴將100g吳茱萸粉碎成300目的粗粉后，加水配置成吳茱萸濃度為30%wt的混懸液。
⑵將混懸液進(jìn)行均質(zhì)，得到吳茱萸均質(zhì)液。
其中：均質(zhì)是指使用低溫冷卻循環(huán)系統(tǒng)將均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃；之后在均質(zhì)機料斗中加入清水，開機，調(diào)節(jié)均質(zhì)工作壓力為400 bar，流量為15 L/h，當(dāng)清水流到料斗底部時，往料斗中加入混懸液，并及時補料，循環(huán)，經(jīng)2 h完成均質(zhì)，即得吳茱萸均質(zhì)液。
⑶將吳茱萸均質(zhì)液在60℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1 h后過濾，得到上清液A；上清液A在50℃經(jīng)減壓濃縮0.5h后過濾，得到濾液，該濾液冷卻至室溫后，按濾液體積的8倍加入體積濃度為75%乙醇，經(jīng)密閉冷藏48 h，促進(jìn)析出沉淀的沉降，得到上清液B。
⑷上清液B經(jīng)60℃減壓干燥48 h，即得吳茱萸總生物堿提取物0.47 g。
實施例5 一種吳茱萸總生物堿的提取方法，包括以下步驟：
⑴將吳茱萸粉碎成250目的粗粉后，加水配置成吳茱萸濃度為25%wt的混懸液。
⑵將混懸液進(jìn)行均質(zhì)，得到吳茱萸均質(zhì)液。
其中：均質(zhì)是指使用低溫冷卻循環(huán)系統(tǒng)將均質(zhì)體系溫度控制在0~4℃；之后在均質(zhì)機料斗中加入清水，開機，調(diào)節(jié)均質(zhì)工作壓力為400 bar，流量為15 L/h，當(dāng)清水流到料斗底部時，往料斗中加入混懸液，并及時補料，循環(huán)，經(jīng)2 h完成均質(zhì)，即得吳茱萸均質(zhì)液。
⑶將吳茱萸均質(zhì)液在60℃經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1 h后過濾，得到上清液A；上清液A在50℃經(jīng)減壓濃縮0.5h后過濾，得到濾液，該濾液冷卻至室溫后，按濾液體積的4倍加入體積濃度為75%乙醇，經(jīng)密閉冷藏48 h，促進(jìn)析出沉淀的沉降，得到上清液B。
⑷上清液B經(jīng)60℃減壓干燥32h，即得吳茱萸總生物堿提取物。
上述實施例1~5所獲得的吳茱萸總生物堿提取物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用是指：該吳茱萸總生物堿提取物作為有效成分按常規(guī)方法與藥學(xué)上可接受的任何載體制成各類抗金黃色葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、綠膿桿菌、耐藥表皮葡萄球菌和大腸桿菌的藥用制劑。