專利名稱：用于制備微小rna 的方法及其治療性應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含治療有效量的miRNA的組合物，其用于治療受益于用這些組合物進(jìn)行治療的醫(yī)療病況的用途。本發(fā)明還涵蓋了用于制備包含miRNA的組合物的方法。
背景技術(shù)：
微小RNA(miRNA)是短的(約21- 個(gè)核苷酸)非編碼RNA，其被認(rèn)為通過(guò)與靶 mRNA的序列特異性堿基配對(duì)來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)。對(duì)于潛在的機(jī)制仍然知之甚少，但是其似乎涉及抑制翻譯起始。微小RNA的許多功能性角色暗示人類疾病中潛在地涉及微小RNA，以及其作為生長(zhǎng)和增殖的主要調(diào)節(jié)因子。由于在原發(fā)性人類腫瘤中許多微小RNA失調(diào)，暗示了微小RNA 在人類癌癥中的作用。因此，已將miRNA的缺乏或過(guò)量與許多臨床上重要的疾病(從心肌梗死至癌癥)相關(guān)聯(lián)。還暗示了微小RNA在免疫系統(tǒng)的發(fā)育和調(diào)節(jié)中的潛在作用。免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵組分炎癥在防御(生理學(xué)的)和病理生理事件中均起作用以維持組織、器官和個(gè)體細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。急性炎癥是以經(jīng)典的炎癥跡象(即腫脹、發(fā)紅、疼痛、熱和喪失功能)為特征的短期過(guò)程，所述炎癥跡象是由于含有數(shù)種經(jīng)活化的組分(例如白細(xì)胞介素、抗體、激素等)和白細(xì)胞的血漿滲入組織而產(chǎn)生的。只要有害的刺激物存在其就發(fā)生， 并且一旦去除所述刺激物其就停止。慢性炎癥是以同時(shí)發(fā)生的主動(dòng)型炎癥、組織破壞和試圖修復(fù)為特征的病理狀況。慢性發(fā)炎的組織的特征在于單核免疫細(xì)胞(單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞和其它血漿細(xì)胞)的滲入、組織破壞、和試圖愈合，這包括血管生成和纖維化。沒(méi)有炎癥時(shí)，傷口和感染將不能愈合并且組織的逐漸破壞將威脅生物體的生存。 另一方面，不適當(dāng)?shù)难装Y可導(dǎo)致各種疾病，這包括但不限于下列適應(yīng)癥，例如枯草熱、動(dòng)脈粥樣硬化、神經(jīng)退行性疾病(例如阿爾茨海默癥)、癌癥和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。由于這些原因，炎癥被身體嚴(yán)密調(diào)控。在感染條件下，單核免疫細(xì)胞被吸引到感染的位點(diǎn)，試圖通過(guò)吞噬作用而清除外來(lái)病原體。白細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞在此被病原體活化以合成和釋放促炎細(xì)胞因子，例如IL-I α， IL-I β，IL-3，IL-5，IL-6，IL-8，TNF-α (腫瘤壞死因子- α )，GM-CSF (巨噬細(xì)胞集落刺激因子)，NF-kB(活化的B細(xì)胞的核因子κ輕鏈增強(qiáng)子)和MCP-I (單核細(xì)胞趨化蛋白-1)。 然后，這些被釋放的細(xì)胞因子進(jìn)一步吸引更多的免疫細(xì)胞到被感染的位點(diǎn)，這放大免疫系統(tǒng)的應(yīng)答以使宿主防御外來(lái)病原體。樹(shù)突細(xì)胞源自造血骨髓祖細(xì)胞。這些祖細(xì)胞起初轉(zhuǎn)換為不成熟的樹(shù)突細(xì)胞。這些細(xì)胞的特征在于高的內(nèi)吞活性和低的T細(xì)胞活化潛能。不成熟的樹(shù)突細(xì)胞持續(xù)地從周圍的環(huán)境對(duì)于外來(lái)病原體取樣。這是通過(guò)模式識(shí)別受體(例如toll樣受體(TLRs))進(jìn)行的，其識(shí)別在病原體亞群上發(fā)現(xiàn)的特定化學(xué)標(biāo)記。一旦它們與可呈遞的抗原接觸，它們就被活化為成熟的樹(shù)突細(xì)胞并開(kāi)始向淋巴結(jié)遷移。不成熟的樹(shù)突細(xì)胞吞噬病原體并將它們的蛋白降解成為小塊，并在成熟之后利用MHC分子在其細(xì)胞表面呈遞那些片段。同時(shí)，它們上調(diào)在T細(xì)胞活化中作為共同受體的細(xì)胞表面受體。一旦位于淋巴結(jié)中，它們?cè)诨罨瘞椭鶷細(xì)胞和殺傷T細(xì)胞以及B細(xì)胞中通過(guò)呈遞源自病原體的抗原以及非抗原特異性共刺激信號(hào)而作為抗原呈遞細(xì)胞。對(duì)大多數(shù)哺乳動(dòng)物miRNA的生物學(xué)功能和體內(nèi)功能仍知之甚少，而且關(guān)于miRNA 為何失調(diào)以及如何失調(diào)的潛在機(jī)制大部分未知。糖皮質(zhì)激素(也稱作“皮質(zhì)類固醇”或“甾類藥物”)以及非甾體抗炎藥物(NSAIDs) 如今代表用于廣泛炎性病況(包括急性炎癥)的最有效的臨床治療之一。然而，這些藥物可具有可能威脅患者的總體健康的副作用。仍存在對(duì)于開(kāi)發(fā)安全、有效的治療自體免疫疾病、炎性病癥以及癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥的方法的需求。本發(fā)明提供了用于治療此類疾病和病癥的組合物和方法。發(fā)明目的本發(fā)明的實(shí)施方案的目的在于提供適于治療自體免疫疾病，炎性病癥和癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥(包括但不限于不育癥、減少的精子產(chǎn)生、習(xí)慣性流產(chǎn)和結(jié)腸炎)的組合物。發(fā)明概述本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了在活化或刺激體液或其元素中的細(xì)胞或細(xì)胞組分之后，所述體液或其元素中的特定miRNA被上調(diào)，并且包含miRNA的組合物可被用于治療或緩解疾病、病癥或體內(nèi)功能失調(diào)的癥狀，例如與炎癥相關(guān)的病況，免疫系統(tǒng)的疾病(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)和/或癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥。本發(fā)明的第一個(gè)方面涉及包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)； 用于制備藥物。本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物，在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)；用于治療選自下列的適應(yīng)癥與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)，癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥，例如白血病，慢性炎癥， 牙周病，習(xí)慣性流產(chǎn)，潰瘍性結(jié)腸炎，風(fēng)濕性多肌痛，急性頸部扭傷相關(guān)病癥，子宮內(nèi)膜異位癥(例如子宮腺肌病)，帕金森氏病，阿爾茨海默病，癡呆，糖尿病(例如I型糖尿病)，AIDS/ HIV,骨質(zhì)疏松癥，銀屑病和傷口愈合，生殖系統(tǒng)中的病況，例如精子產(chǎn)生低、配偶子或其衍生物中的炎性或退行性病況、產(chǎn)生單純支持細(xì)胞綜合征以及人和動(dòng)物中的胎兒流產(chǎn)。此外，根據(jù)本發(fā)明的組合物可具有在下列病況中增強(qiáng)卵巢中的原始卵泡發(fā)育的作用，所述病況為例如卵巢中的退行性疾病，染色體畸變或腹膜腔中的炎性病況。本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及用于制備包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物的方法，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)，所述方法包括下列步驟a)從哺乳動(dòng)物中收集所述體液或其元素；b)與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素；c)收集在步驟b)之后產(chǎn)生的所述體液并且任選地純化所述miRNA。
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在一些實(shí)施方案中，在步驟b)中孵育所述體液或其元素超過(guò)M小時(shí)，例如超過(guò)48 小時(shí)，例如超過(guò)60小時(shí)，72小時(shí)，84小時(shí)，96小時(shí)，120小時(shí)或150小時(shí)。本發(fā)明的另一方面涉及用于制備包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物的方法，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述 miRNA被上調(diào)，所述方法包括下列步驟a)從哺乳動(dòng)物中收集所述體液或其元素；b)與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素；c)鑒別在所述體液或其元素中被上調(diào)的一種或多種miRNA ；d)以分離的形式提供在步驟c)中鑒別的所述一種或多種miRNA分子并將它們加入所述組合物中。本發(fā)明的另一方面涉及分部試劑盒，其包括a)用于制備包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物的設(shè)備，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)，所述設(shè)備包含任選地具有誘導(dǎo)物的容器；和b)用于根據(jù)本發(fā)明的方法使用的說(shuō)明書(shū)；和c)任選地磁性納米顆粒制備物，例如包被了聚乙烯亞胺(PEI)的鐵磁性納米顆粒。在一些實(shí)施方案中，所述容器具有在內(nèi)部空間四周連續(xù)形成的壁結(jié)構(gòu)和在所述壁的頂端提供的進(jìn)入點(diǎn)用于向所述內(nèi)部空間中注射體液或其元素。本發(fā)明的另一方面涉及用于治療或緩解下列的癥狀的方法與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)和/或癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥，所述方法包括向需要所述治療的受試者施用包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的治療方法還包括在施用包含與所述miRNA分子相結(jié)合的磁性納米顆粒制備物的所述組合物后，在疾病位點(diǎn)中或附近(例如腫瘤中或附近)體內(nèi)放置磁體的步驟。本發(fā)明的另一方面涉及治療或緩解自體免疫病癥疾病的癥狀或不適當(dāng)?shù)募?xì)胞生長(zhǎng)或應(yīng)答的方法，其中使用病毒載體來(lái)向體內(nèi)引入mirRNA。本發(fā)明的另一方面涉及適于本發(fā)明的方法的設(shè)備，其由適于離心的60ml容器組成，所述容器包括兩個(gè)用于注射的橡膠口和用于壓力均衡的小孔，所述容器含有或不含 2-25克的玻璃珠，l-8mm，例如4mm。也可使用除珠子之外的、用于增加表面區(qū)域的其它工具。其它潛在適用的設(shè)備在EP0740964，EP1638691, W02008097230, EP1093390 或 EP1549552中的任一項(xiàng)中描述，在所述設(shè)備的上清液收集室中預(yù)裝了珠子以刺激miRNA的產(chǎn)生，或者向上清液收集室提供刺激miRNA產(chǎn)生的表面結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的其它方面涉及用于活化血液制備物的方法，其中所述血液制備物在本文所描述的設(shè)備或潛在地 EP0740964, EP1638691, W02008097230, EP1093390 或 EP1M9552 的任一項(xiàng)中所描述的設(shè)備中被活化，在所述設(shè)備的上清液收集室中預(yù)裝了珠子以刺激miRNA的產(chǎn)生，或者向上清液收集室提供了剌激miRNA產(chǎn)生的表面結(jié)構(gòu)。發(fā)明詳述本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了，在活化(例如在表面上對(duì)含有單核細(xì)胞的體液進(jìn)行剌激)之后，某些miRNA被上調(diào)。本發(fā)明的發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了此類經(jīng)活化的體液可用于治療廣泛的適應(yīng)癥，例如與炎癥相關(guān)的疾病或病癥、免疫系統(tǒng)的疾病(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)、癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥。因此，本發(fā)明的發(fā)明人實(shí)現(xiàn)了，可制備組合物以含有治療上有效的miRNA分子或其功能性變體。在某些實(shí)施方案中，所述miRNA 選自hsa-let_7a，hsa-let-7a_l， hsa-let-7a-2, hsa-let-7a-3, hsa一let一7b， hsa一let一7b*， hsa一let一7c， hsa一let一7d， hsa_let一7d氺，hsa_let一7e， hsa_let一7e氺，hsa_let一7f， hsa_let一7f_l， hsa_let一7f一2， hsa_let_7g， hsa_let_7i， hsa_miR-l， hsa-miR-l_2， hsa-miR-100， hsa-miR-100-1， hsa-miR-100-2， hsa_miR-101， hsa_miR-101_1， hsa_miR-101a， hsa-miR-101b_2， hsa-miR-102， hsa_miR-103， hsa-miR-103_l， hsa-miR-103_2， hsa_miR-104， hsa-miR-105， hsa_miR-106a， hsa-miR-106a_l， hsa_miR-106b， hsa-miR-106b_l， hsa-miR-107， hsa-miR-10a， hsa-miR-10b， hsa_miR-122a， hsa-miR-1228^, hsa-miR-123， hsa_miR-124a， hsa-miR-124a_l， hsa-miR-124a_2， hsa-miR-124a_3， hsa_miR-125a， hsa_miR-125b，hsa-miR-125b_l，hsa-miR-125b_2，hsa_miR-126，hsa-miR-126_5p， hsa-miR-126*， hsa_miR_127， hsa_miR-128a， hsa_miR-128b， hsa_miR_129， hsa-miR-129-1， hsa-miR-129_2， hsa_miR-130， hsa_miR-130a， hsa-miR-130a_l， hsa_miR-130b， hsa-miR-130b_l， hsa_miR-132， hsa_miR-133a， hsa_miR-133b， hsa—miR-134， hsa_miR-135a， hsa_miR-135b， hsa—miR-136， hsa—miR-137， hsa_miR-138， hsa-miR-138-1， hsa-miR-138_2， hsa_miR-139， hsa-miR-139_5p， hsa_miR-140， hsa-miR-140*， hsa-miR-141， hsa-miR-142_3p， hsa-miR-142_5p， hsa-miR-143， hsa-miR-144,hsa-miR-144^,hsa_miR—145，hsa_miR—146a，hsa_miR—146a*，hsa_miR—146b， hsa-miR-147， hsa_miR-148a， hsa_miR-148b， hsa—miR-149， hsa—miR-15， hsa_miR-150， hsa-miR-151, hsa-miR-151^, hsa-miR-152, hsa-miR-153, hsa-miR-154, hsa-miR-154^, hsa-miR-155， hsa_miR-15a， hsa-miR-15a_2， hsa_miR-15b， hsa—miR-16， hsa-miR-16_l， hsa—miR-16-2， hsa_miR-16a， hsa—miR-164， hsa—miR-170， hsa-miR-172a_2， hsa—miR-17， hsa-miR-17_3p，hsa-miR-17_5p，hsa—miR-17-92，hsa—miR-18，hsa_miR-18a，hsa_miR-18b， hsa-miR_18a*， hsa_miR-181a， hsa-miR-181a_l， hsa-miR-181a_2， hsa_miR-181a*， hsa-miR-181a-l*， hsa_miR-181b， hsa-miR-181b_l， hsa-miR-181b_2， hsa_miR-181c， hsa-miR-181d, hsa-miR-182, hsa-miR-182^, hsa-miR-183, hsa-miR-184, hsa-miR-185, hsa-miR-186， hsa_miR-188， hsa_miR-189， hsa_miR-190， hsa_miR_191， hsa_miR_192， hsa-miR-192-1， hsa-miR-192_2， hsa-miR-192_3， hsa_miR_193a， hsa_miR_193b， hsa-miR-194， hsa_miR-195， hsa_miR-195*， hsa_miR-196a， hsa-miR-196a_2， hsa_miR-196b，hsa_miR-197，hsa_miR-198，hsa_miR-199a，hsa-miR-199a_l， hsa-miR-199a-l_5p， hsa-miR-199a_2， hsa-miR-199a-2_5p， hsa-miR-199a_3p， hsa_miR-199b， hsa-miR-199b_5p， hsa_miR-19a， hsa_miR-19b， hsa-miR-19b_l，hsa-miR-19b-2，hsa_miR-200a，hsa_miR-200b，hsa_miR-200c，hsa—miR-202，hsa—miR-203， hsa-miR-204， hsa_miR-205， hsa_miR-206， hsa_miR-207， hsa_miR-208， hsa_miR-20a， hsa_miR-20b， hsa_miR-21， hsa_miR-210， hsa_miR-211， hsa_miR-212， hsa_miR-213， hsa-miR-214, hsa-miR-215, hsa-miR-216, hsa-miR-217, hsa-miR-218, hsa-miR-218-2, hsa-miR-219， hsa-miR-219_l， hsa_miR_22， hsa_miR-220， hsa_miR_221， hsa_miR_222， hsa-miR-223， hsa-miR-224， hsa_miR-23a， hsa_miR-23b， hsa-miR-24， hsa-miR-24-1， hsa—miR-24-2，hsa—miR-25，hsa_miR-26a，hsa-miR-26a_l，hsa-miR-26a_2，hsa_miR-26b， hsa_miR-27a， hsa_miR-27b， hsa_miR-28， hsa—miR-296， hsa—miR-298， hsa-miR-299_3p， hsa-miR-299_5p， hsa_miR-29a， hsa-miR-29a_2， hsa_miR-29b， hsa-miR-29b_l， hsa-miR-29b_2，hsa_miR-29c，hsa—miR-301，hsa—miR-302，hsa_miR-302a，hsa_miR-302b， hsa-miR-302b*， hsa_miR-302c， hsa_miR-302c*， hsa_miR-302d， hsa_miR-30a， hsa-miR-30a_3p， hsa-miR-30a_5p， hsa_miR-30b， hsa_miR-30b*， hsa_miR-30c， hsa-miR-30c_l，hsa_miR-30d，hsa_miR-30e，hsa-miR-SOe^,hsa-miR-30e_5p，hsa—miR-31， hsa-miR-32， hsa_miR-32*， hsa_miR-320， hsa-miR-320-2， hsa_miR-320a， hsa-miR-323， hsa-miR-324_3p， hsa-miR-324_5p， hsa_miR-325， hsa_miR-326， hsa_miR-328， hsa-miR-328—1， hsa—miR-33， hsa—miR-330， hsa—miR-331， hsa—miR-335， hsa—miR-337， hsa-miR-337_3p， hsa_miR-338， hsa-miR-338_5p， hsa_miR-339， hsa-miR-339_5p， hsa-miR-34a*，hsa-miR-340，hsa-miR-340*，hsa-miR-341，hsa-miR-342，hsa-miR-342_3p， hsa—miR-345， hsa—miR-346， hsa—miR-347， hsa_miR-34a， hsa_miR-34b， hsa_miR-34c， hsa-miR-351， hsa_miR-352， hsa_miR-361， hsa_miR-362， hsa_miR-363， hsa_miR-355， hsa—miR-365， hsa—miR-367， hsa—miR-368， hsa-miR-369_5p， hsa—miR-370， hsa—miR-371， hsa-miR-372， hsa_miR-373， hsa—miR-373*， hsa_miR-374， hsa—miR-375， hsa_miR-376a， hsa_miR-376b， hsa—miR-377， hsa—miR-378， hsa—miR-379， hsa—miR-381， hsa—miR-382， hsa-miR-383， hsa-miR-409_3p， hsa_miR_419， hsa_miR_422a， hsa_miR_422b， hsa-miR-423， hsa-miR-424， hsa-miR-429， hsa-miR-431， hsa-miR-432， hsa-miR-432*， hsa-miR-433，hsa_miR-449a，hsa—miR-451，hsa-miR-452，hsa-miR-483，hsa-miR-483_3p， hsa-miR-484， hsa-miR-485_5p， hsa-miR-485_3p， hsa-miR-486， hsa_miR-487b， hsa-miR-451，hsa-miR-452, hsa—miR-452*，hsa—miR-491，hsa-miR-492，hsa-miR-493_3p， hsa-miR-493-5p， hsa_miR_494， hsa_miR_495， hsa_miR_497， hsa-miR-498， hsa_miR_5， hsa—miR-501， hsa—miR-503， hsa—miR-508， hsa—miR-509， hsa—miR-510， hsa—miR-511， hsa-miR-512_5p， hsa_miR-513， hsa-miR-513_l， hsa-miR-513_2， hsa-miR-515_3p， hsa-miR-516_5p， hsa-miR-516_3p， hsa-miR-518a_2*， hsa_miR-518b， hsa_miR-518c*， hsa-miR_519a，hsa_miR-519d，hsa_miR-520c，hsa-miR-521，hsa-miR-524*，hsa-miR-525*， hsa-miR-532_5p， hsa—miR-539， hsa-miR-542_3p， hsa-miR-542_5p， hsa—miR-550， hsa_miR-551a， hsa—miR-561， hsa—miR-563， hsa—miR-565， hsa—miR-572， hsa—miR-582， hsa—miR-584， hsa—miR-594， hsa—miR-595， hsa—miR-598， hsa—miR-600， hsa—miR-601， hsa—miR-602， hsa—miR-605， hsa—miR-608， hsa—miR-611， hsa—miR-612， hsa—miR-615， hsa-miR-615_3p， hsa—miR-622， hsa—miR-627， hsa—miR-628， hsa—miR-635， hsa—miR-637， hsa—miR-638， hsa—miR-642， hsa—miR-648， hsa—miR-652， hsa—miR-654， hsa—miR-657，hsa-miR-658, hsa-miR-659, hsa-miR-662, hsa-miR-663, hsa-miR-7, hsa-miR-7—1, hsa-miR-7-1*, hsa-miR-7-2, hsa-miR-7-3, hsa-miR-708, hsa-miR-765, hsa-miR-769_3p, hsa-miR-802, hsa-miR-885_3p, hsa-miR-9, hsa-miR-9-1, hsa-miR-9-3, hsa_miR-9氺， hsa-miR-9_3p, hsa-miR-92, hsa-miR-92—1, hsa-miR-92—2, hsa-miR-9—2, hsa-miR-92, hsa-miR-92a, hsa-miR-93, hsa-miR-95, hsa-miR-96, hsa-miR-98, hsa_miR-99a 禾口 hsa-miR-99b，及其變體。在一些實(shí)施方案中，所述miRNA 選自hsa-Let_7a，hsa_Let_7b，hsa_Let_7b*， hsa-Let~7c, hsa-Let-7d, hsa_Let_7d氺,hsa-Let~7e, hsa-Let~7f, hsa_Let_7f■氺, hsa-Let_7g, hsa-Let_7g*, hsa-Let_7i, hsa-miR-103, hsa_miR-106A, hsa_miR-106B, hsa-miR-107, hsa-miR-125A, hsa-miR-125B, hsa-miR-126, hsa-miR-128, hsa-miR-130A, hsa-miR-130B, hsa-miR-140-3P, hsa-miR-140-5P, hsa-miR-142-3P, hsa-miR-142-5P, hsa-miR-143, hsa-miR-144, hsa-miR-146A, hsa-miR-148A, hsa-miR-148B, hsa-miR-150, hsa-miR-151_3P, hsa-miR-151_5P, hsa-miR-152, hsa_miR-15A, hsa_miR-15B, hsa-miR-16, hsa-miR-15B*, hsa-miR-17, hsa_miR-181A, hsa-miR-185, hsa-miR-186, hsa-miR-18A, hsa-miR-18A*, hsa-miR-18B, hsa-miR-192, hsa-miR-191, hsa-miR-194, hsa-miR-197, hsa-miR-1979, hsa-miR-19A, hsa-miR-19B, hsa-miR-20A, hsa-miR-20B, hsa-miR-21, hsa-miR-205, hsa-miR-210, hsa-miR-215, hsa-miR-22, hsa-miR-22*, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-223, hsa-miR-223*, hsa-miR-23A, hsa-miR-23B, hsa-miR-24, hsa-miR-25, hsa_miR-26A, hsa_miR-26B, hsa_miR-27A, hsa_miR-27B, hsa-miR-28-5P, hsa_miR-29A， hsa_miR-29B， hsa_miR-29C， hsa_miR-30A， hsa_miR-301A， hsa-miR-30B, hsa-miR-30C, hsa-miR-30D, hsa-miR-30E, hsa-miR-320A, hsa-miR-320B, hsa-miR-324-3P, hsa-miR-326, hsa-miR-328, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-339_5P, hsa_miR-33A, hsa-miR-342_3P, hsa-miR-365, hsa-miR-378, hsa-miR-423-3P, hsa-miR-423-5P, hsa-miR-424, hsa-miR-425, hsa-miR-451, hsa-miR-484, hsa-miR-486-5P, hsa-miR-505, hsa-miR-502-3P, hsa-miR-590-5P, hsa-miR-628-3P, hsa-miR-652, hsa-miR-660, hsa-miR-720, hsa_miR-92A， hsa_miR-92B， hsa-miR-93, hsa-miR-93*, hsa-miR-99A, hsa-miR-99B, hsa-miR-103-2*, hsa-miR-106B*, hsa-miR-133A, hsa_miR-133B，hsa-miR-338_3P，hsa-miR-340,hsa_miR-34A，hsa_miR-34B， hsa-miR-376A, hsa-miR-532-3P, hsa-miR-125A-5P, hsa-miR-154, hsa-miR-196B, hsa-miR-1979, hsa-miR-326, hsa-miR-425*, hsa-miR-127-3P, hsa-miR-1537, hsa-miR-183, hsa-miR-29B-2*, hsa-miR-339-3P, hsa-miR-551A, hsa-miR-629, hsa-miR-766, hsa-miR-2110, hsa-miR-361-3P, hsa-miR-501-5P, hsa-miR-940, hsa-miR-1249, hsa-miR-132, hsa-miR-1538, hsa-miR-149, hsa-miR-125a-5P, hsa-miR-132, hsa-miR-155, hsa-miR-182, hsa-miR-324-5P, hsa-miR-331-3P, hsa-miR-335, hsa_miR-374b 和 hsa-miR-532_5P，及其變體。在一些實(shí)施方案中，所述miRNA是Let_7家族的成員，或其變體。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物還包括選自下組的miRNA :hsa-miR-7, hsa-Let-7a, hsa-Let-7b, hsa_Let_7b氺,hsa-Let-7c, hsa-Let-7d, hsa_Let_7d氺, hsa-Let~7e, hsa-Let~7f, hsa_Let_7f氺,hsa-Let-7g, hsa_Let_7g氺,hsa-Let-7i,hsa-miR-103, hsa-miR-106A, hsa-miR-106B, hsa-miR-107, hsa-miR-125A, hsa-miR-125B, hsa-miR-126, hsa-miR-128, hsa-miR-130A, hsa-miR-130B, hsa-miR-140-3P, hsa-miR-140-5P, hsa-miR-142-3P, hsa-miR-142-5P, hsa-miR-143, hsa-miR-144, hsa-miR-146A, hsa-miR-148A, hsa-miR-148B, hsa-miR-150, hsa-miR-151-3P, hsa-miR-151_5P, hsa-miR-152, hsa_miR-15A, hsa_miR-15B, hsa-miR-16, hsa-miR-15B*, hsa-miR-17, hsa-miR-181A, hsa-miR-185, hsa-miR-186, hsa-miR-18A, hsa-miR-18A*, hsa-miR-18B, hsa-miR-192, hsa-miR-191, hsa-miR-194, hsa-miR-197, hsa-miR-1979, hsa-miR-19A, hsa-miR-19B, hsa-miR-20A, hsa-miR-20B, hsa-miR-21, hsa-miR-205, hsa-miR-210, hsa-miR-215, hsa-miR-22, hsa-miR-22*, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-223, hsa-miR-223*, hsa-miR-23A, hsa-miR-23B, hsa-miR-24, hsa-miR-25, hsa-miR-26A, hsa-miR-26B, hsa-miR-27A, hsa-miR-27B, hsa-miR-28-5P, hsa-miR-29A, hsa-miR-29B, hsa-miR-29C, hsa-miR-30A, hsa-miR-301A, hsa-miR-30B, hsa-miR-30C, hsa-miR-30D, hsa_miR-30E，hsa_miR-320A，hsa_miR-320B，hsa-miR-324_3P，hsa-miR-326, hsa-miR-328, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-339-5P, hsa-miR-33A, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-365, hsa-miR-378, hsa-miR-423-3P, hsa-miR-423-5P, hsa-miR-424, hsa-miR-425, hsa-miR-451, hsa-miR-484, hsa-miR-486_5P， hsa-miR-505, hsa-miR-502-3P, hsa-miR-590-5P, hsa-miR-628-3P, hsa-miR-652, hsa-miR-660, hsa-miR-720, hsa-miR-92A, hsa-miR-92B, hsa-miR-93, hsa-miR-93*, hsa-miR-99A, hsa-miR-99B, hsa-miR-103-2*, hsa-miR-106B*, hsa-miR-133A, hsa-miR-133B, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-340, hsa-miR-34A, hsa-miR-34B, hsa-miR-376A, hsa-miR-532-3P, hsa-miR-125A-5P, hsa-miR-154, hsa-miR-196B, hsa-miR-1979, hsa-miR-326, hsa-miR-425*, hsa-miR-127-3P, hsa-miR-1537, hsa-miR-183, hsa-miR-29B-2*, hsa-miR-339-3P, hsa-miR-551A, hsa-miR-629, hsa-miR-766, hsa-miR-2110, hsa-miR-361-3P, hsa-miR-501-5P, hsa-miR-940, hsa-miR-1249, hsa-miR-132, hsa-miR-1538,禾口 hsa-miR-149， hsa-miR-125a_5P， hsa-miR-132, hsa-miR-155, hsa-miR-182, hsa-miR-324_5P, hsa-miR-331-3P, hsa-miR-335, hsa-miR-374b, 禾口 hsa-miR-532_5P, hsa_miR-320a, hsa_miR-130a, hsa_miR-320c, hsa-miR-628_3p, hsa-miR-637, hsa_miR-320b, hsa-miR-129_5p, hsa-miR-943, hsa-miR-185*, hsa-miR-340*, hsa-miR-744, hsa-miR-638, hsa-miR-585, hsa-miR-26b, hsa-miR-485_3p, hsa-miR-103, hsa-miR-146b_5p, hsa-miR-642, hsa_miR-146a, hsa-let_7a, hsa-let_7f, hsa_miR-200b*, hsa_miR-320d, hsa-let_7d, hsa-miR-1282, hsa-miR-124, hsa-miR-602, hsa-let-7g, hsa-miR-221, hsa-miR-25*, hsa-miR-1184, hsa-miR-663, hsa-miR-93, hsa-miR-30b*, hsa-miR-124*, hsa-miR-22, hsa-miR-1281, hsa-miR-1237, hsa_miR-34b，hsa-miR-1290,hsa_miR-193b*，hsa_miR-526b，hsa-miR-622, hsa-miR-191,hsa-miR-142_3p, hsa_miR-92a,hsa-miR-1280, hsa-miR-1236, hsa_miR-30c, hsa-miR-877*, hsa-miR-548n, hsa-miR-1249, hsa-let-7i, hsa-miR-1224-3p, hsa-miR-17, hsa-miR-300, hsa-miR-193a-5p, hsa_let_7cHs hsa-miR-24, hsa_miR_518c氺， hsa-miR-222, hsa-miR-664,hsa_miR-130b，hsa-miR-625*，hsa-miR-593,hsa-miR-885_5p， hsa-miR-505*, hsa_miR_491_3p, hsa-miR-421, hsa-miR-7, hsa-miR-106a, hsa_miR_99b氺，hsa-miR-1300, hsa-miR-92b, hsa-miR-30d, hsa-miR-720, hsa-miR-1260, hsa-miR-425, hsa-miR-939, hsa_miR-30a, hsa_miR-30e, hsa-miR-654_5p, hsa-miR-509_5p, hsa-miR-1826，及其變體。定義如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“miRNA”或“miR”或“微小RNA”是指長(zhǎng)度為17至25個(gè)核苷酸的非編碼RNA，其與編碼RNA雜交并調(diào)節(jié)編碼RNA的表達(dá)。17-25個(gè)核苷酸的miRNA 分子可通過(guò)天然的加工途徑(例如使用完整的細(xì)胞或細(xì)胞裂解物)或通過(guò)合成的加工途徑 (例如使用分離的加工酶，如分離的Dicer，Argonaut或RNA酶III)而從miR前體獲得。所理解的是所述17-25個(gè)核苷酸的RNA分子也可通過(guò)生物或化學(xué)合成直接產(chǎn)生，而未經(jīng)從miR 前體加工。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“miRNA分子”是指代表miRNA的任何核酸分子。此定義中所包括的是天然miRNA分子、pre-miRNA, pri-miRNA,核酸序列與天然形式以及其中一個(gè)或多個(gè)核酸被一個(gè)或多個(gè)DNA核苷酸和/或核酸類似物替代或代表的核酸序列相同的miRNA 分子。本說(shuō)明書(shū)中的miRNA分子有時(shí)指編碼miRNA的核酸分子或簡(jiǎn)單地指核酸分子。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“miR前體”，“pre-miRNA”或“pre-miR”是指具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼RNA，其含有miRNA。在某些實(shí)施方案中，pre-miRNA是初級(jí)mi-RNA轉(zhuǎn)錄物的剪切產(chǎn)物，或者“pri-miR”是由雙鏈RNA特異性核糖核酸酶(已知為Drosha)產(chǎn)生的，但 pre-miRNA也可直接通過(guò)生物學(xué)或化學(xué)合成而不經(jīng)從pri-miR加工而產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)“體液或其元素”是指任何液體或源自其的元素，其可從哺乳動(dòng)物的身體獲得。包含在此定義中的是腦脊液、血液(例如來(lái)自循環(huán)系統(tǒng)或臍帶的血液)、血清、淋巴液、 血漿、胸膜滲出液、腹膜滲出液、骨髓滲出液、細(xì)胞外液、來(lái)自關(guān)節(jié)的液體、羊水。此定義中所包括的還有細(xì)胞(例如造血干細(xì)胞)或體外的細(xì)胞培養(yǎng)物(例如單核細(xì)胞培養(yǎng)物)，以及外核體或可源自體液的其它物質(zhì)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“經(jīng)調(diào)節(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)基”是指這樣的培養(yǎng)基(例如生長(zhǎng)培養(yǎng)基)，其中細(xì)胞被培養(yǎng)(例如體外培養(yǎng))了一段時(shí)間。所述培養(yǎng)的時(shí)間段可以是1，2，4， 8，16，24，48，72小時(shí)，或者只要細(xì)胞是存活和穩(wěn)定的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液包含白細(xì)胞，例如單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞?？赏ㄟ^(guò)骨髓吸出而獲得骨髓滲出液，其中通過(guò)針去除一定量的骨髓(例如從髖部)。放置針穿過(guò)骨的上層，并通過(guò)吸入注射器中而獲得含有骨髓細(xì)胞的液體樣品?？蛇M(jìn)一步離心骨髓滲出液以獲得含有血細(xì)胞的級(jí)分。在一些實(shí)施方案中，所述體液為血液，例如外周血或源自血液的任何組分，例如單核細(xì)胞。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“活化”、“活化的”或“經(jīng)調(diào)節(jié)的”是指在包含表面的容器中體外或體內(nèi)處理體液或其元素一段時(shí)間，例如能夠激發(fā)白細(xì)胞(例如血液制備物中的單核細(xì)胞或樹(shù)突細(xì)胞)中的免疫應(yīng)答的表面。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)暴露于增強(qiáng)劑、或通過(guò)刺激以表達(dá)增強(qiáng)劑而活化全血。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“自體的”是指制備向與其所來(lái)自的同一個(gè)體施用的組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物對(duì)于需要所述治療的哺乳動(dòng)物而言是自體的。如本文中所使用的，用語(yǔ)“緩解癥狀”是指減少病況或疾病的至少一種指征的嚴(yán)重性。在某些實(shí)施方案中，緩解癥狀包括延遲或減緩病況或疾病的一種或多種指征的進(jìn)展。可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的主觀或客觀度量來(lái)確定指征的嚴(yán)重性。在本文的語(yǔ)境中，術(shù)語(yǔ)“治療”意在也包括預(yù)防預(yù)期的、與炎癥相關(guān)的病況，免疫系統(tǒng)的疾病(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)，癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥。因此，術(shù)語(yǔ)“治療”包括預(yù)防性施用根據(jù)本發(fā)明的一種或多種miRNA分子或其功能性變體。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“受試者”意在指任何動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物(例如人)， 并且適當(dāng)時(shí)可與術(shù)語(yǔ)“患者”可互換地使用。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“癌癥”包括但不限于固體腫瘤和血液產(chǎn)生的腫瘤，這包括白血病和淋巴瘤。術(shù)語(yǔ)癌癥是指皮膚、組織、器官、骨、軟骨、血液和脈管的疾病。術(shù)語(yǔ)“癌癥”還涵蓋原發(fā)性和轉(zhuǎn)移的癌癥。微小RNA本發(fā)明針對(duì)的是與使用miRNA分子治療選自下列的適應(yīng)癥相關(guān)的組合物和方法 與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)，癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥。本領(lǐng)域所熟知的是，可對(duì)miRNA或pre_miRNA或pri_miRNA的序列進(jìn)行修飾而不破壞miRNA活性。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)miRNA序列的“功能性變體”是指寡核苷酸序列， 其不同于天然的miRNA序列，但保留了所述miRNA的一個(gè)或多個(gè)功能特征(例如，癌細(xì)胞增殖抑制、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、提高癌細(xì)胞對(duì)于化學(xué)治療劑的敏感性、特定的miRNA靶標(biāo)抑制)。 在一些實(shí)施方案中，“功能性變體，，是指一個(gè)或兩個(gè)核苷酸不同(例如一個(gè)或兩個(gè)取代、添加、缺失或其組合)的miRNA。在一些實(shí)施方案中，miRNA序列的功能性變體保持所述miRNA 的所有功能特征。在某些實(shí)施方案中，miRNA的功能性變體具有的核堿基序列在約5，6，7， 8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，30，35，40，45，50，55，60，65， 70，75，80，85，90，95，100或更多核堿基的區(qū)域中與所述miRNA或其前體至少約60%，65%， 70%，75%，80%，85%，90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%或 99% 同一，或者所述功能性變體在嚴(yán)緊雜交條件下與所述miRNA或其前體的補(bǔ)體雜交。因此，在某些實(shí)施方案中，功能性變體的核堿基序列可能能夠與miRNA的一個(gè)或多個(gè)靶標(biāo)序列雜交。所理解的是，本文所示的任何核堿基序列都獨(dú)立于任何糖部分、核苷間連接或核堿基的修飾。還理解的是，包含U的核堿基序列也涵蓋相同的核堿基序列，其中在一個(gè)或多個(gè)具有“U”的位置中“U”被“T”取代。相應(yīng)地，所理解的是包含“T”的核堿基序列也涵蓋相同的核堿基序列，其中在一個(gè)或多個(gè)具有“T”的位置中“T”被“U”取代。本文所描述的核堿基序列miRNA及其相應(yīng)的莖-環(huán)序列可在miRBase中找到，所述miRBase是在線的可檢索miRNA序列和注釋數(shù)據(jù)庫(kù)，在http://microRNA. sanger. ac. uk/ 找到。miRBase序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的錄入代表所預(yù)測(cè)的miRNA轉(zhuǎn)錄物的發(fā)夾部分(莖-環(huán))，含有關(guān)于成熟miRNA序列的位置和序列的信息。所述數(shù)據(jù)庫(kù)中的miRNA莖-環(huán)序列不是嚴(yán)格的前體miRNA (pre-miRNA)，并且在一些情形中可包括pre_miRNA和一些來(lái)自推測(cè)的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物的側(cè)翼序列。本文所述的miRNA核堿基序列涵蓋任何版本的miRNA，這包括miRBase序列數(shù)據(jù)庫(kù)的發(fā)行(Release) 10. 0中所描述的序列和miRBase序列數(shù)據(jù)庫(kù)的任何更早的發(fā)行中所描述的序列。序列數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)行可引起某些miRNA的重命名。序列數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)行可引起成熟miRNA序列的變化。術(shù)語(yǔ)“Let_7miRNA家族”是指包括下列種類的miRNA的集合hsa-let-7a_l， hsa-let-7a-2, hsa-let-7a-3, hsa-let-7b, hsa-let-7c, hsa-let-7d, hsa-let-7e, hsa-let-7f-l, hsa-let-7f-2, hsa-let~7g 禾口 hsa_let_7i。本發(fā)明涉及含有核酸分子的藥物組合物。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“核酸分子”意在包括DNA分子和RNA分子以及使用核苷酸類似物產(chǎn)生的DNA或RNA類似物。所述核酸分子可以是單鏈的或雙鏈的，例如以小的干擾RNA(siRNA)或雙鏈miRNA(dsmiRNA)的形式，并且可使用純化的酶或通過(guò)化學(xué)合成而產(chǎn)生。它們可以是粗制的或純化的。除非另外指明， 術(shù)語(yǔ)“miRNA”是指成熟的miRNA序列。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸分子包含與全長(zhǎng)的miRNA至少約60%，65%， 70%，75%，80%，85%，90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99% 或更多同一的核苷酸序列，或者包含任何這些核苷酸序列的部分。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸分子所包含的核苷酸序列長(zhǎng)度少于約100個(gè)核苷酸，例如長(zhǎng)度少于約80個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約60個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約40個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約30個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約25個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約23個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約21個(gè)核苷酸、例如長(zhǎng)度少于約19個(gè)核苷酸。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的核酸分子包含這樣的核苷酸序列，其長(zhǎng)度為至少約19個(gè)核苷酸，例如至少約21個(gè)核苷酸，例如至少約23個(gè)核苷酸，例如至少約25個(gè)核苷酸，例如至少約30個(gè)核苷酸，例如至少約40個(gè)核苷酸，例如至少約50個(gè)核苷酸，例如至少約50個(gè)核苷酸，例如至少約60個(gè)核苷酸，例如至少約80個(gè)核苷酸，例如至少約100個(gè)核苷酸。核酸序列可以是RNA或DNA，并且可以是單鏈的或雙鏈的，且可選自包含下列的組RNA核苷酸，DNA核苷酸，以及核酸類似物；例如肽-核酸(PNA)，偽-互補(bǔ)PNA (pc-PNA)， 鎖核酸(LNA)等。醫(yī)療病況可用根據(jù)本發(fā)明的方法治療的疾病或病癥可以是癌癥或與惡性或異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥，例如選自下列之一急性淋巴母細(xì)胞性白血病(ALL)，急性髓性白血病(AML)，急性前髓細(xì)胞性白血病(APL)，腺瘤，腎上腺皮質(zhì)癌，酒精性肝病(ALD)， 阿爾茨海默病，甲狀腺未分化癌(ATC)，焦慮癥，哮喘，自閉癥類群(ASD)，B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病，B細(xì)胞淋巴瘤，貝克肌營(yíng)養(yǎng)不良(BMD)，膀胱癌，乳腺癌，伯基特淋巴瘤，心肥大，心肌病，小腦神經(jīng)變性，宮頸癌，膽管上皮癌，慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)，慢性骨髓白血病(CML)，慢性胰腺炎，結(jié)腸直腸癌，先天性心臟病，冠狀動(dòng)脈疾病，考登綜合征，皮肌炎(DM)，糖尿病性腎病，腹瀉型腸易激綜合征(IBS-D)，彌散性巨大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)， 唐氏綜合征(DS)，杜興氏肌肉營(yíng)養(yǎng)不良癥(DMD)，子宮內(nèi)膜癌，子宮內(nèi)膜異位癥，肉樣瘤，上皮卵巢癌(EOC)，食道癌，面肩肱型肌營(yíng)養(yǎng)不良(FSHD)，濾泡性淋巴瘤(FL)，濾泡性甲狀腺癌(FTC)，額顳性癡呆，胃癌(胃部癌癥)，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腎小球疾病，腎小球硬化，錯(cuò)構(gòu)瘤，HBV相關(guān)肝硬化，HCV感染，頭頸癌，頭頸鱗狀細(xì)胞癌(HNSCC)，聽(tīng)覺(jué)喪失，心力衰竭，肝細(xì)胞癌(HCC)，霍奇金氏淋巴瘤，純合性鐮狀細(xì)胞病(HbSS)，亨廷頓氏病(HD)，高血壓，包涵體肌炎(IBM)，胰島素瘤，腎癌，喉癌，2A型肢帶型肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(LGMD2A)，脂肪瘤，肺癌，淋巴組織增生疾病，惡性淋巴瘤，惡性黑色素瘤， 惡性間皮瘤(MM)，套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)，髓母細(xì)胞瘤，黑色素瘤，黑色素瘤，代謝疾病，三好氏遠(yuǎn)端肌肉病變(MM)，多發(fā)性骨髓瘤(MM)，MYC重排淋巴瘤，骨髓增生病癥，肌瘤，鼻咽癌 (NPC)，線狀體肌病(NM)，腎炎，神經(jīng)細(xì)胞瘤(NB) ,neutrophiliais (過(guò)去的)，非小細(xì)胞肺癌癥(NSCLC)，肥胖癥，口癌，口癌，口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)，卵巢癌(OC)，胰腺癌，胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)，乳頭狀甲狀腺癌(PTC)，帕金森氏病，PFV-I感染，垂體腺瘤，多囊性腎病，多囊性肝病，真性紅細(xì)胞增多癥(PV)(過(guò)去的)，多肌炎(PM)，原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)，前列腺癌，銀屑病，肺性高血壓，復(fù)發(fā)的卵巢癌，腎透明細(xì)胞癌，色素性視網(wǎng)膜炎(RP)，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，肉瘤，精神分裂癥，罹患漿液性卵巢癌，皮膚病，脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)，鱗癌，T細(xì)胞白血病，畸胎癌，睪丸生殖細(xì)胞腫瘤，地中海貧血，甲狀腺癌，舌鱗狀細(xì)胞癌，圖雷特綜合征，2型糖尿病，潰瘍性結(jié)腸炎(UC)，子宮肌瘤(ULM)，葡萄膜黑色素瘤，血管疾病，水皰性口炎和華氏巨球蛋白血癥(WM)。在一些具體的實(shí)施方案中，可根據(jù)本發(fā)明的方法來(lái)治療的疾病或病癥可以是癌癥，例如黑色素瘤或肉樣瘤?？筛鶕?jù)本發(fā)明的方法來(lái)治療的另一種疾病是AIDS/HIV，例如防止HIV發(fā)展成為 AIDS。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可根據(jù)本發(fā)明的方法來(lái)治療的疾病是與凋亡、脂肪代謝或心血管疾病相關(guān)的適應(yīng)癥。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“牙周病”或“牙周炎”是指影響口腔內(nèi)的牙周組織的炎性疾病。在一些實(shí)施方案中，所述牙周病與局部疼痛，紅斑，腫脹，牙齒松弛和牙周袋(dental pocket)相關(guān)。術(shù)語(yǔ)“習(xí)慣性流產(chǎn)”也已知為“流產(chǎn)”，如本文中所使用的，這是指下述醫(yī)療病況在第20個(gè)妊娠周之前，通過(guò)從子宮娩出卵或胎兒而重復(fù)的自發(fā)終止妊娠(通常由于未知的原因)。在當(dāng)前的實(shí)施方案中，也被稱為原因不明性不孕的這一病況是由于因子的不平衡而使胚泡不附著并植入子宮內(nèi)膜，所述因子的不平衡被本發(fā)明所糾正。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“潰瘍性結(jié)腸炎”或“潰瘍結(jié)腸炎”是指大腸和/或直腸的慢性炎性疾病。潰瘍性結(jié)腸炎通常被表征為重復(fù)發(fā)作的腹痛以及發(fā)燒發(fā)寒，和劇烈腹瀉。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“風(fēng)濕性多肌痛”是指這樣的臨床綜合征，其特征在于頸、 肩帶和骨盆帶中的嚴(yán)重疼痛和僵硬，其通常引起近端肌肉群中的嚴(yán)重疼痛。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“急性頸部扭傷”或“急性頸部扭傷相關(guān)病癥”是指頸部的廣泛損傷，其是由頸部的突然扭曲引起的或與其相關(guān)。在一些實(shí)施方案中，急性頸部扭傷與機(jī)動(dòng)車事故、從自行車或馬上跌下或頭部碰撞相關(guān)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“子宮內(nèi)膜異位癥”是指婦女中一般性的病況，其中子宮內(nèi)膜細(xì)胞被置于子宮腔外面的區(qū)域中。置于子宮外面的區(qū)域中的子宮內(nèi)膜細(xì)胞(子宮內(nèi)膜異位癥)可引起骨盆痛的癥狀并且可引起不育。在一些特別的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明治療的醫(yī)療病況是子宮內(nèi)膜異位癥；特別是與不育、推定的不育或生殖力減弱相關(guān)的子宮內(nèi)膜異位癥。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明而治療的病況是未解釋的不育。在一些實(shí)施方案中，在體外受精(IVF)程序中或與其相
18關(guān)連而根據(jù)本發(fā)明治療患者。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“子宮腺肌病”或“腺肌病”是指婦女中的病況，其中子宮內(nèi)膜細(xì)胞被置于子宮內(nèi)膜腔外面的子宮肌層內(nèi)。這可引起出血、疼痛和不育。在一些實(shí)施方案中，可在設(shè)備中活化體液或其元素，所述設(shè)備包括但不限于如下列的任一項(xiàng)中所公開(kāi)的設(shè)備國(guó)際專利申請(qǐng)WO 06007529，WO 07090569，WO 03080122，WO 0046249 或 W09909051。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“誘導(dǎo)物”或“增強(qiáng)劑”是指可被用于誘導(dǎo)根據(jù)本發(fā)明所使用的體液制備物的成熟或活化(例如在抗原呈遞細(xì)胞(APC)中的活化)的任何物質(zhì)或化合物。在一些實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)物是生物學(xué)化合物(例如免疫球蛋白或癌細(xì)胞，其能夠誘導(dǎo)或使得可能產(chǎn)生血液制備物的白細(xì)胞或樹(shù)突細(xì)胞中的免疫應(yīng)答)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“抗凝劑”是指防止凝結(jié)的任何物質(zhì)。此定義中所包括的是華法林(可密定)，醋硝香豆素，苯丙香豆素，苯茚二酮，肝素，低分子量肝素，因子)(a的合成抑制劑(例如磺達(dá)肝素和艾卓肝素)，凝血酶抑制因子，例如阿加曲班，來(lái)匹盧定，比伐盧定和達(dá)比加群。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“富含血小板的血漿”或“PRP”是指濃縮的血小板源，例如自體血小板。已知PRP含有并且釋放(通過(guò)去粒)刺激軟組織愈合的數(shù)種生長(zhǎng)因子(細(xì)胞因子)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的體液是經(jīng)與富含血小板的血漿(PRP)相混合的活化的血清制備物。這可被用于數(shù)種醫(yī)療病癥或病況，例如傷口愈合(例如與手術(shù)相關(guān)的)、肌腱炎、心臟護(hù)理、軟骨再生、盤(pán)再生及牙齒保健。在本發(fā)明的一些非限制性實(shí)施方案中，體液制備物被進(jìn)一步活化以增強(qiáng)所述制備物的抗炎和/或免疫抑制活性。增強(qiáng)劑可以是細(xì)胞因子、細(xì)胞因子拮抗劑、和NFkappaB拮抗劑，并且包括但不限于 TGF-β，IL-10，CTLA4-Ig，sCD40-Ig，IL-4，IL-13，F(xiàn)asL，IL-l 受體拮抗劑蛋白(IL-IRa)， vIL-10, sICAM-1，sICAM_3和TRAIL。在一些非限制性實(shí)施方案中，所述增強(qiáng)劑為IL_lRa， IL-10或IL-4，或它們的組合。任選地，當(dāng)已知特定的抗原或特定抗原來(lái)源(包括但不限于源自病毒或細(xì)菌的抗原)時(shí)，這種特定的抗原或特定抗原來(lái)源(例如固定的或減弱的感染性試劑)可被加入培養(yǎng)物中作為增強(qiáng)劑。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，從個(gè)體中去除外周血(例如用注射器)，然后將其轉(zhuǎn)移至容器，其中通過(guò)在珠子的存在下孵育來(lái)刺激miRNA的產(chǎn)生而活化所述血液。備選地，可直接將外周血移除到包括珠子的容器中以刺激miRNA的產(chǎn)生。然后可收集血清并根據(jù)本發(fā)明使用。在另一個(gè)備選方案中，從個(gè)體中去除外周血，從血液制備物中收獲血沉黃層和/ 或血清并將其轉(zhuǎn)移至包括珠子的容器以刺激miRNA的產(chǎn)生。在其它備選方案中，從個(gè)體中去除(或以其它方式獲得)外周血、骨髓制備物或含有血液組分的其它制備物，將其轉(zhuǎn)移至本文所述的容器或潛在地EP0740964，EP1638691， W02008097230，EP1093390或EP1549552的任一項(xiàng)中的容器，在所述設(shè)備的上清液收集室中預(yù)裝了珠子以刺激miRNA的產(chǎn)生，或者上清液收集室的壁具有表面結(jié)構(gòu)(包括潔凈表面)，其根據(jù)本發(fā)明的方法刺激miRNA的產(chǎn)生。可用于此目的的珠子包括但不限于，直徑在0. 5至IOmm或0. 5至5mm之間的玻璃或塑料珠，任選地以試劑(例如CrSO4)處理，其刺激淋巴細(xì)胞增殖(Mignini等人，2004， Preventive Med 39 767-775 ;Rhee 等人，2002，Clin Exp Immunol 127(3) :463-469)。 可通過(guò)在50% Cr SO4中孵育而修飾醫(yī)療級(jí)別的玻璃珠(直徑4mm)。將經(jīng)處理或未處理的珠子置于合適的容器(例如微量滴定板、離心管、培養(yǎng)管或注射器，或者本文所述的其它設(shè)備)中，然后滅菌(例如通過(guò)高壓滅菌或Y輻射)。在一些實(shí)施方案中，可將外周血引入含有珠子的容器中，然后于37°C無(wú)菌地孵育(任選地用5% CO2)例如2-200小時(shí)，例如2-150 小時(shí)或2-48小時(shí)。然后，可通過(guò)離心(例如以4200rpm離心10分鐘)從珠/血液懸浮物中收集血清。通?？苫厥湛傇纪庵苎w積的30%。然后可將所產(chǎn)生的含有miRNA的血清儲(chǔ)存在_20°C。在本發(fā)明的相關(guān)、具體、非限制性實(shí)施方案中，可在以珠子孵育之前或作為以珠子孵育的備選方案而向外周血樣品中加入增強(qiáng)劑。例如，可加入5 μ g增強(qiáng)劑/ml外周血。在本發(fā)明的一些非限制性實(shí)施方案中，通過(guò)從外周血中收集血清，任選地用珠子和/或增強(qiáng)劑孵育，通過(guò)離心以去除所形成的血液元素(例如以3000-5000g，離心10分鐘)，然后進(jìn)行超速離心(例如以100，000g，進(jìn)行1小時(shí))而制備血清制備物?？蓪⑺a(chǎn)生的粒狀沉淀重懸于生理鹽水中，然后優(yōu)選地進(jìn)行滅菌(例如，通過(guò)0. 2 μ m的濾器過(guò)濾)。在一些實(shí)施方案中，可用抗凝劑(例如肝素或檸檬酸鹽)處理血液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在容器中孵育體液或其元素2至200小時(shí)，例如2-150小時(shí)，例如2-100或2至72小時(shí)，例如20小時(shí)的時(shí)間段，優(yōu)選在生理溫度或室溫下，即 20°C至 41°C，特別是:35-37°C。在本發(fā)明的一種配置中，本發(fā)明還提供在體液中形成治療上或預(yù)防上有活性的蛋白質(zhì)或化合物之后進(jìn)一步處理所述體液，從而例如去除后者的特定組分，例如血漿或血小板。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，這種去除可通過(guò)離心、過(guò)濾或凝結(jié)(以去除凝結(jié)因子和/ 或凝結(jié)的物質(zhì))進(jìn)行。在本發(fā)明的備選實(shí)施方案中，體液組合物可與其它體液或體液組分相混合。因此，在一些特別的實(shí)施方案中，在向患者施用之前，將活化的體液組合物(例如活化的血清制備物)與富含血小板的血漿相混合。這特別適于用來(lái)治療與關(guān)節(jié)、腱、韌帶和肌肉相關(guān)的適應(yīng)癥，例如用于治療肌肉疼痛、風(fēng)濕性多肌痛和急性頸部扭傷相關(guān)病癥。如上文所討論的，本發(fā)明關(guān)于用于治療或緩解醫(yī)療病況的癥狀的方法，包含血清制備物的組合物用來(lái)制備用于治療或緩解這些癥狀的藥物，以及這些組合物在制備藥物中的用途。在本發(fā)明的一些方面，在容器中或通過(guò)備選的方法來(lái)活化血液制備物。在一些備選的實(shí)施方案中，用如別處所描述的另一種體液來(lái)替代血液制備物。因此，在一些備選的實(shí)施方案中，將體液或其元素(例如體外細(xì)胞培養(yǎng)物)，骨髓滲出液等裝入容器中，并用與用于處理血液制備物的方法相似或相同的方法進(jìn)行處理。在一些實(shí)施方案中，用注射器直接從患者中獲取體液。在一些實(shí)施方案中，從血液制備物中去除血沉黃層并將其活化。這可以在存在或不存在血液制備物的血漿級(jí)分時(shí)進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，在生長(zhǎng)培養(yǎng)基的存在下孵育含有或不含有血漿的血沉黃層，例如在于表面上進(jìn)行活化的過(guò)程中或者在所述活化之前。
在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物還包含膠束、囊泡或脂質(zhì)體，且優(yōu)選地所述膠束、囊泡、脂質(zhì)體包含miRNA。脂質(zhì)體通常是完全閉合的結(jié)構(gòu)，其包含含有被包裹的水性體積的脂雙層膜。脂質(zhì)體可含有許多被液相分隔的同心脂雙層(多層囊泡或MLV)，或備選地，它們可包含單一的膜雙層(單層囊泡)。脂雙層由具有疏水性“尾部”區(qū)域和親水性“頭部”區(qū)域的兩個(gè)脂單層構(gòu)成。在膜雙層中，脂單層的疏水性(非極性)“尾部”朝向所述雙層的中心，而親水性 (極性)“頭部”朝向液相。文獻(xiàn)中一般性地描述了可用于本文所述的脂質(zhì)體的脂組分。一般地，這些是磷脂-例如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酸、 磷脂酰肌醇和/或鞘脂?？墒褂昧硗獾慕M分，例如留醇類(如膽固醇)或其它組分-例如脂肪酸(如硬脂酸、棕櫚酸)，磷酸十六烷酯或膽固醇半琥珀酸。此外，脂質(zhì)體膜還可含有防腐劑。脂質(zhì)體膜還可含有組分，其修飾它們的分散行為。它們包括例如，磷脂酰乙醇胺的聚乙二醇化衍生物，脂(例如GMl)或糖的綴合物，以及疏水性組分(例如葡萄糖的棕櫚或硬脂酸酯)?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中已知的各種技術(shù)來(lái)制得脂質(zhì)體的基本結(jié)構(gòu)。例如，通常使用Bangham 等人(1965 J. MoI. Biol. ,13 :238-252)的方法制備了脂質(zhì)體，其中在反應(yīng)容器中將懸浮于有機(jī)溶劑中的脂在降低的壓力下蒸發(fā)為干的薄膜。然后向容器中加入適量的含水相并攪動(dòng)混合物。然后允許所述混合物靜置，基本上使其在足以形成多層囊泡的時(shí)間中不被攪擾?？墒褂迷S多目前可獲得的技術(shù)來(lái)可重復(fù)地制備脂質(zhì)體。使用許多這些技術(shù)可產(chǎn)生的脂質(zhì)體類型包括小單層囊泡(SUV)[見(jiàn)Papahadjapoulous and Miller, Biochem. Biophys. Acta.，135，p. 624-638 (1967)]，反相蒸發(fā)囊泡(REV)[見(jiàn)美國(guó)專利號(hào) 4，235,871， Nov. 25，1980發(fā)行]，穩(wěn)定多層囊泡(SPLV)[見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4，522，803，June 11，1985發(fā)行]，和通過(guò)頂出技術(shù)產(chǎn)生的大單層囊泡如1984年6月20日遞交的、共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào) 622，690 (Cullis 等人，題目是 “Extrusion Technique for Producing 單層 vesicles")中所描述的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂質(zhì)體是使用下列方法制備的。脂是通過(guò)如下制備的將適量的例如CDAN，DOPE和氨氧基脂(CPA)的儲(chǔ)液分別移液到用硝酸和二甲硅烷基二氯化物預(yù)處理的圓底瓶中，蒸發(fā)溶劑，以及在劇烈渦流振動(dòng)下用水來(lái)水合干燥脂薄膜以產(chǎn)生多層脂質(zhì)體?？赏ㄟ^(guò)超聲處理多層脂質(zhì)體30分鐘而產(chǎn)生單層脂質(zhì)體。優(yōu)選地，繼續(xù)進(jìn)行所述超聲處理直至達(dá)到小于約30nm的大小。本發(fā)明的具體實(shí)施方案在一些實(shí)施方案中，將適于治療性應(yīng)用的組合物用于治療所述組合物所源自的同一個(gè)體，即自體應(yīng)用，例如用于從中獲得了血液樣品并將其活化的同一個(gè)人。然而，適于治療性應(yīng)用的組合物也可源自相同物種的遺傳上不同一的成員，例如另一個(gè)人。在這種情形中，體液或其元素的制備物被稱作同種異體的或同源的。在一些實(shí)施方案中，適于治療性應(yīng)用的組合物源自另一個(gè)物種，即異源制備物。這可以是來(lái)自相似的或密切相關(guān)的哺乳動(dòng)物的異源制備物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述體液是血液，其源自循環(huán)系統(tǒng)。在一些實(shí)施方案中，所述體液是不含顯著水平的紅血細(xì)胞的血液制備物。在一些實(shí)施方案中，所述體液制備物含有完整的單核細(xì)胞，例如顯著的水平以具有可測(cè)量的活化效果。在一些實(shí)施方案中，體液制備物缺乏顯著水平的凝固因子。在一些實(shí)施方案中， “體液制備物”可含有凝固因子。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的miRNA選自hSa-miR-320a， hsa-miR-130a, hsa_miR-320c, hsa-miR-628_3p, hsa-miR-637, hsa_miR-320b, hsa-miR-129-5p,hsa-miR-943, hsa-miR-185*，hsa-miR-340*，hsa-miR-744, hsa-miR-638, hsa-miR-585, hsa_miR-26b, hsa-miR-485_3p, hsa-miR-103, hsa-miR-146b_5p, hsa-miR-642, hsa_miR-146a, hsa-let_7a, hsa-let_7f, hsa_miR-200b*, hsa_miR-320d, hsa-let_7d, hsa-miR-1282, hsa-miR-124, hsa-miR-602, hsa-let_7g, hsa-miR-221, hsa-miR-25*, hsa-miR-1184, hsa-miR-663, hsa-miR-93, hsa-miR-30b*, hsa-miR-124*, hsa-miR-22, hsa-miR-1281, hsa-miR-1237, hsa_miR-34b，hsa-miR-1290, hsa_miR-193b*， hsa-miR-526b, hsa-miR-622, hsa-miR-191,hsa-miR-142_3p,hsa_miR-92a,hsa-miR-1280, hsa-miR-1236, hsa_miR-30c, hsa-miR-877*, hsa_miR-548n, hsa-miR-1249, hsa-let_7i, hsa—miR-1224_3p, hsa-miR-17, hsa-miR-300, hsa-miR-193a_5p, hsa-let_7d*, hsa-miR-24, hsa_miR-518c*， hsa-miR-222, hsa-miR-664, hsa_miR-130b， hsa-miR-625*， hsa-miR-593, hsa-miR-885_5p, hsa-miR-505*, hsa-miR-491_3p,hsa-miR-421,hsa-miR-7, hsa-miR-106a, hsa_miR-99b*， hsa-miR-1300, hsa_miR-92b， hsa_miR-30d， hsa-miR-720, hsa-miR-1260, hsa-miR-425, hsa-miR-939, hsa_miR-30a, hsa_miR-30e,hsa-miR-654_5p, hsa-miR-509-5p, hsa-miR-1826 及其變體。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物不是源自血液產(chǎn)品。在一些實(shí)施方案中， 所述組合物基本上不含其它源自血液的組分。在一些實(shí)施方案中，在活化之后，血液制備物中的miRNA被上調(diào)。在一些實(shí)施方案中，在任選地含有誘導(dǎo)物的容器中，活化之后，體液或其元素中的 miRNA被上調(diào)。在一些實(shí)施方案中，在于平面上活化之后，miRNA被上調(diào)，所述平面選自球形、凝膠、玻璃棉、粒狀材料和顆粒或者包括聚苯乙烯或玻璃的表面結(jié)構(gòu)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的誘導(dǎo)物被涂覆在選自下列的結(jié)構(gòu)上球形、凝膠、玻璃棉、粒狀材料和顆?；蛘甙ň郾揭蚁┗虿ＡУ谋砻娼Y(jié)構(gòu)。在一些實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)物包含免疫球蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述誘導(dǎo)物由自體的，同種異體的或異源腫瘤細(xì)胞代表，例如 IO3-IO7個(gè)腫瘤細(xì)胞/ml組合物。在一些實(shí)施方案中，特定的miRNA種類以下列量存在于組合物中至少約1000，例如至少約5000，例如至少約104，例如至少約切104，例如至少約105，例如至少約切105，例如至少約106，例如至少約切106，例如至少約107，例如至少約切107，例如至少約108，例如至少約5xl08飛克/ml，例如直至250皮克/ml。在一些實(shí)施方案中，組合物中存在的miRNA總量為至少約1000，例如至少約5000， 例如至少約104，例如至少約切104，例如至少約105，例如至少約切105，例如至少約106，例如至少約切106，例如至少約107，例如至少約切107，例如至少約108，例如至少約切108飛克/ml，例如直至250皮克/ml的量。在一些實(shí)施方案中，一種或多種miRNA以下列濃度存在于組合物中，所述濃度與未活化的組合物中的所述miRNA的濃度水平相比為至少約50%，例如至少約100%，例如至少約200 %，例如至少約300 %，例如至少約400 %，例如至少約500 %，例如至少約600 %，例如至少約700%，例如至少約800%更高。在一些實(shí)施方案中，所述組合物源自血清。在一些實(shí)施方案中，所述組合物具有正常生理水平的鈉，例如135_145mEq/L的水平。在一些實(shí)施方案中，所述組合物還包含載體蛋白和/或膠束和/或囊泡和/或脂質(zhì)體，用于保護(hù)miRNA不被RNA酶降解。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物還包含磁性納米顆粒的制備物，例如涂覆了聚乙烯亞胺(PEI)的鐵磁性納米顆粒。在一些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的組合物的核酸分子是通過(guò)合成手段制備的。在一些實(shí)施方案中，包含miRNA分子的所述組合物不含一種或多種血清蛋白，例如血清白蛋白，免疫球蛋白，纖維蛋白原，凝血酶原，α -抗胰蛋白酶，α 2-巨球蛋白和其它球蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白。在一些實(shí)施方案中，所述核酸分子以可測(cè)量的量存在。在一些實(shí)施方案中，在活化過(guò)程中，存在于根據(jù)本發(fā)明的組合物中的所述一種或多種miRNA分子的可測(cè)量量被上調(diào)至0. 00001到10000倍，例如0. 00001到1000倍增加。在一些實(shí)施方案中，核酸分子包括親合力提高性核苷酸類似物，例如肽核酸 (PNA)，偽互補(bǔ)PNA (pcPNA)，鎖核酸(LNA)，或它們的類似物。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物包含至少1-100，例如至少2-50，例如至少10-50不同種的miRNA。在一些實(shí)施方案中，組合物還包含外核體制備物。在一些實(shí)施方案中，所述外核體制備物來(lái)自與所述體液或其元素所源自的同一患者。在一些實(shí)施方案中，所述外核體制備物是通過(guò)體外產(chǎn)生的，例如源自在體外培養(yǎng)的細(xì)胞?？墒褂肊xoQuick 沉淀試劑盒來(lái)制備富含miRNA的外核體制備物。要理解所述miRNA可被整合到外核體中或其表面上并且可保護(hù)miRNA不被降解。在一些實(shí)施方案中，所述外核體富含根據(jù)本發(fā)明的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是體外細(xì)胞培養(yǎng)物，例如單核細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)物。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是血清制備物。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是血沉黃層制備物。在一些實(shí)施方案中，所述血沉黃層制備物還包含血漿級(jí)分。在一些實(shí)施方案中，在根據(jù)本發(fā)明活化之前或之中，將含有或不含有血漿級(jí)分的所述血沉黃層制備物與生長(zhǎng)培養(yǎng)基一起孵育。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是全血制備物。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素來(lái)自骨髓滲出液。在一些實(shí)施方案中，將經(jīng)活化的體液或其元素進(jìn)一步與富含血小板的血漿(PRP) 相混合。
在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素在進(jìn)一步包括下列步驟的方法中被活化用抗凝劑處理所述體液或其元素，任選地繼以分離的步驟，其中分離了所需的體液部分。在一些實(shí)施方案中，從兩個(gè)或更多個(gè)哺乳動(dòng)物中收集根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素，例如來(lái)自超過(guò)3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50或100個(gè)哺乳動(dòng)物。在一些實(shí)施方案中，體液所源自的哺乳動(dòng)物是人。在一些實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是家畜。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是從健康個(gè)體收集的。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是從疾病個(gè)體收集的。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的體液或其元素是從健康和疾病個(gè)體的組合收集的。在一些實(shí)施方案中，與未在步驟b)中經(jīng)活化的組合物中所述miRNA的濃度水平相比，所述一種或多種miRNA的濃度水平以至少約50%，例如至少約100%，例如至少約 200 %，例如至少約300 %，例如至少約400 %，例如至少約500 %，例如至少約600 %，例如至少約700%，例如至少約800%被上調(diào)。在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括在合成的或備選的miRNA源的存在下， 與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素的步驟。在一些實(shí)施方案中，包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的所述組合物是如本文中所定義的組合物，或者是根據(jù)本發(fā)明的方法制備的組合物，其中在活化體液或其元素之后所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。在一些實(shí)施方案中，所述施用是通過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、鼻內(nèi)、經(jīng)口、神經(jīng)周、鞘內(nèi)施用，或者是通過(guò)局部注射或滴注(例如在外科程序的過(guò)程中)，或者這些中任意的組合。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是自體的。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是同源的。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是異源的。在一些實(shí)施方案中，所述組合物是通過(guò)根據(jù)本發(fā)明的方法制備的，其中在施用其所含有的組合物之前，將所述體液或其元素孵育1至150小時(shí)，例如1至100小時(shí)。在一些實(shí)施方案中，需要根據(jù)本發(fā)明的治療的受試者是人。在一些實(shí)施方案中，可通過(guò)本發(fā)明的方法治療的醫(yī)療病況選自癌癥(例如白血病)，牙周病，習(xí)慣性流產(chǎn)，潰瘍性結(jié)腸炎，風(fēng)濕性多肌痛，急性頸部扭傷相關(guān)病癥，子宮內(nèi)膜異位癥(例如子宮腺肌病)，帕金森氏病，阿爾茨海默病，癡呆，糖尿病例如I型糖尿病， AIDS/HIV,骨質(zhì)疏松癥，銀屑病和傷口愈合。在一些實(shí)施方案中，可通過(guò)本發(fā)明的方法治療的醫(yī)療病況是由人免疫缺陷病毒 (HIV)引起的獲得性免疫缺陷綜合征或獲得的免疫缺陷綜合征(AIDQ。在一些具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法防止產(chǎn)生與HIV感染相關(guān)的癥狀。
在--些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的核酉I分子是miRNA。
在--些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的核酉I分子是 pri-miRNA。
在--些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的核酉I分子是 pre-miRNA。
在--些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所使用的核酉堯分子是小的干擾RNA(siRNA)。
在--些實(shí)施方案中，用于治療或緩解與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病
(例如不希望的免疫系統(tǒng)活化)和/或癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥的癥狀的方法還包括施用化學(xué)治療劑。 在一些實(shí)施方案中，所述化學(xué)治療劑選自烷化劑，例如噻替派和環(huán)磷酰胺；烷基磺酸鹽，例如白消安，英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，例如苯佐替派，卡巴醌，美妥替哌和烏瑞替派；乙烯亞胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺，三乙撐密胺，三亞乙基磷酰胺，三乙烯硫代磷酰胺和三羥甲密胺；乙酸配質(zhì)(特別是泡番荔枝辛和泡番荔枝辛酮)；喜樹(shù)堿(包括合成的類似物托泊替坎)；苔蘚抑素；海綿多烯酮類化合物；CC-1065(包括其阿多來(lái)新， 卡折來(lái)新和比折來(lái)新合成類似物)；念珠藻環(huán)肽(特別是念珠藻環(huán)肽1和念珠藻環(huán)肽8)； 多拉司他??；多卡米星(包括合成的類似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴素；水鬼蕉堿； sarcodictyin ；軟海綿素；氮芥，例如苯丁酸氮芥，萘氮芥，膽磷酰胺，雌氮芥，異環(huán)磷酰胺， 氮芥，鹽酸氧化氮芥，美法侖，新氮芥，苯芥膽留醇，潑尼氮芥，曲磷胺，尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，例如卡莫司汀，氯脲菌素，福莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀和雷莫斯汀；抗生素，例如烯二炔類抗生素(例如加利車霉素，特別是加利車霉素Y和加利車霉素ω ；烯二炔蒽環(huán)類抗生素，包括烯二炔蒽環(huán)類抗生素A ；雙磷酸鹽類，例如氯屈膦酸鹽；埃斯波霉素；以及新制癌菌素發(fā)色團(tuán)和相關(guān)的色蛋白烯二炔抗生素發(fā)色團(tuán)，阿克拉霉素，放線菌素，authrarnycin，偶氮絲氨酸，博萊霉素，放線菌素c，carabicin，洋紅霉素，嗜癌霉素，chromomycinis，更生霉素，柔紅霉素，地托比星，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，多柔比星(包括嗎啉代-多柔比星，氰基嗎啉代-多柔比星，2-吡咯啉-多柔比星和脫氧多柔比星)，表柔比星，依索比星，伊達(dá)比星，麻西羅霉素，絲裂霉素(例如絲裂霉素C)，霉酚酸，諾拉霉素，橄欖霉素，培洛霉素，甲基絲裂霉素C，嘌呤霉素，三鐵阿霉素，羅多比星，鏈黑霉素，鏈脲菌素，殺結(jié)核菌素，烏苯美司， 凈司他丁，佐柔比星；抗代謝藥，例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，例如二甲葉酸，甲氨蝶呤，蝶羅呤，三甲曲沙；嘌呤類似物，例如氟達(dá)拉濱，6-巰嘌呤，硫咪嘌呤，硫鳥(niǎo)嘌呤；嘧啶類似物，例如安西他濱，阿扎胞苷，6-阿扎尿苷，卡莫氟，阿糖胞苷，雙脫氧尿苷，去氧氟尿苷，依諾他濱，氟尿苷；雄激素類，例如卡普睪酮，屈他雄酮丙酸酯，環(huán)硫雄醇， 美雄烷，睪內(nèi)酯；抗腎上腺藥，例如氨魯米特，米托坦，曲洛司坦；葉酸補(bǔ)充劑例如frolinic acid ；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil ；比生群；依達(dá)曲沙；defofamine ；秋水仙胺；地吖醌；elformithine ；依利醋銨；埃博霉素；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；Ionidainine ；美登木素生物堿，例如美坦辛和安絲菌素；米托胍腙；米托蒽醌；mopidanmol ；nitraerine ；噴司他丁 ；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；podophyllinic acid ；2-乙基酰胼；丙卡巴胼；PSK多糖復(fù)合物)；丙亞胺；根霉素； sizofuran;鍺螺胺；細(xì)交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2，2'，2"-三氯乙胺；單端孢霉烯類(特別是T-2毒素，桿孢菌素A，roridin A和anguidine)；烏拉坦；長(zhǎng)春地辛；達(dá)卡巴嗪；甘露莫司??；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；gacytosine ；阿拉伯糖苷(〃 Ara-C")；環(huán)磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如紫杉酚和多西紫杉醇；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥(niǎo)嘌呤；巰嘌呤；甲氨蝶呤；鉬配位絡(luò)合物，例如順鉬，奧沙利鉬和卡鉬；長(zhǎng)春堿；鉬；依托泊甙(VP-16)； 異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春瑞濱；諾消靈；替尼泊甙；依達(dá)曲沙；道諾霉素；氨基蝶呤；希羅達(dá)；伊班膦酸鹽；伊立替康(例如，CPT-I 1)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS 2000 ；二氟甲基鳥(niǎo)氨酸(DMFO)；類視黃醇，例如視黃酸；卡培他濱；以及上述任意的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可包含其它有生物學(xué)活性的物質(zhì)， 這包括治療性藥物或前藥，例如，其它化學(xué)治療劑、清除化合物、抗生素、抗病毒劑、抗真菌劑、抗炎藥、血管收縮藥和抗凝劑，可用于癌癥疫苗應(yīng)用的抗原或相應(yīng)的前藥。本發(fā)明的編號(hào)的實(shí)施方案實(shí)施方案1.包含治療有效量的一種或多種編碼miRNA或其功能性變體的核酸分子的組合物，在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)；用于制備藥物。實(shí)施方案2.根據(jù)實(shí)施方案1的組合物，其中所述miRNA選自hSa-miR-320a， hsa-miR-130a, hsa_miR-320c, hsa-miR-628_3p, hsa-miR-637, hsa_miR-320b, hsa-miR-129-5p,hsa-miR-943, hsa-miR-185*，hsa-miR-340*，hsa-miR-744, hsa-miR-638, hsa-miR-585, hsa_miR-26b, hsa-miR-485_3p, hsa-miR-103, hsa-miR-146b_5p, hsa-miR-642, hsa_miR-146a, hsa-let_7a, hsa-let_7f, hsa_miR-200b*, hsa_miR-320d, hsa-let_7d, hsa-miR-1282, hsa-miR-124, hsa-miR-602, hsa-let_7g, hsa-miR-221, hsa-miR-25*, hsa-miR-1184, hsa-miR-663, hsa-miR-93, hsa-miR-30b*, hsa-miR-124*, hsa-miR-22, hsa-miR-1281, hsa-miR-1237, hsa_miR-34b，hsa-miR-1290, hsa_miR-193b*， hsa-miR-526b,hsa-miR-622,hsa-miR-191,hsa-miR-142_3p, hsa_miR-92a, hsa-miR-1280, hsa-miR-1236, hsa_miR-30c, hsa-miR-877*, hsa_miR-548n, hsa-miR-1249, hsa-let_7i, hsa—miR-1224_3p, hsa-miR-17, hsa-miR-300, hsa-miR-193a_5p, hsa-let_7d*, hsa-miR-24, hsa_miR-518c*， hsa-miR-222, hsa-miR-664, hsa_miR-130b， hsa-miR-625*， hsa-miR-593,hsa-miR-885_5p, hsa-miR-505*, hsa-miR-491_3p, hsa-miR-421, hsa-miR-7, hsa-miR-106a, hsa_miR-99b*， hsa-miR-1300, hsa_miR-92b， hsa_miR-30d， hsa-miR-720, hsa-miR-1260, hsa-miR-425, hsa-miR-939, hsa_miR-30a, hsa_miR-30e, hsa-miR-654_5p, hsa-miR-509-5p, hsa-miR-1826，及其變體。實(shí)施方案3.根據(jù)實(shí)施方案1-2中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物不是源自血液產(chǎn)品。實(shí)施方案4.根據(jù)實(shí)施方案1-3中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物基本上不含其它源自血液的組分。實(shí)施方案5.根據(jù)實(shí)施方案1-2中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物源自骨髓，任選地其中對(duì)于血細(xì)胞和造血干細(xì)胞純化所述骨髓。實(shí)施方案6.根據(jù)實(shí)施方案1-2中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物源自血沉黃層制備物，任選地連同血漿。實(shí)施方案7.根據(jù)實(shí)施方案1-2中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物是經(jīng)調(diào)節(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)基，例如體外細(xì)胞培養(yǎng)基。實(shí)施方案8.根據(jù)實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)的組合物，其中在活化后，血液制備物中的所述miRNA被上調(diào)。
實(shí)施方案9.根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的組合物，其中在包含誘導(dǎo)物的容器中被活化后，體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。實(shí)施方案10.根據(jù)前述實(shí)施方案中任一項(xiàng)的組合物，其中在選自下列的表面上活化后，所述miRNA被上調(diào)球形、凝膠、玻璃棉、粒狀材料和顆?；虬ň郾揭蚁┗虿ＡУ谋砻娼Y(jié)構(gòu)。實(shí)施方案11.根據(jù)實(shí)施方案9-10中任一項(xiàng)的組合物，其中所述誘導(dǎo)物包括免疫球蛋白。實(shí)施方案12.根據(jù)實(shí)施方案1-11中任一項(xiàng)的組合物，其中所述核酸分子是通過(guò)合成手段制備的。實(shí)施方案13.根據(jù)實(shí)施方案1-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述核酸分子以可測(cè)量的量存在。實(shí)施方案14.根據(jù)實(shí)施方案1-13中任一項(xiàng)的組合物，其中所述核酸分子包括親合力提高性核苷酸類似物，例如肽核酸(PNA)，偽-互補(bǔ)PNA (pcPNA)，鎖核酸(LNA)，或它們的類似物。實(shí)施方案15.根據(jù)實(shí)施方案1-14中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物包含至少1-100， 例如至少2-50，例如至少10-50種不同的核酸分子，每一種編碼不同種的miRNA。實(shí)施方案16.根據(jù)實(shí)施方案1-15中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物還包含外核體制備物，例如通過(guò)體外產(chǎn)生的外核體制備物。實(shí)施方案17.根據(jù)實(shí)施方案16的組合物，其中所述外核體富含所述核酸分子。實(shí)施方案18.包含治療有效量的一種或多種編碼miRNA或其功能性變體的核酸分子的組合物，其中在活化體液或其元素之后所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)；用于制備用來(lái)治療選自下列的適應(yīng)癥的藥物與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病例如不希望的免疫系統(tǒng)活化，癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥，例如白血病，慢性炎癥，牙周病，習(xí)慣性流產(chǎn)，潰瘍性結(jié)腸炎，風(fēng)濕性多肌痛，急性頸部扭傷相關(guān)病癥，子宮內(nèi)膜異位癥，例如子宮腺肌病，帕金森氏病，阿爾茨海默病，癡呆，糖尿病例如I型糖尿病，AIDS/HIV,骨質(zhì)疏松癥，銀屑病，和傷口愈合，生殖系統(tǒng)中的病況，例如精子產(chǎn)生低， 產(chǎn)生單純支持細(xì)胞綜合征，以及人和動(dòng)物的胎兒流產(chǎn)。實(shí)施方案19.用于制備包含治療有效量的一種或多種編碼miRNA或其功能性變體的核酸分子的組合物的方法，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述 miRNA被上調(diào)，所述方法包括下列步驟a)從哺乳動(dòng)物收集所述體液或其元素；b)與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素。實(shí)施方案20.用于制備包含治療有效量的一種或多種編碼miRNA或其功能性變體的核酸分子的組合物的方法，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述 miRNA被上調(diào)，所述方法包括下列步驟a)從哺乳動(dòng)物收集所述體液或其元素；b)與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素；c)鑒別在所述體液或其元素中被上調(diào)的一種或多種miRNA ；d)以分離的形式提供所述一種或多種編碼在步驟c)中鑒別的所述miRNA的核酸
27分子并將它們加至所述組合物。實(shí)施方案21.根據(jù)實(shí)施方案19或20中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是體外細(xì)胞培養(yǎng)物，例如單核細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)物，造血干細(xì)胞培養(yǎng)物或胎盤(pán)來(lái)源的細(xì)胞培養(yǎng)物。實(shí)施方案22.根據(jù)實(shí)施方案19或20中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是血清制備物。實(shí)施方案23.根據(jù)實(shí)施方案19或20中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是血沉黃層制備物。實(shí)施方案24.根據(jù)實(shí)施方案19或20中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是全血制備物。實(shí)施方案25.根據(jù)實(shí)施方案19或20中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素來(lái)自骨髓滲出液。26.根據(jù)實(shí)施方案19-25中任ー項(xiàng)的方法，其中將經(jīng)活化的體液或其元素進(jìn)ー步與富含血小板的血漿(PRP)相混合，任選地與外核體的制備物相組合。27.根據(jù)實(shí)施方案19-26中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素在還包括用抗凝劑處理所述體液或其元素的步驟的方法中被活化。28.根據(jù)實(shí)施方案19-27中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從兩個(gè)或更多個(gè)哺乳動(dòng)物收集的，例如來(lái)自超過(guò)3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50或100個(gè)哺乳動(dòng)物。實(shí)施方案29.根據(jù)實(shí)施方案19-28中任ー項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
根據(jù)實(shí)施方案19-29中任根據(jù)實(shí)施方案19-30中任實(shí)施方案30,實(shí)施方案31 健康個(gè)體收集的。實(shí)施方案32 疾病個(gè)體收集的。實(shí)施方案33
づ頁(yè)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是家畜。 -項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從
根據(jù)實(shí)施方案19-31中任ー項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從
づ頁(yè)的方法，其中所述體液或其元素是從
根據(jù)實(shí)施方案19-31中任-健康和疾病個(gè)體的組合收集的。實(shí)施方案34.根據(jù)實(shí)施方案19-33中任ー項(xiàng)的方法，其中與未在步驟b)中經(jīng)活化的組合物中所述miRNA的濃度水平相比，所述ー種或多種miRNA的濃度水平以至少約50%， 例如至少約100%，例如至少約200%，例如至少約300%，例如至少約400%，例如至少約 500%，例如至少約600%，例如至少約700%，例如至少約800%被上調(diào)。實(shí)施方案35.根據(jù)實(shí)施方案19-34中任ー項(xiàng)的方法，所述方法還包括在合成的或備選來(lái)源的miRNA的存在下，與増加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素的步
づ永ο實(shí)施方案36.根據(jù)實(shí)施方案19-35中任ー項(xiàng)的方法，所述方法還包括在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中孵育所述體液或其元素。實(shí)施方案37.分部試劑盒，其包括a)用于制備包含治療有效量的一種或多種編碼miRNA或其功能性變體的核酸分子的組合物的設(shè)備，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)，所述設(shè)備包含具有誘導(dǎo)物的容器；和b)用于根據(jù)實(shí)施方案19-36中任ー項(xiàng)的方法使用的說(shuō)明書(shū)。
實(shí)施方案38.用于治療或緩解與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病例如不希望的免疫系統(tǒng)活化和/或癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥的癥狀的方法，所述方法包括向需要所述治療的受試者施用包含治療有效量的一種或多種編碼 miRNA或其功能性變體的核酸分子的組合物，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。實(shí)施方案39.根據(jù)實(shí)施方案38的方法，其中包含治療有效量的一種或多種編碼 miRNA或其功能性變體的核酸分子的所述組合物是如實(shí)施方案1-18中任ー項(xiàng)所定義的組合物或由根據(jù)實(shí)施方案19-36中任ー項(xiàng)的方法所制備的組合物，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。實(shí)施方案40.根據(jù)實(shí)施方案38或39中任ー項(xiàng)的方法，其中所述施用是通過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、鼻內(nèi)、經(jīng)ロ、神經(jīng)周、鞘內(nèi)施用，或者是通過(guò)局部注射或滴注， 例如在外科程序的過(guò)程中。實(shí)施方案41.根據(jù)實(shí)施方案38-40中任ー項(xiàng)的方法，其中所述組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是自體的。實(shí)施方案42.根據(jù)實(shí)施方案38-40中任ー項(xiàng)的方法，其中所述組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是同源的。實(shí)施方案43.根據(jù)實(shí)施方案38-40中任ー項(xiàng)的方法，其中所述組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是異源的。實(shí)施方案44.根據(jù)實(shí)施方案38-43中任ー項(xiàng)的方法，其中所述組合物是通過(guò)根據(jù)實(shí)施方案19-36中任ー項(xiàng)的方法制備的，其中在施用其所含有的組合物之前，將所述體液或其元素孵育1至100小吋。實(shí)施方案45.根據(jù)實(shí)施方案38-44中任ー項(xiàng)的方法，其中所述受試者是人。實(shí)施方案46.根據(jù)實(shí)施方案38-45中任ー項(xiàng)的方法，其中所述醫(yī)療病況選自癌癥例如白血病，牙周病，習(xí)慣性流產(chǎn)，潰瘍性結(jié)腸炎，風(fēng)濕性多肌痛，急性頸部扭傷相關(guān)病癥， 子宮內(nèi)膜異位癥，例如子宮腺肌病，帕金森氏病，阿爾茨海默病，癡呆，糖尿病例如I型糖尿病，AIDS/HIV，骨質(zhì)疏松癥，銀屑病和傷ロ愈合。實(shí)施方案47.根據(jù)實(shí)施方案38-46中任ー項(xiàng)的方法，其中所述用于治療的方法還包括施用化學(xué)治療劑。
實(shí)施例實(shí)施例1制備活化的血清從動(dòng)物或人、或者備選地動(dòng)物或人的群體(優(yōu)選沒(méi)有任何感染或發(fā)熱)收集血液。 通過(guò)靜脈經(jīng)皮穿刺取血并在容器中收集。此后，將全血或者備選地含有或不含血漿的血沉黃層轉(zhuǎn)移至具有表面或含有活化物質(zhì)(例如玻璃珠等)的容器，優(yōu)選適于離心的60ml的容器，其包含用于注射的兩個(gè)橡膠口和用于壓カ均衡的小孔，所述容器含有或不含2-25克的玻璃珠，l-8mm，例如4mm。在一些實(shí)施方案中，將含有或不含血漿級(jí)分的血沉黃層制備物與生長(zhǎng)培養(yǎng)基一起孵育。這可以是在將體液暴露于活化性表面的程序之前或之中。
在37攝氏度下，使樣品回流或在任何其它程序中使血細(xì)胞暴露于活化性表面1， 2,4,10,24,48,72,96,120 或 150 小時(shí)。此后，通過(guò)將溫度降低至室溫來(lái)終止孵育，并通過(guò)過(guò)濾或離心而從凝結(jié)的血液中分離血清。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，使用抗凝劑來(lái)孵育全血，并且在孵育時(shí)間之后，通過(guò)離心或過(guò)濾來(lái)收集血清。然后，將所制備的血清、血漿或血沉黃層制備物儲(chǔ)存在室溫下，冷凍在-5-18攝氏度，或制備其用于冷凍儲(chǔ)存以優(yōu)化更為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)(例如膜，如囊泡等)的保存。實(shí)施例2用于制備經(jīng)活化的血清的備選程序在無(wú)菌的60ml容器中將血液孵育2_72，96，120或150hrs的時(shí)間段，所述容器含有玻璃珠(SiliBeads-Borosilicate, Sigmund Linder，德國(guó))。玻璃珠的直徑是 2_5mm，例如2-4mm，并且是醫(yī)療級(jí)別的。在所述容器中填裝5_25，例如18克珠子并且可通過(guò)高壓滅菌或Y-輻射來(lái)滅菌。血液培養(yǎng)技術(shù)在所有實(shí)驗(yàn)中，在填裝有珠子的容器(例如60ml容器)中裝入新鮮抽取的人全血，所述人全血來(lái)自健康的男性或女性供體(20至70歲大)，不含抗凝劑 (除非另行提及)。在無(wú)菌、層流條件下建立了全血培養(yǎng)物。在37 °C，5% CO2下無(wú)菌地孵育 2-7airs的區(qū)間。孵育后，取回血清并離心G200rpm，IOmin)。備選地，孵育后通過(guò)以5000g 離心IOmin而將血清與血細(xì)胞分離。實(shí)施例3用經(jīng)活化的血清治療人受試者硬膜外、神經(jīng)周或肌內(nèi)注射三次(每周一次)而給予患者。以6次(tl-t6)/患者進(jìn)行客觀和主觀的評(píng)估，這包括視覺(jué)模擬評(píng)分(VAQ (Joyce等人，Eur J Clin Pharmacol. 14 415-20(1975))，Oswestry 疼痛問(wèn)卷(Fairbank 等人 Spine, 25 :2940-2953(2000)), SF-36(短形健康調(diào)查)(Ware等人，Med. Care, 30 :473-483 (199 )，和標(biāo)準(zhǔn)化臨床檢查。注射2ml經(jīng)活化的血清。給予ー組經(jīng)活化的血清，給予另一組IOmg去炎松，且給予最后一組 5mg去炎松。去炎松是常用于治療炎癥，過(guò)敏，關(guān)節(jié)炎和哮喘的類固醇。已顯示去炎松在減少腰椎神經(jīng)性疼痛方面有效(隨機(jī)雙盲研究，Kramer Eur Spine 1997)。以根據(jù)實(shí)施例1 或2中任ー項(xiàng)的方法制備的活化的血液制備物見(jiàn)到了類似的效果。實(shí)施例4在6周中，用根據(jù)實(shí)施例1或2中的描述而制備的經(jīng)調(diào)節(jié)的血清治療也具有子宮腺肌病的5名嚴(yán)重的子宮內(nèi)膜異位癥患者。向患者施用5ml經(jīng)活化的血清，毎次施用為每周肌內(nèi)施用，施用5-6周。他們的癥狀顯著緩解。進(jìn)行肌內(nèi)治療的背景是基于數(shù)次實(shí)驗(yàn)性的肌內(nèi)注射，所述注射是在4匹馬中，在2 年的時(shí)間段中進(jìn)行的。動(dòng)物研究證明了以相同的注射間隔治愈了肌肉壓痛。實(shí)施例5以如實(shí)施例4中所描述的相同的方案在體外受精(IVF)過(guò)程中治療了 2名習(xí)慣性流產(chǎn)患者，其中一名在此研究中懷孕。實(shí)施例6經(jīng)過(guò)了相同的定時(shí)準(zhǔn)備和注射經(jīng)活化的血清的3名潰瘍性結(jié)腸炎患者和1名克羅恩患者在其病況/疾病方面都有顯著改善，因此在急性初始治療中，較短的施用間隔是有益的，而在達(dá)到了癥狀的平臺(tái)期之后，血清施用之間更長(zhǎng)的間隔似乎穩(wěn)定了所有的癥狀。這種施用物質(zhì)的順次策略方法的益處是使得發(fā)明能夠處理急性期中疾病的高活性以及疾病在穩(wěn)定期時(shí)物質(zhì)活性的改變。此外，施用經(jīng)活化的血清通過(guò)在治療方案開(kāi)始時(shí)施用較大量的經(jīng)調(diào)節(jié)的血清(例如5ml，IOml或20ml)而對(duì)于疾病的進(jìn)程有影響。一名被診斷患有嚴(yán)重潰瘍性結(jié)腸炎的患者毎日排便20次，在用經(jīng)活化的血清治療之前通過(guò)結(jié)腸鏡觀察到了腸狹窄。所述患者在7周內(nèi)被完全治愈(由進(jìn)行所述結(jié)腸鏡的外部醫(yī)生證實(shí))。實(shí)施例7產(chǎn)生mirRNA的干細(xì)胞(包括胎盤(pán)來(lái)源的細(xì)胞培養(yǎng)物)的體外培養(yǎng)將造血干細(xì)胞或胎盤(pán)來(lái)源的細(xì)胞培養(yǎng)物在體外條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，任選地在含有活化性物質(zhì)(例如玻璃珠等)的容器中培養(yǎng)。備選地，在隨后的步驟中，可將細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至含有活化性物質(zhì)(例如玻璃珠等)的容器。在回流或任何其它程序中，在37攝氏度下，使細(xì)胞暴露于活化性表面1，2，4，10， 24或48小吋，可使樣品不被接觸總共5小時(shí)至M小吋，這取決于體積、容器的表面區(qū)域以及給定樣品中的細(xì)胞數(shù)目。此后，通過(guò)將溫度降低至室溫而終止孵育。然后，可將所制備的細(xì)胞制備物儲(chǔ)存在室溫，冷凍于-5-18攝氏度，或者制備其用于冷凍儲(chǔ)存以優(yōu)化更為復(fù)雜的結(jié)構(gòu)(例如膜，如囊泡等)的保存。實(shí)施例8在測(cè)定中測(cè)試如實(shí)施例1或2中所制備的經(jīng)活化的血清以確定響應(yīng)于活化而被上調(diào)的特定mi RNA。由Ex i qon (丹麥)進(jìn)行了 mi RCURYtmLNA陣列微小RNA特征描繪 (profiling)服務(wù)。結(jié)果總結(jié)在表1中。表1含有來(lái)自所有雜交的、歸ー化的Hy3信號(hào)(log2轉(zhuǎn)化的)。所顯示的是重復(fù)測(cè)量來(lái)自各個(gè)玻片的相同miRNA的中值。表 權(quán)利要求
1.包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)；用作藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述miRNA是Let-7家族的成員，或其變體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述miRNA選自hsa-Let-7a，hsa-Let-7b, hsa_Let_7b氺,hsa-Let~7c, hsa-Let-7d, hsa_Let_7d氺,hsa-Let~7e, hsa-Let~7f, hsa-Let-7f*, hsa-Let_7g, hsa-Let_7g*, hsa-Let_7i, hsa-miR-103, hsa_miR-106A, hsa-miR-106B, hsa-miR-107, hsa-miR-125A, hsa-miR-125B, hsa-miR-126, hsa-miR-128, hsa-miR-130A, hsa-miR-130B, hsa-miR-140-3P, hsa-miR-140-5P, hsa-miR-142-3P, hsa-miR-142-5P, hsa-miR-143, hsa-miR-144, hsa-miR-146A, hsa-miR-148A, hsa-miR-148B, hsa-miR-150, hsa-miR-151-3P, hsa-miR-151-5P, hsa-miR-152, hsa_miR-15A, hsa_miR-15B, hsa-miR-16, hsa_miR-15B*, hsa-miR-17, hsa-miR-181A, hsa-miR-185, hsa-miR-186, hsa-miR-18A, hsa-miR-18A*, hsa-miR-18B, hsa-miR-192, hsa-miR-191, hsa-miR-194, hsa-miR-197, hsa-miR-1979, hsa-miR-19A, hsa-miR-19B, hsa-miR-20A, hsa-miR-20B, hsa-miR-21, hsa-miR-205, hsa-miR-210, hsa-miR-215, hsa-miR-22, hsa-miR-22*, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-223, hsa-miR-223*, hsa-miR-23A, hsa-miR-23B, hsa-miR-24, hsa-miR-25, hsa-miR-26A, hsa-miR-26B, hsa-miR-27A, hsa-miR-27B, hsa-miR-28-5P, hsa-miR-29A, hsa-miR-29B, hsa-miR-29C, hsa_miR-30A, hsa_miR-301A, hsa_miR-30B, hsa_miR-30C, hsa_miR-30D, hsa-miR-30E, hsa-miR-320A, hsa-miR-320B, hsa-miR-324-3P, hsa-miR-326, hsa-miR-328, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-339-5P, hsa-miR-33A, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-365, hsa-miR-378, hsa-miR-423-3P, hsa-miR-423-5P, hsa-miR-424, hsa-miR-425, hsa-miR-451, hsa-miR-484, hsa-miR-486_5P， hsa-miR-505, hsa-miR-502-3P, hsa-miR-590-5P, hsa-miR-628-3P, hsa-miR-652, hsa-miR-660, hsa-miR-720, hsa-miR-92A, hsa-miR-92B, hsa-miR-93, hsa-miR-93*, hsa-miR-99A, hsa-miR-99B, hsa-miR-103-2*, hsa-miR-106B*, hsa-miR-133A, hsa-miR-133B, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-340, hsa-miR-34A, hsa-miR-34B, hsa-miR-376A, hsa-miR-532-3P, hsa-miR-125A-5P, hsa-miR-154, hsa-miR-196B, hsa-miR-1979, hsa-miR-326, hsa-miR-425*, hsa-miR-127-3P, hsa-miR-1537, hsa-miR-183, hsa-miR-29B-2*, hsa-miR-339-3P, hsa-miR-551A, hsa-miR-629, hsa-miR-766, hsa-miR-2110, hsa-miR-361-3P, hsa-miR-501-5P, hsa-miR-940, hsa-miR-1249, hsa-miR-132, hsa-miR-1538,禾口 hsa-miR-149， hsa-miR-125a_5P， hsa-miR-132, hsa-miR-155, hsa-miR-182, hsa-miR-324_5P, hsa-miR-331_3P, hsa-miR-335, hsa-miR-374b 和 hsa-miR-532_5P，以及它們的變體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的組合物，還包含選自下列的miRNA:hsa-miR-7， hsa-Let-7a, hsa-Let~7b, hsa_Let_7b氺,hsa-Let~7c, hsa-Let-7d, hsa_Let_7d氺, hsa-Let-7e, hsa-Let~7f , hsa_Let_7f氺,hsa-Let-7g, hsa_Let_7g氺,hsa-Let-7i, hsa-miR-103, hsa-miR-106A, hsa-miR-106B, hsa-miR-107, hsa-miR-125A, hsa-miR-125B, hsa-miR-126, hsa-miR-128, hsa-miR-130A, hsa-miR-130B, hsa-miR-140-3P, hsa-miR-140-5P, hsa-miR-142-3P, hsa-miR-142-5P, hsa-miR-143, hsa-miR-144,hsa-miR-146A, hsa-miR-148A, hsa-miR-148B, hsa-miR-150, hsa-miR-151-3P, hsa-miR-151_5P, hsa-miR-152, hsa_miR-15A, hs a_miR-15B, hsa-miR-16, hsa-miR-15B*, hsa-miR-17, hsa-miR-181A, hsa-miR-185, hsa-miR-186, hsa-miR-18A, hsa-miR-18A*, hsa-miR-18B, hsa-miR-192, hsa-miR-191, hsa-miR-194, hsa-miR-197, hsa-miR-1979, hsa-miR-19A, hsa-miR-19B, hsa-miR-20A, hsa-miR-20B, hsa-miR-21, hsa-miR-205, hsa-miR-210, hsa-miR-215, hsa-miR-22, hsa-miR-22*, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-223, hsa-miR-223*, hsa-miR-23A, hsa-miR-23B, hsa-miR-24, hsa-miR-25, hsa-miR-26A, hsa-miR-26B, hsa-miR-27A, hsa-miR-27B, hsa-miR-28-5P, hsa-miR-29A, hsa-miR-29B, hsa-miR-29C, hsa-miR-30A, hsa-miR-301A, hsa-miR-30B, hsa-miR-30C, hsa-miR-30D,hsa_miR-30E，hsa_miR-320A，hsa_miR-320B，hsa-miR-324_3P，hsa-miR-326, hsa-miR-328, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-339-5P, hsa-miR-33A, hsa-miR-342-3P, hsa-miR-365, hsa-miR-378, hsa-miR-423-3P, hsa-miR-423-5P, hsa-miR-424, hsa-miR-425, hsa-miR-451, hsa-miR-484, hsa-miR-486_5P， hsa-miR-505, hsa-miR-502-3P, hsa-miR-590-5P, hsa-miR-628-3P, hsa-miR-652, hsa-miR-660, hsa-miR-720, hsa-miR-92A, hsa-miR-92B, hsa-miR-93, hsa-miR-93*, hsa-miR-99A, hsa-miR-99B, hsa-miR-103-2*, hsa-miR-106B*, hsa-miR-133A, hsa-miR-133B, hsa-miR-338-3P, hsa-miR-340, hsa-miR-34A, hsa-miR-34B, hsa-miR-376A, hsa-miR-532-3P, hsa-miR-125A-5P, hsa-miR-154, hsa-miR-196B, hsa-miR-1979, hsa-miR-326, hsa-miR-425*, hsa-miR-127-3P, hsa-miR-1537, hsa-miR-183, hsa-miR-29B-2*, hsa-miR-339-3P, hsa-miR-551A, hsa-miR-629, hsa-miR-766, hsa-miR-2110, hsa-miR-361-3P, hsa-miR-501-5P, hsa-miR-940, hsa-miR-1249, hsa-miR-132, hsa-miR-1538,禾口 hsa-miR-149， hsa-miR-125a_5P， hsa-miR-132, hsa-miR-155, hsa-miR-182, hsa-miR-324_5P, hsa-miR-331-3P, hsa-miR-335, hsa-miR-374b, 禾口 hsa-miR-532_5P, hsa_miR-320a, hsa_miR-130a, hsa_miR-320c, hsa-miR-628_3p, hsa-miR-637, hsa_miR-320b, hsa-miR-129_5p, hsa-miR-943, hsa-miR-185*, hsa-miR-340*, hsa-miR-744, hsa-miR-638, hsa-miR-585, hsa-miR-26b, hsa-miR-485_3p, hsa-miR-103, hsa-miR-146b_5p, hsa-miR-642, hsa_miR-146a, hsa-let_7a, hsa-let_7f, hsa_miR-200b*, hsa_miR-320d, hsa-let_7d, hsa-miR-1282, hsa-miR-124, hsa-miR-602, hsa-let-7g, hsa-miR-221, hsa-miR-25*, hsa-miR-1184, hsa-miR-663, hsa-miR-93, hsa-miR-30b*, hsa-miR-124*, hsa-miR-22, hsa-miR-1281, hsa-miR-1237,hsa_miR-34b，hsa-miR-1290,hsa_miR-193b*，hsa_miR-526b，hsa-miR-622, hsa-miR-191,hsa-miR-142_3p, hsa_miR-92a,hsa-miR-1280,hsa-miR-1236,hsa_miR-30c, hsa-miR-877*, hsa-miR-548n, hsa-miR-1249, hsa-let-7i, hsa-miR-1224-3p, hsa-miR-17, hsa-miR-300, hsa-miR-193a-5p, hsa_let_7cHs hsa-miR-24, hsa_miR_518c氺， hsa-miR-222,hsa-miR-664,hsa_miR-130b，hsa-miR-625*，hsa-miR-593,hsa-miR-885_5p， hsa-miR-505*, hsa_miR_491_3p, hsa-miR-421, hsa-miR-7, hsa-miR-106a, hsa_miR_99b氺， hsa-miR-1300, hsa-miR-92b, hsa-miR-30d, hsa-miR-720, hsa-miR-1260, hsa-miR-425, hsa-miR-939, hsa_miR-30a, hsa_miR-30e, hsa-miR-654_5p, hsa-miR-509_5p, hsa-miR-1擬6，以及它們的變體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物不是源自血液產(chǎn)品。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物基本上不含其它源自血液的組分。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物源自骨髓，任選地其中所述骨髓是對(duì)于血細(xì)胞和造血干細(xì)胞純化了的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物源自血沉黃層制備物，任選地連同血漿。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物是經(jīng)調(diào)節(jié)的細(xì)胞培養(yǎng)基，例如體外細(xì)胞培養(yǎng)基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的組合物，其中活化之后，所述miRNA在血液制備物中被上調(diào)。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其中在任選地包含誘導(dǎo)物的容器中被活化后，體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的組合物，其中在選自下列的表面上活化后，所述 miRNA被上調(diào)球形、凝膠、玻璃棉、粒狀材料和顆?；虬ň郾揭蚁┗虿ＡУ谋砻娼Y(jié)構(gòu)。
13.根據(jù)權(quán)利要求11-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述誘導(dǎo)物包括免疫球蛋白。
14.根據(jù)權(quán)利要求11-13中任一項(xiàng)的組合物，其中所述誘導(dǎo)物被自體的，同種異體的或異源的腫瘤細(xì)胞所代表，例如IO3-IO7個(gè)腫瘤細(xì)胞/ml組合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)的組合物，其中所述miRNA以下列量存在至少約 1000，例如至少約5000，例如至少約104，例如至少約5xl04，例如至少約105，例如至少約 5xl05，例如至少約106，例如至少約5xl06，例如至少約107，例如至少約5xl07，例如至少約 108，例如至少約5xl08飛克/ml，例如直至250皮克/ml。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物源自血清。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物具有正常生理水平的鈉，例如 135-145mEq/L之間的水平。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物還包含載體蛋白和/或膠束和 /或囊泡和/或脂質(zhì)體，用于保護(hù)miRNA不被RNA酶降解。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的組合物，其中所述核酸分子是通過(guò)合成手段制備的。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)的組合物，其中所述核酸分子以可測(cè)量的量存在。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的組合物，其中所述核酸分子包含親合力增強(qiáng)性核苷酸類似物，例如肽核酸(PNA)，偽-互補(bǔ)PNA (pcPNA)，鎖核酸(LNA)，或它們的類似物。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物包含至少1-100，例如至少 2-50，例如至少10-50種不同的mi RNA種類。
23.根據(jù)權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物還包含外核體的制備物，例如通過(guò)體外產(chǎn)生的外核體制備物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的組合物，其中所述外核體富含所述核酸分子。
25.根據(jù)權(quán)利要求114中任一項(xiàng)的組合物，所述組合物還包含磁性納米顆粒的制備物，例如涂覆了聚乙烯亞胺(PEI)的鐵磁性納米顆粒。
26.根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)的組合物；用于治療選自下列的適應(yīng)癥與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病例如不希望的免疫系統(tǒng)活化，癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥例如白血病，慢性炎癥，牙周病，習(xí)慣性流產(chǎn)，潰瘍性結(jié)腸炎，風(fēng)濕性多肌痛，急性頸部扭傷相關(guān)病癥，子宮內(nèi)膜異位癥例如子宮腺肌病，帕金森氏病，阿爾茨海默病，癡呆，糖尿病例如I型糖尿病，AIDS/HIV，骨質(zhì)疏松癥，銀屑病，和傷口愈合，生殖系統(tǒng)中的病況，例如精子產(chǎn)生低，產(chǎn)生單純支持細(xì)胞綜合征，以及人和動(dòng)物中的胎兒流產(chǎn)。
27.用于制備包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物的方法，其中在活化體液或其元素之后所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)，所述方法包括下列步驟a)從哺乳動(dòng)物收集所述體液或其元素；b)與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素；c)收集在步驟b)之后產(chǎn)生的所述體液并任選地純化所述miRNA。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中所述組合物是根據(jù)權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)的。
29.根據(jù)權(quán)利要求27或觀中任一項(xiàng)的方法，其中在步驟b)中孵育所述體液或其元素超過(guò)24小時(shí)，例如超過(guò)48小時(shí)，例如超過(guò)60小時(shí)，72小時(shí)，84小時(shí)，96小時(shí)，120小時(shí)，或 150小時(shí)。
30.用于制備包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物的方法，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)，所述方法包括下列步驟a)從哺乳動(dòng)物收集所述體液或其元素；b)與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素；c)鑒別在所述體液或其元素中被上調(diào)的一種或多種miRNA；d)以分離的形式提供所述一種或多種在步驟c)中鑒別的所述miRNA分子并將它們加至所述組合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是體外細(xì)胞培養(yǎng)物， 例如單核細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)物，造血干細(xì)胞培養(yǎng)物或胎盤(pán)來(lái)源的細(xì)胞培養(yǎng)物。
32.根據(jù)權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是血清制備物。
33.根據(jù)權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是血沉黃層制備物。
34.根據(jù)權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是全血制備物。
35.根據(jù)權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是來(lái)自骨髓滲出液的。
36.根據(jù)權(quán)利要求27-35中任一項(xiàng)的方法，其中將經(jīng)活化的體液或其元素進(jìn)一步與富含血小板的血漿(PRP)相混合，任選地與外核體制備物相組合。
37.根據(jù)權(quán)利要求27-36中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素還在包括用抗凝劑處理所述體液或其元素的步驟的方法中被活化。
38.根據(jù)權(quán)利要求27-37中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從兩個(gè)或更多個(gè)哺乳動(dòng)物收集的，例如來(lái)自超過(guò)3，4，5，6，7，8，9，10，20，30，40，50或100個(gè)哺乳動(dòng)物。
39.根據(jù)權(quán)利要求27-38中任一項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。
40.根據(jù)權(quán)利要求27-39中任一項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是家畜。
41.根據(jù)權(quán)利要求27-40中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從健康的個(gè)體收集的。
42.根據(jù)權(quán)利要求27-41中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從疾病個(gè)體收集的。
43.根據(jù)權(quán)利要求27-42中任一項(xiàng)的方法，其中所述體液或其元素是從健康和疾病個(gè)體的組合收集的。
44.根據(jù)權(quán)利要求27-43中任一項(xiàng)的方法，其中與未在步驟b)中經(jīng)活化的組合物中所述miRNA的濃度水平相比，所述一種或多種miRNA的濃度水平以至少約50%，例如至少約 100 %，例如至少約200 %，例如至少約300 %，例如至少約400 %，例如至少約500 %，例如至少約600%，例如至少約700%，例如至少約800%被上調(diào)。
45.根據(jù)權(quán)利要求27-44中任一項(xiàng)的方法，所述方法還包括在合成的或備選來(lái)源的 miRNA的存在下，與增加的表面區(qū)域相接觸而孵育所收集的體液或其元素的步驟。
46.根據(jù)權(quán)利要求27-45中任一項(xiàng)的方法，所述方法還包括在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中孵育所述體液或其元素。
47.分部試劑盒，其包括a)用于制備包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物的設(shè)備，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)，所述設(shè)備包含任選地具有誘導(dǎo)物的容器；和b)用于根據(jù)權(quán)利要求27-46中任一項(xiàng)的方法使用的說(shuō)明書(shū)；c)任選地磁性納米顆粒制備物，例如包被了聚乙烯亞胺(PEI)的鐵磁性納米顆粒。
48.用于治療或緩解與炎癥相關(guān)的疾病或病癥，免疫系統(tǒng)的疾病例如不希望的免疫系統(tǒng)活化和/或癌癥或與異常細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞分裂相關(guān)的其它適應(yīng)癥的癥狀的方法，所述方法包括向需要所述治療的受試者施用包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物，其中在活化體液或其元素之后，所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中所述包含治療有效量的一種或多種miRNA分子或其功能性變體的組合物是權(quán)利要求1-26中任一項(xiàng)所定義的組合物，或通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求 27-46中任一項(xiàng)的方法制備的組合物，其中在活化體液或其元素之后所述體液或其元素中的所述miRNA被上調(diào)。
50.根據(jù)權(quán)利要求48或49中任一項(xiàng)的方法，其中所述施用是通過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、鼻內(nèi)、經(jīng)口、神經(jīng)周、鞘內(nèi)施用，或者是通過(guò)局部注射或滴注，例如在外科程序的過(guò)程中，或者這些中任意的組合。
51.根據(jù)權(quán)利要求48-50中任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是自體的。
52.根據(jù)權(quán)利要求48-50中任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是同源的。
53.根據(jù)權(quán)利要求48-50中任一項(xiàng)的方法，其中所述組合物對(duì)于需要所述治療的受試者而言是異源的。
54.根據(jù)權(quán)利要求48-53中任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物是通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求沈-46中任一項(xiàng)的方法制備的，其中在施用其所含有的組合物之前，將所述體液或其元素孵育1至200小時(shí)，例如1至150小時(shí)，例如1至100小時(shí)。
55.根據(jù)權(quán)利要求48-54中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者是人。
56.根據(jù)權(quán)利要求48-55中任一項(xiàng)的方法，其中所述醫(yī)療病況選自癌癥例如白血病， 牙周病，習(xí)慣性流產(chǎn)，潰瘍性結(jié)腸炎，風(fēng)濕性多肌痛，急性頸部扭傷相關(guān)病癥，子宮內(nèi)膜異位癥，例如子宮腺肌病，帕金森氏病，阿爾茨海默病，癡呆，糖尿病例如I型糖尿病，AIDS/HIV, 骨質(zhì)疏松癥，銀屑病和傷口愈合。
57.根據(jù)權(quán)利要求48-56中任一項(xiàng)的方法，其中用于治療的所述方法還包括施用化學(xué)治療劑。
58.根據(jù)權(quán)利要求48-57中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法還包括在施用包含磁性納米顆粒制備物的所述組合物后，在疾病位點(diǎn)中或附近，例如在腫瘤中或附近，體內(nèi)放置磁體的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含治療有效量的miRNA的組合物，其用于治療受益于用這些組合物進(jìn)行治療的醫(yī)療病況的用途，以及用于制備包含miRNA的組合物的方法。
文檔編號(hào)A61K31/713GK102573856SQ201080046930
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月10日
發(fā)明者弗萊明·韋林, 斯文·林登堡 申請(qǐng)人:弗萊明·韋林, 斯文·林登堡