專利名稱：作為TGF-β受體激酶抑制劑的雜芳基氨基喹啉類的制作方法
作為TGF-β受體激酶抑制劑的雜芳基氨基喹啉類
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的是尋找具有有價值的性質(zhì)的新的化合物、特別是可以用于制備藥物的那些化合物。本發(fā)明涉及化合物，其中通過ATP消耗蛋白如激酶對信號轉(zhuǎn)導的抑制、調(diào)節(jié)和/或調(diào)控起作用的化合物的應(yīng)用，特別是TGF-β受體激酶的抑制劑。本發(fā)明的目的還在于包含此類化合物的藥物組合物，以及所述化合物在治療激酶誘導的疾病中的應(yīng)用。轉(zhuǎn)化生長因子β是TGF-β超家族(高度保守的、多效的生長因子的家族)的原型，其在胚胎發(fā)育期間以及成年生物中具有重要的功能。在哺乳動物中，已經(jīng)鑒定出TGF-β 三種同種型(TGF-β 1、2 和 3)，TGF-3 1 為最常見的同種型(Kingsley (1994)Genes Dev 8 133-146)。TGF-β 3只在例如間充質(zhì)細胞中表達，而TGF-β 1在間充質(zhì)細胞和上皮細胞中發(fā)現(xiàn)。TGF-β作為前蛋白原被合成，且以無活性形式被釋放至細胞外基質(zhì)中(Derynck(1985) Nature 316 :701-705 ；Bottinger(1996)PNAS 93:5877-5882)。除了被裂解的前序列(也被稱為隱性相關(guān)肽(LAP)且仍與成熟區(qū)保持連接)之外，潛在TGF-β結(jié)合蛋白(LTBP 1-4) 的 4 種同種型中的一種也可結(jié)合于 TGF-β (Gentry(1988)Mol Cell Biol 8:4162-4168， Munger (1997)Kindey Int 51:1376-1382)。出現(xiàn)TGF-β的生物作用所需要的無活性復合體的活化尚未被全部闡明。然而，例如通過胞質(zhì)素、血漿轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶或血小板反應(yīng)蛋白進行的蛋白酶解加工一定是必需的(Munger (1997)Kindey Int 51 :1376-1382)。活化的配體TGF-β經(jīng)由膜上的三種TGF-β受體(普遍表達的I型和II型受體和以及III型受體 β聚糖和內(nèi)皮糖蛋白，后者只在內(nèi)皮細胞內(nèi)表達)介導其生物作用(GOUgOS(1990)J Biol Chem 264 :8361-8364, Loeps-Casillas (1994) J Cell Biol 124:557-568)。這兩種 III 型 TGF-β受體都缺乏促進向細胞中進行信號傳遞的細胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域。由于III型TGF-β 受體以高親和カ結(jié)合全部三種TGF-β同種型，且II型TGF-β受體也對結(jié)合于III型受體的配體具有較高的親和力，所以生物功能被認為存在于I型和II型TGF-β受體的配體的可用性的調(diào)節(jié)中(Lastres (1996) J Cell Bioll33 :1109-1121 ；Lopes-Casillas (1993) Cell 73 :1435-1344)。結(jié)構(gòu)上密切相關(guān)的I型和II型受體在胞質(zhì)區(qū)具有絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，其負責信號傳遞。II型TGF-β受體結(jié)合TGF-β，隨后將I型TGF-β受體募集到該信號傳遞復合物。II型受體的絲氨酸/蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域是組成性活化的，且能夠在I型受體的所謂的GS結(jié)構(gòu)域中磷酸化該復合物中的絲氨酰殘基。所述磷酸化激活I(lǐng)型受體的激酶，這使其自身能夠磷酸化細胞內(nèi)信號介質(zhì)(SMAD蛋白)，因而啟動細胞內(nèi)信號傳遞(在 Derynck (1997) Biochim Biophys Acta 1333 :F105_F150 中概述)。SMAD家族蛋白為所有TGF-β家族受體激酶擔任底物。迄今為止，已經(jīng)鑒定了 8種 SMAD蛋白，這些SMAD蛋白可以被分為3類(1)受體相關(guān)的SMAD (R-SMAD)為TGF- β受體激酶的直接底物(SMAD1、2、3、5、8) ； (2)共同通路型-SMAD，其在信號級聯(lián)期間與R-Smad相連 (SMAD4)；和(3)抑制性SMAD(SMAD6、7)，其抑制上述SMAD蛋白的活性。在各種R-SMAD中， SMAD2和SMAD3為TGF- β -特異性信號介質(zhì)。因此在TGF- β信號級聯(lián)中，SMAD2/SMAD3被I 型TGF-β受體磷酸化，這使得它們與SMAD4相連。此時由此得到的SMAD2/SMAD3與SMAD4的復合物可以移位至細胞核中，在這里它可以直接或通過其他蛋白質(zhì)啟動TGF-β -調(diào)節(jié)的基因的轉(zhuǎn)錄(在 ItohQOOO)Eur J Biochem 267 :6954-6967 ；Shi (2003) Cell 113:685-700 中概述)。TGF- β的功能范圍廣闊，且取決于細胞的類型和分化狀態(tài)(Roberts (1990) Handbook of Experimental Pharmacology :419-472)。TGF-β 所影響的細胞功能包括細胞凋亡、増殖、分化、細胞運動性和細胞粘著。因此，TGF-β在種類非常廣泛的生物學過程中起著重要作用。在胚胎發(fā)育期間，其在形態(tài)發(fā)生的位置表達，特別是在有上皮間充質(zhì)相互作用的區(qū)域，在此它誘導重要的分化過程(Pelton(1991)J Cell Biol 115:1091-1105)。 TGF-β還在未分化狀態(tài)的干細胞的自我更新和維持中起關(guān)鍵作用(Mishra(2005) Science 310:68-71)。另外，TGF-β還在免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)中具有重要功能。由于TGF-β尤其抑制淋巴細胞的增殖并限制組織巨噬細胞的活性，所以其通常具有免疫抑制功能。因此TGF-β 使得炎癥性反應(yīng)再次消退，且因此有助于防止過度的免疫反應(yīng)(Bogdan (199 Arm NY Acad Sci 685 :713-739,在 Letterio (1998) Annu Rev Immunol 16 137-161 中概述)。TGF-β 另ー個功能是調(diào)節(jié)細胞増殖。TGF-β抑制內(nèi)皮、上皮和造血源的細胞的生長，但促進間質(zhì)源的細胞的生長(Tucker (1984) kience 226 :705-707, Shipley (1986) Cancer Res 46 2068-2071，Shipley(1985)PNAS 82:4147-4151)。TGF-β 的另ー個重要的功能是調(diào)節(jié)細胞附著和細胞間相互作用。TGF-β通過誘導細胞外基質(zhì)的蛋白(例如，纖連蛋白和膠原蛋白)而促進細胞外基質(zhì)累積。另外，TGF-β減少降解基質(zhì)的金屬蛋白酶和金屬蛋白酶抑制劑的表達(Roberts (1990) Ann NY Acad Sci 580 :225-232 ；Ignotz (1986) J Biol Chem261 :4337-4345 ；Overall(1989)J Biol Chem 264:1860-1869) ；Edwards(1987)EMBO J6 :1899-1904)。TGF- β的廣譜作用表明TGF- β在多種生理狀況(諸如傷ロ愈合)和病變(諸如癌癥和纖維變性)中起重要作用。TGF-β在傷ロ愈合中是關(guān)鍵的生長因子之一(在0' Kane (1997) Int J Biochem Cell Biol四79-89中概述)。在肉芽形成期期間，在創(chuàng)傷處從血小板中釋放TGF-β。然后TGF-β在巨噬細胞中調(diào)節(jié)其自身的產(chǎn)生，并例如通過單核細胞誘導分泌其它的生長因子。在傷ロ愈合期間最重要的功能包括刺激炎癥細胞的趨化性，合成細胞外基質(zhì)和調(diào)節(jié)所有在傷ロ愈合過程中涉及的重要的細胞類型的増殖、分化和基因表達。在病理狀況下，這些TGF-β-介導的作用(特別是調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)(ECM)生產(chǎn)) 可以導致皮膚的纖維變性或疤痕(Border (1994)N Engl J Med331 :1286-1292) 對于纖維變性疾病、糖尿病腎病和腎小球性腎炎，已證明TGF-β促使腎細胞肥大和細胞外基質(zhì)的致病性的累積(pathogenic accumulation) 0使用抗-TGF-β抗體處理阻斷TGF-β信號傳導途徑在糖尿病動物中防止小球膜基質(zhì)擴充、腎功能的進行性降低， 并減少糖尿病性腎小球病已造成的損傷(Border (1990) 346 :371-374, Yu(2004)Kindney Int 66 :1774-1784, Fukasawah (2004) Kindney Int 65 :63-74, Sharma (1996)糖尿病 45 522-530)。TGF-β還在肝纖維變性中起重要的作用。TGF-p的刺激造成肝星形細胞的活化(對肝纖維變性發(fā)展至關(guān)重要)，得到肌成纖維細胞(肝硬化發(fā)展過程中細胞外基質(zhì)的主要生產(chǎn)者)。同樣已經(jīng)顯示阻斷TGF-β信號傳導途徑在實驗?zāi)Ｐ椭袦p少纖維變性(Yata(2002)Hepatology 35 :1022-1030 ；Arias (2003)BMC Gastroenterol 3:29)。TGF-β 還在癌癥形成中具有關(guān)鍵功能(在 Derynck (200 l)Nature Genetics 29 117-129 ；Elliott (2005) J clin One 23 :2078-2093 中概述)。在癌癥發(fā)展早期，TGF-β 對抗癌癥的形成。該腫瘤抑制作用主要基于TGF-β抑制上皮細胞分裂的能力。與此相反， TGF-β在腫瘤晚期促進癌細胞生長和轉(zhuǎn)移瘤形成。這可以歸因于以下事實多數(shù)上皮細胞瘤對TGF-β的生長抑制作用發(fā)展出抵抗力，且TGF-β同時經(jīng)由其它機制支持癌細胞生長。這些機制包括促進血管發(fā)生、免疫抑制作用，其支持腫瘤細胞避開免疫系統(tǒng)的控制功能 (免疫監(jiān)視)，并促進轉(zhuǎn)移瘤的侵入和形成。腫瘤細胞的侵襲性表型(invasive phenotype) 的形成是轉(zhuǎn)移瘤形成的首要的先決條件。TGF-β通過其調(diào)節(jié)細胞附著、運動性和形成細胞外基質(zhì)的能力促進該過程。此外，TGF-β誘導細胞從上皮表型向侵襲性間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)化(上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化=EMT)。TGF-β在促進癌細胞生長中所起的重要作用還通過以下研究證實，所述研究顯示強的TGF-β表達與預(yù)后不良相關(guān)。尤其是已經(jīng)在前列腺癌、乳腺癌、 腸癌和肺癌的患者中發(fā)現(xiàn)提升的TGF-β水平(Wikstrom (1998)前列腺37 :19- ; Hasegawa (2001) Cancer 91 :964-971 ；Friedman (1995), Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 4 :549-54)。由于上文所述的TGF-β的癌癥促進作用，例如通過抑制TGF-β I型受體而抑制 TGF-β信號傳導途徑是ー種合理的治療觀念。在眾多臨床前試驗中已經(jīng)顯示阻斷TGF-β 信號傳導途徑確實抑制癌細胞生長。因此使用可溶性TGF-β II型受體治療在轉(zhuǎn)基因鼠(在該時程內(nèi)發(fā)展了侵襲性乳腺癌)中減少了轉(zhuǎn)移瘤的形成(Muraoka(2002)J Clin Invest 109 :1551-1559, Yang(2002)J Clin Invest 109:1607-1615)。表達有缺陷的TGF-βΙΙ型受體的腫瘤細胞系顯示減少的腫瘤和轉(zhuǎn)移生長 (0ft (1998)Curr Biol 8 :1243-1252,McEachern(2001)Int J Cancer91 :76-82, Yin (1999) J Clin Invest 103 :197-206)?！疤卣鳛門GF- β活性增強，，的情況包括其中TGF- β合成受激致使TGF- β存在的水平升高的情況，或者其中TGF-β潛在蛋白質(zhì)不合需要地激活或者轉(zhuǎn)化為活性TGF-β蛋白質(zhì)的情況，或者其中TGF-β受體被増量調(diào)節(jié)的情況，或者其中TGF-β蛋白質(zhì)表現(xiàn)出對疾病部位細胞或胞外基質(zhì)結(jié)合力增強的情況。因此，任一情況中的“活性增強”是指其中無論任何原因引起的TGF-β生物活性不合需要地升高的任何情況。已經(jīng)證實許多疾病與TGF-β 1過量生成相關(guān)。TGF-β細胞內(nèi)信號傳導途徑的抑制劑可用于纖維增生性疾病的治療。具體而言，纖維增生性疾病包括與TGF-β活性失調(diào)和過度纖維化有關(guān)的腎病，其包括腎小球腎炎 (GN)、諸如系膜增生性GN、免疫GN和新月形GN。其他腎臟病癥包括糖尿病腎病、腎間質(zhì)性纖維變性、接受環(huán)孢菌素的移植患者的腎纖維變性和HIV相關(guān)腎病。膠原血管病包括進行性系統(tǒng)性硬化癥、多肌炎、硬皮病、皮肌炎、嗜酸細胞性筋膜炎、硬斑病或與雷諾氏綜合征發(fā)病相關(guān)的病癥。TGF-β活性過度導致的肺纖維變性包括成人型呼吸窘迫綜合征、特發(fā)性肺纖維變性和常與自身免疫性疾病諸如系統(tǒng)性紅斑狼瘡和硬皮病、化學物質(zhì)接觸或過敏有關(guān)的間質(zhì)性肺纖維變性。與纖維增生性特征相關(guān)的另ー種自身免疫性疾病是類風濕性關(guān)節(jié)炎。與纖維增生性病癥有關(guān)的眼部疾病包括視網(wǎng)膜復位手術(shù)伴隨的増殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變、有眼內(nèi)人工晶狀體植入的白內(nèi)障摘除術(shù)和青光眼后引流手木，其與TGF-β 1過量生成有關(guān)。與TGF-βΙ過量生成相關(guān)的纖維變性疾病可以被分為慢性病癥、諸如腎、 肺和肝的纖維變性，以及較急性的病癥、諸如皮膚瘢痕形成和再狹窄(Chamberlain， J. Cardiovascular Drug Reviews, 19 (4) :329-344)。腫瘤細胞 TGF- β 1 的合成和分泌還可以導致免疫抑制，如在患有侵襲性腦或乳腺腫瘤的患者中所觀察到的(Arteaga 等人(1993) J. Clin. Invest. 92 :2569-2576)。TGF-β 1徹底改變小鼠中利什曼原蟲 (Leishmanial)感染的過程(Barral-Netto 等人(1992)kience 257 :545-547)。TGF-β 1 加劇疾病，而TGF-βΙ抗體在遺傳易感小鼠內(nèi)中止所述疾病的進展。遺傳抗性小鼠施用 TGF-β 1后變得對利什曼原蟲易感。關(guān)于TGF-β 1對細胞外基質(zhì)沉積復雜影響的綜述參見(Rocco和Ziyadeh(1991)， Contemporary Issues in Nephrology 弟 23 卷，Hormones, autocoids ana tne kidney. Jay Stein 編著，Churchill Livingston，紐約，第 391-410 頁；Roberts 等人(1988) Rec. Prog. Hormone Res. 44 :157-197)，且所述影響包括對胞外基質(zhì)組分的合成刺激作用和降解抑制作用。由于腎小球的結(jié)構(gòu)和過濾性質(zhì)很大程度上決定于血管系膜和腎小球膜胞外基質(zhì)的構(gòu)成，所以TGF-βΙ對腎臟的影響復雜也不足為奇。增生性腎小球腎炎(Border等人(1990)Kidney Int. 37 :689-695)和糖尿病腎病(Mauer 等人(1984) J. Clin. Invest. 74 1143-1155)中系膜基質(zhì)的累積是該種疾病明確而主要的病理特征。人糖尿病性腎小球硬化癥中 TGF-β 1 水平升高(晚期神經(jīng)病)(Yamamoto 等人(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90 1814-1818)。TGF-β 1是許多動物模型中腎臟纖維變性發(fā)生的重要介質(zhì)(Wian等人(1990) Kidney Int. 37 :426 ；Okuda等人(1990) J. Clin. Invest. 86 :453)。TGF-β 1 抗血清(Border 等人(1990)Nature 346 :371)和通過ー種可結(jié)合TGF-β 1的細胞外基質(zhì)蛋白，即核心蛋白多糖(Border等人(1992)Nature 360 :361-363)在大鼠中顯示可抑制實驗誘導的腎小球腎炎。過多的TGF-β 1導致皮膚瘢痕組織形成。注入大鼠正在愈合的傷ロ邊緣后，中和 TGF-β 1的抗體顯示了抑制瘢痕形成但卻不干擾傷ロ愈合速度或傷ロ牽引力強度(Siah等人(1992)Lancet 339:213-214)。同時，出現(xiàn)血管生成減少、傷口內(nèi)巨噬細胞和單核細胞數(shù)量降低，以及瘢痕組織中無序的膠原纖維沉積量降低。TGF- β 1可能是氣囊血管成形術(shù)后動脈中平滑肌細胞增生和細胞外基質(zhì)沉積導致的進行性動脈壁增厚中的ー個因素。由于增厚，再狹窄的動脈直徑可減小90%，而且由于大部分直徑減小是由胞外基質(zhì)而非平滑肌細胞體引起，所以只是減少大量的胞外基質(zhì)沉積即可能打開這些血管的50%。用TGF-β 1基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染的完整無損的豬動脈中，TGF-β 1基因的表達與胞外基質(zhì)合成和過度增生都有關(guān)(Nabel等人(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :10759-10763)。TGF-β 1誘導的過度增生不如PDGF-BB誘導的過度增生廣泛，但是使用TGF-β 1轉(zhuǎn)染子時中胞外基質(zhì)更為廣泛。在該轉(zhuǎn)基因豬模型中，未發(fā)現(xiàn)胞外基質(zhì)沉積與 FGF-I (FGF的ー種分泌形式)誘導的過度增生有關(guān)(Nabel (1993) Nature 362 :844-846)。腫瘤產(chǎn)生的TGF-β 1在若干類型的癌癥中可能有害。MATLyLu大鼠前列腺癌細胞 (Steiner 和 Barrack(1992)Mol. Endocrinol 6 :15-25)和 MCF-7 人乳腺癌細胞(Arteaga 等人(199 Cell Growth和Differ. 4 :193-201)在轉(zhuǎn)染表達小鼠TGF-β 1的載體后變得更易發(fā)生腫瘤和瘤轉(zhuǎn)移。已經(jīng)將TGF-β 1與人前列腺癌和晩期胃癌中的血管生成、轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良聯(lián)糸在一起(Wikstrom 等人(1998)Prostate 37 :19-29 ；Saito 等人(1999)Cancer 86:1455-1462)。乳腺癌中預(yù)后不良與TGF-β升高有關(guān)(Dickson等人(1987)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84 :837-841 ;Kasid 等人(1987)Cancer Res. 47 :5733-5738 ;Daly 等人 (1990) J. Cell Biochem. 43 :199-211 ；Barrett-Lee 等人(1990)Br. J Cancer 61 :612-617 ； King 等人(1989) J. Steroid Biochem. 34 :133-138 ；Welch 等人(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87 :7678-7682 ；Walker 等人(1992) Eur. J. Cancer 238 :64ト644)，而且發(fā)現(xiàn)他莫昔芬治療對TGF-β 1的誘導作用(Butta等人(1992) Cancer Res. 52 =4261-4264)與乳腺癌的他莫昔芬治療的失敗有關(guān)(Thompson等人(1991)Br. J. Cancer 63:609-614)。抗 TGF-β 1抗體抑制裸鼠體內(nèi)MDA-231人乳腺癌細胞的生長(Arteaga等人(1993) J. Clin. Invest. 92 =2569-2576)；該治療與脾臟自然殺傷細胞活性升高有關(guān)。轉(zhuǎn)染了潛在TGF-βΙ 的CHO細胞在裸鼠體內(nèi)也表現(xiàn)出NK活性下降和腫瘤生長的增加(Wallick等人(1990) J. Exp. Med. 172 :1777-1784) 0因此乳腺腫瘤分泌的TGF-β可能引起內(nèi)分泌免疫抑制。已顯示高TGF-β 1血漿濃度指示乳腺癌晩期患者預(yù)后不良(Anscher等人(1993)N. Engl. J. Med. 328 :1592-1598)。高劑量化療和自體骨髄移植之前循環(huán)TGF-β高的患者得肝臟靜脈閉塞性疾病(占全部患者的15-50%，死亡率可達50% )和特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(占全部患者的40-60%)的風險高。這些發(fā)現(xiàn)意味著1)TGF-β 1血漿水平升高可用于鑒別處危的患者，并且2)降低TGF-β 1可降低乳腺癌患者普通治療的發(fā)病率和死亡率。許多惡性細胞分泌轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β)——一種強カ的免疫抑制劑，這說明 TGF-β的生成可能是腫瘤逃避宿主的免疫監(jiān)視的重要機理。在帶瘤宿主中建立具有被干擾的TGF-β信號轉(zhuǎn)導的白細胞亞群是癌癥免疫治療的潛在方法。在T細胞中具有被干擾的TGF-β信號轉(zhuǎn)導的轉(zhuǎn)基因動物模型能夠根除正常的致死性的TGF-β過表達的淋巴瘤， 即 EL4(Gorelik和 Flavell， (2001)Nature Medicine 7(10) :1118-1122)。腫瘤細胞中TGF- β分泌下調(diào)致使宿主免疫原性恢復，而T細胞對TGF- β不敏感可促進分化和自身免疫，其元件可能是為了在耐受的宿主中對抗表達自身抗原的腫瘤所需的。一個亞群的HIV患者的免疫反應(yīng)低于根據(jù)他們⑶4/⑶8Τ細胞計數(shù)的預(yù)測，這也意味著 TGF-β 的免疫抑制效果(Garba 等人 J. Immunologバ2002) 168 :2247-2254)。TGF-β 中和抗體能夠在培養(yǎng)中逆轉(zhuǎn)該效應(yīng)，表明TGF-β信號傳導抑制劑可能在逆轉(zhuǎn)該亞群HIV患者的免疫抑制上有效用。在癌發(fā)生的最早期，TGF-β 1可作為強カ的腫瘤抑制劑并介導ー些化學預(yù)防劑的作用。然而，在惡性腫瘤的發(fā)展和增進過程中的某一點，腫瘤細胞顯示可以脫離TGF-β依賴的生長抑制，同時有生物活性的TGF-β出現(xiàn)在微環(huán)境中。TGF-β腫瘤抑制/腫瘤促進的雙重作用在角質(zhì)細胞中過表達TGF-β的轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)中闡明得非常清晰。雖然轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物對良性皮膚損害的形成更為抵抗，但所述轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物中轉(zhuǎn)移性轉(zhuǎn)變的速度卻明顯增加(Cui 等人(1996)Cell 86(4) :531-42)。原發(fā)腫瘤中惡性細胞的TGF-β 1的生成顯示隨著腫瘤進展的進行性階段而増加。對許多主要上皮癌的研究表明，人癌生成的TGF-β増加在腫瘤進展過程中發(fā)生的相對較晩。而且，該腫瘤相關(guān)TGF-β向腫瘤細胞提供了選擇性優(yōu)勢并促進腫瘤的進展。TGF-β對細胞/細胞和細胞/間質(zhì)相互作用的影響導致更大的侵襲和轉(zhuǎn)移傾向。腫瘤相關(guān)TGF-β可允許腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視，因為它是活化淋巴細胞克隆擴增的強力抑制劑。TGF-β還表現(xiàn)出抑制血管抑素生成的作用。癌癥治療方式如放射治療和化學治療可誘導腫瘤中活化TGF-β的生成，并藉此選擇了對TGF-β生長抑制效果有抗性的惡性細胞的向外生長。因此，這些抗癌治療會增加生長和侵襲增強的腫瘤發(fā)生的風險并加速其發(fā)展。在這種形勢下，靶向TGF-β介導的信號轉(zhuǎn)導的活性劑可能是ー個非常有效的治療策略。已證實腫瘤細胞對TGF-β的抗性可抵消大部分放射治療和化學治療的細胞毒性，而且基質(zhì)中TGF-β的治療依賴性激活甚至可以是有害的，因為這能使微環(huán)境更有利于腫瘤進展并有助于導致纖維變性的組織損傷。開發(fā)TGF-β信號轉(zhuǎn)導抑制劑單獨或與其他治療相結(jié)合，可能對癌癥晩期治療大有裨益。這些化合物通過抑制TGF-β適合用于在有需要的患者中治療癌癥和受TGF-β 影響的其它疾病狀態(tài)，其通過向所述患者施用所述化合物實現(xiàn)。TGF-β還可用于對抗動脈粥樣硬化(T. A. McCaffrey 動脈粥樣硬化中的TGF_ps和TGF-β受體細胞因子和生長因ナ綜述 2000 (TGF-ps and TGF-β Receptors in Atherosclerosis :Cytokine and Growth Factor Reviews), 2000 11,103-114)和阿爾茨海默病(Mas Ii ah, Ε. ；Ho, G.； ffyss-Coray, Τ. =TGF-β在阿爾茨海默病微血管損傷中的功能性作用得自轉(zhuǎn)基因小鼠的結(jié)果(Functional Roie of TGF-β in Alzheimer' s Disease Microvascular Injury Lessons from Transgenic Mice) :Neurochemistry International 2001，39，393-400)。信號轉(zhuǎn)導的另ー個關(guān)鍵的生物化學機制涉及蛋白質(zhì)上酪氨酸殘基的可逆磷酸化。 蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)可影響其構(gòu)象和/或酶活性以及其細胞位置。蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)通過蛋白酪氨酸激酶(PTK)和蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)在多種特定酪氨酸殘基上的相互作用而改變。蛋白酪氨酸激酶包括ー個大家族的跨膜受體和胞內(nèi)酶，其有多個功能域的。配體的結(jié)合變構(gòu)地轉(zhuǎn)導跨越細胞膜的信號，在細胞膜PTK的細胞質(zhì)部分啟動分子間相互作用的級聯(lián)，級聯(lián)在整個細胞傳播信號并傳播至細胞核中。配體結(jié)合之后許多受體蛋白酪氨酸激酶(RPTK)、諸如表皮生長因子受體(EGFR)和血小板衍生生長因子受體(PDGFR)發(fā)生低聚化，且受體在受體的細胞質(zhì)部分中的特定的酪氨酸殘基發(fā)生自身-磷酸化(通過自體磷酸化或轉(zhuǎn)磷酸作用)。細胞質(zhì)的蛋白酪氨酸激酶(CPTK)、諸如詹納斯激酶(例如JAK1、JAK2、 TYK2)和Src激酶(例如src、Ick、fyn)與細胞因子(例如IL-2、IL-3、IL-6、紅細胞生成素)和干擾素的受體以及抗原受體有關(guān)。這些受體也歷經(jīng)低聚化，并且具有在活化期間變成磷酸化形式的酪氨酸殘基，但所述受體多肽自身不具有激酶活性。如同PTK，蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)包括ー個家族的跨膜和細胞質(zhì)酶類，具有至少約230個氨基酸催化域，所述催化域包含高度保守的帶有共有基序的活化部位。PTP的底物可以是具有磷酸酪氨酸殘基的PTK或PTK的底物。任何時候正常細胞生長和分化所需的酪氨酸磷酸化的水平是通過PTK和PTP的協(xié)調(diào)的作用達到的。根據(jù)細胞環(huán)境，這兩種在信號轉(zhuǎn)導期間可能相互對抗或協(xié)作的酶。這些酶之間的不平衡可損害正常的細胞功能，導致代謝障礙和細胞轉(zhuǎn)化。還眾所周知的是例如PTK、諸如HER2的過表達在癌癥的發(fā)展中能起決定性作用， 能阻斷該酶活性的抗體可以消除腫瘤。已經(jīng)顯示阻斷酪氨酸激酶、諸如Flk-I和PDGF受體的信號轉(zhuǎn)導的能力在動物模型中阻止腫瘤生長。已知結(jié)合ATP并利用其能量改變構(gòu)象、磷酸化底物和啟動信號傳導級聯(lián)的蛋白質(zhì)來自多種類型，如激酶類、磷酸酶類、侶伴蛋白類或異構(gòu)酶類。使用特定的工具和技術(shù)可以富集ATP-結(jié)合蛋白。將大家族的蛋白激酶分為酪氨酸激酶和絲氨酸蘇氨酸激酶亞家族，其中的部分包括 cAbl、Akt、ALK, ALKl 及其家族成員如 ALKl 禾ロ ALK5、Axl、Aurora A 禾ロ B、Btk、Dyrk2、 EGFR、Erk、肝配蛋白受體如EphA2、FAK, FGF受體如FGFR3、胰島素受體頂和類胰島素生長因子受體 IGF1R、IKK2、Jak2、JNK3、cKit、LimK, VEGF 受體 1、2 和 3、MekUMet, P70s6K、 PDGFR、PDKl、PI3K、Plkl、PKDl、bRaf、RSKl、Src 及其家族成員、TAKl、Trk A、B、C、Zap70。 這些不同的激酶可以根據(jù)幾種同物異名來描述，其為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知且可獲自數(shù)據(jù)庫如Kinweb，由此可找到具有備選名稱、分類、基因注釋、序列和基因結(jié)構(gòu)的基因和蛋白報告，且鏈接有Pdb 3D結(jié)構(gòu)信息。同樣地蛋白組學服務(wù)器將允許訪問包括基因和蛋白的許多信息和分析和預(yù)測工具，包括激酶。作為癌癥標志的機理部分，Ser/Thr激酶和受體酪氨酸激酶(RTK)是在細胞信號傳導中所必需的磷酸化酶。細胞周期、存活、増殖和細胞死亡是通過細胞信號傳導調(diào)節(jié)的細胞過程，以允許組織生長、再生和處于內(nèi)穩(wěn)態(tài)或退化。因此，對于哺乳動物治療，某些激酶是精確的標靶。在作為人類蛋白激酶組的一部分的不同的激酶家族中，受體酪氨酸激酶KDR(也稱為VEGF受體幻可以刺激內(nèi)皮細胞存活和増殖，條件是通過VEGF連接到胞外部分。配體結(jié)合然后能導致細胞內(nèi)磷酸化事件(信號級聯(lián)放大)，并最終導致増殖。多種治療法嘗試抑制該KDR的信號傳導。對于內(nèi)皮細胞的功能而言重要的其他激酶和配體為TIE2激酶和血管生成素、 PDGF受體和PDGF以及P1GF、肝配蛋白受體激酶和肝配蛋白、尤其是EphB4和肝配蛋白-B2。 另外，配體TGFβ及其受體TGFi3R，即Alkl/Alk5在血管完整性維持中起重要作用。通過結(jié)合于TGFi3 II型受體，TGFii在內(nèi)皮細胞中可以活化2種不同的I型受體，即EC-限制性 ALKl和廣泛表達的對EC行為有相反作用的ALK5。ALKl經(jīng)由Smadl/5轉(zhuǎn)錄因子刺激EC増殖和遷移，ALK5抑制經(jīng)由Smad2/3轉(zhuǎn)錄因子的那些功能。促進EC増殖和薄層形成的Alk5激酶抑制劑的ー個實例是SB-431M2。在血管發(fā)生中配體結(jié)合抑制還可能是調(diào)節(jié)TGFii受體信號傳導的另ー個途徑。這通過使用2種肽得到證明，且對于可溶性TGF β受體sTi3R-Fc 也在這一方面進行了討論。使用抗-TGF β抗體甚至TGF β捕獲(trap)將是抑制TGF β信號傳導的另ー個策略。TGF^蛋白包含分子量為 25kDa的保守的ニ聚體蛋白家族，其以無活性形式普遍表達和分泌。響應(yīng)適合的刺激的局部蛋白酶解導致活化TGFii配體。TGFii信號傳導牽涉于眾多病癥和疾病，包括癌癥、心血管、骨、CNS、PNS、炎性和神經(jīng)變性的病癥。在上皮細胞中TGFii抑制細胞増殖。正常上皮細胞向癌細胞的轉(zhuǎn)化伴隨對TGFii 的生長-抑制響應(yīng)的下調(diào)，這使得細胞逃避TGFβ信號傳導的自分泌瘤抑制劑活性。癌細胞的TGFii產(chǎn)生增加有助于癌癥細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移行為。TGFii可以誘導上皮細胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，這使得細胞變得具有侵襲性和遷移性。另外，増加的TGFii產(chǎn)生對基質(zhì)細胞和免疫細胞產(chǎn)生影響，從而提供有利于癌癥進展的微環(huán)境。TGFii蛋白通過Ti3R-I/II受體激酶和它們的Smad底物傳導信號，但還可以不依賴于Smad(諸如ERK MAP激酶、PI3激酶、類I ho GTP酶(I ho-like GTPases)、蛋白質(zhì)磷酸酶2A和Par6)傳導信號?；罨腎型T β R激酶增加細胞的存活，且可以加速病理性細胞進展。TGF3I型和II型受體(Ti3R I、Ti3R II)是單次跨膜的存在細胞內(nèi)絲氨酸/蘇氨酸激酶的細胞外配體(TGFii)結(jié)合受體。細胞內(nèi)信號傳導通過自身磷酸化、轉(zhuǎn)磷酸作用和底物磷酸化進行，從而調(diào)控節(jié)目標基因表達。Τβ R蛋白的克隆和基因組織是公知的。Ti3R 序列在www. uniprot. org作為TGFRl人(登錄號P36897)和TGF β R2人(登錄號Ρ37173) 保存。在蛋白水平上，I型T β R被描述為包含在受體激酶結(jié)構(gòu)域之前的富含Gly和kr的區(qū)域(GS結(jié)構(gòu)域)。T^R II在其自身/被磷酸化狀態(tài)是組成性活化激酶，它結(jié)合于I型受體并在GS結(jié)構(gòu)域?qū)⑵淞姿峄 β R受體，是結(jié)合配體TGF- β的(活化的)2個Ti3R I禾ロ 2個Ti3R II單元的四聚體復合物，能夠磷酸化作為底物的Smad (Smad 2和Smad 3)的C-端SSXS基序，所述底物又結(jié)合于SmadV通過Smad4被轉(zhuǎn)移至細胞核，在此它們調(diào)節(jié)TGF-β應(yīng)答基因。調(diào)節(jié)I型和II型Τβ R之間同數(shù)(homomeric)和異數(shù)(heteromeric)復合物形成的不同的結(jié)構(gòu)域是已知的。Ti3R I的GS結(jié)構(gòu)域中的突變可以是組成性活化的。已發(fā)現(xiàn)激酶失活的突變，對于 I型T β R而言為K232R，且對于II型T β R而言為K277R。在多種癌癥中發(fā)現(xiàn)I型和II型 Τβ R基因中的失活突變或減活突變。另外，Τβ R的信號傳導通過磷酸化和脫磷酸化機制、 泛素化(ubiquitinylation)和SUMO蛋白修飾化(sumoylation)以及通過胞吞作用和通過 TACE-介導的I型的胞外域釋放來調(diào)節(jié)，但并非II型受體TACE，即aka ADAM-17，其介導細胞因子、GF受體和粘附蛋白的釋放且在癌癥中高度表達。T^R I和FKBP12的X-射線晶體復合物結(jié)構(gòu)已有描述，且討論了激酶活化過程。同吋，幾種晶體結(jié)構(gòu)可以在PDB數(shù)據(jù)庫中找到1B6C、1 IAS、1PY5、1RW8、1VJY、2PJY和 ITBI模型。對于Τβ R II只有胞外配體結(jié)合域的X-射線研究為公眾所知1ΚΤΖ、1Μ9Ζ和 1PL0 (NMR)，但激酶結(jié)構(gòu)域未知。TGF- β信號轉(zhuǎn)導涉及Smad，其為T β R I型受體激酶的唯一底物。人基因組編碼八種來自3個亞家族(R-、Co-、I-Smad)的Smad，其在發(fā)育的整個過程中和成人組織中普遍表達。Smad不僅僅受到I型TGF-β受體激酶磷酸化，而且它們還通過低聚化、泛素化和降 MUMM^iM^^ (nucleoplasmatic shuttling) τΓ0已顯示VEGF釋放通過ALKl和ALK5調(diào)節(jié)，而TGF- β增強VEGF表達，ΒΜΡ-9抑制 VEGF表達。關(guān)于截短型ALK4同種型的研究表明該I型激酶涉及垂體瘤的生長和發(fā)展(通過顯性負調(diào)控抑制活化素信號傳導)。ALK4在胚胎發(fā)育、中胚層誘導的調(diào)節(jié)、原條形成、原腸胚形成、初生軸形成和左右軸確定中的作用的時空窗ロ的研究仍未闡明ALK4在成人中的作用。在大規(guī)模的人候選人篩選中發(fā)現(xiàn)顯性負調(diào)控的ALK2等位基因與先天性心臟病相關(guān)，如不適宜的房室隔發(fā)育。ALKl結(jié)合T β R-II和內(nèi)皮糖蛋白/CD105/T PR-III，并磷酸化SMAD-I和-5。已經(jīng)證明了內(nèi)皮糖蛋白的作用、尤其是由兩種變體(L-和S-內(nèi)皮糖蛋白)進行的TGF-β信號傳導的差別調(diào)節(jié)。ALKl在血管重建中具有功能，且在發(fā)炎的組織、傷口和腫瘤中在內(nèi)皮的活化狀態(tài)的平衡中發(fā)現(xiàn)ALKl與ALK5。ALKl在肺、胎盤和其他高度血管化組織中表達，且選擇性地存在于EC上。另外，在神經(jīng)元中檢測到ALKl。
II型Τβ R表達缺失與人乳腺癌的高的腫瘤級別相關(guān)，表明其促進乳腺癌進展。腫瘤生長可以以失調(diào)(即由于突變或其它的遺傳變化干擾信號傳導而引起的自發(fā)的細胞生長)為特征。在32000個涉及信號轉(zhuǎn)導的人類編碼基因中，超過520種蛋白激酶和130種蛋白磷酸酶對蛋白質(zhì)磷酸化施加嚴格和可逆的控制。已發(fā)現(xiàn)對酪氨酸和對絲氨酸/蘇氨酸磷酸化的選擇性。在人類基因組中有超過90中已知的PTK基因，超過50種編碼屬于20個亞家族的跨膜RPTK且32種編碼屬于10個亞家族的細胞質(zhì)、非受體ΡΤΚ。例如Trk A在甲狀腺癌和成神經(jīng)細胞瘤中具有重要的作用，EphB2和B4在癌中過表達，Axl和Lck在白血病中過表達。對用于治療癌癥的TGF-β抑制劑已有綜述。存在另外的適應(yīng)癥和病變(間接靶向癌癥)，傷ロ愈合和炎癥，其經(jīng)由抗血管發(fā)生，血管形成、穩(wěn)定、保持和退化。血管生成，即從之前存在的血管發(fā)育新血管，在胚胎發(fā)生、器官發(fā)生和傷ロ愈合中的血管發(fā)育中很關(guān)鍵。除了這些生理過程之外，血管發(fā)生對于腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和炎癥很重要，導致疾病如乳腺、子宮頸、子宮體(子宮內(nèi)膜)、卵巣、肺、支氣管、肝、腎、皮膚、口腔和咽、前列腺、胰、膀胱、血細胞、結(jié)腸、直腸、骨、腦、中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤、例如乳腺癌、 結(jié)腸直腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、淋巴瘤等，和炎癥性疾病如類風濕性關(guān)節(jié)炎和銀屑病，或眼部的疾病如黃斑變性和糖尿病性視網(wǎng)膜病。近來討論了腫瘤發(fā)生中的血管形成和血管生成開關(guān)的分子機制。血管模式通過Eph受體酪氨酸激酶和肝配蛋白配體(例如經(jīng)由Eph B4和Eph Bl的肝配蛋白-B2信號傳導)調(diào)節(jié)。EphB4在出生后血管發(fā)生期間控制血管形態(tài)發(fā)生。通過血管形成或血管發(fā)生形成的新生血管系統(tǒng)的成熟，需要壁細胞(周細胞、平滑肌細胞)、 細胞外基質(zhì)產(chǎn)生和用于結(jié)構(gòu)支撐的血管壁特化以及血管功能調(diào)節(jié)。這些過程的調(diào)節(jié)和內(nèi)皮細胞和它們的壁細胞之間的相互作用涉及幾種配體激酶對，如VEGF/VEGFR1、VEGFR2、肝配蛋白 B2/EphB4、PDGFR/PDGFRβ、血管生成素 /ΤΙΕ2、TGF-β /TGF-β R-ALK1/ALK5。血管裝配、毛細血管形成、芽生、穩(wěn)定和去穩(wěn)定、甚至退化通過這些激酶和配體的功能平衡而調(diào)節(jié)。 淋巴管發(fā)生經(jīng)由VEGF受體3及其配體VEGF C和D以及ΤΙΕ2及其配體血管生成素1、2進行調(diào)節(jié)。VEGFR3和/或ΤΙΕ2信號傳導的抑制和由此的淋巴管形成的抑制能做完停止腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的ー種方法。關(guān)于病理性血管形成的完整信息導致產(chǎn)生以下的預(yù)期抑制血管發(fā)生成為治療癌癥和其他障礙的有望的策略。通過均表現(xiàn)胎胚致死表型的Alkl、內(nèi)皮糖蛋白、Alk5和Ti3RII KO小鼠(由于有血管的缺陷)顯示TGF-β受體對于生成血管過程的重要性。另外，在EC中TGF-β配體能夠刺激兩個通路(Smad 1/5/8磷酸化Alkl的下游區(qū)和Smad2/3磷酸化Alk5的下游區(qū))。 兩個通路之間有交叉。帶有L45環(huán)區(qū)突變的Alk5敲入小鼠顯示缺陷的Smad活化。在EC 中，ALKl拮抗TGF- β /Alk5信號傳導。TGF-β存在至少五種同種型(TGF-β 1_5)，與TGFa無關(guān)，TGF-β 1為普遍形式。 TGF-β是細胞和生理過程的普遍存在的和必需的調(diào)節(jié)劑，所述生理過程包括増殖、分化、遷移、細胞存活、血管發(fā)生和免疫監(jiān)視。由于癌細胞表達腫瘤特異性抗原，它們通常會被免疫系統(tǒng)識別，且會被摧毀。在腫瘤發(fā)生期間癌細胞通過多種機制獲得逃避該免疫監(jiān)視的能力。主要機制是癌細胞介導的通過分泌TGF-β (—種有效的免疫抑制細胞因子)的免疫抑制。TGF-β有從腫瘤抑制劑向腫瘤啟動劑和轉(zhuǎn)移前因子(prometastatic factor)轉(zhuǎn)化的潛能。
TGF-β功能由稱為I型和II型受體的四部分的受體復合物(由兩組跨膜絲氨酸-蘇氨酸激酶受體組成)傳遞，所述復合物在TGF-β配體超家族成員結(jié)合之后被活化， 所述配體被分為兩組(TGF-β /激活蛋白和BMP/⑶F分支)。TGF-β 1、2和3屬于配體的 TGF-β/激活蛋白分支。這些結(jié)合事件詳細說明在不同的細胞類型中差別調(diào)節(jié)的下游應(yīng)答。在皮膚成纖維細胞中TGF_i3RII的可誘導的出生后缺失描述了在傷ロ修復期間成纖維細胞在皮膚的上皮-間質(zhì)交互作用中的重要性。在傷ロ修復期間，配體TGF-β及其受體RI和RII型的表達是及時的并有空間調(diào)控。⑶109是連接GPI細胞表面抗原，被⑶34+ 急性髓性白血病細胞系、EC、活化的血小板和T-細胞所表達，是人角質(zhì)形成細胞中的Τβ R 系統(tǒng)的一部分。毛囊隆突區(qū)中的毛囊干細胞(FSC)在毛發(fā)周期和傷ロ愈合期間能產(chǎn)生多種細胞系。Smad4(TGF-i3信號傳導的共用介質(zhì))是FSC保持的一部分。小鼠皮膚中SmacMKO 研究顯示毛囊缺陷和鱗狀細胞癌形成。TGF-β的潛在抑制在毛囊中延緩毛發(fā)生長中期進展。TGF-β在毛發(fā)生長中期期間在角質(zhì)形成細胞細胞凋亡中的充分描述的作用可能涉及毛發(fā)生長初期-特異的毛囊組分，其也涉及共定位的T β RI和T β RII。已知TGF-β在幾種器官諸如皮膚、腎、心和肝的纖維變性中的異常活性，將Τβ R 抑制劑應(yīng)用于纖維變性疾病是合理的。系統(tǒng)性硬化病(硬皮病)，是ー種復雜的導致皮膚和內(nèi)部器官的纖維變性的結(jié)締組織的疾病，顯示具有TGF- β /受體RI依賴性。肺動脈高壓 (PAH)是潛在可使用ALK5抑制劑的處理的病癥，因為周邊動脈平滑肌細胞的異常增殖由活化的TGF-β受體驅(qū)使。使用SB525334在大鼠中治療獲得了成功。在大鼠中使用ΙΝ-1233 也顯示有益處。腎纖維變性可以導致糖尿病。已知T β R激酶抑制劑衍生物的有益的副作用以及TGF- β信號傳導和丙型肝炎病毒(HCV)復制之間的聯(lián)系。TGF-β信號傳導在轉(zhuǎn)移乳腺癌中作為新出現(xiàn)干細胞標靶被討論。TGF-β 1、2、3和它們的受體在神經(jīng)元、星形細胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細胞中表達。使用TGF-β 信號傳導調(diào)節(jié)劑可以預(yù)期到病理學結(jié)果的改善。在心血管疾病如動脈粥樣硬化、心肌缺血和心肌重構(gòu)中TGF-β超家族是心血管研究議題的焦點。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物及其鹽具有非常有價值的藥理性質(zhì)，同時耐受良好。特別是，它們顯示TGF- β受體I激酶-抑制性質(zhì)。本發(fā)明化合物優(yōu)選展現(xiàn)有益的生物活性，這在基于酶的試驗例如本文所述的試驗中可以容易地被證實。在所述基于酶的試驗中本發(fā)明化合物優(yōu)選展現(xiàn)和引起抑制作用，這通常通過適合范圍的、優(yōu)選在μ M范圍的且更優(yōu)選在ηΜ范圍的IC50值記錄。如本文所討論，這些信號傳導途徑與多種疾病有關(guān)。因此，本發(fā)明化合物可用于通過與ー種或多種所述信號傳導通路相互作用而預(yù)防和/或治療依賴于所述信號傳導通路的疾病。本發(fā)明因此涉及作為本文所述的信號傳導通路的啟動劑或抑制劑、優(yōu)選作為其抑制劑的本發(fā)明化合物。本發(fā)明因此優(yōu)選涉及作為TGF-β信號傳導通路的啟動劑或抑制劑、 優(yōu)選作為其抑制劑的本發(fā)明化合物。本發(fā)明還涉及ー種或多種本發(fā)明化合物在治療和/或預(yù)防由TGF-β活性増加引起、介導和/或傳播的疾病、優(yōu)選本文所述的疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明因此涉及在治療和/或預(yù)防所述疾病中作為藥物和/或藥物活性成分的本發(fā)明化合物，和本發(fā)明化合物在制備用于治療和/或預(yù)防所述疾病的藥物中的應(yīng)用，以及治療所述疾病的方法，所述方法包括將一種或多種本發(fā)明化合物施用于需要該施用的患者。
宿主或患者可以屬于任何哺乳動物物種，例如靈長類物種，特別是人；嚙齒類，包括小鼠、大鼠和倉鼠；兔；馬、牛、犬、貓等。動物模型對于試驗研究而言具有用處，可提供治療人類疾病的模型。特定細胞對于使用本發(fā)明化合物治療的敏感性可以通過體外試驗測定。通常，細胞的培養(yǎng)物與多種濃度的本發(fā)明化合物混合達足以使活性劑誘導細胞死亡或抑制細胞遷移的一段時間，所述時間通常在約1小時至1周。體外試驗可以使用來自活檢樣本的培養(yǎng)的細胞進行。然后對治療后保持活性的細胞計數(shù)。劑量取決于所使用的特定的化合物、特定的疾病、病人的情況等。治療劑量通常很足以減少目標組織中不希望的細胞數(shù)，同時維持患者的存活。治療一般會持續(xù)至已出現(xiàn)相當大的減少，例如細胞負擔中至少約50%的減少，也可以持續(xù)至在身體基本上檢測不到不希望的細胞。為了鑒定信號轉(zhuǎn)導通路和檢測各種信號轉(zhuǎn)導通路之間的相互作用，許多科學家開發(fā)了適當?shù)哪Ｐ突蚰Ｐ拖到y(tǒng)，例如細胞培養(yǎng)模型(例如Khwaja等人，EMB0，1997，16， 2783-93)和轉(zhuǎn)基因動物模型(例如 White 等人，Oncogene，2001，20，7064-7072)。為了檢測信號轉(zhuǎn)導級聯(lián)反應(yīng)所處的某些階段，可采用相互作用的化合物來調(diào)控所述信號(例如 St印hens等人，Biochemical J.，2000，351，95-105)?？蓪⒈景l(fā)明化合物用作試劑來檢測動物模型和/或細胞培養(yǎng)模型或本申請中所提及臨床疾病中的激酶依賴性信號轉(zhuǎn)導通路。檢測激酶的活性是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技木。文獻中描述了檢測激酶活性的通用檢測系統(tǒng)，所用底物例如有組蛋白(例如Alessi等人，F(xiàn)EBSLett. 1996，399，3，第333-338 頁)，或堿性髓磷脂蛋白(例如 Campos-Gonzalez, R.和 Glenney，Jr.，J. R. 1992，J. Biol. Chem. 267，第 14535 頁)?，F(xiàn)已有鑒定激酶抑制劑的各種試驗系統(tǒng)。在閃爍迫近試驗(Sorg等人，J. of. Biomolecular Screening, 2002, 7,11-19)和閃光板試驗(flashplate assay)中檢測使用 Y ATP的作為底物的蛋白或肽的放射性磷酸化。在存在抑制性化合物吋，檢測到的放射活性信號減弱或根本檢測不到。此外，均質(zhì)時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(HTR-FRET)和熒光偏振 (FP)技術(shù)適合用作試驗方法(Sills 等人，J. of Biomolecular Screening, 2002,191-214)。 其它的非放射性ELISA試驗方法采用特異性磷酸-抗體(磷酸-AB)。此種磷酸-AB只結(jié)合磷酸化的底物?？墒褂镁Y合過氧化物酶的抗綿羊第二抗體通過化學發(fā)光法檢測這種結(jié)合。幾個現(xiàn)有技術(shù)中的參考文獻涉及喹啉衍生物的合成。WO 06/058201A2描述了 2-芳基-4-芳基-氨基喹啉類(和喹唑啉和異喹啉類)，但沒有教導4-吡啶基-氨基(4) 取代的情況的合成和應(yīng)用。WO 04/081009A1描述了幾種均在4位被ニ環(huán)的氮雜ニ氫吲哚或四氫萘啶系統(tǒng)取代的喹唑啉和3-F喹啉類，但未教導3位未修飾的喹啉系統(tǒng)的合成和應(yīng)用。 WO 03/018561A1描述了喹啉類用作鈣通道阻滯劑的應(yīng)用。WO 05/030U9A2涉及鉀通道抑制劑。WO 00/076982A1的4-氨基喹啉應(yīng)用于免疫調(diào)節(jié)。后3個引用文獻中均未描述最適用于T β R抑制的喹啉類的藥效團的構(gòu)建。本發(fā)明涉及式⑴化合物
權(quán)利要求
1.式⑴化合物
2.依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X是指N。
3.依據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中Z疋 曰Cn0
4.依據(jù)權(quán)利要求1至3中任意ー項的化合物，其中Het是指吡啶基、嘧啶基、三嗪基、噠嗪基或吡嗪基，其各自可以被R5、R6、R7、R8和/或 R9所取代。
5.依據(jù)權(quán)利要求1至4中任意ー項的化合物，其中R5 是指 H、A、OA、CN、-Alk-OY, -CO-NYY, SA、NYY、-NH-CO-Alk-OY、-NH-CO-Alk-OCOY、-N H-CO-Alk-NYY, -NH-CO-NYY, -NH-CO-Het3, -NH-SO2-NYY, -CO-NH-Alk-NYY 或 Het3或R1、R5 —起還指-CH = CH-,-C (Y) = N-,-C (Alk-OY) = N-、-C0_N(C00Y)-、-C0_NH-或 -SO2-NH-。
6.依據(jù)權(quán)利要求1至5中任意ー項的化合物，其中R6 是指 H、A、OA、NYY、-NH-Alk-NYY, -NH-COA 或-NH-CO-Alk-NYY，或R5、R6 一起還指=CH-CH = C(Y)-CH =或-N = CH-CH = CH-。
7.依據(jù)權(quán)利要求1至6中任意ー項的化合物，其中R2是指苯基或吡啶基，其各自可以被至少ー個選自以下的取代基單取代或ニ取代F、 Cl、Br、CH3、CF3、CN、OCH3。
8.依據(jù)權(quán)利要求1至7中任意ー項的化合物，其中 Rl、R3、R4、R7、R8、R9相互獨立地是指H。
9.依據(jù)權(quán)利要求1至8中任意ー項的化合物，其選自
10.具有亞式(II)的結(jié)構(gòu)的依據(jù)權(quán)利要求1的化合物，
11.制備式(I)化合物的方法，其包括以下步驟(a)將式(IV)化合物
12.依據(jù)權(quán)利要求1至10中任意ー項的化合物和/或其生理學可接受的鹽用于抑制 ATP消耗蛋白、優(yōu)選TGF-β受體激酶和/或ALK5的應(yīng)用。
13.藥物，其包含至少ー種依據(jù)權(quán)利要求1至10中任意ー項的化合物和/或生理學可接受的鹽。
14.藥物組合物，其包含作為活性成份的有效量的至少ー種依據(jù)權(quán)利要求1至10中任意ー項的化合物和/或其生理學可接受的鹽，以及可藥用輔助劑。
15.依據(jù)權(quán)利要求1至10中任意ー項的化合物和/或其生理學可接受的鹽，其用于預(yù)防性或治療性治療和/或監(jiān)測選自以下的疾病癌癥、腫瘤生長、轉(zhuǎn)移性生長、纖維變性、再狹窄、HIV感染、神經(jīng)變性疾病、動脈粥樣硬化、炎癥、以及傷ロ愈合、血管發(fā)生、心血管系統(tǒng)、 骨、CNS和/或PNS的病癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)的雜芳基氨基喹啉衍生物，其中X、Z、Het、R1、R2、R3和R4具有依據(jù)權(quán)利要求1的含義，所述衍生物為ATP消耗蛋白的抑制劑，且尤其可以用于治療腫瘤。
文檔編號A61K31/4709GK102596200SQ201080050256
公開日2012年7月18日 申請日期2010年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月7日
發(fā)明者A·約恩齊克, C·阿門特, F·岑克 申請人:默克專利有限公司