從漏蘆花中提取總生物堿的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提 取方法。
【背景技術】
[0002] 漏蘆花，為一種常見的中蒙藥，別名為祁州漏蘆（Rhaponticum unif lorum(L.) DC.)干燥花，屬于菊科管狀花亞科祁州漏蘆屬植物。漏蘆花作為常用蒙藥，具有止刺痛、清 熱、解毒、解表等功效。
[0003] 總生物堿類物質是漏蘆花的主要藥用成分。為此，研究漏蘆花中總生物堿的提取、 分離、純化方法對后續(xù)研究其生物活性具有重要意義。
[0004] 要從漏蘆花中充分地獲得總生物堿，應當盡可能地破壞漏蘆花細胞結構。在提取 階段采用超聲波法提取總生物堿類物質，是一種創(chuàng)新，其原理是超聲波可在液體中產生"空 穴作用"，而"空穴作用"產生的沖擊波和射流可以破壞植物細胞和細胞膜結構，從而增加細 胞內容物通過細胞膜的穿透能力，有助于總生物堿類化合物的釋放與溶出，超聲波使提取 液不斷震蕩，有助于溶質擴散，同時超聲波的熱效應對原料有水浴作用。目前，在提取階段 采用超聲波從漏蘆花中提取總生物堿的研究尚未報道。
[0005] 目前，多采用正交試驗設計對中蒙藥中主要成分進行提取工藝優(yōu)化，響應面優(yōu)化 與其比較具有明顯優(yōu)勢，可以實現(xiàn)應用較少的試驗數(shù)據(jù)在給定的范圍內找到因素與響應值 之間明確的函數(shù)表達式，得出最佳因素組合和響應值的最優(yōu)值。
[0006] 因此，本發(fā)明以漏蘆花中總生物堿含量為指標，采用響應面優(yōu)化漏蘆花總生物堿 的提取工藝，為其進一步研究提供了科學的理論基礎。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取方法，以漏蘆花為原料， 利用超聲波提取，可高得率地獲得較高含量的漏蘆花總生物堿。
[0008] 本發(fā)明提供了一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取方法，包括：
[0009] 稱取漏蘆花，加入石油醚，50 °C水浴回流2h，取藥渣，加入1 %酸性乙醇，靜置 30min，在一定超聲溫度下超聲提取一定時間，進行超聲提取，抽濾，將濾液濃縮，即得。
[0010] 作為一種【具體實施方式】，本發(fā)明提供了一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取 方法，包括：
[0011] 稱取漏蘆花〇. 5g，按l:10g/mL比例加入石油醚，50°C水浴回流2h，取藥渣，加入 一定量1 %酸性乙醇，靜置30min，在一定超聲溫度下超聲提取一定時間，進行超聲提取，抽 濾，將濾液濃縮至25mL，即得。
[0012] 優(yōu)選地，所述的超聲溫度在20-60 °C，優(yōu)選為41°C。
[0013] 優(yōu)選地，超聲時間為20-60分鐘，優(yōu)選為40分鐘。
[0014] 優(yōu)選地，超聲功率為120-200W，優(yōu)選為200W。
[0015] 優(yōu)選地，料液比為l:20(g/mL)到l:40(g/mL)之間，更優(yōu)選為l:28(g/mL)。"料液 比"，指固態(tài)的"料"的質量與作為浸提液的"液"的體積的比。"料"的單位用g、mg，"液"的 單位用L、mL，于是"料液比"的單位有g/L、mg/L、g/mL、mg/mL等。本發(fā)明所采用的單位為 g/mL〇
[0016] 超聲波作為一種物理能對漏蘆花進行處理，更有利于漏蘆花中總生物堿的提取， 一方面，能通過空化作用產生極大的壓力，造成被破碎物的細胞壁甚至整個生物體破裂而 使胞內物質釋放、擴散或溶解出來；另一方面，適宜強度的超聲波能夠使總生物堿分子的構 象發(fā)生正向轉化，從而提高總生物堿的活性。
[0017] 在超聲溫度一定時，隨著超聲功率的增大，總生物喊提取率呈遞增趨勢，這是由于 超聲功率的增大，有助于超聲波破壞細胞結構，進而提高總生物堿提取率。在超聲功率一定 時，隨著超聲溫度增大，總生物堿提取率呈現(xiàn)先增加后減少趨勢，其原因是，溫度升高加快 分子運動速度，提取率增高，但溫度過高，破壞生物堿結構，進而導致總生物堿提取率相對 下降。綜上所述，在超聲溫度與超聲功率相互作用下，總生物堿提取率呈先增大后減少的趨 勢。
[0018] 總生物堿提取率隨著料液比和超聲溫度的增加呈現(xiàn)先升后降的趨勢。料液比一定 時，在高溫區(qū)和低溫區(qū)的生物堿提取率較低，這主要是因為溫度的升高使得分子解附和擴 散運動速度加快，從而提高了生物堿析出速度和提取率，而溫度過高會破壞生物堿結構，降 低提取率。料液比的增大，使得生物堿濃度降低，更容易從細胞中溶出。
[0019] 總生物堿提取率隨超聲時間的延長和超聲溫度的升高而增大，根據(jù)超聲波作用原 理，超聲時間的延長有利于超聲波充分破壞漏蘆花細胞壁，從而使生物堿得以充分溶出，同 時超聲溫度的升高使得分子解附和擴散運動速度加快，從而提高了總生物堿提取率。因此 適當?shù)匮娱L時間和提高溫度有助于提高生物堿的提取率。但超聲溫度過高、超聲時間過長 導致生物堿提取率下降，這是由于時間長、溫度高使生物堿分解或破壞了生物堿結構。
[0020] 在料液比不變時，生物堿提取率隨功率增大而逐漸增大，這是由于超聲功率的增 大，有助于超聲波破壞細胞結構，進而提高生物堿提取率。在功率不變時，生物堿提取率隨 料液比增大，呈拋物線形狀，料液比的增大，使得生物堿濃度降低，更容易從細胞中溶出。
[0021] 在超聲時間不變時，生物堿提取率隨超聲功率增大而逐漸增大，這是由于超聲功 率的增大，有助于超聲波破壞細胞結構，進而提高生物堿提取率。在超聲功率不變時，生物 堿提取率隨超聲時間增大，呈拋物線形狀。這是因為超聲時間的延長有利于超聲波充分破 壞漏蘆花細胞壁，從而使生物堿得以充分溶出。
[0022] 在超聲時間一定時，總生物堿提取率隨料液比增加而升高，在料液比一定時，生物 堿提取率隨超聲時間延長先增加后減小。主要原因是超聲波可以使得漏蘆花的細胞壁破 碎，從而使生物堿從細胞中析出，而超聲時間過長會破壞生物堿結構，進而影響提取率。
[0023] 本發(fā)明利用超聲對漏蘆花中的總生物堿進行了提取，首先通過石油醚進行脫脂脫 色脫蠟，將漏蘆花細胞中總生物堿以乙醇為溶劑進行提取，協(xié)同超聲波處理破碎的漏蘆花 細胞，可高效獲得含總生物堿的漏蘆花內容物提取液；再通過抽濾處理以除去提取液中的 藥渣后，即可高得率地獲得漏蘆花總生物堿。相比傳統(tǒng)提取法，該法具有使用溶劑少、工藝 簡便、條件溫和、易于控制、安全可靠等特點；該法提取效率更高，操作時間短，提取得率較 尚。
【附圖說明】
[0024] 圖1 :對照品溶液和供試品溶液的吸收光譜曲線
[0025] 圖2 :鹽酸小檗堿標準曲線
[0026] 圖3 :超聲溫度對漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0027] 圖4 :超聲功率對漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0028] 圖5 :料液比對漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0029] 圖6 :超聲時間對漏蘆花中總生物堿提取效果的影響
[0030] 圖7 :超聲溫度（A)和超聲功率⑶交互作用對總生物堿提取率影響的響應面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0031] 圖8 :超聲溫度㈧和料液比（C)交互作用對總生物堿提取率影響的響應面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0032] 圖9 :超聲溫度（A)和超聲時間⑶交互作用對總生物堿提取率影響的響應面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0033] 圖10 :超聲功率⑶和料液比（C)交互作用對總生物堿提取率影響的響應面（左 圖）及等高線圖（右圖）
[0034] 圖11 :超聲功率（B)和超聲時間（D)交互作用對總生物堿提取率影響的響應面 (左圖）及等高線圖（右圖）
[0035] 圖12 :料液比（C)和超聲時間⑶交互作用對總生物堿提取率影響的響應面（左 圖）及等高線圖（右圖）
【具體實施方式】
[0036] 下面對本發(fā)明的實施例進行描述：
[0037] 實施例1.從漏蘆花中提取總生物堿的方法
[0038] I. 1實驗材料準備
[0039] 漏蘆花，采自內蒙古呼和浩特市大青山，經鑒定為菊科管狀花亞科祁州漏蘆屬植 物的干燥花（Rhaponticum uniflorum(L.)DC·)] 〇
[0040] 1. 2實驗具體方法
[0041] 1. 2. 1緩沖溶液及顯色劑的配制
[0042] pH = 5. 4緩沖溶液：取40m