專利名稱：一種含tpgs的脂質(zhì)體組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含TPGS的脂質(zhì)體組合物，以及由其制備得到的載藥脂質(zhì)體。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體主要由磷脂和膽固醇組成的類似細(xì)胞膜的雙分子層結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)體可分為三 類小單室(層)脂質(zhì)體，粒徑為20 SOnm ；大單室脂質(zhì)體，粒徑約為100 IOOOnm ；多室 (層)脂質(zhì)體，粒徑約為1000 5000nm。脂質(zhì)體的發(fā)展經(jīng)歷了普通脂質(zhì)體，PEG修飾脂質(zhì) 體，到受體或配體修飾脂質(zhì)體。目前臨床應(yīng)用的脂質(zhì)體主要為普通脂質(zhì)體(如DaimoXome) 和PEG修飾脂質(zhì)體(如Doxil)。與普通脂質(zhì)體相比，PEG修飾脂質(zhì)體具有降低脂質(zhì)體的粒 徑，提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，延長體循環(huán)時(shí)間，提高抗癌藥物靶向性等優(yōu)點(diǎn)。常用的脂質(zhì)體PEG 修飾劑主要為PEG (2000) -DSPE，如PEG修飾阿霉素脂質(zhì)體上市產(chǎn)品Doxil ；此外尚有一些含 PEG 的表面活性劑，如 Tween80，Poloxmerl88，等。脂質(zhì)體的制備方法有多種，根據(jù)藥物的性質(zhì)或需要進(jìn)行選擇。(1)薄膜分散法系 將磷脂等膜材溶于適量的氯仿或其它有機(jī)溶劑中，脂溶性藥物可加在有機(jī)溶劑中，然后在 減壓旋轉(zhuǎn)下除去溶劑，使脂質(zhì)在器壁形成薄膜后，加入不含有或者含有水溶性藥物的緩沖 溶液或其他溶液，進(jìn)行振搖，則可形成多層脂質(zhì)體。(2)注入法將磷脂等脂質(zhì)材料和脂溶 性藥物溶于有機(jī)溶劑中(油相)，然后把油相均速注射到水相(含有或不含有水溶性藥物) 中，除盡有機(jī)溶劑得到脂質(zhì)體的方法。根據(jù)溶劑的不同可分為乙醇或叔丁醇注入法和乙醚 注入法等。(3)逆相蒸發(fā)法系將磷脂等脂質(zhì)材料溶于有機(jī)溶劑，如氯仿中，再按一定比例 與含藥的緩沖液混合、乳化，然后減壓蒸去有機(jī)溶劑即可形成脂質(zhì)體。該法適合于水溶性藥 物、大分子活性物質(zhì)，如胰島素等的脂質(zhì)體制備，可提高包封率。此外尚有冷凍干燥法和熔 融法。前面5種方法分散所形成的脂質(zhì)體多為多室脂質(zhì)體，可用各種機(jī)械方法進(jìn)一步分散， 以減小粒徑并形成小單室脂質(zhì)體a)超聲法將得到的大多層脂質(zhì)體用超聲波儀超聲處理， 根據(jù)所采用超聲的強(qiáng)度和作用時(shí)間長短而獲得小單層脂質(zhì)體。b)勻化法將得到的大多層脂 質(zhì)體通過組織搗碎機(jī)或高壓乳勻機(jī)勻化成較小粒徑的脂質(zhì)體。c)擠壓法將得到的大多層 脂質(zhì)體在高壓下連續(xù)通過孔徑1. 0-0. 05 μ m的聚碳酸纖維膜后，脂質(zhì)體的大小分布趨于均 一，且多為單室脂質(zhì)體。在制備載藥脂質(zhì)體時(shí)，根據(jù)藥物的性質(zhì)，裝載的機(jī)理不同，可分為“主動(dòng)載藥”與 “被動(dòng)載藥”兩大類。所謂“被動(dòng)載藥”，即首先將藥物溶于水相或有機(jī)相(脂溶性藥物)中， 然后按所選擇的脂質(zhì)體制備方法制備載藥脂質(zhì)體。對于脂溶性的、與磷脂膜親和力高的藥 物，“被動(dòng)載藥”法較為適用。所謂“主動(dòng)載藥”，即通過脂質(zhì)體內(nèi)外水相的不同離子或化合 物梯度進(jìn)行載藥，主要適用于雙親性的藥物。主動(dòng)載藥法主要包括(I)PH梯度法；(2)硫酸 銨梯度法；(3)醋酸鈣梯度法或其他離子梯度法。硫酸銨梯度法即先將硫酸銨包于脂質(zhì)體內(nèi)水相，然后通過透析、凝膠色譜或超濾 的方法除去脂質(zhì)體外水相的硫酸銨。由于離子對雙分子層滲透系數(shù)的不同，氨分子滲透系 數(shù)(0. 13cm/s)較高，能很快擴(kuò)散到外水相中；H+的滲透系數(shù)遠(yuǎn)小于氨分子，使脂質(zhì)體內(nèi)水相呈酸性，形成PH梯度，梯度大小由[NH4+]外水相/[NH4+]內(nèi)水相比較決定，這樣使藥物逆 硫酸銨梯度載入脂質(zhì)體。藥物進(jìn)入脂質(zhì)體后與SO/—形成的硫酸鹽，對雙分子層滲透系數(shù)降 低，因而使弱堿性藥物具有很高的包封率并具有良好的穩(wěn)定性。醋酸鈣梯度法通過醋酸鈣的跨膜運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的醋酸鈣濃度梯度(內(nèi)部的濃度 高于外部)，使得大量質(zhì)子從脂質(zhì)體內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)到外部產(chǎn)生PH梯度。醋酸的滲透參數(shù) (6. 6 X 10_4Cm · s—1)比Ca2+(2. 5 X KrllCm · s—1)大7個(gè)數(shù)量級，所以Ca2+很少穿越雙分子膜 而留在脂質(zhì)體內(nèi)部，醋酸分子則參與了質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)。醋酸鈣跨膜運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的濃度梯度(內(nèi)部 的濃度高于外部)導(dǎo)致大量質(zhì)子從脂質(zhì)體的內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)到外部產(chǎn)生PH梯度，而pH的不平衡 為包載和聚集弱酸性藥物提供了高效驅(qū)動(dòng)力。主動(dòng)載藥與被動(dòng)載藥的共同特點(diǎn)是在裝載過程中脂質(zhì)體的內(nèi)外水相或雙分子層膜上的藥物濃度基本一致，決定其包封率的因素為藥物與磷脂膜的作用力、膜材的組成、脂 質(zhì)體的內(nèi)水相體積、脂質(zhì)體數(shù)目及藥脂比(藥物與磷脂膜材比)等。維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)是由維生素E琥珀酸酯與聚乙二醇1000經(jīng) 酯化形成的維生素E的水溶性衍生物，包括d-α -維生素E琥珀酸聚乙二醇酯(d-TPGS) 和dl- α -維生素E琥珀酸聚乙二醇酯(dl-TPGS)。Youk等報(bào)道將維生素E制備成TPGS， 具有一定的抗癌作用(Youk HJ, et al. Enhanced anticancer efficacy ofa-tocopheryl succinate by conjugation with polyethylene glycol. JControl Rel,2005,107 43-52.)。Yamagata等研究發(fā)現(xiàn)TPGS可抑制耐藥乳腺癌細(xì)胞MDCK-II中Ρ-gp的作 用而顯著促進(jìn)抗癌藥米托蒽醌的攝取，提高抗癌療效(Yamagata T，et al. Effect of excipients on breastcancer resistance protein substrate uptake activity. J Control Rel，2007，124 :1_5)。Zhao等報(bào)道TPGS可促進(jìn)葉酸修飾PLGA納米粒在腫瘤細(xì) 胞的攝取和藥物的細(xì)胞毒作用(Zhao H, et al. Addition ofTPGS tofolate-conjugated polymer micelles for selective tumor targeting. JBiomed Mater Res A.2008, epub)。Cao等將阿霉素與TPGS通過化學(xué)鍵形成載藥膠束，較游離阿霉素半衰期延長4. 5 倍(Cao N, et al. Doxorubicin conjugated to D-a-tocopheryl polyethylene glycol lOOOsuccinate (TPGS) !Conjugation chemistry,characterization,in vitro andin vivo evaluation。Biomaterials，2008，29 :3856_65)。此外，TPGS 可促進(jìn)藥物的透皮吸收(Chen CH,et al. Simultaneous effects of tocopherylpolyethyIene glycol succinate (TPGS) on local hair growth promotionand systemic absorption of topically applied minoxidil in a mouse model. Int J Pharm. 2005，306 (1-2) :91_8·)并促進(jìn)藥物的 口服吸 收(Mu L，et al. Mixed micelles made of poly (ethyleneglycol)-phosphatidylethano lamine conjugate and d-alpha-tocopheryIpolyethylene glycol 1000 succinate as pharmaceutical nanocarriers forcamptothecin. Int J Pharm. 2005 306(1-2) 142-9.)鑒于TPGS是一種多功能的藥用輔料。本發(fā)明旨在利用TPGS具有親水性的PEG鏈 (分子量1000)和疏水性的維生素E鏈，維生素E的疏水鏈可插入脂質(zhì)體的疏水層，以形成 PEG修飾脂質(zhì)體。同時(shí)利用TPGS的抑制P-gp糖蛋白作用、促進(jìn)細(xì)胞攝取和藥物吸收等特性 而設(shè)計(jì)含TPGS的載藥脂質(zhì)體配方。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的第一個(gè)技術(shù)問題在于提供一種新型的含TPGS的脂質(zhì)體組合物， 其不僅能提高脂質(zhì)體藥物穩(wěn)定性，且能提高藥物的療效。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種含TPGS的脂質(zhì)體組合物，由磷脂類化合物、膽固醇類化合物和TPGS組成，各 組分的重量份比例磷脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為5 95 0 50 0. 1 60。 其中膽固醇類化合物的重量份下限“0”表示可以無限趨近于零，但不為0。本發(fā)明優(yōu)選所述組分的重量份比例磷脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為50 90 10 40 1 40。進(jìn)一步優(yōu)選所述組分的重量份比例磷脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為60 90 10 30 5 30。本發(fā)明所述的磷脂類化合物可選自下列一種或任意幾種的組合磷脂酰膽堿類 (PC)、磷脂酰乙醇胺類(PE)、磷脂酰甘油類(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)等。其中磷脂酰膽堿類 (PC)包括天然來源的磷脂酰膽堿，如蛋黃卵磷脂(EPC)、大豆卵磷脂(SPC)、氫化大豆磷脂 酰膽堿(HSPC)、氫化蛋黃卵磷脂(HEL)、心磷脂(HPC)、腦磷脂(BPC)和肝磷脂(LPC)等；合 成的飽和磷脂酰膽堿如二月桂酸磷脂酰膽堿(DLPC)、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿(DMPC)、二棕 櫚酸磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酸磷脂酰膽堿(DSPC)等；以及合成的不飽和磷脂酰膽堿如 二油酸磷脂酰膽堿(DOPC)等。磷脂酰乙醇胺類(PE)包括二硬脂酸磷脂酰乙醇胺(DSPE)、 二油酸磷脂酰乙醇胺(DOPE)等。磷脂酰甘油類(PG)包括二硬脂酸磷脂酰甘油(DSPG)、二 肉豆蔻酰磷脂甘油(DMPG)等。本發(fā)明所述的磷脂類化合物優(yōu)選磷脂酰膽堿類，更優(yōu)選下列 一種或任意幾種的組合HSPC、DPPC、DSPC、DMPC、EPC、SPC。本發(fā)明所述的膽固醇類化合物可選自下列之一膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯 (CHEMS)、膽固醇硫酸酯鈉、DC-chol (3 β-[N-(N'，N-二甲基胺乙基)胺基甲?；鵠膽固 醇)，優(yōu)選為膽固醇、CHEMS或DC-chol。本發(fā)明要解決的第二個(gè)技術(shù)問題是提供所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物在制備載 藥脂質(zhì)體中的應(yīng)用，即由脂質(zhì)體組合物和藥物制備載藥脂質(zhì)體，該載藥脂質(zhì)體能顯著提高 藥物的療效。本發(fā)明適用的藥物可以是各種類型的藥物，根據(jù)其溶解性能可分為以下幾類水 溶性、雙親性、脂溶性。水溶性藥物包括核酸類、蛋白類及小分子水溶性藥物類如順鉬、卡 鉬、氟尿嘧啶、斑蝥素、去甲斑蝥素、氧化苦參堿等；雙親性藥物包括弱堿性藥物如鹽酸阿 霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸米托蒽醌、硫酸長春新堿、磷酸氯喹、鹽酸表阿霉素等，弱酸性藥 物如潑尼松龍琥珀酸鈉、潑尼松龍磷酸鈉、地塞米松磷酸鈉、氫化可的松琥珀酸鈉、雙氯芬 酸鈉、甲潑尼龍琥珀酸鈉、氯霉素琥珀酸鈉、倍他米松磷酸鈉等；脂溶性藥物包括大黃素、 大黃酸、兩性霉素B、紫杉醇、多烯紫杉醇、維生素C琥珀酸酯，維生素C棕櫚酸酯、維生素E 醋酸酯、維生素A棕櫚酸酯、喜樹堿，羥基喜樹堿等。本發(fā)明優(yōu)選在載藥脂質(zhì)體的制備中，所 述藥物的重量為脂質(zhì)體組合物重量的1 40%，優(yōu)選1 30%，更優(yōu)選1 20%。本發(fā)明具體推薦所述的藥物為大黃素。本發(fā)明具體推薦所述的載藥脂質(zhì)體由下列組分制成蛋黃卵磷脂48 87份，膽固 醇11 24份，TPGS 2 38份，大黃素5份。
本發(fā)明所述的載藥脂質(zhì)體可以采用常規(guī)方法制備，可根據(jù)藥物的性質(zhì)和需要自行 選擇，比如可以使用注入法、薄膜分散法等，藥物的載入方式可以采用主動(dòng)載藥或者被動(dòng)載 藥，一般來說，脂溶性藥物可采用被動(dòng)載藥方式，兩親性藥物可采用主動(dòng)載藥方式，主動(dòng)載 藥方式可根據(jù)藥物性質(zhì)選用硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法等。水溶性藥物既可采用主動(dòng)載 藥方式，也可采用被動(dòng)載藥方式。當(dāng)藥物為雙親性弱堿性藥物時(shí)，推薦通過如下方法進(jìn)行制備將磷脂類化合物、膽 固醇和TPGS溶于乙醇或叔丁醇中，快速注入(NH4)2SOyK溶液中，形成多室脂質(zhì)體，N2下依 次擠壓通過200nm和IOOnm聚碳酸酯膜，得單室脂質(zhì)體。再用蔗糖水溶液或磷酸鹽等緩沖
液超濾置換脂質(zhì)體分散介質(zhì)中的(NH4)2SO4,形成脂質(zhì)體雙分子膜內(nèi)外的NH廣度，得空白
單室脂質(zhì)體；然后將雙親性弱堿性藥物溶于水中，加入空白單室脂質(zhì)體中，37-65°C水浴條 件下，藥物在NH4+梯度的作用下進(jìn)入脂質(zhì)體載藥，得到載藥脂質(zhì)體。當(dāng)藥物為雙親性弱酸性藥物時(shí)，推薦通過如下方法進(jìn)行制備將磷脂類化合物、膽 固醇和TPGS溶于乙醇或叔丁醇中，快速注入醋酸鈣水溶液中，形成多室脂質(zhì)體，N2下依次擠 壓通過200nm和IOOnm聚碳酸酯膜，得單室脂質(zhì)體。再用蔗糖水溶液或醋酸鹽等緩沖液超 濾置換脂質(zhì)體分散介質(zhì)中的醋酸鈣，形成脂質(zhì)體雙分子膜內(nèi)外的鈣離子濃度梯度，得空白 單室脂質(zhì)體；然后將雙親性弱酸性藥物溶于水中，加入空白單室脂質(zhì)體中，37-65°C水浴條 件下，藥物在鈣離子濃度梯度的作用下進(jìn)入脂質(zhì)體載藥，得到載藥脂質(zhì)體。當(dāng)藥物為脂溶性藥物時(shí)，所述的載藥脂質(zhì)體推薦采用如下方法進(jìn)行制備將磷脂 類化合物、膽固醇、TPGS和脂溶性藥物置于反應(yīng)器中，加有機(jī)溶劑(優(yōu)選乙醇和/或氯仿) 進(jìn)行溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜，加生理鹽水或甘油水溶液水化薄膜形成多室脂質(zhì)體，N2 下依次擠壓通過200nm和IOOnm聚碳酸酯膜，得單室載藥脂質(zhì)體。當(dāng)藥物為水溶性藥物時(shí)，所述的載藥脂質(zhì)體推薦采用如下方法制備將磷脂類化 合物、膽固醇類化合物和TPGS置于反應(yīng)器中，加有機(jī)溶劑(優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、乙醇)進(jìn) 行溶解，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜，加含有水溶性藥物的生理鹽水水化薄膜形成多室脂質(zhì)體， N2下依次擠壓通過200nm和IOOnm聚碳酸酯膜，得單室載藥脂質(zhì)體。本發(fā)明制得的載藥脂質(zhì)體適用于注射給藥、口服給藥、皮膚給藥及其它方式給藥。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明利用TPGS的多功能性設(shè)計(jì)PEG 修飾脂質(zhì)體。利用TPGS具有親水性的PEG鏈(分子量1000)和疏水性的維生素E鏈，維生 素E的疏水鏈可插入脂質(zhì)體的疏水層，以形成PEG修飾脂質(zhì)體，提高脂質(zhì)體穩(wěn)定性并具有延 長藥物體循環(huán)。同時(shí)利用TPGS抑制P-gp糖蛋白的作用、促進(jìn)細(xì)胞攝取和藥物吸收等特性而 設(shè)計(jì)含TPGS的載藥脂質(zhì)體配方以提高藥物療效。與現(xiàn)有PEG2000-DSPE修飾脂質(zhì)體相比， 因TPGS中PEG鏈(分子量1000)較PEG2000-DSPE (PEG分子量2000)的PEG鏈短，空間位 阻小，易與細(xì)胞接觸并攝取；且TPGS還具有抑制P-gp的功能，促進(jìn)藥物吸收并具有一定抗 癌作用；同時(shí)TPGS已被FDA批準(zhǔn)作為藥用輔料，價(jià)格較PEG-DSPE便宜，其在脂質(zhì)體的應(yīng)用 將在很大程度上降低生產(chǎn)成本?？傊?，本發(fā)明所述的脂質(zhì)體組合物和載藥脂質(zhì)體，由于添加 了 TPGS，更有利于發(fā)揮藥物療效。


圖1為PEG-DSPE修飾的大黃素脂質(zhì)體、TPGS修飾的大黃素脂質(zhì)體和游離大黃素藥物與L1210細(xì)胞作用24h的細(xì)胞毒作用圖；圖2為PEG-DSPE修飾的大黃素脂質(zhì)體、TPGS修飾的大黃素脂質(zhì)體和游離大黃素 藥物與L1210細(xì)胞作用48h的細(xì)胞毒作用圖；圖3為PEG-DSPE修飾的大黃素脂質(zhì)體、TPGS修飾的大黃素脂質(zhì)體和游離大黃素 藥物與L1210細(xì)胞作用72h的細(xì)胞毒作用圖。
具體實(shí)施例方式下面以具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限 于此實(shí)施例1 含TPGS的大黃素脂質(zhì)體配方表1含TPGS的大黃素脂質(zhì)體配方
權(quán)利要求
一種含TPGS的脂質(zhì)體組合物，由磷脂類化合物、膽固醇類化合物和TPGS組成，各組分的重量份比例磷脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為5～95∶0～50∶0.1～60。
2.如權(quán)利要求1所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述組分的重量份比例磷 脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為50 90 10 40 1 40。
3.如權(quán)利要求2所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述組分的重量份比例磷 脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為60 90 10 30 5 30。
4.如權(quán)利要求1 3之一所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的磷脂類化 合物選自下列一種或任意幾種的組合磷脂酰膽堿類、磷脂酰乙醇胺類、磷脂酰甘油類、磷 脂酰絲氨酸類。
5.如權(quán)利要求4所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的磷脂類化合物選自 下列之一蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酸磷脂酰膽堿、二棕櫚 酸磷脂酰膽堿、二硬脂酸磷脂酰膽堿。
6.如權(quán)利要求1 3之一所述的脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的膽固醇類化合物選 自下列之一膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯、膽固醇硫酸酯鈉、DC-chol。
7.如權(quán)利要求1所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物在制備載藥脂質(zhì)體中的應(yīng)用，其特征在 于所述的藥物為雙親性藥物、水溶性藥物或脂溶性藥物，所述藥物的重量為脂質(zhì)體組合物 重量的1 40%。
8.如權(quán)利要求7所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物在制備載藥脂質(zhì)體中的應(yīng)用，其特征在 于所述藥物的重量為脂質(zhì)體組合物重量的1 30%。
9.如權(quán)利要求7所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物在制備載藥脂質(zhì)體中的應(yīng)用，其特征在 于所述的藥物為大黃素。
10.如權(quán)利要求9所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物在制備載藥脂質(zhì)體中的應(yīng)用，其特征 在于所述的載藥脂質(zhì)體由下列組分制成蛋黃卵磷脂48 87份，膽固醇11 24份，TPGS 2 38份，大黃素5份。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含TPGS的脂質(zhì)體組合物及其應(yīng)用，所述脂質(zhì)體組合物由磷脂類化合物、膽固醇類化合物和TPGS組成，各組分的重量份比例磷脂類化合物膽固醇類化合物TPGS為5～95∶0～50∶0.1～60。所述的含TPGS的脂質(zhì)體組合物應(yīng)用于制備載藥脂質(zhì)體，不僅能提高脂質(zhì)體藥物穩(wěn)定性，且能提高藥物的療效。
文檔編號A61K47/24GK101991538SQ20091010160
公開日2011年3月30日 申請日期2009年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者R·J·李, 尹小東, 熊素彬 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)