一種甘草酸的生物提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了一種甘草酸的生物提取方法，藥物化工領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]甘草(Glycyrrhiza)為豆科屬多年生植物，種類較多，主要分布于我國西北、華北、華中和東北地區(qū)，具有抗寒、抗鹽堿、耐熱、耐旱等優(yōu)良特性，生態(tài)適應(yīng)性強，生命力旺盛，系干旱、半干旱地區(qū)重要的植物資源之一。甘草被我國認定為食藥兩用植物，目前作為調(diào)味劑、增稠劑、輔助劑、添加劑、防腐劑、抗氧化劑等被廣泛用于食品、飼料、化妝品和日用化工等產(chǎn)業(yè)，但其最重要的用途是在醫(yī)藥領(lǐng)域。中醫(yī)藥有“十方九草”之說，即大部分中藥復(fù)方的配伍都離不開甘草，被譽為中藥的“國佬”；其主要化學成分甘草酸及其藥理活性成分甘草次酸，更是被大量用于中成藥和現(xiàn)代中藥中。此外，甘草以其獨特而顯著的藥學作用，也受到了其它國家特別是發(fā)達國家的極大關(guān)注，成為和銀杏齊名的被西方國家進行了較為徹底研究和開發(fā)的植物藥。
[0003]目前采用的水提法和溶劑法提取甘草酸是較為成熟的工藝技術(shù)，提取及精制的生產(chǎn)方法尚比較落后。這些常規(guī)方法存在著明顯的不足之處，如使用有機溶劑，易造成環(huán)境污染，且產(chǎn)品中雜質(zhì)多，品質(zhì)不好。在水提法和加熱回流法提取過程中，由于操作溫度高，甘草中的甘草酸易發(fā)生分解；滲轆法和冷浸法提取過程中，雖然避免了高溫帶來的影響，但要達到較高的萃取效率需時間較長。新發(fā)展的技術(shù)如超聲波提取、微波提取、高壓提取和超臨界萃取等方法，不但設(shè)備成本高，而且新工藝也尚不成熟。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對目前傳統(tǒng)提取甘草酸的方法，使用大量有機溶劑對環(huán)境產(chǎn)生污染，提取出的甘草酸產(chǎn)品純度低，提取率低且成本高的問題，本發(fā)明提供了一種甘草酸的生物提取方法，本發(fā)明首先通過使用甘草顆粒與河道污泥等物質(zhì)進行混合，再密封培養(yǎng)富集微生物，然后使用混合物進行栽培甘草，消耗混合物內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)，對混合物內(nèi)的微生物進行篩選，最后將成熟的甘草與混合物攪拌發(fā)酵，再使用乙醇溶液，對發(fā)酵物進行混合，靜置，收集液體，再經(jīng)過離心、純化得到純度達到95%以上的甘草酸。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)取花期甘草自然晾曬，待其含水量為10?15%時，將其放入粉碎機中粉碎成40?60目顆粒，再將顆粒物與河道污泥按照質(zhì)量比1:5進行混合，放入培養(yǎng)池，使用質(zhì)量分數(shù)為20?30%的氨水調(diào)節(jié)pH為7.5?8.0，然后分別向其中加入顆粒物質(zhì)量8?10%的過磷酸鈣及顆粒物質(zhì)量4?8 %的沼氣肥，攪拌均勻得混合物，密封培養(yǎng)池20?25天，保持溫度為 18 ?25°C ；
(2)待上述密封結(jié)束后，按照每平方米混合物種植8?12株花蕾期的甘草，進行種植甘草，在種植過程中保持混合物含水量為10?15%，使用質(zhì)量分數(shù)為10?15%的氨水保持土壤pH為7.5?8.0，光照強度為950?1100 μ mo I.m2.s S (3)待上述甘草成熟后，將甘草取出自然風干后，放入粉碎機中粉碎成100?120目顆粒物，之后將顆粒物放入培養(yǎng)池內(nèi)與混合物混合均勻，再向其中加入顆粒物質(zhì)量I?3%的磷酸氫二鉀及顆粒物質(zhì)量0.8?2%的磷酸二氫鉀，然后密封攪拌發(fā)酵15?20天，保持溫度為25?30°C ;
(4)待上述發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物移入攪拌池中，向其中加入質(zhì)量分數(shù)為60?70%的乙醇溶液淹沒發(fā)酵物10?15cm，在轉(zhuǎn)速為1500?2000r/min下，攪拌10?15h，再靜置8?12h，收集上層液體；
(5)將上述所得的液體放入離心機中離心分離，取上清液放入陶瓷膜過濾器中進行過濾，收集過濾物，再將過濾液放入容器中，向其中加入質(zhì)量分數(shù)為40?50%的氨水調(diào)節(jié)pH為7.5?8，然后對容器進行減壓至1200?3000Pa，溫度設(shè)定為60?70°C，攪拌5?8h后得漿狀物，將其與過濾物混合均勻；
(6)待上述混合均勻后，向其中加入冰醋酸使混合物完全溶解，再向其中加入磷酸氫二鉀等質(zhì)量的甘草酸單銨鹽晶種，在溫度為30?35°C下，靜置20?24h后，過濾得過濾物，使用冰醋酸洗滌2?3次，然后將過濾物進行減壓干燥，即可。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明使用生物法進行提取，對環(huán)境無污染；
(2)本發(fā)明所提取出的甘草酸純度達到95%以上，且提取率達到45?50%;
(3)本發(fā)明制作成本低，易于操作。
【具體實施方式】
[0007]取花期甘草自然晾曬，待其含水量為10?15%時，將其放入粉碎機中粉碎成40?60目顆粒，再將顆粒物與河道污泥按照質(zhì)量比1:5進行混合，放入培養(yǎng)池，使用質(zhì)量分數(shù)為20?30%的氨水調(diào)節(jié)pH為7.5?8.0，然后分別向其中加入顆粒物質(zhì)量8?10%的過磷酸鈣及顆粒物質(zhì)量4?8 %的沼氣肥，攪拌均勻得混合物，密封培養(yǎng)池20?25天，保持溫度為18?25°C ;待上述密封結(jié)束后，按照每平方米混合物種植8?12株花蕾期的甘草，進行種植甘草，在種植過程中保持混合物含水量為10?15%，使用質(zhì)量分數(shù)為10?15%的氨水保持土壤pH為7.5?8.0，光照強度為950?1100 μ mol -m2-s %待上述甘草成熟后，將甘草取出自然風干后，放入粉碎機中粉碎成100?120目顆粒物，之后將顆粒物放入培養(yǎng)池內(nèi)與混合物混合均勻，再向其中加入顆粒物質(zhì)量I?3%的磷酸氫二鉀及顆粒物質(zhì)量0.8?2%的磷酸二氫鉀，然后密封攪拌發(fā)酵15?20天，保持溫度為25?30°C ;待上述發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物移入攪拌池中，向其中加入質(zhì)量分數(shù)為60?70 %的乙醇溶液淹沒發(fā)酵物10?15cm，在轉(zhuǎn)速為1500?2000r/min下，攪拌10?15h，再靜置8?12h，收集上層液體；將上述所得的液體放入離心機中離心分離，取上清液放入陶瓷膜過濾器中進行過濾，收集過濾物，再將過濾液放入容器中，向其中加入質(zhì)量分數(shù)為40?50%的氨水調(diào)節(jié)pH為7.5?8，然后對容器進行減壓至1200?3000Pa，溫度設(shè)定為60?70°C，攪拌5?8h后得漿狀物，將其與過濾物混合均勻；待上述混合均勻后，向其中加入冰醋酸使混合物完全溶解，在向其中加入磷酸氫二鉀等質(zhì)量的甘草酸單銨鹽晶種，在溫度為30?35°C下，靜置20?24h后，過濾得過濾物，使用冰醋酸洗滌2?3次，然后將過濾物進行減壓干燥，即可。
[0008]實例I 取4kg花期甘草自然晾曬，待其含水量為10%時，將其放入粉碎機中粉碎成40目顆粒，再將顆粒物與河道污泥按照質(zhì)量比1:5進行混合，放入培養(yǎng)池，使用質(zhì)量分數(shù)為20%的氨水調(diào)節(jié)PH為7.5，然后分別向其中加入0.32kg過磷酸鈣及0.16kg沼氣肥，攪拌均勻得混合物，密封培養(yǎng)池20天，保持溫度為18°C ;待上述密封結(jié)束后，按照每平方米混合物種植8株花蕾期的甘草，進行種植甘草，在種植過程中保持混合物含水量為10%，使用質(zhì)量分數(shù)為10%的氨水保持土壤pH為7.5，光照強度為950 μ mol -1n2-S %待上述甘草成熟后，將甘草取出自然風干后，放入粉碎機中粉碎成100目顆粒物，之后將顆粒物放入培養(yǎng)池內(nèi)與混合物混合均勻，再向其中加入0.08kg磷酸氫二鉀及6.4g磷酸二氫鉀，然后密封攪拌發(fā)酵15天，保持溫度為25°C ;待上述發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物移入攪拌池中，向其中加入質(zhì)量分數(shù)為60%的乙醇溶液淹沒發(fā)酵物10cm，在轉(zhuǎn)速為15