[0094] 4. 5響應(yīng)面圖及等高線分析
[0095] 響應(yīng)面圖是響應(yīng)值對(duì)各試驗(yàn)因子A、B、C、D所構(gòu)成的三維空間的曲面圖，從響應(yīng)面 圖上可形象地看出最佳參數(shù)及各參數(shù)之間的相互作用。圖7~圖12是根據(jù)上述模擬的多 項(xiàng)回歸模型和對(duì)回歸方差的分析，得到各因素對(duì)漏蘆花中總生物堿提取率影響的響應(yīng)面及 等高線圖，此反映了任意兩因素及其交互作用對(duì)總作用生物堿提取率的影響，等高線的形 狀越趨向橢圓，表示交互作用越強(qiáng)；趨向于正圓，則表示交互越弱。
[0096] 由圖7可知，在超聲溫度一定時(shí)，隨著超聲功率的增大，總生物堿提取率呈遞增趨 勢(shì)，這是由于超聲功率的增大，有助于超聲波破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高總生物堿提取率。在 超聲功率一定時(shí)，隨著超聲溫度增大，總生物喊提取率呈現(xiàn)先增加后減少趨勢(shì)，其原因是， 溫度升高加快分子運(yùn)動(dòng)速度，提取率增高，但溫度過(guò)高，破壞生物堿結(jié)構(gòu)，進(jìn)而導(dǎo)致總生物 堿提取率相對(duì)下降。綜上所述，在超聲溫度（A)與超聲功率（B)相互作用下，總生物堿提取 率呈先增大后減少的趨勢(shì)。
[0097] 由圖8可知，總生物堿提取率隨著料液比和超聲溫度的增加呈現(xiàn)先升后降的趨 勢(shì)。料液比一定時(shí)，在高溫區(qū)和低溫區(qū)的生物堿提取率較低，這主要是因?yàn)闇囟鹊纳呤沟?分子解附和擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)速度加快，從而提高了生物堿析出速度和提取率，而溫度過(guò)高會(huì)破壞 生物堿結(jié)構(gòu)，降低提取率。料液比的增大，使得生物堿濃度降低，更容易從細(xì)胞中溶出。
[0098] 由圖9可知，總生物堿提取率隨超聲時(shí)間的延長(zhǎng)和超聲溫度的升高而增大，根據(jù) 超聲波作用原理，超聲時(shí)間的延長(zhǎng)有利于超聲波充分破壞漏蘆花細(xì)胞壁，從而使生物堿得 以充分溶出，同時(shí)超聲溫度的升高使得分子解附和擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)速度加快，從而提高了總生物 堿提取率。因此適當(dāng)?shù)匮娱L(zhǎng)時(shí)間和提高溫度有助于提高生物堿的提取率。但超聲溫度過(guò) 高、超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致生物堿提取率下降，這是由于時(shí)間長(zhǎng)、溫度高使生物堿分解或破壞了 生物堿結(jié)構(gòu)。
[0099] 由圖10可知，在料液比不變時(shí)，生物堿提取率隨功率增大而逐漸增大，這是由于 超聲功率的增大，有助于超聲波破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高生物堿提取率。在功率不變時(shí)，生 物堿提取率隨料液比增大，呈拋物線形狀，料液比的增大，使得生物堿濃度降低，更容易從 細(xì)胞中溶出。
[0100] 由圖11可知，在超聲時(shí)間不變時(shí)，生物堿提取率隨超聲功率增大而逐漸增大，這 是由于超聲功率的增大，有助于超聲波破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而提高生物堿提取率。在超聲功率 不變時(shí)，生物堿提取率隨超聲時(shí)間增大，呈拋物線形狀。這是因?yàn)槌晻r(shí)間的延長(zhǎng)有利于超 聲波充分破壞漏蘆花細(xì)胞壁，從而使生物堿得以充分溶出。
[0101] 由圖12可知，在超聲時(shí)間一定時(shí)，總生物堿提取率隨料液比增加而升高，在料液 比一定時(shí)，生物堿提取率隨超聲時(shí)間延長(zhǎng)先增加后減小。主要原因是超聲波可以使得漏蘆 花的細(xì)胞壁破碎，從而使生物堿從細(xì)胞中析出，而超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)破壞生物堿結(jié)構(gòu)，進(jìn)而影 響提取率。
[0102] 4.6漏蘆花中總生物堿提取工藝條件優(yōu)化
[0103] 利用Design-Expert 8. 0. 6. 1統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)邊界值和求得的極值進(jìn)行分析后， 得到最優(yōu)的提取條件為超聲溫度40. 63°C、料液比1:28. 04g/mL、超聲時(shí)間40. 29min、超聲 功率200W，理論預(yù)測(cè)值Y (總生物堿提取率）=0. 0. 288034%。按照修正為超聲溫度41 °C， 料液比l:28g/mL，超聲時(shí)間40min，超聲功率200W。
[0104] 實(shí)施例5總生物堿含量測(cè)定
[0105] 按實(shí)施例4下的最佳工藝提取漏蘆花中總生物堿，按"實(shí)施例1下的方法顯色處理 后，在419nm處測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算漏蘆花中總生物堿的含量為0. 2774%，RSD為 1. 9 %，結(jié)果見(jiàn)表11，與理論值0. 288034 %，誤差為0. 010634 %。優(yōu)化得到的試驗(yàn)預(yù)測(cè)值與 實(shí)驗(yàn)結(jié)果吻合較好，說(shuō)明響應(yīng)面優(yōu)化得到的漏蘆花生物堿提取工藝條件可靠。
[0106] 表10總生物堿含量測(cè)量數(shù)據(jù)
[0111] 5. 1穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0112] 精密量取同一供試品溶液，按實(shí)施例1下方法顯色，分別在10、20、30、40、50、 60min時(shí)，于419nm處分別測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表10 :RSD為2. 8%，結(jié)果表明供試品在60min 內(nèi)穩(wěn)定性較好。
[0113] 表10穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0114]
[0115] 5.2精密度試驗(yàn)
[0116] 精密量取供試品溶液5份，每份1.0 mL，按實(shí)施例1項(xiàng)下方法顯色，在419nm處分別 測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算總生物堿提取率，結(jié)果見(jiàn)表11 :RSD為0. 55%，結(jié)果表明精密 度良好。
[0117] 表11精密度試驗(yàn)結(jié)果
[0118]
[0119] 5. 3重復(fù)性試驗(yàn)
[0120] 精密稱取漏蘆花0. 5g，5份，按實(shí)施例4項(xiàng)下制備供試品溶液和實(shí)施例1項(xiàng)下方法 顯色，在419nm處分別測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算總生物堿提取率。結(jié)果見(jiàn)下表12, RSD 為1.9%。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。
[0121] 表12重復(fù)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)
[0126] 5. 4加樣回收率試驗(yàn)
[0127] 精密稱取漏蘆花0. 5g，9份，分別加入相當(dāng)于供試品中總生物堿含量80%、100%、 120%的鹽酸小檗堿對(duì)照品，按最佳提取工藝制備供試液溶液和實(shí)施例1項(xiàng)下顯色方法，在 419nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表15。
[0128] 表15加樣回收試驗(yàn)結(jié)果
[0130] 響應(yīng)面優(yōu)化克服了正交設(shè)計(jì)只能處理離散的水平值，而無(wú)法找出整個(gè)區(qū)域上因素 的最佳組合和響應(yīng)值的最優(yōu)值的缺陷，響應(yīng)面優(yōu)化是研究幾種因素間交互作用的回歸分析 方法。
[0131] 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Box-Benhnken中心組合設(shè)計(jì)響應(yīng)面法，建立了 4個(gè)影響因素（超聲溫 度、超聲功率、料液比、超聲時(shí)間）與響應(yīng)值（生物堿提取率）相互作用的數(shù)學(xué)模型，采用 重疊等高線法實(shí)現(xiàn)了總生物堿提取率多因素優(yōu)化，得到漏蘆花中總生物堿的最佳提取工藝 為：超聲溫度41°C，超聲功率200W，料液比1:28g/mL，超聲時(shí)間40min，測(cè)得總生物堿含量為 0. 2774%，為今后工作提供理論基礎(chǔ)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取方法，包括： 稱取漏蘆花，加入石油醚，50°C水浴回流2h，取藥渣，加入1 %酸性乙醇，靜置30min，進(jìn) 行超聲提取，抽濾，將濾液濃縮，即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：超聲溫度為20-60°C，優(yōu)選為41°C。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：超聲時(shí)間為20-60min，優(yōu)選為40min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：料液比為1:20g/mL到1:40g/mL之間，優(yōu) 選 I:28g/mL〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：超聲波的功率為120-200W，優(yōu)選200W。6. -種從漏蘆花中提取總生物堿的超聲提取方法，包括： 稱取漏蘆花〇. 5g，按I: lOg/mL比例加入石油醚，50°C水浴回流2h，取藥渣，加入一定量 1 %酸性乙醇，靜置30min，在一定超聲溫度下超聲提取一定時(shí)間，進(jìn)行超聲提取，抽濾，將濾 液濃縮至25mL，即得。
【專利摘要】本發(fā)明研究漏蘆花中總生物堿超聲提取工藝并進(jìn)行含量測(cè)定，采用紫外分光光度測(cè)定漏蘆花中生物堿含量，以其作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，從而確定最佳工藝。響應(yīng)面優(yōu)化后漏蘆花中總生物堿最佳提取工藝為：超聲溫度41℃，超聲功率200W，料液比1:28g/mL，超聲時(shí)間40min，四因素影響順序依次為超聲功率>料液比>超聲溫度>超聲時(shí)間，總生物堿含量為0.2774％，平均回收率為99.77％，RSD為2.0％(n＝9)。響應(yīng)面優(yōu)化漏蘆花生物堿提取工藝，精密度高、可預(yù)測(cè)性高，為其進(jìn)一步開發(fā)提供了科學(xué)、合理的理論依據(jù)。
【IPC分類】A61K36/28, A61K133/00
【公開號(hào)】CN104997825
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510336454
【發(fā)明人】陳建平, 成日青, 于姝燕, 趙紅梅, 包保全
【申請(qǐng)人】?jī)?nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【公開日】2015年10月28日
【申請(qǐng)日】2015年6月17日