專利名稱：槐甙的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及槐甙在制備治療婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
性激素對(duì)維持人體骨量起重要作用，老年性或手術(shù)性的性激素降低均可導(dǎo)致失骨，引起骨質(zhì)疏松性骨折。絕經(jīng)后地骨質(zhì)疏松癥常見(jiàn)于高齡婦女，其治療相當(dāng)困難。當(dāng)今社會(huì)，人口老化，踏入高齡的婦女不斷增加，婦女在絕經(jīng)后骨質(zhì)丟失率隨血循環(huán)中雌激素水平的減少而增高，進(jìn)而出現(xiàn)骨質(zhì)疏松癥，增加了骨折的危險(xiǎn)性，因骨質(zhì)疏松、骨折和各種并發(fā)癥導(dǎo)致的死亡人數(shù)越來(lái)越多。
雌激素替代療法對(duì)預(yù)防絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥上有效的。此外，雌激素替代療法的好處還包括(1)降低冠心病的發(fā)病率；(2)預(yù)防抑郁癥和記憶力喪失等。因此，目前婦女絕經(jīng)后常常用雌激素替代療法來(lái)預(yù)防心血管疾病或骨質(zhì)疏松癥，有時(shí)也用雌激素替代療法配合其它藥物來(lái)治療骨質(zhì)疏松癥。但是攝入人體雌激素也會(huì)帶來(lái)很多副作用，最嚴(yán)重的是會(huì)增加乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率。
所以，該技術(shù)領(lǐng)域一直想尋找一種沒(méi)有諸如增加乳腺癌和子宮內(nèi)莫癌的發(fā)病率危險(xiǎn)的藥物來(lái)治療婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。
染料木素(genistein)是存在于植物中的一種異黃酮成分，在多種植物中以甙元本身或糖甙的形式存在。糖甙中組成氧甙健的糖可以是諸如葡萄糖的單糖，也可以是諸如新橙皮糖(neohesperidose)、葡糖基芹菜糖(glucosylapiosied)；糖鏈所在的位置可以是在7位或4’位形成單鏈，也可以在7，4’形成雙鏈；或者在8位或6，8位形成碳甙鍵。在多種糖甙中，最常見(jiàn)的是染料木素-4’-O-毗喃葡萄糖甙(genistein-4’-glucopyranoside)，又名槐甙(sophoricoside)和染料木素-7-O-毗喃葡萄糖甙(genistein-7-O-glucopyranoside)，又名染料木甙(genistin)。
R1 R2
H β-D-Glc 槐甙(sophoricoside)
β-D-Glc H 染料木甙(genistin)
HH 染料木素(genistein)
染料木甙是大豆的一種活性成分，屬于異黃酮類。1953年曾經(jīng)報(bào)道在豆渣中存在，將豆渣用作牲畜的飼料，因其中所含的染料木甙具有雌激素樣活性而使牲畜的體重增加。
近年來(lái)，人們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，大豆中的這類異黃酮能降低絕經(jīng)期前婦女患乳腺癌的危險(xiǎn)，并能抑制大鼠膀胱腫瘤的生長(zhǎng)和前列腺癌的早期發(fā)展。最近又報(bào)道含有染料木甙的大豆提取作為雌激素劑外，尚可抑制腸道的葡萄糖攝入，從而可能用于糖尿病以及用作葡萄糖誘導(dǎo)脂類過(guò)氧化的保護(hù)劑。此外，從老齡雌性大鼠所得股骨干骺端組織(femoral-metaphyseal tissues)的體外試驗(yàn)，染料木甙或染料木素能引起干骺端組織中堿性磷酸酶、DNA和鈣含量的顯著增加，表明他們具有對(duì)骨代謝的合成作用，同時(shí)染料木甙能預(yù)防對(duì)卵巢功能切除大鼠的骨丟失。
槐甙得自槐角，即豆科(Leguminosae)槐屬植物槐樹(shù)(Sophora japonica L)的果實(shí)，為常用中藥，槐甙尚存在于尼泊爾黃花木(Piptanthus nepalensis)莖和漆樹(shù)科植物寬葉尚乳香(Schinus latifolius)葉中，槐甙具有抗炎作用，能明顯抑制發(fā)炎過(guò)程的增生期，并有降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶的作用。近年尚報(bào)道能同時(shí)抑制大鼠由角叉菜膠引起的水腫和巴豆油誘導(dǎo)的耳水腫，以及作為白介素-5的抑制劑。
日本專利申請(qǐng)JP11-116487只揭示了槐甙在治療糖尿病等疾病中的應(yīng)用。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供對(duì)人體的乳房和子宮沒(méi)有雌激素樣副作用的槐甙在制備治療婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列構(gòu)思來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種下式槐甙在制備治療與雌激素缺乏相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用
3-[4-(β-D-毗喃葡萄糖基)-苯基]5，7-二氫-4H-1-苯并毗喃-4-酮(4’，5，7-三羥基異黃酮-4’-D-葡糖苷
其中，所述的疾病選自骨質(zhì)疏松癥、更年期綜合癥、睡眠不良和乳房小葉增生。
所述槐甙特別可用于制備治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的應(yīng)用。
優(yōu)選的是，所述的槐甙從豆科植物(sophora subprograms)，特別是大豆中提取得到。
制藥領(lǐng)域的技術(shù)人員可根據(jù)常規(guī)的技術(shù)，將所述的槐甙制備成各種劑型，如口服的膠囊劑、片劑等常規(guī)劑型。
藥理實(shí)施例
藥理實(shí)施例1急性毒性試驗(yàn)
將槐甙用蒸餾水配制成0.2g/ml溶液，備用。
選取20只體重為19-21克的昆明種小鼠(雌雄各半)，禁食16小時(shí)后，經(jīng)口灌胃一次，劑量0.5ml/20g體重，給藥后即刻觀察動(dòng)物中毒癥狀的各種表現(xiàn)和記錄死亡動(dòng)物。
記錄觀察期里小鼠的死亡數(shù)。死亡動(dòng)物即刻尸解，肉眼觀察小鼠的主要臟器(心、肝、脾、肺、腎等)的變化。若肉眼可見(jiàn)異常則進(jìn)行病理檢查。另外記錄觀察期里雌雄小鼠的行為活動(dòng)、被毛、皮膚、呼吸、大小便、食欲、鼻、眼、口腔有無(wú)異常分泌物等情況。
結(jié)果
小鼠給藥后活動(dòng)正常，沒(méi)有出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，無(wú)一例小鼠死亡。觀察期間小鼠活動(dòng)狀況與飲食情況良好，實(shí)驗(yàn)小鼠沒(méi)有出現(xiàn)飲食、活動(dòng)等不良反應(yīng)和死亡情況。
觀察期7天后處死全部存活的小鼠，解剖和巨檢試驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)臟器官無(wú)異常。
小鼠口服給藥LD50＞5g/kg/日。相當(dāng)于人體用量的5000倍，無(wú)毒。
藥理實(shí)施例2對(duì)未發(fā)育大鼠(三周SD大鼠)子宮作用試驗(yàn)
用槐甙16.67mg/kg(相當(dāng)于人體50mg/60kg用量的20倍)經(jīng)口灌胃給藥，每日一次，連續(xù)7天?；边皩?duì)子宮的濕重和干重沒(méi)有增重作用，病理切片觀察子宮形狀，未見(jiàn)子宮形態(tài)有發(fā)育改變。
用陽(yáng)性對(duì)照組尼爾雌醇片對(duì)子宮有明顯增重作用，子宮形態(tài)向發(fā)育成熟改變。本試驗(yàn)說(shuō)明槐甙對(duì)子宮無(wú)作用，它的靶器官不在子宮。
藥理實(shí)施例3.槐甙對(duì)6個(gè)月成熟去卵巢大鼠的預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用
(i)生物力學(xué)試驗(yàn)
股骨三點(diǎn)折彎試驗(yàn)觀察指標(biāo)；彈性載荷、彈性形變、最大載荷、最大形變、斷裂載荷、斷裂形變、韌性、硬度、彈性應(yīng)力、最大應(yīng)力。結(jié)果，給予槐甙組的大鼠的彈性形變、最大載荷、最大形變的數(shù)值與假手術(shù)組的大鼠和給予尼爾雌醇片的陽(yáng)性對(duì)照組大鼠的數(shù)值最接近，或高于后者，這些數(shù)值明顯高于未給予藥物的模型組和給予仙靈骨葆組得到的數(shù)值，但兩者均無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。對(duì)于斷裂形變，槐甙低劑量組明顯高于假手術(shù)組、尼爾雌醇組、仙靈骨葆，并有顯著差異(p＜0.05)；韌性，斷裂形變，槐甙低劑量組明顯高于假手術(shù)組、尼爾雌醇組、仙靈骨葆組，并有顯著差異(p＜0.05)；彈性應(yīng)力，槐甙高劑量組和假手術(shù)組最高，同模型組、仙靈骨葆組、尼爾雌醇片組有顯著差異(p＜0.05)；最大應(yīng)力，假手術(shù)組、槐甙高劑量組和中劑量組最高，同模型組相比有顯著差異(p＜0.05)。
腰椎抗壓試驗(yàn)觀察指標(biāo)最大應(yīng)力尼爾雌醇片組、假手術(shù)組和槐甙中劑量組最高，同模型組相比有顯著差異(p＜0.05)，與其余各組相比無(wú)顯著差異。
本試驗(yàn)表明，槐甙能顯著增加6個(gè)月成熟去卵巢大鼠密質(zhì)骨(股骨)和松質(zhì)骨(腰椎)的生物力學(xué)性能。
(ii)股骨遠(yuǎn)髁、脛骨髁、第三腰椎圖像分析
觀察指標(biāo)骨小梁面積、骨小梁面積百分比、節(jié)點(diǎn)、游離末端、平均骨小梁寬度。平均骨小梁間距結(jié)果
腰椎骨小梁面積、骨小梁面積百分比，假手術(shù)組最大，并同各組有顯著差異，槐甙高劑量組和仙靈骨葆組其次，同模型組相比有顯著差異(p＜0.05)；節(jié)點(diǎn)，槐甙高劑量組、假手術(shù)組和槐甙中、低劑量組最多，并同其余各組有顯著差異(p＜0.05)；游離末端從少到多是槐甙中劑量組、假手術(shù)組、模型組、槐甙高、低劑量組和仙靈骨葆組，各族之間無(wú)顯著差異；平均骨小梁寬度假手術(shù)組最大，仙靈骨葆組和槐甙高劑量組其次，中劑量組再次，以上各組之間并同模型組有顯著差異(p＜0.05)；平均骨小梁間距最窄是槐甙高劑量組和槐甙中劑量組，其次是假手術(shù)組、模型組和槐甙低劑量組，再次仙靈骨葆組，各組之間均有顯著差異(p＜0.05)。
脛骨髁骨小梁面積、骨小梁面積百分比假手術(shù)組最大，并同各組有顯著差異，槐甙高、中劑量組其次，同模型組有顯著差異(p＜0.05)；節(jié)點(diǎn)假手術(shù)組、槐甙高、中、低劑量組最多，并同仙靈骨葆組有顯著差異(p＜0.05)；平均骨小梁寬度假手術(shù)組最大，仙靈骨葆組和槐甙中劑量組其次，低劑量組再次，以上各組之間并同模型組有顯著差異(p＜0.05)；游離末端槐甙高、中劑量組、假手術(shù)組和仙靈骨葆組最少，同模型組有顯著差異(p＜0.05)；平均骨小梁間距最窄的是假手術(shù)組和槐甙中劑量組，其次是槐甙高劑量組，再次是槐甙低劑量組和模型組，最大是仙靈骨葆組，各組之間均有顯著差異(p＜0.05)。
股骨遠(yuǎn)髁骨小梁面積、骨小梁面積百分比假手術(shù)組最大，并同各組有顯著差異，槐甙高、中劑量組其次，同其余各組有顯著差異(p＜0.05)；節(jié)點(diǎn)假手術(shù)組最多，并同各組有顯著差異(p＜0.05)；游離末端槐甙中劑量組和假手術(shù)組最少，并同仙靈骨葆組有顯著差異(p＜0.05)；平均骨小梁寬度假手術(shù)組最大，仙靈骨葆組和槐甙中、高劑量組其次，低劑量組再次，模型組最小，以上各組之間并同模型組有顯著差異(p＜0.05)；平均骨小梁間距最窄的是仙靈骨葆組和槐甙中、高劑量組，其次假手術(shù)組，再次是槐甙低劑量組，間距最大是模型組，各組之間均有顯著差異(p＜0.05)。
綜上所述，槐甙能增加骨小梁面積、骨小梁面積百分比、節(jié)點(diǎn)和平均骨小梁寬度，減少游離末端，同假手術(shù)組最接近，說(shuō)明槐甙提供骨生物力學(xué)性能是通過(guò)抑制骨吸收作用實(shí)現(xiàn)的。
藥理實(shí)施例4
微生物回復(fù)突變?cè)囼?yàn)
按《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)，藥理，毒理學(xué))》(中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政局，1993)的設(shè)計(jì)要求，選用組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌(S.Typhimurium)TA97、TA98、TA100及TA102為指示菌株，檢測(cè)槐甙的致突變性。實(shí)驗(yàn)在加和不加代謝活化系統(tǒng)(S9)的條件下進(jìn)行，采用標(biāo)準(zhǔn)平板滲入法。結(jié)果表明，槐甙在加和不加S9的條件下，對(duì)鼠傷寒沙門氏菌無(wú)致突變性。
臨用時(shí)先將槐甙用雙蒸水溶解配成最高應(yīng)用劑量，抽濾滅菌，然后稀釋成不同的應(yīng)用劑量。
陽(yáng)性對(duì)照不加代謝活化系統(tǒng)(S9)，TA97阿的平(500微克/皿)，TA100和TA102MMS(1微升/皿)，TA98對(duì)硝基喹啉(200微克/皿)；加S9，TA97、TA98、TA100用2-AF(10微克/皿)及TA102用1，8-二羥基蒽醌(50微克/皿)；
陰性對(duì)照雙蒸水0.1毫升/皿
溶劑對(duì)照二甲亞砜(DMSO)0.1毫升/皿
菌株由美國(guó)加里福尼亞大學(xué)Ames實(shí)驗(yàn)室提供的組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌(S.typhimurium)TA97、TA98、TA100及TA102，保存于液氮中。
菌株鑒定
(1)R因子鑒定用無(wú)菌棉拭子沾各菌株培養(yǎng)液少許，平行劃線接種于氨芐青霉素平板上，于37℃培養(yǎng)24小時(shí)。
結(jié)果在各菌株的劃線處均有菌落生長(zhǎng)，表明有R因子存在。
(2)自發(fā)回變數(shù)鑒定將0.1ml各菌株培養(yǎng)液加入2毫升(45℃)含組氨酸/生物素的頂層瓊脂中，充分混勻后，倒入低限葡萄糖平板上，于37℃培養(yǎng)48小時(shí)，作菌落計(jì)數(shù)。
結(jié)果在不加入S9的低限葡萄糖平板上，自發(fā)回變菌落數(shù)分別為
TA9781.3±29.7 TA9836.3±15.3
TA100127.7±50.0TA102231.3±13.5
(3)致突變性鑒定用作陽(yáng)性對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)致突變物，對(duì)各菌株作平板摻入試驗(yàn)，以鑒定菌株的致突變性，不加S9；結(jié)果如下
TA973264.0±74.9TA98171.0±9.6
TA100895.7±48.5TA1021342.7±12.6
上述鑒定結(jié)果表明，本試驗(yàn)所用的各種菌株均符合實(shí)驗(yàn)要求。
參照Ames試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)劑量，分別設(shè)5000、500、50、5及0.5微克/皿。
代謝活化劑的制備參照Maron DM等“Revised method for the Salmonellamutagenicity test.Muta Res.1983，113”，選用150-180克雄性SD大鼠，按500mg/kg體重腹腔內(nèi)一次注射多氯聯(lián)苯(Arrclod-1254)誘導(dǎo)5天后，處死動(dòng)物，制備S9。具體步驟是用沌器擊昏大鼠，斷頭放血，消毒，剪開(kāi)表皮，打開(kāi)腹腔，用冷凍0.1M KCl門脈灌注，至肝為無(wú)色最佳，摘出肝臟，稱重，去除結(jié)締組織，吸干后，分杯裝入消毒杯中，按肝重3倍加0.1M KCl溶液。用消毒剪刀剪碎，放入勻漿器中，在冷凍條件下勻漿肝臟，然后在4℃下，以9000g離心20分鐘。取上清液分裝后凍存于-80℃冰箱或液氮中。
(2)代謝活化劑質(zhì)量鑒定包括a)蛋白質(zhì)含量測(cè)定；b)酶活化性P-450測(cè)定；c)致突變性測(cè)定；d)細(xì)菌培養(yǎng)
方法根據(jù)新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則(藥學(xué)、藥理、毒理學(xué)，1993)的要求，采用標(biāo)準(zhǔn)平板滲入法，在加和不加代謝活化系統(tǒng)(S9Mix)條件下進(jìn)行，樣品的各種劑量設(shè)三個(gè)平行平皿，取其均值及標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)。
結(jié)果如表1所示。
Ames試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)，是以比較各劑量的回變菌落數(shù)為基礎(chǔ)，如大于相當(dāng)于陰性對(duì)照的2倍，并在一定的劑量范圍內(nèi)存在著劑量-反應(yīng)關(guān)系，而又有重現(xiàn)性，則判為陽(yáng)性。
本實(shí)驗(yàn)中各受試物劑量和對(duì)照組的回變菌落數(shù)見(jiàn)表1，結(jié)果顯示，各劑量組受試物對(duì)TA97、TA98、TA100及TA102誘發(fā)的回變菌落數(shù)，在加或不加代謝活化劑(S9)條件下均與自發(fā)回變數(shù)相近(未超過(guò)自發(fā)回變數(shù)2倍)，可判定為陰性結(jié)果。另外，在5000微克/皿劑量組可見(jiàn)受試物有析出，說(shuō)明受試物已配成最大溶解度。
結(jié)果在本實(shí)驗(yàn)條件下，采用標(biāo)準(zhǔn)平板滲入法，槐甙在加或不加S9條件下，對(duì)沙門氏菌無(wú)致突變性。
表1
槐甙對(duì)TA97、TA98、TA100及TA102的致突變性測(cè)試結(jié)果測(cè)試物及劑量 回變菌落數(shù)(個(gè)/皿，x±s)(ug/皿) TA97TA98TA100 TA102
-S9 +S9-S9 +S9-S9 +S9 -S9+S9測(cè)試樣品 5000 99.3±4.9 79.7±23.5 23.0±7.527.0±7.9152.7±12.0 211.7±54.2220.0±26.2282.0±5.6
500 9.0±10.5 76.7±8.143.0±7.227.0±3.6133.7±29.5 232.3±50.3254.7±27.2307.0±56.6
50106.0±14.4 54.3±7.825.0±2.736.7±5.0199.0±46.7 222.7±25.7230.7±23.2234.3±62.8
5 84.0±28.693.0±10.4 35.3±12.9 34.7±5.9204.0±8.7207.3±22.1241.3±50.2270.0±25.0
0.5 82.7±2.5 86.7±9.029.0±9.534.3±6.1188.7±24.8 188.7±5.1 255.0±13.9280.0±8.7雙蒸水0.1ml/皿 81.3±29.764.2±24.2 36.3±15.3 42.0±5.0127.7±50.0 204.3±19.47 231.3±13.5274.7±24.6DMSO 0.1ml/皿 97.0±2.7 64.7±25.7 26.7±4.733.3±7.6182.3±4.0175.3±26.6227.0±32.1260.0±31.2陽(yáng)性對(duì)照 0.1ml/皿 3264.0±74.9 706.7±35.8 171.0±9.6 177.3±17.1 895.7±48.5 798.0±0.0 1342.7±12.6 966.7±90.0陽(yáng)性對(duì)照物-S9 TA97用阿的平(500μg/皿)、TA98用對(duì)硝基喹啉(200μg/皿)、TA100及TA102均用MMS(1μl/皿)
+S9 TA97、TA98、TA100用2-AF(10ug/皿)，TA102用1，8-二羥蒽酯(50ug/皿)
藥理實(shí)施例5嚙齒類動(dòng)物微核試驗(yàn)
本實(shí)施例旨在應(yīng)用小鼠骨髓微核試驗(yàn)方法對(duì)槐甙進(jìn)行致突變性研究。結(jié)果顯示在所設(shè)劑量范圍(1250～5000mg/kg，相當(dāng)于1/4、1/2、1/1MTD)內(nèi)，各劑量組微核率(‰)與陰性對(duì)照組相比較，無(wú)顯著差異(P＞0.05)，表明該受試物對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率無(wú)誘發(fā)效應(yīng)。
試驗(yàn)?zāi)康挠^察槐甙對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞有無(wú)致微核效應(yīng)。
受試物槐甙；溶劑雙蒸水
對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照采用環(huán)磷酰胺，陰性對(duì)照采用蒸餾水。
選用性成熟ICR小鼠共50只，每組10只，雌雄各半，體重分別為雌性23.17±1.08g，雄性25.9±0.99g。由上海市西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字第153號(hào)。
劑量根據(jù)測(cè)試單位提供小鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)結(jié)果MTD數(shù)據(jù)(5000mg/kg體重)，本試驗(yàn)設(shè)5000mg/kg體重、2500mg/kg體重、1250mg/kg體重共3個(gè)劑量組。
對(duì)照組陰性用蒸餾水，陽(yáng)性用環(huán)磷酰胺40mg/kg體重；
給藥容量0.1ml/10g體重
受試物和陰性對(duì)照物經(jīng)口灌胃一次給予，陽(yáng)性對(duì)照物經(jīng)腹腔注射一次給藥。
骨髓采樣時(shí)間經(jīng)預(yù)試驗(yàn)受試物誘發(fā)的微核率于24，48和72小時(shí)無(wú)顯著性差異，因此確定正式試驗(yàn)的骨髓采樣時(shí)間為給藥后48小時(shí)。
標(biāo)本制作取胸骨，將骨髓擠出后加1滴小牛血清攪勻，每只動(dòng)物制2張涂片，固定后用pH6.8的Giemsa染液染色。
鏡檢每只動(dòng)物鏡檢1000個(gè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，計(jì)數(shù)含微核的PCE數(shù)(MNPCE)，計(jì)算微核發(fā)生率(‰)，同時(shí)計(jì)數(shù)正染紅細(xì)胞(NCE)，求PCE/NCE值。
結(jié)果
表2 槐甙對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞的微核效應(yīng)
組別 動(dòng)物數(shù) 性別 觀察PCE數(shù) 微核率 PCE
(只)(個(gè))(x±s，‰) /NCE
(x±s)
1250mg/kg5雌 50001.00±0.71 1.00±0.00
5雄 50000.60±0.55 1.00±0.00
1250mg/kg5雌 50001.20±0.45 1.09±0.05
5雄 50001.60±1.34 1.08±0.12
1250mg/kg5雌 50001.20±0.84 0.97±0.06
5雄 50001.20±0.45 0.99±0.02
陰性對(duì)照 5雌 50000.80±0.84 1.00±0.00
5雄 50001.40±0.55 1.00±0.00
陽(yáng)性對(duì)照 5雌 500036.15±5.19* 0.99±0.02
5雄 500039.92±1.87* 1.00±0.00
*與陰性組相比P＜0.01
結(jié)論試驗(yàn)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，樣品槐甙各劑量組的微核誘發(fā)率(‰)與陰性組相比較，無(wú)顯著差異(P＞0.05)，表明在設(shè)計(jì)劑量范圍內(nèi)，該樣品對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞無(wú)誘發(fā)微核效應(yīng)。
臨床實(shí)施例1
選擇22例絕經(jīng)后婦女，年齡47-73歲，絕經(jīng)年齡46-53歲，她們的腰椎(L1、L2、L3、L4)骨密度低于一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差以下。每日口服槐甙50mg膠囊一次，并停用其它治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。治療前后檢查腰椎和前臂骨密度，血清E2、T、FSH、OC、PC-I、尿D-Pyr，觀察治療前后腰背靜息痛和運(yùn)動(dòng)痛。
結(jié)果
(1)對(duì)骨密度的影響
槐甙治療前后腰椎骨密度有普遍提高，其中L1、L3和L2-4骨密度有顯著提高，p＜0.05。前臂骨密度無(wú)明顯變化。
(2)槐甙對(duì)骨代謝的影響
槐甙能顯著減少尿脫氧吡啶酚(D-Pyr)的排泄，p＜0.05。輕度提高0C、PC-I的水平，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
(3)槐甙對(duì)性激素的影響
槐甙能顯著減少T和FSH在血中的水平，p＜0.05。輕度提高E2在血中的水平，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
(4)槐甙對(duì)骨質(zhì)疏松癥引起的腰背疼痛的影響
評(píng)分等級(jí)無(wú)疼痛，0分；輕度疼痛，1分；中度疼痛，2分；嚴(yán)重疼痛，3分。
槐甙能顯著減輕由骨質(zhì)疏松癥引起的腰背疼痛，p＜0.05。
(5)槐甙的安全性觀察
本組22例婦女連續(xù)服用槐甙50mg/天，3個(gè)月，無(wú)一例發(fā)生陰道出血，乳房脹痛，水腫、眩暈、瘙癢、發(fā)疹、惡心和抑郁等副作用。
綜上所述，本發(fā)明者經(jīng)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)了槐甙在替代雌激素中的應(yīng)用，它具有人體雌激素的有益作用，但無(wú)人體雌激素對(duì)子宮、乳房等的副作用，能治療和預(yù)防婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，同時(shí)能治療婦女更年期綜合癥、乳房小葉增生、降血脂，并能治療骨質(zhì)疏松癥引起的腰背疼痛。另外，槐甙來(lái)源豐富，提取方便，純度高，價(jià)格便宜，其市場(chǎng)前景相當(dāng)廣闊。
權(quán)利要求
1.一種下式槐甙在制備治療與雌激素缺乏相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用
3-[4-(β-D-毗喃葡萄糖基)-苯基]5，7-二氫-4H-1-苯并毗喃-4-酮(4’，5，7-三羥基異黃酮-4’-D-葡糖苷。
2.根據(jù)權(quán)利要1所述的應(yīng)用，其中所述的疾病選自絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥、更年期綜合癥和乳房小葉增生。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述的疾病是絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述的槐甙從大豆中提取得到。
全文摘要
本發(fā)明涉及槐甙在制備治療與雌激素缺乏相關(guān)疾病,特別是絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥的藥物中的應(yīng)用,其療效顯著,但沒(méi)有動(dòng)物體雌激素對(duì)子宮、乳房等的副作用,提取方便,來(lái)源豐富,有著很廣闊的市場(chǎng)前景。
文檔編號(hào)A61K31/7042GK1389210SQ0111308
公開(kāi)日2003年1月8日 申請(qǐng)日期2001年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月6日
發(fā)明者杜寧, 王建中, 葉劍璆 申請(qǐng)人:杜寧