本發(fā)明涉及一種動物飼料添加劑中含中藥有效成分的絞股藍(lán)總甙提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
：目前我國用于促進(jìn)畜禽生長的飼料添加劑絕大部分為抗生素飼料添加劑，植物有效成分飼料添加劑很少，由此造成的抗生素殘留的問題在養(yǎng)殖業(yè)領(lǐng)域非常突出，隨著人們生活水平的提高和對健康的重視程度不斷加強(qiáng)，人們對綠色食品、有機(jī)食品的認(rèn)識不斷提高，環(huán)保無毒副作用的天然中藥提取有效成分的飼料添加劑的應(yīng)用將越來越普遍。絞股藍(lán)為葫蘆科絞股藍(lán)屬蔓生草本植物，主要含皂甙、黃酮、多糖、維生素和微量元素等?，F(xiàn)代藥理研究表明：絞股藍(lán)總甙具有抑制腫瘤、抗疲勞、抗衰老、抗缺氧、降低血脂、增強(qiáng)免疫力、保護(hù)心臟、對大腦有良好的鎮(zhèn)靜、興奮雙向調(diào)節(jié)等多重生理功效，而黃酮等成分也有比較好的藥理作用。絞股藍(lán)的細(xì)胞壁和細(xì)胞間質(zhì)主要由纖維素和果膠等物質(zhì)構(gòu)成其纖維素含量較高，在提取過程中，有效成分需要通過細(xì)胞間質(zhì)和細(xì)胞壁擴(kuò)散到提取介質(zhì)，從一定程度上阻礙了有效成分的傳質(zhì)過程。傳統(tǒng)的提取方法主要有水提法、醇提法、超聲提取法、堿水提法等，普通水提法存在提取效率不高的問題，醇提法等存在工藝比較復(fù)雜，提取成本高的問題，超聲提取對設(shè)備要求高等，專利93106940.8曾有人使用半纖維素酶和果膠酶混合處理提取，取得了一定的效果，本發(fā)明將加入一種纖維素酶，結(jié)合實(shí)驗(yàn)來確定那種混合酶處理的效果佳。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提高絞股藍(lán)提取物總甙的提取率本發(fā)明提供了用酶處理絞股藍(lán)原料，然后用水提取絞股藍(lán)總甙的方法，此方法較傳統(tǒng)水提法能大大提高絞股藍(lán)總甙的提取率，而提取成本又比用醇提法低。分離純化方法采用的是大孔吸附樹脂，酶選用的是纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶的混合酶，用混合酶破壞細(xì)胞壁后可以大大提高細(xì)胞內(nèi)容物的提取率，相關(guān)文獻(xiàn)中曾有人用果膠酶處理提取絞股藍(lán)總甙取得一定效果，本發(fā)明與其不同之處主要在于三種酶還起到了協(xié)同增效的作用。所述混合酶為下列三種酶的組合：纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶。本發(fā)明的制備工藝包括酶處理、浸提、濃縮、分離純化、干燥等步驟，具體操作方法如下：1、酶處理：將絞股藍(lán)粗粉與水混合，混合后加酸調(diào)節(jié)至PH值。加入混合酶混勻浸泡；2、浸提：將酶處理后的混合物提取，過濾，濾渣加水再提取1次；3、濃縮：合并濾液，減壓濃縮，調(diào)節(jié)PH至中性，過濾；4、分離純化：濾液通過大孔吸附樹脂除雜，用乙醇溶液洗脫；5、干燥：洗脫液回收乙醇，濃縮，噴霧干燥，得絞股藍(lán)提取物。本發(fā)明的優(yōu)選方案中所述的步驟1為加8-10倍量水，加酸調(diào)節(jié)PH值為4-6，加0.3-0.5%混合酶45℃—55℃酶解2小時，混合酶為纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶，比例為1:1:1。根據(jù)酶的理化性質(zhì)主要考查不同酶和加酶量對提取物的影響。表一不同酶對提取的影響酶提取率（%）絞股藍(lán)總甙的含量（%）纖維素酶6.824.84果膠酶7.165.08半纖維素6.444.57半纖維素酶、果膠酶7.535.34纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶8.255.85文獻(xiàn)上曾有人用半纖維素酶與果膠酶混合處理，現(xiàn)將其對比結(jié)果顯示，三種酶的混合酶能起到比較好的提取效果。表二、不同加酶量對絞股藍(lán)總甙提取率的影響加酶量提取率（%）絞股藍(lán)總甙的含量（%）0.2%7.655.430.4%8.255.850.6%7.725.48實(shí)驗(yàn)表明，加入0.4%的混合酶能取得比較好的提取效果。本發(fā)明的方案步驟2中提取溫度為50℃—60℃，這主要是由混合酶的理化性質(zhì)決定的，重點(diǎn)考察提取次數(shù)對提取物的影響。表三、提取次數(shù)對提取物的影響提取次數(shù)提取率（%）絞股藍(lán)總甙的含量（%）第一、二次8.255.91第三次0.640.32實(shí)驗(yàn)表明由于第三次提取物得率只占到三次提取總得率的7.2%，而且雜質(zhì)較多，絞股藍(lán)總甙的含量更低，且絞股藍(lán)屬比較常見的藥材，價格比較低廉，故確定提取次數(shù)為兩次。步驟3中減壓濃縮至密度為1.10，調(diào)節(jié)PH至中性，過濾。步驟4中大孔吸附樹脂采用的是D101型非極性樹脂，先用30%的乙醇溶液洗脫，除去部分雜質(zhì)，再用50-70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液。步驟5中將洗脫液減壓濃縮，回收乙醇，噴霧干燥得絞股藍(lán)提取物粉末。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例僅用于說明并不能限制本發(fā)明的范圍.實(shí)施例1：取絞股藍(lán)粗粉1000g加水8000g，調(diào)節(jié)PH至4，按0.4%的比例加入混合酶45℃—55℃浸泡2個小時，混合酶為纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶，加熱至50℃—60℃提取一小時，過濾，藥渣再加入8000g水，50℃—60℃提取一小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至密度為1.10，調(diào)節(jié)PH至中性，過濾。濾液上柱，先用3倍體積的30%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，后用70%的乙醇溶液洗脫至無色，收集洗脫液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液噴霧干燥，得絞股藍(lán)提取物粉末78.4g，分光光度法測得絞股藍(lán)總甙以絞股藍(lán)皂甙A計為56.2g。實(shí)施例2：取絞股藍(lán)粗粉1000g加水10000g，調(diào)節(jié)PH至4，按0.4%的比例加入混合酶45℃—55℃浸泡2個小時，混合酶為纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶，加熱至50℃—60℃提取一小時，過濾，藥渣再加入10000g水，50℃—60℃提取一小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至密度為1.10，調(diào)節(jié)PH至中性，過濾。濾液上柱，先用3倍體積的30%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，后用70%的乙醇溶液洗脫至無色，收集洗脫液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液噴霧干燥，得絞股藍(lán)提取物粉末82.5g，分光光度法測得絞股藍(lán)總甙以絞股藍(lán)皂甙A計為58.9g。實(shí)施例3取絞股藍(lán)粗粉1000g加水10000g，調(diào)節(jié)PH至4，按0.4%的比例加入混合酶45℃—55℃浸泡2個小時，混合酶為纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶，加熱至50℃—60℃提取一小時，過濾，藥渣再加入8000g水，50℃—60℃提取一小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至密度為1.10，調(diào)節(jié)PH至中性，過濾。濾液上柱，先用3倍體積的30%乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，后用70%的乙醇溶液洗脫至無色，收集洗脫液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液噴霧干燥，得絞股藍(lán)提取物粉末80.1g，分光光度法測得絞股藍(lán)總甙以絞股藍(lán)皂甙A計為56.8g。當(dāng)前第1頁1 2 3