專利名稱：一種粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，具體涉及一種粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，。
背景技術(shù)：
2. 1納米脂質(zhì)體納米脂質(zhì)體是磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，它具有一些類似生物膜的特性，例如極好的親水性、親脂性和天然的靶向性、長效性、包容性等，并且納米脂質(zhì)體都是無毒、無免疫原性的，它們吸收速度快、生物利用度高、給藥方便。脂質(zhì)體的效用與其粒徑呈反相關(guān)的關(guān)系，一般說來，脂質(zhì)體粒徑越小，其具有的表面效應(yīng)和小尺寸效應(yīng)所達到的效果則越大，即脂質(zhì)體所載的藥物能夠?qū)ζ渌幬镫y以到達的部位起到很好的補充治療作用，并且有更多的處于表面的活性物質(zhì)原子能夠參與功效反應(yīng)，因此，制備粒徑小且分布均一的脂質(zhì)體已經(jīng)成為目前脂質(zhì)體研究中的重要方向。近年來，人們對脂質(zhì)體的制備方法進行了大量的探索，主要有逆向蒸發(fā)法、注入法、二次乳化法、冷凍熔融法、薄膜分散法、表面活性劑處理法、超臨界(X)2流體技術(shù)、主動載藥法、薄膜接觸器法、微通道法、納米反應(yīng)器法等，但這些方法都具有粒徑不可控制、約束效果不明顯、操作過于復(fù)雜等不足，例如，逆向蒸發(fā)法，此法制得的脂質(zhì)體粒徑較大，不易達到納米級，冷凍熔融法，過于復(fù)雜，且過程需要對脂質(zhì)體進行冷凍和復(fù)融以完成制備，其精密度很高，不易操作，并且制得的脂質(zhì)體粒徑也不能進行控制。2. 2 凝膠交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex)是一種由高分子化合物葡聚糖和環(huán)氧氯丙烷相互交聯(lián)的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物，葡聚糖-瓊脂糖復(fù)合凝膠(Superdex)是一種用葡聚糖以共價方式交聯(lián)到瓊脂糖上的復(fù)合凝膠，凝膠均能吸水，吸水后體積泡漲，這是由于它分子中具有許多親水基團，吸水后使它的網(wǎng)孔張開，這些網(wǎng)孔能把水溶液中不同大小分子量的溶質(zhì)區(qū)分篩開， 因而起到“分子篩”的功能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對脂質(zhì)體制備方法存在的問題以及在對凝膠特性深入研究的基礎(chǔ)上，提出了一種新的控制脂質(zhì)體粒徑的方法，得到一系列從百納米級到十納米級的載藥脂質(zhì)體， 利用凝膠網(wǎng)孔的孔徑約束使脂質(zhì)體的制備真正達到粒徑可控。本發(fā)明中凝膠不是用于分離，而是利用其內(nèi)部狹窄的空間，在制備過程中對納米脂質(zhì)體的粒徑加以限制，根據(jù)脂質(zhì)體成品的功能及其需求有目的的對納米脂質(zhì)體的粒徑進行可控調(diào)節(jié)。本發(fā)明采用如下技術(shù)方案粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)對凝膠進行前處理稱取3-5g凝膠，加入30_50mL蒸餾水，沸水浴中溶脹1_2
3小時,傾去上清液及細顆粒,并蒸餾水清洗2-4遍備用；
(2)去離子水中加入3-5ml處理好的凝膠，并加入0. 8_lg凍干保護劑，700_750r/ min攪拌加熱至70-74°C構(gòu)成水相，控制水與凝膠體積比為=3.5-4 I ;凝膠的體積與凍干保護劑質(zhì)量的比為4-5 I ；
(3)將脂類和藥物加入到13-181111溶劑中，超聲加熱處理，超聲頻率為70%-80%， 加熱溫度50-55°C，處理時間2-3小時，使其充分溶解，構(gòu)成有機相；
(4)用玻璃注射器緩慢將有機相注入水相中，控制有機相與水相的體積比為 2 2.8-3. 2，攪拌蒸發(fā)至溶液體系8-10mL;
(5)攪拌完成后向步驟⑷溶液體系中加入冰水并至于室溫下，繼續(xù)攪拌 10-15min ；
(6)將處理過的脂質(zhì)體通過微孔濾膜進行真空抽濾，得到納米脂質(zhì)體純品；
(7)將脂質(zhì)體純品在_15°C —20°C下預(yù)凍3-4小時，接著在_40°C —50°C下真空冷凍干燥大于24小時，即得脂質(zhì)體干粉劑成品。
所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的凍干保護劑選自海藻糖或者甘露醇。
所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中凝膠選自交聯(lián)葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、交聯(lián)葡聚糖-瓊脂糖復(fù)合凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和聚苯乙烯凝膠。
所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟(3)中藥物選自任意的水溶或脂溶性藥物，所述的脂類選自12個碳鏈以上的脂肪酸甘油酯、脂肪酸、Compritol ATO 888中的一種或幾種混合物。
所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟(3)中溶劑為乙醇或乙醚。
本發(fā)明的優(yōu)點
(I)達到了納米脂質(zhì)體粒徑制備可控的目的，在納米脂質(zhì)體制備的過程中可以根據(jù)需求加入不同型號的凝膠制備出不同粒徑大小的納米脂質(zhì)體，此方法效率高，制備過程簡單方便，可重復(fù)性高。
(2)通過在制備的過程中加入凝膠，顯著的改善了脂質(zhì)體的性狀，改善后的納米脂質(zhì)體邊緣清晰，分散度高，脂質(zhì)體分布均勻且成正球狀，是性狀極優(yōu)的納米脂質(zhì)體。


圖I為本發(fā)明方法的制備流程圖。
圖2為實施例I方法制備的納米脂質(zhì)體電鏡圖，圖中A、對照品SO、B. Sephadex GlOO 凝膠制備 SI、C、Sephadex G75 凝膠制備 S2、D、SephadexG50 凝膠制備 S3、E、 SephadexG25 凝膠制備 S4、F、SephadexGlO 凝膠制備 S5。
圖3為實施例2方法制備的納米脂質(zhì)體電鏡圖，圖中A、Superdex 200凝膠制備 S6、B、Superdex 75 凝膠制備 S7、C、Superdex 30 凝膠制備 S8。
圖4為實施例3方法制備的納米脂質(zhì)體電鏡圖，圖中A、SephadexG75凝膠制備S9、B、SephadexG50 凝膠制備 S10、C、Sephadex G25 凝膠制備 SI I。
圖5為脂質(zhì)體成品HPLC-ELSD色譜圖(所載藥物為銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B)。圖6為本發(fā)明所用藥品(銀杏內(nèi)酯A和銀杏內(nèi)酯B)的標準曲線圖。圖7為納米脂質(zhì)體的粒徑和包封率的走勢圖，圖中A、實施例1方法制備的納米脂質(zhì)體粒徑和包封率走勢圖，B、實施例2方法制備的納米脂質(zhì)體粒徑和包封率走勢圖，C、實施例3方法制備的納米脂質(zhì)體粒徑和包封率走勢圖。圖8為凝膠約束納米脂質(zhì)體粒徑示意圖。
具體實施例方式實施例1 乙醇注入法輔以交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex)制備銀杏內(nèi)酯B納米脂質(zhì)體(1)對凝膠進行前處理分別稱取kphadex G10、G25、G50、G75、GlOO適量，加入 50mL蒸餾水，沸水浴中溶脹1小時，傾去上清液及細顆粒，并加入適量蒸餾水清洗3遍；(2) 20mL去離子水中分別加入5mL處理好5種交聯(lián)葡聚糖凝膠，并加入Ig海藻糖， 750r/min攪拌加熱至74°C構(gòu)成水相；(3)將卵磷脂、腦磷脂、膽固醇和銀杏內(nèi)酯B加入到15mL乙醇中，超聲處理，使其充分溶解，構(gòu)成有機相；(4)用玻璃注射器緩慢將有機相注入水相中，蒸發(fā)30-45min至IOmL ；(5)向反應(yīng)體系中加入20mL冰水至室溫下，繼續(xù)攪拌IOmin ；(6)使用0. 45 μ m的微孔濾膜將處理好的脂質(zhì)體混懸液進行真空抽濾，除去交聯(lián)
葡聚糖凝膠；(7)將脂質(zhì)體懸液在-20°C下預(yù)凍4小時，接著將其置于-40°C下繼續(xù)冷凍干燥大于M小時即得5種銀杏內(nèi)酯B納米脂質(zhì)體干粉實驗品Si、S2、S3、S3、S4、S5。實施例2 乙醇注入法輔以交聯(lián)葡聚糖-瓊脂糖復(fù)合凝膠(Superdex)制備銀杏內(nèi)酯B納米脂質(zhì)體(1)對凝膠進行前處理分別稱取Superdex 200,75,30適量，加入50mL蒸餾水， 沸水浴中溶脹1小時，傾去上清液及細顆粒，并加入適量蒸餾水清洗3遍；(2) 20mL去離子水中分別加入5mL處理好3種交聯(lián)葡聚糖-瓊脂糖復(fù)合凝膠，并加入Ig海藻糖，750r/min攪拌加熱至74°C構(gòu)成水相；(3)將卵磷脂、腦磷脂、膽固醇和銀杏內(nèi)酯B加入到15mL乙醇中，超聲處理，使其充分溶解，構(gòu)成有機相；(4)用玻璃注射器緩慢將有機相注入水相中，蒸發(fā)30-45min至IOmL ；(5)向反應(yīng)體系中加入20mL冰水至室溫下，繼續(xù)攪拌lOmin，(6)使用0. 65 μ m的微孔濾膜將處理好的脂質(zhì)體混懸液進行真空抽濾，除去交聯(lián)葡聚糖-瓊脂糖復(fù)合凝膠；(7)將脂質(zhì)體懸液在_20°C下預(yù)凍4小時，接著將其置于_40°C下繼續(xù)冷凍干燥大于M小時即得3種銀杏內(nèi)酯B納米脂質(zhì)體干粉實驗品S6、S7、S8。實施例3 乙醚注入法輔以交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex)制備銀杏內(nèi)酯B納米脂質(zhì)體(1)對凝膠進行前處理分別稱取葡聚糖G75、G50、G25各6. 5g、10g、20g，加入50mL蒸餾水，沸水浴中溶脹，傾去上清液及細顆粒，并加入適量蒸餾水清洗3遍；
(2) 30mL去離子水中分別加入5mL處理好的三種交聯(lián)葡聚糖凝膠,750r/min攪拌并加熱至74°C構(gòu)成水相；
(3)將脂質(zhì)材料加入到20mL乙醚中，超聲處理，使其充分溶解，接著加入甲醇溶解的IOOmg銀杏內(nèi)酯B構(gòu)成有機相；
(4)用玻璃注射器緩慢將有機相注入水相中，蒸發(fā)至IOmL ；
(5)向脂質(zhì)體懸液中加入20mL冰水至室溫下,繼續(xù)攪拌IOmin ；
(5)使用0. 45 y m微孔濾膜對脂質(zhì)體懸液進行真空抽濾，除去交聯(lián)葡聚糖凝膠，即得3種納米脂質(zhì)體混懸液實驗品S9、S10、Sll0
表I為本實施例I、實施例2和實施例3中使用的凝膠規(guī)格和分離范圍
權(quán)利要求
1.一種粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)對凝膠進行前處理稱取3-5g凝膠，加入30-50mL蒸餾水，沸水浴中溶脹1_2小時，傾去上清液及細顆粒，并蒸餾水清洗2-4遍備用；(2)去離子水中加入3-5ml處理好的凝膠，并加入0.8-lg凍干保護劑，700-750 r/ min攪拌加熱至70-74°C構(gòu)成水相，控制水與凝膠體積比為=3. 5-4 1 ；凝膠的體積與凍干保護劑質(zhì)量的比為4-5 1 ；(3)將脂類和藥物加入到13-18ml溶劑中，超聲加熱處理，超聲頻率為70%-80%，加熱溫度50-55°C，處理時間2-3小時，使其充分溶解，構(gòu)成有機相；(4)用玻璃注射器緩慢將有機相注入水相中，控制有機相與水相的體積比為2 2. 8-3. 2，攪拌蒸發(fā)至溶液體系8-10 mL ；(5)攪拌完成后向步驟(4)溶液體系中加入冰水并至于室溫下，繼續(xù)攪拌10-15min；(6)將處理過的脂質(zhì)體通過微孔濾膜進行真空抽濾，得到納米脂質(zhì)體純品；(7)將脂質(zhì)體純品在_15°C-20°C下預(yù)凍3-4小時，接著在_40°C -50°C下真空冷凍干燥大于M小時，即得脂質(zhì)體干粉劑成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的凍干保護劑選自海藻糖或者甘露醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中凝膠選自交聯(lián)葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、交聯(lián)葡聚糖-瓊脂糖復(fù)合凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和聚苯乙烯凝膠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟(3)中藥物選自任意的水溶或脂溶性藥物，所述的脂類選自12個碳鏈以上的脂肪酸甘油酯、脂肪酸、Compritol ATO 888中的一種或幾種混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述的步驟(3)中溶劑為乙醇或乙醚。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種粒徑可控的載藥納米脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟對凝膠進行前處理、制備水相和有機相，然后將有機相注入水相中，攪拌蒸發(fā)；加入冰水并至于室溫下，繼續(xù)攪拌、真空抽濾，最后預(yù)凍、真空冷凍即得成品。本發(fā)明達到了納米脂質(zhì)體粒徑制備可控的目的，制備出不同粒徑大小的納米脂質(zhì)體，此方法效率高，制備過程簡單方便，可重復(fù)性高；而且顯著的改善了脂質(zhì)體的性狀，改善后的納米脂質(zhì)體邊緣清晰，分散度高。
文檔編號A61K9/127GK102525925SQ20111044087
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者丁兢娜, 佟媛, 徐存吉, 李紹飛, 江誠, 祝慶軍, 陳彥 申請人:安徽大學(xué)