本發(fā)明涉及一種組合物，具有涉及一種防治動(dòng)脈粥樣硬化的茶多酚組合物。

背景技術(shù)：

近年來，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、飲食習(xí)慣及環(huán)境的改變、生活節(jié)奏的加劇以及人口老齡化進(jìn)程的加速，全世界范圍內(nèi)冠狀動(dòng)脈性心臟病(coronary heart disease,CHD，簡(jiǎn)稱為冠心病，亦稱缺血性心臟病)的發(fā)病率呈現(xiàn)出急劇增長(zhǎng)的趨勢(shì)，在美國(guó)和許多發(fā)達(dá)國(guó)家冠心病排在死亡原因的第一位。隨著生活壓力的增大，近年來冠心病的發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)，曾有報(bào)道急性心肌梗死患者包括青少年，其已成為猝死的主要原因和危害人類健康的頭號(hào)殺手。在我國(guó)，隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展、生活節(jié)奏的加劇以及人口老齡化進(jìn)程的加速，冠心病的發(fā)病率節(jié)節(jié)攀升，流行病學(xué)研究表明，我國(guó)冠心病的發(fā)病率有較顯著的地區(qū)差異，北方省市普遍高于南方省市，城市高于農(nóng)村，男性高于女性，冠心病已成為危害我國(guó)人民健康的主要?dú)⑹帧Ｒ虼?，有效預(yù)防和控制冠心病的發(fā)生是當(dāng)前亟需解決的課題。

動(dòng)脈粥樣硬化是一個(gè)緩慢進(jìn)展的疾病，其共同病理特點(diǎn)是動(dòng)脈管壁變硬增厚、失去彈性以及管腔縮小。冠脈粥樣硬化病變最先從受累動(dòng)脈內(nèi)膜開始，先后合并多種病變，包括局部有復(fù)合糖類以及脂質(zhì)的積聚、鈣質(zhì)沉著和纖維組織反應(yīng)性增生形成斑塊，以及動(dòng)脈中層的逐漸退變，繼發(fā)性的病變包括斑塊破裂、斑塊內(nèi)出血以及局部血栓形成(即為著名的動(dòng)脈粥樣硬化-血栓形成學(xué)說)。現(xiàn)代分子生物以及細(xì)胞學(xué)技術(shù)研究證實(shí)動(dòng)脈粥樣硬化病變具有平滑肌細(xì)胞反應(yīng)性增生、巨噬細(xì)胞游移；大量蛋白多糖、膠原纖維以及彈力纖維等結(jié)締組織基質(zhì)增生；以及細(xì)胞內(nèi)外脂質(zhì)層積聚形成的特點(diǎn)。動(dòng)脈粥樣硬化病因日前尚未完全確定，研究表明，本病是多因素作用于不同環(huán)節(jié)所致，其中不良生活方式、血脂異常、高血壓、肥胖、糖尿病以及糖耐量異常等是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素。近年來大量的研究證實(shí)動(dòng)脈粥樣硬化是一種炎癥性疾病和自身免疫性疾病，炎癥和免疫反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮非常關(guān)鍵的作用。

冠心病的發(fā)病機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，針對(duì)其不同發(fā)病環(huán)節(jié)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者開展了大量的有關(guān)冠心病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究，其發(fā)病機(jī)制曾有多種學(xué)說從不同角度來闡述。包括血栓形成學(xué)說、脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說、平滑肌細(xì)胞克隆學(xué)說、血流動(dòng)力學(xué)異常、炎癥介質(zhì)釋放以及氧化應(yīng)激等。近年來大多數(shù)學(xué)者支持內(nèi)皮損傷反應(yīng)這一學(xué)說，認(rèn)為冠心病的各種危險(xiǎn)因素最終導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)皮損傷，炎癥反應(yīng)在內(nèi)皮損傷過程在發(fā)揮重要作用。動(dòng)脈粥樣硬化病變的形成是動(dòng)脈對(duì)內(nèi)膜、內(nèi)皮細(xì)胞損傷做成的炎癥-纖維增生性反應(yīng)的結(jié)果。冠心病具體發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，正是基于此，目前臨床上對(duì)該病的預(yù)防和治療顯得十分棘手。

茶多酚是茶葉中兒茶素類、丙酮類、酚酸類和花色素類化合物的總稱。茶多酚(teapolyphenols)又叫茶單寧或茶鞣質(zhì)，是茶葉(Camellia sinensis)中酚類及其衍生物的總稱，在綠茶中含30-40％，在紅茶則相對(duì)較少，約占10％。主要是兒茶素類(catechins)、茶黃素類(theaflavins)、花青素和酚酸等化合物，其中兒茶素類的含量占60％左右。兒茶素中的主要成分有四種：表兒茶素(epicatechin,EC)、表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC),表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)。

茶多酚防治心血管疾病降血脂、預(yù)防肝臟及冠狀動(dòng)脈粥樣硬化茶多酚對(duì)人體脂肪代謝有著重要作用。人體的膽固醇、甘油三酯等含量高，血管內(nèi)壁脂肪沉積，血管平滑肌細(xì)胞增生后形成動(dòng)脈粥樣化斑塊等心血管疾病。茶多酚，尤其是茶多酚中的兒茶素ECG和EGC及其氧化產(chǎn)物茶黃素等，有助于抑制這種斑狀增生，使形成血凝黏度增強(qiáng)的纖維蛋白原降低，凝血變清，從而抑制動(dòng)脈粥樣硬化。降血壓茶多酚具有較強(qiáng)的抑制轉(zhuǎn)換酶活性的作用，因而可以起到降低或保持血壓穩(wěn)定的作用。降血糖茶多酚對(duì)人體的糖代謝障礙具有調(diào)節(jié)作用，能降低血糖水平，從而有效的預(yù)防和治療糖尿病。

原花青素(Proantho cyanidins，PC)是植物中廣泛存在的一大類多酚化合物的總稱，具有極強(qiáng)的抗氧化、消除自由基的作用，可有效消除超氧陰離子自由基和羥基自由基，也參與磷酸、花生四烯酸的代謝和蛋白質(zhì)磷酸化，保護(hù)脂質(zhì)不發(fā)生過氧化損傷；是強(qiáng)有力的金屬螯合劑，可螯合金屬離子，在體內(nèi)形成惰性化合物；保護(hù)和穩(wěn)定維生素c，有助于維生素c的吸收和利用。原花青素分布廣泛，存在于許多植物的皮、殼、籽、核、花、葉中，葡萄籽中原花青素含量最 高，種類豐富。

花青素(anthocyanin)是一類廣泛存在于植物中的水溶性色素，屬于類黃酮類化合物，茶葉中花青素種類很多，有呈青色、銅紅、暗紅、暗紫色等。花青素含量雖少，但它的存在對(duì)茶葉品質(zhì)不利。若花青素含量稍高，就能使綠茶湯滋味苦，干色烏暗，葉底呈靛藍(lán)色。特別是紫芽種和夏茶的鮮葉，花青素含量增高，所以制出的綠茶，滋味苦味較重，品質(zhì)不好?，F(xiàn)代研究表明,花青素為人體帶來多種益處。從根本上講，花青素是一種強(qiáng)有力的抗氧化劑，它能夠保護(hù)人體免受一種叫自由基的有害物質(zhì)的損傷。花青素還能夠增強(qiáng)血管彈性，改善循環(huán)系統(tǒng)和增進(jìn)皮膚的光滑度，抑制炎癥和過敏，改善關(guān)節(jié)的柔韌性?；ㄇ嗨鼐哂锌寡趸⒖雇蛔?、降血壓、降血脂、預(yù)防心腦血管疾病、消炎、護(hù)肝、抑制腫瘤、增強(qiáng)視力、抗衰老等多種保健功能。

雖然綠茶提取物中含有多種茶多酚單體，但是綠茶提取物質(zhì)量不好控制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處而提供了一種防治動(dòng)脈粥樣硬化的茶多酚組合物。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，所采取的技術(shù)方案：一種防治動(dòng)脈粥樣硬化的茶多酚組合物，所述茶多酚組合物包括以下組分：表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、原花青素、矢車菊素-3-葡萄糖甙、茶黃素和茶黃素-3-沒食子酸酯。

優(yōu)選地，所述茶多酚組合物包括以下重量百分比的組分：

其中所述表沒食子兒茶素沒食子酸酯的英文名是epigallocatechin-3-gallate(EGCG)。

所述表沒食子兒茶素的英文名是epigallocatechin(EGC)。

所述表兒茶素的英文名是epicatechin(EC)。

所述表兒茶素沒食子酸酯的英文名是epicatechin gallate(ECG)。

所述原花青素的英文名是Proantho Cyanidins(PC)。

所述矢車菊素-3-葡萄糖甙的英文名是Cyanidin-3-glucoside。

所述茶黃素的英文名是Theaflavin(TF)。

所述茶黃素-3-沒食子酸酯的英文名是Theaflavin-3-gallate(TF-3-G)。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供了一種防治動(dòng)脈粥樣硬化的茶多酚組合物，該茶多酚組合物包含8種茶多酚單體物質(zhì)，其質(zhì)量可控，并且所述茶多酚組合物在預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化方面有很好的效果，能夠使動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型的體重和血糖指標(biāo)趨于正常，能夠明顯減緩動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型的主動(dòng)脈粥樣斑塊的生成。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中正常飲食組、高脂飲食組和高脂飲食+茶多酚組合組Apoe-/-小鼠的體重隨時(shí)間變化的趨勢(shì)圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中正常飲食組、高脂飲食組和高脂飲食+茶多酚組合組Apoe-/-小鼠的空腹血糖隨時(shí)間變化的趨勢(shì)圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例1中正常飲食組、高脂飲食組和高脂飲食+茶多酚組合組小鼠全程主動(dòng)脈大體油紅O染色對(duì)比圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例1中正常飲食組、高脂飲食組和高脂飲食+茶多酚組合組小鼠主動(dòng)脈表面動(dòng)脈粥樣斑塊面積范圍對(duì)比圖。

具體實(shí)施方式

為更好的說明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)，下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：本發(fā)明所述茶多酚組合物的效果實(shí)驗(yàn)

Apoe-/-基因剔除小鼠是國(guó)際上廣為采用的研究動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型。Apoe-/-基因剔除小鼠模型可表現(xiàn)出異常高脂血癥，在3月齡時(shí)便可出現(xiàn)脂肪沉積于動(dòng)脈內(nèi)皮，隨著小鼠月齡的增加將會(huì)出現(xiàn)大量類似于動(dòng)脈粥樣硬化前期損傷的表現(xiàn)，17月齡時(shí)小鼠腦內(nèi)將可出現(xiàn)脂瘤性纖維瘤，同時(shí)還有泡沫細(xì)胞和脂質(zhì)小球。

本實(shí)施例中，為了提高茶多酚提取物在藥效研究中的質(zhì)量控制，發(fā)明人按照綠茶茶多酚提取物各種成分的比例，用8種茶多酚單體的組合模擬綠茶茶多酚提取，其中發(fā)明人適當(dāng)提高了活性成分的比例，以期提高藥物效應(yīng)。

發(fā)明人以Apoe-/-小鼠為動(dòng)物模型，通過灌胃多種茶多酚單體的組合到Apoe-/-小鼠，動(dòng)態(tài)觀察Apoe-/-小鼠體重和空腹血糖，比較主動(dòng)脈斑塊差異，探討茶多酚組合對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防作用。

1、材料與方法

1.1動(dòng)物分組及處理方法

15只4周齡無特殊病原體(specific pathogen-free,SPF)級(jí)雄性C57BL/6J APOE-/-小鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)于北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(由美國(guó)Jackson實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)繁殖)，依照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究所所頒布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和使用指南》(NIH publication No.23-85,revised 1996)及《中山大學(xué)驗(yàn)動(dòng)物管理辦法》于中山大學(xué)北校區(qū)SPF級(jí)屏障系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房飼養(yǎng)。Apoe-/-基因剔除小鼠模型表現(xiàn)出異常高血脂，在3月齡時(shí)即可出現(xiàn)動(dòng)脈脂肪沉積，隨著月齡的增加將出現(xiàn)大量類似于動(dòng)脈粥樣硬化前期損傷表現(xiàn)，17月齡時(shí)小鼠腦內(nèi)將可出現(xiàn)脂瘤性纖維瘤，同時(shí)還有脂質(zhì)小球和泡沫細(xì)胞，Apoe-/-基因剔除小鼠是國(guó)際上廣為采用的研究動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型。

整個(gè)實(shí)驗(yàn)歷時(shí)14周，飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級(jí)，每籠5只，溫度為(23±2)℃，相對(duì)濕度為(55±5)％。12小時(shí)光照，12小時(shí)黑暗交替。20只6周齡雄性APOE-/-小鼠隨機(jī)分為3組，每組5只，分組如下：(1)正常飲食組：喂養(yǎng)正常飲食；(2)高脂飲食組：喂養(yǎng)高脂食料；(3)高脂飲食+茶多酚組合組：喂養(yǎng)高脂食料的基礎(chǔ)上，灌胃給予8種茶多酚單體的組合，每天灌胃1次，直至鼠處置前1天。

本實(shí)施例所述8種茶多酚單體的組合是指將以下8種茶多酚單體混合起來使用，所述8種茶多酚單體如下：

表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)，占5-15重量％；

表沒食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)，占30-40重量％；

表兒茶素(epicatechin,EC)，占10重量％；

表兒茶素沒食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)，占10重量％；

原花青素，英文名是Proantho Cyanidins(PC)，5-10重量％；

矢車菊素-3-葡萄糖甙(Cyanidin-3-glucoside)，占5重量％；

茶黃素(Theaflavin，TF)，占10重量％；

茶黃素-3-沒食子酸酯(Theaflavin-3-gallate，TF-3-G)，占10重量％。

以上8種茶多酚單體在市場(chǎng)上均可以買到，將以上8種茶多酚單體按照上述配比進(jìn)行混合即得本發(fā)明所述茶多酚組合物。

其中大鼠給藥劑量范圍：10mg/kg-500mg/kg

而對(duì)于人的給藥劑量：71mg/70kg。

1.2標(biāo)本采集和處理

整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，每周監(jiān)測(cè)小鼠體重，動(dòng)物干預(yù)前及干預(yù)后4周每2周檢測(cè)空腹血糖1次。禁食8小時(shí)后，由小鼠尾靜脈取血，采用便攜式穩(wěn)豪型強(qiáng)生血糖儀和和強(qiáng)生血糖試紙測(cè)定空腹血糖。

治療14周后，采用氯胺酮(70mg/kg腹腔注射)麻醉小鼠，從眼眶后靜脈叢獲取靜脈血，3000g離心10分鐘獲得血清，用于測(cè)定血脂的濃度。小鼠取仰臥位，用手術(shù)剪縱形切開，打開胸腔，用注射器從左心室注釋PBS液，直至小鼠心臟、血管及注射后生理鹽水變白為止。在解剖顯微鏡下分離全程主動(dòng)脈(從升主動(dòng)脈至髂動(dòng)脈)，去除血管外脂肪及結(jié)締組織，剪取動(dòng)脈放入盛有PBS的培養(yǎng)皿中，縱行剪開動(dòng)脈，平鋪在濾紙上，折疊濾紙并固定，放入培養(yǎng)皿中，10％甲醛溶液固定。

1.3生化指標(biāo)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取經(jīng)眼眶后靜脈叢獲取靜脈全血，3000r/min，4℃離心l0min，取上清液-70℃保存以備檢測(cè)，血脂水平由廣東省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)(7170s全自動(dòng)生化分析儀，日本日立公司)。

1.4主動(dòng)脈油紅O染色

油紅O染液配置后，按以下步驟進(jìn)行主動(dòng)脈油紅O染色：⑴固定：4％多聚甲醛，4℃固定24～48小時(shí)；⑵漂洗：PBS漂洗3次；⑶潤(rùn)洗：60％異丙醇潤(rùn)洗1次；⑷染色：0.3％油紅O染色5min(裝在離心管中反復(fù)顛倒)；⑸潤(rùn)洗：60％異丙醇洗3次，洗去浮色；⑹漂洗：PBS洗2次，洗去異丙醇；⑺拍照：在防脫載玻片上展開，置于黑色卡紙上拍照(保持血管濕潤(rùn))；⑻圖像分析：染色主動(dòng)脈進(jìn)行掃描并用圖像分析軟件ProPlus分析，粥樣硬化嚴(yán)重程度用脂質(zhì)斑塊浸潤(rùn)面積比血管總面積百分比表示；⑼拍完照后的主動(dòng)脈投入裝有4％多聚甲 醛的培養(yǎng)皿中至4℃冰箱保存。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組進(jìn)行比較采用兩樣本獨(dú)立T檢驗(yàn)，P<0.05被定義為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)期間小鼠體重變化

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)所有小鼠均存活，無退出情況。如圖1所示，在前8周，正常飲食組、高脂飲食組和高脂飲食+茶多酚組合組Apoe-/-小鼠的體重隨時(shí)間增長(zhǎng)而增加。但8周后，正常飲食組小鼠體重趨于穩(wěn)定，而高脂飲食組小鼠體重依然在增加，但增幅明顯變緩趨于穩(wěn)定；在第10、12、14周，體重均明顯重于正常飲食組小鼠體重(P<0.05)。高脂飲食+茶多酚組合組小鼠的體重在8周后體重也趨于穩(wěn)定，在第10、12、14周，體重稍高于正常飲食組小鼠體重(P>0.05)，但均顯著輕于高脂飲食組(P<0.05)。

2.2實(shí)驗(yàn)期間小鼠空腹血糖變化

如圖2所示，在前8周，正常飲食組、高脂飲食組和高脂飲食+茶多酚組合組Apoe-/-小鼠的空腹血糖保持相對(duì)穩(wěn)定，各組小鼠空腹血糖無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯差異。在第10、12、14周，高脂飲食組小鼠空腹血糖顯著高于正常飲食組(P<0.05)。高脂飲食+茶多酚組合組小鼠的空腹血糖與正常飲食組小鼠空腹血糖的變化相似(P>0.05)，均顯著低于高脂飲食組(P<0.05)。

3主動(dòng)脈表面動(dòng)脈粥樣硬化病變范圍的影響

發(fā)明人對(duì)全程主動(dòng)脈表面大體進(jìn)行油紅O染色，以比較主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化病變范圍面積，結(jié)果如圖3和圖4。結(jié)果顯示高脂飲食組Apoe-/-小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化病變范圍面積顯著高于正常飲食組(平均面積±標(biāo)準(zhǔn)差：12.12±1.66vs 5.76±1.20，P<0.001)；高脂飲食+茶多酚組合組小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化病變范圍面積也顯著高于正常飲食組(平均面積±標(biāo)準(zhǔn)差：8.20±1.07vs 5.76±1.20，P＝0.014),但顯著低于高脂飲食組小鼠(平均面積±標(biāo)準(zhǔn)差：8.20±1.07vs 5.76±1.20，P＝0.001)。從上可知，高脂飲食可促使Apoe-/-小鼠主動(dòng)脈粥樣斑塊增多，而8種茶多酚單體組合可以明顯減緩主動(dòng)脈粥樣斑塊的生成。

從以上結(jié)果可以看出，所述茶多酚組合物在預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化方面 有很好的效果，能夠使動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型的體重和血糖指標(biāo)趨于正常，能夠明顯減緩動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型的主動(dòng)脈粥樣斑塊的生成。

最后所應(yīng)當(dāng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。