本發(fā)明涉及中藥提取、分離領(lǐng)域，尤其涉及從馬齒莧藥材中提取、分離和鑒別出的一種生物堿化合物及其提取分離方法，特別是馬齒莧中生物堿化合物及其提取分離方法。

背景技術(shù)：

馬齒莧(portulacaoleraceal.)，又名長(zhǎng)命菜、馬莧菜，為馬齒莧科植物。馬齒莧性喜肥沃土壤，耐旱亦耐澇，生命力強(qiáng)，分布廣泛，資源豐富，而以我國(guó)東北部的更為常見。馬齒莧既可入藥，又可食用，是我國(guó)衛(wèi)生部劃定的藥食同源的野生植物之一。2015版《中華人民共和國(guó)藥典》中收載馬齒莧的干燥地上部分入藥，具有清熱解毒、涼血止血、止痢等功效，用于熱毒血痢、癰腫疔瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血、痔血、崩漏下血等。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，馬齒莧具有降血脂、降血糖、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、松弛或興奮平滑肌及增強(qiáng)免疫力等功效。研究表明馬齒莧中所含多種化學(xué)成分與其多樣的藥理作用息息相關(guān)，其主要化學(xué)成分包括：黃酮類、生物堿類、萜類、香豆素類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油、多糖、氨基酸、各種色素類和礦物質(zhì)類等。其中生物堿是馬齒莧中的一大類活性成分，而酰胺類生物堿又占絕大多數(shù)。目前已報(bào)道的生物堿類成分有去甲腎上腺素、多巴胺、少量多巴、腺苷、尿嘧啶、腺嘌呤、n，n-二環(huán)己基脲、尿囊素、n-反式-阿魏?；野罚贿€有環(huán)二肽生物堿和酰胺類生物堿：馬齒莧酰胺a-i、k、l、n-s。

目前從馬齒莧中分離出的化學(xué)成分大多數(shù)是已知的，且結(jié)構(gòu)一種性較低，因此，對(duì)馬齒莧中新化合物的開發(fā)和分離是亟待需要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供從馬齒莧中提取的一種生物堿化合物，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的一種生物堿具有抗炎、神經(jīng)保護(hù)的作用，同時(shí)提供一種針對(duì)本發(fā)明一種生物堿化合物的簡(jiǎn)便、快速、環(huán)保、純度高的提取分離方法。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供一種生物堿化合物，分子式為c18h17no4，命名為oleraciamided，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明還提供一種馬齒莧中一種生物堿化合物的提取分離方法，具體步驟為。

步驟1、取馬齒莧干燥藥材，采用水煎煮提取，水提液濾過(guò)，合并濾液直接加熱濃縮，放涼至室溫，得藥液備用。

步驟2、將步驟1中藥液用乙酸乙酯反復(fù)萃取，減壓回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯萃取物。

步驟3、將步驟2中乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱層析分離，依次用乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫得到若干洗脫部位，經(jīng)薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，顯色，合并顯色的洗脫部位，將合并后的洗脫部位經(jīng)減壓濃縮至干，得到濃縮物備用。

步驟4、將步驟3中所得物再經(jīng)預(yù)處理的ods柱(octadecylsilyl，十八烷基硅烷鍵合硅膠填料)層析分離，用甲醇-水梯度洗脫，得到若干洗脫部位，經(jīng)薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，顯色，將顯色部位減壓濃縮至干，得到濃縮物備用。

步驟5、將步驟4中所得濃縮物經(jīng)預(yù)處理的sephadexlh-20(羥丙基葡聚糖凝膠)層析分離，以甲醇-水等度洗脫，經(jīng)薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，顯色，將顯色的洗脫部位分別減壓濃縮至干，得濃縮物備用。

步驟6、將步驟5中所得濃縮物通過(guò)hplc(高效液相)分離制備，以乙腈-水為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，最終得到本發(fā)明所述的生物堿。

所述ods和sephadexlh-20凝膠的預(yù)處理過(guò)程為甲醇浸泡過(guò)24小時(shí)，上柱，用甲醇洗至滴入水中無(wú)混濁，再以初始流動(dòng)相平衡。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果。

本發(fā)明中所述馬齒莧一種生物堿化合物的分離和藥理活性研究未被現(xiàn)有論文期刊所報(bào)道；本發(fā)明提供來(lái)源于馬齒莧的一種生物堿化合物及一種針對(duì)本發(fā)明新化合物的提取分離方法，依次采用水煎煮提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、ods中壓柱、sephadexlh-20及hplc進(jìn)行分離純化與制備，成功提取分離出一種新的生物堿化合物，該方法操作步驟僅為六步，操作方法簡(jiǎn)便及快速，提取分離過(guò)程主要采用水提取及乙酸乙酯萃取，工藝方法環(huán)保，且經(jīng)該方法分離得到的化合物純度較高均大于90％，此外經(jīng)研究表明以上化合物具有抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用，因此本發(fā)明一種生物堿化合物及其鹽和衍生物可以作為其他化合物合成先導(dǎo)物，以及新藥開發(fā)和藥理活性研究的原料，亦可用于制備抗炎和神經(jīng)保護(hù)的藥物。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的紫外光譜圖。

圖2為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的紅外光譜圖。

圖3為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的¹h-nmr光譜圖。

圖4為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的¹³c-nmr光譜圖。

圖5為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的核磁共振碳譜(dept)光譜圖。

圖6為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的核磁共振¹h-¹hcosy光譜圖。

圖7為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的核磁共振hmbc光譜圖。

圖8為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的核磁共振hsqc光譜圖。

圖9為本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的核磁共振noesy光譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)的說(shuō)明。

實(shí)施例1。

本發(fā)明提供一種生物堿化合物，分子式為c18h17no4，命名為oleraciamided，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為。

所述一種生物堿化合物根據(jù)結(jié)構(gòu)命名為oleraciamided，表1為該一種生物堿化合物的核磁數(shù)據(jù)：¹h-nmr與¹³c-nmr在meod中。

表1：本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided的核磁數(shù)據(jù)。

本發(fā)明一種生物堿化合物oleraciamided的結(jié)構(gòu)鑒定與推導(dǎo)。

oleraciamided：黃色粉末狀物，易溶于甲醇，不溶、微溶于水。點(diǎn)樣于硅膠薄層板后，噴稀碘化鉍鉀試液斑點(diǎn)顯橘黃色，提示該化合物為生物堿成分。uv(meoh)λmax:320nm，irνn-h3415,νc＝o1670，νc＝c1634，1594，νc-n1515，νc-o1428，νs(c-o-c)1030,820cm^-1。結(jié)合¹h-nmr，¹³c-nmr以及dept數(shù)據(jù)，推測(cè)該化合物可能的分子式為c18h17no4，不飽和度為11。¹³c-nmr譜和dept譜顯示18個(gè)碳信號(hào)，分別為1個(gè)och3(δ：56.22)、1個(gè)ch2(δ：51.14)、9個(gè)ch(一個(gè)脂肪碳，δ：43.82；八個(gè)烯烴碳，δ：113.89,116.18,116.85,126.51,129.10,134.46,其中116.85,129.10為重疊峰)、7個(gè)季碳(一個(gè)羰基，δ：175.07；六個(gè)烯烴碳，δ：127.71,131.11,135.19,148.86,149.30,157.60)。

¹h-nmr譜顯示一個(gè)abx系統(tǒng)，對(duì)應(yīng)信號(hào)δ6.84(d,1h,j＝1.85),δ6.70(d,1h,j＝8.20)以及δ6.89(dd,1h,j＝1.9，8.20).同時(shí)，¹h-nmr信號(hào)δ6.73(d,2h,j＝8.6),δ7.09(d,2h,j＝8.5)以及³c-nmr譜信號(hào)δc129.10(c-2”,c-6”,重疊),δc＝116.85(c-3”,c-5”,重疊)顯示一個(gè)aa’bb’系統(tǒng)的存在。依據(jù)hmbc譜的相關(guān)性，h-3/4與c-2,c-5相關(guān)，h-5與c-2,c-6相關(guān)，h-6與c-2,c-5相關(guān)，并結(jié)合一個(gè)由δc175.07酰胺特征峰和紅外特征吸收峰共同確定的酰胺基團(tuán)，進(jìn)一步確定一個(gè)5，6-二氫吡啶-2(1h)-酮的存在。由hmbc譜的相關(guān)峰，h-5與c-1”,c-2”,c-6”相關(guān)，h-6與c-1”相關(guān)，h-2”與c-5相關(guān)，h-6”與c-5相關(guān)，說(shuō)明c-1”與c-5相連。同時(shí)，由h-3/4與c-2’,c-6’相關(guān)，h-2’與c-3相關(guān)，h-6’與c-3相關(guān)可知c-1’與c-3或c-4相連?？紤]到δh7.41(d,1h,j＝2.05)的耦合常數(shù),可知此氫不會(huì)產(chǎn)生鄰位耦合作用，因此確定c-1’與c-4相連。此外，考慮到h-och3(s,3.54,3h)與c-3’在hmbc相關(guān)性,并結(jié)合noesy譜上h-2’與h-och3的相關(guān)峰，說(shuō)明甲氧基與c-3’相連。最后，結(jié)合化合物分子式以及處于低場(chǎng)化學(xué)位移的c-4’(δc＝149.30)和c-4”(δc＝157.60)質(zhì)子,可說(shuō)明兩個(gè)羥基的存在，并且它們分別處于c-4’和c-4”位上。

根據(jù)以上信息，可確定此新生物堿為上述結(jié)構(gòu)。

本發(fā)明還提供上述此一種生物堿化合物的提取分離方法，具體步驟為。

步驟1：稱取馬齒莧干燥藥材150kg，采用水煎煮提取，水用量為藥材的8～16倍，煎煮提取兩次，每次煎煮2h，水提液濾過(guò)，合并濾液，100℃加熱濃縮至150l，放涼至室溫，得藥液備用。

步驟2：將步驟1中所得藥液，用乙酸乙酯反復(fù)萃取3次，乙酸乙酯與濃縮液的體積比例為1:1(v:v)，40℃以下減壓回收乙酸乙酯至浸膏，得到乙酸乙酯萃取物。

步驟3：將步驟2中所得乙酸乙酯萃取物干法上樣，經(jīng)硅膠柱層析分離，其中硅膠為200～300目，依次用乙酸乙酯-甲醇(1:1、1:2、1:3、1:5，v:v)梯度洗脫，共得到150個(gè)部位(即共得到150個(gè)瓶，每瓶400ml)，經(jīng)薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，顯色，合并顯色的90～130洗脫部位(即合并顯色的90～130瓶，棄去1～89瓶與131～150瓶)，將合并后的90～130部位經(jīng)40℃以下減壓濃縮至干，備用。

步驟4：將步驟3中所得物再經(jīng)預(yù)處理的ods中壓柱層析分離，其中填料粒度為20～40μm，用甲醇-水(30/70，50/50，70/30,100/0,v/v)梯度洗脫(加壓，使流速為1ml/min，溫度為室溫)，得到10個(gè)部位(即梯度洗脫得10個(gè)瓶，每瓶200ml)，經(jīng)薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，顯色，將顯色的5～7部位合并，50℃以下減壓濃縮至干，備用。所述ods的預(yù)處理過(guò)程為甲醇浸泡過(guò)24h，上柱，用甲醇洗至滴入水中無(wú)混濁，再以初始流動(dòng)相平衡。

步驟5：將步驟4中所得顯色部位經(jīng)預(yù)處理的sephadexlh-20柱層析，以甲醇-水(50/50，v/v)等度洗脫，得到35個(gè)部位(即梯度洗脫得35個(gè)瓶，每瓶20ml)，經(jīng)薄層色譜進(jìn)行檢測(cè)，顯色，將顯色的5～10部位合并，50℃以下減壓濃縮至干，備用。所述sephadexlh-20凝膠的預(yù)處理過(guò)程為甲醇浸泡過(guò)24h，上柱，用甲醇洗至滴入水中無(wú)混濁，再以初始流動(dòng)相平衡。

步驟6：將步驟5中所得顯色部位經(jīng)hplc分離制備，以乙腈和水體積比為16:84作為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230，280nm，分離制備得到本發(fā)明新生物堿化合物，歸一法測(cè)定純度均為90～99％。

本發(fā)明新生物堿化合物的抗炎作用。

1、主要材料。

1.1、藥品和試劑：實(shí)驗(yàn)所用新生物堿化合物由上述方法制備，純度為90～99％，精密稱取，用dmso稀釋至下述各劑量組所需溶液。dmem高糖培養(yǎng)基、胎牛血清(美國(guó)hyclone公司)；青霉素、鏈霉素(杭州四季青公司)；lps(美國(guó)sigma公司)；il-6、tnf-α、pge2的elisa試劑盒(美國(guó)cayman公司)；細(xì)胞裂解液、griess試劑(碧云天生物技術(shù)有限公司)。

1.2細(xì)胞株：raw264.7巨噬細(xì)胞(美國(guó)atcc細(xì)胞庫(kù))

1.3分組：對(duì)照組、lps組和實(shí)驗(yàn)組，各一組。

2實(shí)驗(yàn)方法。

2.1細(xì)胞培養(yǎng)，dmem高糖培養(yǎng)基，加入10％的胎牛血清，l％抗菌素(100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素)，置于37.5％，co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.2mtt比色法測(cè)定細(xì)胞活力，上述三組分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期raw264.7巨噬細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，細(xì)胞密度為1×10⁴個(gè)/ml，每孔100μl，溫度37℃，5％co2條件下培養(yǎng)過(guò)夜后，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided(1-100μm)，孵育1h后向lps組和實(shí)驗(yàn)組分別加入終濃度為1μg/ml的lps，另設(shè)調(diào)零組(含dmso溶媒的培養(yǎng)液)，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，考察加入藥物后對(duì)細(xì)胞的影響。上述各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后，在各孔細(xì)胞中加入5mg/mlmtt20μl，溫度37℃，5％co2條件下繼續(xù)孵育4h后，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)液體，每孔加入100μl二甲基亞砜(dmso)，振蕩10min，使細(xì)胞內(nèi)結(jié)晶充分溶解，酶標(biāo)儀570nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光值。

2.3利用格里斯(griess)法測(cè)定no的含量，考察本發(fā)明生物堿化合物對(duì)lps誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞raw264.7的no產(chǎn)生量的抑制作用。小鼠巨噬細(xì)胞raw264.7傳代后在含10％胎牛血清的高糖細(xì)胞培養(yǎng)基dmem中培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided(1-50μm)，在37℃，5％co2條件下孵育1h后用lps(終濃度為1μg/ml)誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，24h后收集上清液，每組處理重復(fù)3孔。griess法測(cè)定細(xì)胞上清液中no的含量，根據(jù)不同濃度本發(fā)明新生物堿化合物對(duì)lps誘導(dǎo)的raw264.7細(xì)胞釋放no的影響，用以反映no水平。

2.4elisa法測(cè)定炎癥因子il-6、tnf-α和炎癥介質(zhì)pge2：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期raw264.7巨噬細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板中，細(xì)胞密度為1×10⁵個(gè)/ml，每孔1ml，溫度37℃，5％co2條件下培養(yǎng)過(guò)夜，實(shí)驗(yàn)組加入本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided(1-50μm)，培育1h后，在每孔加入lps(終濃度為1μg/ml)，共孵育24h，每組處理重復(fù)3孔。elisa法測(cè)定馬齒莧來(lái)源新生物堿處理后的raw264.7巨噬細(xì)胞分泌的il-6、tnf-α和pge2的含量。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明新生物堿化合物對(duì)lps誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞raw264.7的增殖無(wú)影響，安全無(wú)毒；并可有效抑制lps誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞raw264.7所產(chǎn)生過(guò)量炎癥細(xì)胞因子il-6、tnf-α和炎癥介質(zhì)no、pge2，且呈濃度依賴。

細(xì)胞相對(duì)存活率實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表2：本發(fā)明對(duì)raw264.7巨噬細(xì)胞相對(duì)存活率的影響。

注：^*p<0.05與對(duì)照組比較(高濃度組有顯著性差異)。

利用格里斯(griess)法測(cè)定no的含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3：本發(fā)明對(duì)lps誘導(dǎo)的raw264.7細(xì)胞釋放no的影響(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n＝3)。

注：^*p<0.05與對(duì)照組比較，^#p<0.05與lps組比較。

elisa法測(cè)定炎癥因子il-6、tnf-α和炎癥介質(zhì)pge2結(jié)果如表4所示。

表4：本發(fā)明對(duì)lps誘導(dǎo)的raw264.7細(xì)胞分泌的il-6、tnf-α和pge2含量的影響(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n＝3)。

注：^*p<0.05與對(duì)照組比較，^#p<0.05與lps組比較。

本發(fā)明新生物堿化合物的神經(jīng)保護(hù)作用。

1主要材料。

1.1藥品和試劑：實(shí)驗(yàn)所用新生物堿化合物由上述方法制備，純度為90～99％，精密稱取，用dmso稀釋至下述各劑量組所需溶液。dmem高糖培養(yǎng)基、胎牛血清(美國(guó)hyclone公司)；青霉素、鏈霉素(杭州四季青公司)，磷酸鹽緩沖液(pbs)，(武漢博士德有限公司)，ros檢測(cè)試劑盒(海門碧云天試劑公司)

1.2細(xì)胞株：人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(sh-sy5y、imr-32)(中科院上海細(xì)胞

1.3分組：分為對(duì)照組、h2o2損傷模型組和實(shí)驗(yàn)組。

2實(shí)驗(yàn)方法。

2.1細(xì)胞培養(yǎng)，dmem高糖培養(yǎng)基，加入l0％的胎牛血清，l％抗菌素(100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素)，置于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.2mtt比色法測(cè)定細(xì)胞活力，上述三組分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期sh-sy5y細(xì)胞和imr-32細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，細(xì)胞密度為1×10⁴個(gè)/ml，每孔100μl，溫度37℃，5％co2條件下培養(yǎng)過(guò)夜后，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的本發(fā)明新生物堿化合物oleraciamided(5-40μm)，孵育1h后向h2o2組和實(shí)驗(yàn)組分別加入終濃度為800μm/l的h2o2，另設(shè)調(diào)零組(含dmso溶媒的培養(yǎng)液)，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，考察加入藥物后對(duì)細(xì)胞的影響。上述各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后，在各孔細(xì)胞中加入5mg/mlmtt20μl，溫度37℃，5％co2條件下繼續(xù)孵育4h后，終止培養(yǎng)，吸棄孔內(nèi)液體，每孔加入100μl二甲基亞砜(dmso)，振蕩10min，使細(xì)胞內(nèi)結(jié)晶充分溶解，酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光值(a)值，計(jì)算細(xì)胞存活率，細(xì)胞存活率＝(ah2o2損傷－a空白)/(a對(duì)照－a空白)。

2.3dcfh-da法檢測(cè)sh-sy5y細(xì)胞和imr-32細(xì)胞內(nèi)ros，各組細(xì)胞給予相應(yīng)物質(zhì)后孵育24h，孵育結(jié)束前30min，各孔加入dcfh-da，使終濃度為10μmol/l，于37℃繼續(xù)孵育30min，收集細(xì)胞，pbs洗2次，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將各組細(xì)胞制成相同濃度的細(xì)胞懸液。取100μl細(xì)胞懸液檢測(cè)熒光強(qiáng)度，激發(fā)波長(zhǎng)485nm，發(fā)射波長(zhǎng)538nm。以對(duì)照組熒光強(qiáng)度為100％，其余各組與對(duì)照組熒光強(qiáng)度相比較，計(jì)算胞內(nèi)ros變化。

2.4int顯色反應(yīng)法測(cè)定ldh的釋放量，除上述對(duì)照組、h2o2損傷模型組和實(shí)驗(yàn)組外，另設(shè)立空白對(duì)照組(空白對(duì)照組不接種細(xì)胞)，各組細(xì)胞加入相應(yīng)物質(zhì)培養(yǎng)24h，取各孔上清120μl至新的96孔板中，加60μl配好的ldh檢測(cè)工作液，避光室溫孵育30min，在490nm處用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定a值，計(jì)算相對(duì)于對(duì)照管的ldh釋放量百分率。ldh釋放率＝(a給藥－a空白)/(a對(duì)照－a空白)。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

細(xì)胞相對(duì)存活率實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5所示。

表5：本發(fā)明對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株sh-sy5y和imr-32細(xì)胞相對(duì)存活率的影響。

注：^*p<0.05與h2o2損傷模型組比較。

sh-sy5y細(xì)胞和imr-32細(xì)胞內(nèi)ros量檢測(cè)結(jié)果如表6所示。

表6：本發(fā)明對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株sh-sy5y和imr-32細(xì)胞內(nèi)ros量的影響。

注：^*p<0.05與對(duì)照組比較，^#p<0.05與h2o2損傷模型組比較。

sh-sy5y細(xì)胞和imr-32細(xì)胞內(nèi)ldh釋放的影響結(jié)果如表7所示。

表7：本發(fā)明對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株sh-sy5y和imr-32細(xì)胞內(nèi)ldh釋放的影響。

注：^*p<0.05與對(duì)照組比較，^#p<0.05與h2o2損傷模型組比較。

綜上所述，本發(fā)明提供一種生物堿化合物及其提取分離方法，依次采用水煎煮提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、ods中壓柱層析、及sephadexlh-20柱層析，hplc分離制備，成功的分離得到新生物堿化合物，該方法簡(jiǎn)便，快速，環(huán)保，且經(jīng)該方法分離得到的化合物純度較高，由于所得化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特，從常用中藥馬齒莧中提取出來(lái)，其具有抗炎和神經(jīng)保護(hù)作用，因此本發(fā)明新生物堿及其鹽和衍生物可以作為天然產(chǎn)物開發(fā)中藥新藥，具有廣闊的前景。