絞股藍(lán)皂苷XLV Ed及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】絞股藍(lán)皂苷XLV?Ed及其制備方法，涉及絞股藍(lán)。所述絞股藍(lán)皂苷XLV?Ed的名稱(chēng)為2-羥基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人參二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式為C42H72O14，分子量800。所述絞股藍(lán)皂苷XLV?Ed的制備方法：1)制備絞股藍(lán)總皂苷；2)用酶法轉(zhuǎn)化絞股藍(lán)總皂苷；3)制備絞股藍(lán)皂苷XLV?Ed。利用酶法轉(zhuǎn)化法制備絞股藍(lán)皂苷XLV?Ed，以絞股藍(lán)為原料，在我國(guó)分布廣種植面積大，價(jià)廉易得，資源豐富，是生物藥物和功能性食品開(kāi)發(fā)應(yīng)用的良好材料。酶法轉(zhuǎn)化制備方法設(shè)備要求簡(jiǎn)單，工藝簡(jiǎn)單，容易控制和擴(kuò)大規(guī)模，且制備的絞股藍(lán)皂苷XLV?Ed純度高，副產(chǎn)物少。
【專(zhuān)利說(shuō)明】絞股藍(lán)皂苷XLV Ed及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及絞股藍(lán)，尤其是涉及一種絞股藍(lán)皂苷XLV Ed及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]絞股藍(lán)[GynostemmaPentaphyllum(Thunb)Makin0.]為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物,其主要藥效成分為絞股藍(lán)皂苷(gypenoside，GYP)。絞股藍(lán)皂苷具有與人參皂苷相同的達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜的骨架，顯示抗腫瘤、防止衰老、降低血糖血脂、鎮(zhèn)靜止痛及抗?jié)兊人幚砘钚?，且毒副作用小，是近年?lái)國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
[0003]對(duì)人參皂苷藥理活性、構(gòu)效關(guān)系及代謝動(dòng)力學(xué)的研究表明，人參皂苷的藥理活性與其糖鏈有密切的關(guān)系，低糖鏈皂苷及苷元的活性較多糖鏈皂苷有大幅度提高，因此目前國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者都致力于低糖鏈絞股藍(lán)皂苷XLV Ed的研究開(kāi)發(fā)。由多糖鏈原生皂苷制備低糖鏈絞股藍(lán)皂苷XLV Ed的方法有化學(xué)方法的酸堿水解、乙酰解和生物方法的微生物轉(zhuǎn)化、酶法轉(zhuǎn)化等多種方法，化學(xué)水解條件劇烈易導(dǎo)致苷元結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，微生物轉(zhuǎn)化所需步驟多不易控制，因此反應(yīng)條件溫和易控、副產(chǎn)物少的酶水解更容易進(jìn)行。
[0004]人參皂苷的轉(zhuǎn)化研究早期多選用人參和三七，提取總皂苷進(jìn)行轉(zhuǎn)化來(lái)獲得RhpRh2和H901等稀有皂苷做進(jìn)一步的研究，如中國(guó)專(zhuān)利CN101139562公開(kāi)利用弗氏鏈霉菌菌株規(guī)模化發(fā)酵轉(zhuǎn)化各種三七皂苷制備Conpound K(IH901)技術(shù)，中國(guó)專(zhuān)利CN101928671A公開(kāi)利用鏈格孢屬菌發(fā)酵人參莖葉制備人參皂苷Rg3的方法等。絞股藍(lán)是五加科外唯一富含人參皂苷的植物，在我國(guó)長(zhǎng)江流域以南有大面積分布和種植，相對(duì)于人參和三七來(lái)源更為豐富，且價(jià)廉易得，對(duì)大規(guī)模的研究和生產(chǎn)制備更為便利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種絞股藍(lán)皂苷XLV Ed及其制備方法。
[0006]所述絞股藍(lán)皂苷XLV Ed的名稱(chēng)為2-羥基-3-0- β -D-吡喃葡萄糖_20 (S)-原人參二醇-20-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，分子式為C42H72O14,分子量800，結(jié)構(gòu)式為:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.絞股藍(lán)皂苷XLVEd，其特征在于其名稱(chēng)為2-羥基-3-0-β -D-吡喃葡萄糖-20⑶-原人參二醇-20-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，分子式為C42H72O14,分子量800，結(jié)構(gòu)式為:

2.如權(quán)利要求1所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于包括以下步驟: 1)制備絞股藍(lán)總皂苷； 2)用酶法轉(zhuǎn)化絞股藍(lán)總皂苷； 3)制備絞股藍(lán)皂苷XLVEd。
3.如權(quán)利要求2所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述制備絞股藍(lán)總皂苷的具體方法為:將絞股藍(lán)粉末用乙醇溶液水浴提取，提取液減壓濃縮至浸膏狀得到絞股藍(lán)提取物，將絞股藍(lán)提取物用蒸餾水分散懸浮，石油醚萃取脫脂脫色后再用正丁醇萃取至正丁醇層無(wú)色，合并正丁醇層減壓濃縮干，水分散后上樣到大孔樹(shù)脂，用乙醇溶液洗去雜質(zhì)并洗脫總皂苷，洗脫液濃縮干燥得到絞股藍(lán)總皂苷。
4.如權(quán)利要求3所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于所述將絞股藍(lán)粉末用乙醇溶液水浴提取的具體方法為:將絞股藍(lán)粉末用乙醇溶液在水浴鍋中提取，乙醇溶液采用70%~95%乙醇溶液，乙醇溶液的用量按質(zhì)量比為絞股藍(lán)粉末的10~20倍，所述水浴鍋的溫度為45°C ;所述提取提取2~4次，每次提取時(shí)間為12~24h。
5.如權(quán)利要求2所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于在步驟I)中，所述大孔樹(shù)脂采用DM-130大孔樹(shù)脂、AB-8大孔樹(shù)脂、D-1Ol大孔樹(shù)脂、HP-20大孔樹(shù)脂中的一種；所述用乙醇溶液洗去雜質(zhì)并洗脫總皂苷，可先用低濃度乙醇溶液洗去雜質(zhì)，再用高濃度乙醇溶液洗脫總皂苷；所述先用低濃度乙醇溶液洗去雜質(zhì)可采用10%~30%乙醇溶液洗脫3~5個(gè)柱體積，所述高濃度乙醇可采用40%~80%乙醇溶液。
6.如權(quán)利要求2所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述用酶法轉(zhuǎn)化絞股藍(lán)總皂苷的具體方法為:取絞股藍(lán)總皂苷置于三角瓶中，加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液溶解后，加入轉(zhuǎn)化酶，恒溫水浴反應(yīng)后，加入正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮得到酶法轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
7.如權(quán)利要求6所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于所述絞股藍(lán)總皂苷、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的配比為1.5g: 150mL，其中絞股藍(lán)總皂苷以質(zhì)量計(jì)算，磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液以體積計(jì)算，所述磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液pH可為3~7。
8.如權(quán)利要求6所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)化酶選自蝸牛酶、橙皮苷酶、果膠酶、葡萄糖苷酶、纖維素酶、柚皮苷酶中的至少一種；所述轉(zhuǎn)化酶的用量按質(zhì)量百分比可為轉(zhuǎn)化底物的3%~10% ;所述恒溫水浴反應(yīng)的溫度可為45°C，恒溫水浴反應(yīng)的時(shí)間可為36~60h ;所述萃取可萃取至少2次。
9.如權(quán)利要求2所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述制備絞股藍(lán)皂苷XLV Ed的具體方法為:將步驟2)得到的酶法轉(zhuǎn)化產(chǎn)物用正相硅膠柱層析，以氯仿:甲醇:水梯度洗脫，收集洗脫的組分，再用凝膠柱層析，有機(jī)溶劑洗脫，所得組分用反相硅膠柱層析，甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到絞股藍(lán)皂苷XLV Ed。
10.如權(quán)利要求9所述絞股藍(lán)皂苷XLVEd的制備方法，其特征在于所述正相硅膠柱收集氯仿:甲醇:水的體積比為(150~80): 35: 10洗脫的組分；所述有機(jī)溶劑可選自乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇中的至少一種；所述甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液，是收集40%~80%甲醇洗脫的部分。
【文檔編號(hào)】C07J17/00GK103923149SQ201410149616
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月15日
【發(fā)明者】明艷林, 鄭志忠, 張樹(shù)峰, 童慶宣, 劉韶松, 陳良華, 鄭國(guó)華 申請(qǐng)人:廈門(mén)華僑亞熱帶植物引種園