本發(fā)明涉及一種胃酸分泌抑制劑的新給藥途徑及新用途。
背景技術(shù)：
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富馬酸洛那普啶，化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：
化學(xué)名稱：1-[5-(2-氟苯基)-1-(吡啶-3-磺?；?-1H-吡咯-3-基]-N-甲基甲胺單富馬酸鹽
英文化學(xué)名稱：
1-[5-(2-Fluorophenyl)-1-(pyridin-3-ylsulfonyl)-1H-pyrrol-3-yl]-N-methylmethanamine monofumarate
分子式：C17H16FN3O2SC4H4O4
分子量：461.46
CAS號：881681-01-2
富馬酸洛那普啶是一種吡咯類的衍生物，屬于一種新型的鉀離子竟?fàn)幮运嶙铚?。目前在國際上，富馬酸洛那普啶僅有日本獲得上市許可， 其給藥途徑胃腸道給藥，劑型為片劑。上市產(chǎn)品的適應(yīng)癥為：胃潰瘍，十二指腸潰瘍、反流性食道炎、幽門桿菌感染、非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍或十二指腸潰瘍。
富馬酸洛那普啶由武田制藥公司開發(fā)，于2014年2月28日向日本提交上市申請。其化合物專利：CN200680040789.7，申請日：2006年08月29日，到期日：2026年08月29日，法律狀態(tài)：有權(quán)。工藝專利：201080018114.9，申請日：2010年02月24日，到期日：2030年02月24日，法律狀態(tài)：審中-實審。組合物專利：WO2014003199，申請日：2013年6月26日，
與傳統(tǒng)質(zhì)子泵抑制劑蘭索拉唑相比，富馬酸洛那普啶是通過競爭性、可逆的抑制質(zhì)子泵中的K+而起作用，臨床和動物實驗表明，富馬酸洛那普啶比PPI或H2受體阻滯劑起效更快，升高pH的作用更強，能迅速緩解消化道癥狀，離解后酶活性恢復(fù)，不良反應(yīng)少，數(shù)項臨床試驗均證實了，富馬酸洛那普啶對于糜爛性食管炎、預(yù)防及治療胃、十二指腸潰瘍，作為一線治療方案根除幽門螺桿菌等均有顯著的治療作用，療效高于蘭索拉唑，不良反應(yīng)小。富馬酸洛那普啶親脂性高、解離常數(shù)高，在酸性環(huán)境下，不需要酸活化，即可起效。富馬酸洛那普啶對質(zhì)子泵的抑制作用無需酸的激活，以高濃度進入胃中，首次給藥便能產(chǎn)生最大的抑制效應(yīng)，且可持續(xù)24小時。富馬酸洛那普啶在酸中穩(wěn)定，能迅速升高胃內(nèi)pH值，發(fā)揮抑酸效果。在治療劑量時富馬酸洛那普啶對其他的酶影響很小，對機體生理功能影響小，安全性好，更易耐受。傳統(tǒng)PPI由CYP2C19代謝，而富馬酸洛那普啶并不主要由CYP2C19代 謝，藥效及起效劑量在不同患者中的差異并不顯著，能更好的滿足患者的個體化用藥方案。
CN200680040789.7公開了富馬酸洛那普啶化合物及其組合物，也公開了其作為藥物的用途，其主要用途描述在以下段落：
[17]上述[16]的藥物組合物，其為胃酸分泌抑制劑(acid secretioninhibitor)。
[18]上述[16]的藥物組合物，其為鉀競爭性胃酸阻滯劑(potassium-competitive acid blocker)。
[19]上述[16]的藥物組合物，其為治療或預(yù)防消化性潰瘍，佐-埃(Zollinger-Ellison)綜合癥，胃炎，糜爛性食管炎(erosive esophagitis)，反流性食管炎，癥狀性胃食管返流疾病(symptomatic gastroesophageal reflux disease)(癥狀性GERD(symptomatic GERD))，功能性消化不良(functional dyspepsia)，胃癌，胃MALT淋巴瘤或胃酸過多癥的藥物；或者為由于消化性潰瘍的上消化道出血(upper gastrointestinal hemorrhage)，急性應(yīng)激性潰瘍(acute stressulcer)，出血性胃炎或侵入性應(yīng)激反應(yīng)(invasive stress)的抑制劑。
一種治療或預(yù)防消化性潰瘍，佐-埃綜合癥，胃炎，糜爛性食管炎，反流性食管炎，癥狀性胃食管返流疾病(癥狀性GERD)，功能性消化不良，胃癌，胃MALT淋巴瘤或胃酸過多癥的方法；或者抑制由于消化性潰瘍的上消化道出血，急性應(yīng)激性潰瘍，出血性胃炎或侵入性應(yīng) 激反應(yīng)的方法，該方法包括將有效量的上述[1]或[2]的化合物或其前藥給藥于哺乳動物。
上述[1]或[2]的化合物或其前藥在藥物組合物或抑制劑的制備中的用途，其中所述藥物組合物用于治療或預(yù)防消化性潰瘍，佐-埃綜合癥，胃炎，糜爛性食管炎，反流性食管炎，癥狀性胃食管返流疾病(癥狀性GERD)，功能性消化不良，胃癌，胃MALT淋巴瘤或胃酸過多癥；所述抑制劑用于抑制由于消化性潰瘍的上消化道出血，急性應(yīng)激性潰瘍，出血性胃炎或侵入性應(yīng)激反應(yīng)。本發(fā)明的效果：
由于化合物(I)具有優(yōu)異的質(zhì)子泵抑制作用(常規(guī)的質(zhì)子泵抑制劑如奧美拉唑、蘭索拉唑等與H+/K+-ATP酶的半胱氨酸殘基形成共價鍵并不可逆地抑制酶活性，而化合物(I)由于可逆地抑制質(zhì)子泵(H+/K+-ATP酶)活性，因而以K+拮抗劑抑制方式抑制胃酸分泌，所以其有時稱作鉀競爭性胃酸阻滯劑：P-CAB或者胃酸泵拮抗劑(ACPA或APA))，所以其在臨床上可提供有用的藥物組合物，用于預(yù)防和/或治療消化性潰瘍(例如，胃潰瘍，術(shù)后應(yīng)激性(postoperative stress)引起的胃潰瘍，十二指腸潰瘍，吻合口潰瘍(anastomoticulcer)，非甾體抗炎劑引起的潰瘍，術(shù)后應(yīng)激性引起的潰瘍等)；佐-埃綜合癥；胃炎；糜爛性食管炎；反流性食管炎如糜爛性反流性食管炎等；癥狀性胃食管返流疾病(癥狀性GERD)如非糜爛性的反流疾病(non-erosive reflux disease)或無食管炎的胃食管返流疾病等；功能性消化不良；胃癌(包括與歸因于白介素-1的基因多態(tài)性促進的白介素-1β產(chǎn)生有關(guān)的胃癌)；胃MALT淋巴瘤；胃酸過多癥；或者由于 消化性潰瘍的上消化道出血，急性應(yīng)激性潰瘍，出血性胃炎或侵入性應(yīng)激反應(yīng)(如各自均需要加強治療的大手術(shù)要求的術(shù)后集中管理引起的應(yīng)激反應(yīng)、腦血管疾病、頭部創(chuàng)傷、多器官衰竭和大面積燒傷)的抑制劑等。而且，化合物(I)用于預(yù)防和/或治療氣道病癥、哮喘等，麻醉前給藥，幽門螺旋桿菌的根除或輔助根除等。由于化合物(I)具有低毒性而且水溶解性、體內(nèi)動力學(xué)和功效表達優(yōu)異，所以其可用作藥物組合物。此外，由于化合物(I)即使在酸性條件下仍然穩(wěn)定，這使得該化合物可以作為常規(guī)的片劑等經(jīng)口給藥，無需配制成包有腸溶衣的制劑。其結(jié)果是，片劑等制劑可以制得更小，其優(yōu)點在于吞咽困難的患者特別是老人和兒童容易吞咽。另外，由于不存在包有腸溶衣的制劑所具有的緩釋作用，所以胃酸分泌抑制作用的表達迅速，且癥狀如疼痛等的緩解迅速。
另外，該專利說明書第30頁還公開了以下內(nèi)容：
本發(fā)明的化合物(I)及其前藥(下文中有時簡稱為本發(fā)明的化合物)具有質(zhì)子泵抑制作用，并有效地抑制胃酸分泌。另外，由于它們具有低毒性(如急性毒性、慢性毒性、遺傳毒性、生殖毒性、心臟毒性、藥物相互作用、致癌性等)和高的水溶解性，而且穩(wěn)定性、體內(nèi)動力學(xué)(可吸收性、分布、代謝、排泄等)和功效表達優(yōu)異，所以它們可用作藥劑。
本發(fā)明的化合物可用于治療或預(yù)防哺乳動物(例如，人，猿，羊，牛，馬，狗，貓，兔，大鼠，小鼠等)中的消化性潰瘍(例如，胃潰瘍，術(shù)后應(yīng)激性引起的胃潰瘍，十二指腸潰瘍，吻合口潰瘍，非甾體抗炎劑 引起的潰瘍等)；佐-埃綜合癥；胃炎；糜爛性食管炎；反流性食管炎如侵蝕性反流性食管炎等；癥狀性胃食管返流疾病(癥狀性GERD)如非糜爛性的反流疾病或無食管炎的胃食管返流疾病等；功能性消化不良；胃癌(包括與白介素-1的基因多態(tài)性所促進的白介素-1β的產(chǎn)生有關(guān)的胃癌)；胃MALT淋巴瘤；胃酸過多癥；由于消化性潰瘍的上消化道出血，急性應(yīng)激性潰瘍，出血性胃炎或侵入性應(yīng)激反應(yīng)(例如大手術(shù)要求的術(shù)后集中管理引起的應(yīng)激反應(yīng)，腦血管疾病，頭部創(chuàng)傷，多器官衰竭和大面積燒傷，各自均需要增強的治療)等；氣道病癥；哮喘等；麻醉前給藥；幽門螺旋桿菌的根除或輔助根除等。
如本文中所使用的，上述反流性食管炎和癥狀性胃食管返流疾病(癥狀性GERD))有時共同簡稱為GERD。
本發(fā)明的化合物在本發(fā)明的藥物組合物中的含量為約0.01～100％重量，相對于整個組合物。盡管隨給藥對象、給藥途徑、目標(biāo)疾病等而變化，但是當(dāng)該化合物例如作為抗?jié)兯幗?jīng)口給藥于成人(60kg)時，其劑量為約0.5～1500mg/天，優(yōu)選為約5～150mg/天，基于活性成分。本發(fā)明的化合物可以每日給藥一次，或者每日分2或3份給藥。
但上述專利沒有公開富馬酸洛那普啶具有以下適應(yīng)癥：
應(yīng)激狀態(tài)時并發(fā)的急性胃黏膜損害以及重癥疾病應(yīng)激狀態(tài)引起的上消化道出血，胃手術(shù)后引起的上消化道出血。也沒有公開富馬酸洛那普啶通過靜脈給藥可以治療和預(yù)防上述疾病。
胃黏膜損傷因素包括胃酸和胃蛋白酶兩個方面，關(guān)于胃內(nèi)的外化學(xué)環(huán)境可以影響胃粘膜出血的生理止血問題，早在40年代就引起了學(xué)者 們的注意，Smith 1942年曾指出：低pH值對凝血酶的形成有不利的作用。Tocatin及其同事1954年曾報道：在典型的胃內(nèi)環(huán)境中，粘膜出血部位難以形成足夠粗大的血塊以獲得有效止血，同時所形成的血塊還可以進行再消散的作用，注意到鹽酸及胃蛋白酶可以影響血凝塊的形成。Freireich 1966年曾報道：低pH值有抑制血小板聚集的作用。William Green于1978年報道了關(guān)于pH值和胃蛋白酶對血小板聚集以及血小板聚集后的復(fù)散和血凝方面的影響，做了系統(tǒng)的實驗和觀察，他利用拘緣酸抗凝劑(6份0.1M枸櫞酸鈉+4份0.1M枸櫞酸)抗凝的靜脈血，用低速離心處理后獲得含高濃度血小板血漿(血漿內(nèi)血小板含量300萬450萬/mm3)，然后在不同pH值條件下加上促血小板聚集素(A.D.P.)，觀察在不同pH值條件下，對血小板聚集和再分散的影響。實驗結(jié)果顯示：低pH值對血小板聚集的抑制作用，William Green同時還發(fā)現(xiàn)，在鹽酸中加入適量的胃蛋白酶對血小板聚集后的再分散有加速的作用。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，富馬酸洛那普啶除了可以治療上述公開的疾病之外，通過靜脈給藥可以抑制胃蛋白酶活性，從而開發(fā)出一種富馬酸洛那普啶通過靜脈途徑給藥的新的藥物用途。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明在實驗中意外的發(fā)現(xiàn)，富馬酸洛那普啶除了可以治療上述公開的疾病之外，還可以抑制胃蛋白酶活性，從而治療應(yīng)激狀態(tài)時并發(fā)的急性胃黏膜損害以及重癥疾病應(yīng)激狀態(tài)引起的上消化道出血，胃手術(shù)后引起的上消化道出血。從而擴大了富馬酸洛那普啶的臨床用途。
為此，本發(fā)明的一個目的是提供富馬酸洛那普啶的一個新的給藥途徑及一個新的用途。
本發(fā)明提供一種富馬酸洛那普啶在制備“應(yīng)激狀態(tài)時并發(fā)的急性胃黏膜損害，重癥疾病(如腦出血、嚴重創(chuàng)傷等)應(yīng)激狀態(tài)及胃手術(shù)后引起的上消化道出血?！钡乃幬镏械膽?yīng)用。
分別地，本發(fā)明提供富馬酸洛那普啶在制備一種治療和預(yù)防應(yīng)激狀態(tài)時并發(fā)的急性胃黏膜損害的藥物中的應(yīng)用。
或
富馬酸洛那普啶在制備一種治療和預(yù)防重癥疾病應(yīng)激狀態(tài)引起的上消化道出血的藥物中的應(yīng)用。
或
富馬酸洛那普啶在制備一種治療和預(yù)防胃手術(shù)后引起的上消化道出血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物能夠抑制胃蛋白酶活性，降低粘膜損傷因素，有效的預(yù)防和治療了胃黏膜的損傷。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物有助于血小板在出血部位聚集、凝集和使已凝固的血凝塊不被溶解，為創(chuàng)傷面的愈合提供了良好的化學(xué)環(huán)境，有助于潰瘍的恢復(fù)。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物有助于出血部位的止血、可促進凝血、穩(wěn)定血痂、保護粘膜的作用。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物為富馬酸洛那普啶的靜脈注射劑。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：所述治療和預(yù)防的給藥劑量為5mg～50mg/次。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：富馬酸洛那普啶注射劑在臨床使用中與葡萄糖和氯化鈉注射液配伍使用。
本發(fā)明所述的應(yīng)用，其特征在于：富馬酸洛那普啶注射劑在臨床使用中與100ml的5％葡萄糖注射液配伍使用。
本發(fā)明所述富馬酸洛那普啶注射劑，包括液體制劑，固體制劑，混懸劑，乳劑，脂質(zhì)體等，優(yōu)選的為注射液、凍干粉針或粉針劑，規(guī)格為5mg～100mg。
本發(fā)明所述富馬酸洛那普啶注射劑可以采用以下方法制備，將本發(fā)明所述富馬酸洛那普啶和注射用水混合，必要時加入輔助溶解的輔料，根據(jù)制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成注射用水針或粉針。
以上疾病和現(xiàn)有技術(shù)中所述富馬酸洛那普啶可以治療的疾病的主要差別在于：
首先是作用機理的不同：
富馬酸洛那普啶針在針對胃潰瘍、十二指腸潰瘍、反流性食道炎、幽門桿菌感染、非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍或十二指腸潰瘍等疾病的治療，是通過抑制K對H+K+－ATP酶的結(jié)合使胃酸分泌減少。我們通過研究發(fā)現(xiàn)富馬酸洛那普啶不僅能夠抑制胃酸分泌，提高胃內(nèi)pH值，還能夠能夠抑制胃蛋白酶活性，從而有助于血小板在出血部位聚集、凝集和使已凝固的血凝塊不被溶解，有助于出血部位的止血、可促進凝血、穩(wěn)定血痂，粘膜修復(fù)作用。
其次是給藥途徑的不同：人體在應(yīng)激狀態(tài)、重癥疾病、胃手術(shù)后等情況下，無法通過胃腸道給藥，通過靜脈給藥是患者及時、有效、安全、便捷的給藥途徑。
再有是給藥劑量的不同：
富馬酸洛那普啶在針對胃潰瘍，十二指腸潰瘍、反流性食道炎、幽門桿菌感染、非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍或十二指腸潰瘍等病癥的使用劑量是10～20mg/次。富馬酸洛那普啶的水溶性差，其口服固體制劑在體內(nèi)的溶解吸收差，因此胃腸道途徑給藥的劑量會大于靜脈給藥。通過我們的動物實驗顯示，折合人體使用5mg的劑量即有明顯的療效。靜脈給藥途徑避免了人體吸收過程，藥物100％被人體吸收，更小的藥物劑量就可以起到治療作用，因此，更有效的保證了患者的用藥安全性。
以下通過實驗數(shù)據(jù)進一步說明本發(fā)明的有益效果：
藥理實驗
試驗1：
富馬酸洛那普啶注射液對胃酸及胃蛋白酶活性的抑制作用材料：
儀器：酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek公司生產(chǎn)，型號：ELX-800)；低溫高速離心機(德國Eppendorf公司生產(chǎn)，型號：5810型)；紫外-可見分光光度計(日本島津生產(chǎn)，型號：UV1601)。
藥品與試劑：富馬酸洛那普啶注射液由北京歐克蘭醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)中心提供，批號：20150501，給藥劑量分別為：0.8、1.6、2.4mg/kg；對二甲氨基偶氮苯(國藥集團化學(xué)試劑北京有限公司，批號：201401112，分析純)；酚酞(國藥集團化學(xué)試劑北京有限公司，批號：20130428，分析純)；胃蛋白酶測試盒(南京建成科技有限公司，批號：20150208)；大鼠胃蛋白酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(上海麗臣生物科技有限公司，批號：20150304)；其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。
動物：試驗采用健康Wistar大鼠，♀，體質(zhì)量(200±20)g，動 物購買后適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后開始實驗。
試紙：精密試紙(上海試劑三廠，批號：20150121，pH：0.5～5.0)
方法：
分組與給藥：取大鼠隨機分為空白(蒸餾水)組、洛那普啶低、中、高劑量(0.8、1.6、2.4mg/kg)組，依次記為A、B、C、D四組，每組10只，連續(xù)ig給予相應(yīng)藥物10d。
胃液pH的檢測：大鼠第9天給藥后禁食，第10天給藥后禁水。末次ig給藥3h后，用10％水合氯醛(5ml/kg)ip麻醉并結(jié)扎幽門，術(shù)后5h處死大鼠，收集全部胃液于離心管中，以離心半徑4cm、3000r/min離心15min，吸取上清液備用。測量胃液總量，用精密pH試紙測定胃液pH值。
胃液游離酸度和總酸度的檢測：取胃液2ml，置于錐形瓶中，加入托佛氏試劑及酚酞指示劑各2滴，用0.02mol/L NaOH液滴定，恰至紅色消失、出現(xiàn)姜黃色為止，作為游離酸滴定終點。記錄消耗NaOH液毫升數(shù)乘以10，得游離酸度(mmol/L)。繼續(xù)用NaOH液滴定至顯微紅色，為總酸度滴定終點。兩次滴定消耗的NaOH液毫升數(shù)乘以10，得總酸度(mmol/L)。
胃蛋白酶活性的檢測：按照胃蛋白酶測試盒說明書進行檢測，取反應(yīng)終止后的樣本在660nm波長處測定光密度(OD)，計算胃蛋酶活性(U/ml)。
胃蛋白酶含量的測定：按照大鼠胃蛋白酶酶聯(lián)免疫檢測試劑盒說明書進行操作，反應(yīng)結(jié)束后的酶標(biāo)板在酶標(biāo)儀450nm波長處測定OD，代入回歸方程(以胃蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品OD值對質(zhì)量濃度進行回歸 分析)計算胃蛋白酶含量。
胃組織病理變化的觀察：電鏡下觀察各組大鼠末次給藥后胃組織的病理變化。
試驗結(jié)果：
胃液pH值變化與A組比較，B、C、D組大鼠胃液的pH升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
大鼠胃液中胃蛋白酶含量及活性、胃酸及pH值結(jié)果
結(jié)論：
通過本實驗發(fā)現(xiàn)，富馬酸洛那普啶注射液各組與空白對照相比，有增加大鼠胃液pH、抑制游離酸、促進總酸分泌、抑制胃蛋白酶活性的作用；同時對胃蛋白酶合成影響并不明顯。
實驗2，富馬酸洛那普啶注射液對小鼠水浸應(yīng)激性胃粘膜病變模型的作用
實驗?zāi)康模?/p>
應(yīng)激性胃粘膜病變，是臨床危重疾病和嚴重心理障礙的常見并發(fā)癥，易合并出血。由于其發(fā)生機制尚未完全明確，臨床防治效果不夠理想。目前認為應(yīng)激性胃粘膜病變的發(fā)生涉及胃粘膜保護機制削弱、 損傷因素作用相對增強及機體的神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)等多種因素。應(yīng)激狀態(tài)下，由于損傷因子的攻擊和防御作用的減弱，可出現(xiàn)下丘腦調(diào)控垂體等內(nèi)分泌腺體功能障礙，胃粘膜微循環(huán)障礙胃粘膜表面上皮層抗酸屏障受損，迷走神經(jīng)興奮性異常增高，壁細胞激活，胃粘膜內(nèi)脂質(zhì)過氧化物含量升高和氧自由基產(chǎn)生增加等多方面改變。最終，胃粘膜對H+和胃蛋白酶失去抵抗力，從而導(dǎo)致胃粘膜糜爛、潰瘍和出血。
我們通過實驗觀察了富馬酸洛那普啶注射液對小鼠水浸應(yīng)激性胃粘膜病變模型的作用。
實驗材料：
藥物：富馬酸洛那普啶注射液由北京歐克蘭醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)中心提供，批號：20150501
動物：昆明種健康雄性小鼠，動物購買后適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后開始實驗。儀器及設(shè)備：顯微鏡(NIKON型號：SMZ800)
實驗方法：
取小鼠60只，雌、雄各半，隨機分為6組，禁食不禁水24h后，注射給藥1次。10min后，將小鼠四肢固定于鼠板上，垂直浸入23±0.5℃水中。浸入深度至劍突水平，12h后取出，頸椎脫位處死。打開腹腔，結(jié)扎賁門和幽門并經(jīng)胃壁向胃腔內(nèi)注入1％的甲醛液2ml，將胃取出浸入1％甲醛液中，30min后沿胃大彎剖開，解剖顯微鏡下計數(shù)胃部出現(xiàn)的潰瘍點數(shù)目。
試驗結(jié)果顯示：富馬酸洛那普啶注射液在0.8～4mg·kg-1劑量下，對小鼠水浸應(yīng)激性胃粘膜病變的形成具有很強的抑制作用，表現(xiàn)為潰瘍數(shù)和潰瘍發(fā)生率下降，且呈量效關(guān)系。在劑量為0.8mg·kg-1時潰瘍數(shù)即明顯下降，與對照組相比有顯著性差異(P<0.01)，劑量 為1.6mg·kg-1時，抑制作用更為明顯，抑制率為76.50％，在劑量2.4mg·kg-1下，抑制率達82.60％。
實驗3，富馬酸洛那普啶注射液對水浸大鼠胃粘膜損傷以及胃出血的預(yù)防作用
實驗?zāi)康模?/p>
應(yīng)激性潰瘍(stress ulcer，SU)是臨床各種危重疾病和嚴重心理障礙的常見并發(fā)癥，一旦合并出血或穿孔，處理困難，病死率較高。但SU的發(fā)生機制目前尚未完全明確。觀察富馬酸洛那普啶對應(yīng)激狀態(tài)下大鼠胃粘膜損傷及胃泌酸功能的影響。
實驗材料：
藥物：富馬酸洛那普啶注射液由北京歐克蘭醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)中心提供，批號：20150501
動物：健康雄性SD大鼠24只，體重180～200g。將SD大鼠隨機分為3組；生理鹽水組、生理鹽水+應(yīng)激組和富馬酸洛那普啶注射液+應(yīng)激組。各組大鼠禁食24h、禁水1h。
儀器及設(shè)備：pH計德國賽多利斯公司生產(chǎn)；德國Leitz石蠟切片機；顯微鏡(NIKON型號：SMZ800)
實驗方法：
動物分組：健康雄性SD大鼠24只，體重180～200g，將SD大鼠隨機分為3組；各組大鼠禁食24h、禁水1h。
試驗藥物：富馬酸洛那普啶注射液由我公司公司生產(chǎn)，實驗前用5％葡萄糖注射液稀釋，濃度為2.4mg/ml
動物模型：生理鹽水+應(yīng)激組和富馬酸洛那普啶+應(yīng)激組于應(yīng)激之 前半小時分別注射lml生理鹽水和富馬酸洛那普啶2.4mg/kg，然后將上述兩組大鼠束縛于鼠板上并浸入19±1℃水中，水面平胸骨劍突水平，持續(xù)4h。
胃粘膜大體變化：生理鹽水組大鼠胃粘膜色澤紅潤，未見損傷性改變。生理鹽水+應(yīng)激組大鼠的胃腔內(nèi)見有大量積血，粘膜表面附有多量血痂，拭去血跡后見腺胃部彌漫性點線狀出血、糜爛及潰瘍形成。與生理鹽水+應(yīng)激組相比，注射富馬酸洛那普啶后應(yīng)激組大鼠胃粘膜損傷程度明顯減輕，胃腔內(nèi)無血性積液，腺胃區(qū)粘膜僅見少許散在的斑點狀糜爛。
胃粘膜組織學(xué)變化：生理鹽水組大鼠胃粘膜結(jié)構(gòu)完整，腺體排列整齊，層次清楚。生理鹽水+應(yīng)激組粘膜可見明顯出血、壞死及大片狀脫落，粘膜中斷，潰瘍呈火山口狀，幾乎深達粘膜肌層，其周邊細胞腫脹、變性明顯。預(yù)防注射富馬酸洛那普啶后應(yīng)激組鏡下見胃粘膜輕度充血水腫，偶見表層上皮小片狀脫落，無出血及潰瘍形成。
上述研究結(jié)果表明：于應(yīng)激之前半小時，注射富馬酸洛那普啶進行預(yù)防，再給予同樣應(yīng)激，胃液pH明顯上升，UI顯著下降，胃粘膜損傷程度明顯減輕，無潰瘍形成，因此富馬酸洛那普啶能有效預(yù)防SU的發(fā)生，其預(yù)防機制與抑制胃酸分泌有關(guān)。
本研究采用WRS模型，應(yīng)激后大鼠胃粘膜可見明顯出血、壞死和潰瘍形成，說明動物模型制作非常成功。本研究還表明，應(yīng)激狀態(tài)下UI明顯升高，而胃液pH值則異常降低，且降低程度與胃粘膜病變密切相關(guān)，從而證實了胃酸在SU發(fā)生中的作用。
具體實施方式：
以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制：
實施例1
富馬酸洛那普啶小針注射液的制備：
規(guī)格：5ml:10mg
一、處方：
二、制備工藝：
1.稱量、配液：
稱取處方量的葡萄糖和依地酸鈣二鈉，加入到配制總量80％的注射用水中(水溫＜50℃)，攪拌溶解；然后稱取處方量的洛那普啶加入配液罐中充分攪拌，至完全溶解。然后加入0.1％(g/ml)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附15分鐘，藥液經(jīng)0.45μm濾器過濾除炭。
2.pH值調(diào)節(jié)：
以0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2.5～3.5，補加注射用水至全量，藥液經(jīng)0.22μm微孔濾器過濾。
3.灌裝、熔封
中間體檢驗合格后灌裝于5ml棕色安瓿瓶中、沖氮、熔封。
4.滅菌：
將合格的半成品傳入滅菌間，經(jīng)濕熱121℃，15min滅菌；冷卻， 檢漏。
5.燈檢、外包、入庫
實施例2
富馬酸洛那普啶中針注射液的制備：
規(guī)格：20ml:20mg
一、處方：
二、制備工藝：
1.稱量、配液：
稱取處方量的葡萄糖和依地酸鈣二鈉，加入到配制總量80％的注射用水中(水溫＜50℃)，攪拌溶解；然后稱取處方量的洛那普啶加入配液罐中充分攪拌，至完全溶解。然后加入0.1％(g/ml)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附15分鐘，藥液經(jīng)0.45μm濾器過濾除炭。
2.pH值調(diào)節(jié)：
以0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2.5～3.5，補加注射用水至全量，藥液經(jīng)0.22μm微孔濾器過濾。
3.灌裝、熔封
中間體檢驗合格后灌裝于20ml棕色安瓿瓶中、沖氮、熔封。
4.滅菌：
將合格的半成品傳入滅菌間，經(jīng)濕熱121℃，15min滅菌；冷卻，檢漏。
5.燈檢、外包、入庫
實施例3
富馬酸洛那普啶大輸液注射液的制備：
規(guī)格：100ml:20mg
一、處方：
二、制備工藝：
1.稱量、配液：
稱取處方量的葡萄糖和依地酸鈣二鈉，加入到配制總量80％的注射用水中(水溫＜50℃)，攪拌溶解；然后稱取處方量的洛那普啶加入配液罐中充分攪拌，至完全溶解。然后加入0.1％(g/ml)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附15分鐘，藥液經(jīng)0.45μm濾器過濾除炭。
2.pH值調(diào)節(jié)：
以0.1mol/L鹽酸或0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0～6.5，補加注射用水至全量，藥液經(jīng)0.22μm微孔濾器過濾。
3.分裝、軋蓋：
中間體檢驗合格后灌裝于100ml大輸液瓶中、加塞、軋蓋。
4.滅菌
將合格的半成品傳入滅菌間，經(jīng)濕熱121℃，15min滅菌；冷卻，檢漏。
5.燈檢、外包、入庫
實施例4
富馬酸洛那普啶凍干粉針的制備：
規(guī)格：10mg
一、處方：
二、制備工藝：
1.稱量、配液：
準(zhǔn)確稱取處方量的甘露醇和依地酸鈣二鈉，加處方量90％的注射用水，攪拌使溶解；另稱取處方量洛那普啶，加至甘露醇溶液中，攪拌至完全溶解。然后加入0.1％(g/ml)針用活性炭，攪拌均勻，靜置吸附15分鐘，藥液經(jīng)0.45μm濾器過濾除炭。pH值調(diào)節(jié)：
以0.1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2.0～3.0，補加注射用水至全量，藥液經(jīng)0.22μm微孔濾器過濾。
2.分裝與冷凍干燥：
在無菌操作室內(nèi)遮光操作；取上述精濾液測定含量，調(diào)整裝量，取約3ml分裝于7ml西林瓶中，半壓膠塞；制品入冷凍干燥機，預(yù)凍3小時使制品溫度至－40℃(板溫預(yù)先冷至－20℃)，保持1小時，制冷冷凝器溫度至－55℃；開啟真空泵，使干燥箱內(nèi)真空度達到8.0×10‐2mBar左右，對板層加熱升溫，每小時升溫5℃；6小時后板溫升至－10℃恒定，品溫隨板溫約每小時升溫3℃，真空度維持6.0×10‐2mBar左右，約干燥8小時，品溫至共熔點－15℃左右，制品水層消失；而后對板層繼續(xù)加熱升溫，速率每小時5℃，7小時后板溫升至25℃，品溫約經(jīng)14小時至25℃，保溫3小時，干燥箱極限真空為6.0×10‐2mBar左右；停機，進經(jīng)凈化處理、箱內(nèi)壓蓋，出箱鎖鋁蓋，即得。
實施例5
實施例1小水針使用方法詳解：
靜脈滴注：臨用前將加入l00毫升5％葡萄糖注射液中，靜脈滴注；本品靜脈滴注時間應(yīng)在15～20分鐘或更長。禁止用其他其溶劑或其他藥物溶解和稀釋。
預(yù)防應(yīng)激狀態(tài)時并發(fā)的急性胃黏膜損害預(yù)防重癥疾病(如腦出血、嚴重創(chuàng)傷等)應(yīng)激狀態(tài)及胃手術(shù)后引起的上消化道出血的起始劑量的起始劑量均為5mg。