專利名稱：抗氧化劑的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用畢赤酵母屬(Pichia)微生物由豆渣發(fā)酵抗氧化劑的制造方法以及由該制造方法得到的具有高SOD活性的抗氧化劑。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，活性氧被認(rèn)為是造成皮膚皺紋、張力降低等老化的原因，作為防止老化的方法之一，除去活性氧的方法已廣為所知。作為活性氧清除劑被使用的有超氧化物岐化酶 (S0D，也被稱為抗氧化酶)等。SOD不僅具有抑制活性氧發(fā)生的效果，而且能夠防止由活性氧引起的皮膚變粗糙和斑點(diǎn)、皺紋等(參照非專利文獻(xiàn)1)。因此，近年來(lái)，人們對(duì)具有SOD活性的抗氧化物質(zhì)進(jìn)行了相關(guān)研究。例如，已提出了白樺提取組合物(參照專利文獻(xiàn)1)以及以七葉樹(shù)籽的提取物為有效成分的SOD活性化劑(參照專利文獻(xiàn)幻等。然而，由于這些SOD活性化劑全都是從植物原料提取得到，該提取操作耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，且由于天然資源的利用可能性有限等原因，其制造成本高。另外，除了來(lái)自植物的抗氧化物質(zhì)以外，乳酸菌等的發(fā)酵物也被發(fā)現(xiàn)具有抗氧化效果。例如，專利文獻(xiàn)3中提出了對(duì)于廣范圍的過(guò)氧化物具有分解特性的乳酸菌由來(lái)的培養(yǎng)物。然而，該培養(yǎng)物僅僅是從豆曲等分離源分離乳酸菌、并培養(yǎng)，從所得到的培養(yǎng)物回收菌體，而得到的含有該菌體的菌體懸濁液，對(duì)于過(guò)氧化氫等過(guò)氧化物具有分解特性。對(duì)于過(guò)氧化物的分解有可能是由還原性物質(zhì)引起的分解，因而并不一定是由SOD引起的分解。另夕卜，非專利文獻(xiàn)2 5中公開(kāi)了由納豆菌或乳酸菌發(fā)酵豆渣得到的發(fā)酵物具有抗氧化作用。 然而，這些研究都偏重于豆渣發(fā)酵物的亞油酸體系中的抗氧化作用、羥自由基清除能力、過(guò)氧化氫清除活性等抗氧化作用，而對(duì)于具有SOD活性還未有報(bào)道。此外，專利文獻(xiàn)4、5中提出了納豆菌發(fā)酵番石榴葉由來(lái)的抗氧化物質(zhì)。然而，從其實(shí)施例可以看出，只使用番石榴提取物(試樣1)和只使用米糠、大豆發(fā)酵物(試樣幻時(shí)的 SOD活性都低，其活性氧清除效果不充分。而且，由于番石榴葉的獲得受季節(jié)限制，因而該方法同樣在實(shí)際使用上存在困難。如上所述，雖然已知具有各種活性氧清除能力的物質(zhì)，但是，這些物質(zhì)中還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高SOD活性，已實(shí)用化的物質(zhì)也很少。而且，目前還沒(méi)有利用畢赤酵母屬(Pichia)的微生物來(lái)制造具有高SOD活性的抗氧化劑的報(bào)道。非專利文獻(xiàn)1 食品功能素材11，2001年4月27日出版，株式會(huì)社廣告節(jié)目郗， 44-63 頁(yè)非專利文獻(xiàn)2 田村貴起等，日本食品科學(xué)工學(xué)會(huì)刊，1999年，第46卷，第9號(hào)， 561-569 頁(yè)非專利文獻(xiàn)3 渡邊泰成等，崎玉縣產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合中心研究報(bào)告，2005年，第3卷非專利文獻(xiàn) 4 :B. Moktan, etc.，F(xiàn)ood Research International, 2008,41 :586-93非專利文獻(xiàn)5 :Y. P. Zhu, etc.，F(xiàn)ood Control, 2008,19 :654-661專利文獻(xiàn)1 :日本特開(kāi)2008-88109號(hào)公報(bào)
專利文獻(xiàn)2 日本特開(kāi)2007-291069號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3 日本特開(kāi)2009-191276號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4 日本特開(kāi)2004-24004號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5 日本特開(kāi)2004-43505號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明人進(jìn)行了悉心研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)畢赤酵母屬(Pichia)的微生物，特別是培養(yǎng)異常畢赤酵母(Pichia anomala)或季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)，能夠低成本且高效地獲得抗氧化齊U，從而完成本發(fā)明。本發(fā)明涉及提供一種抗氧化劑的制造方法，其中，在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)畢赤酵母屬(Pichia)的微生物，從其上清液中得到抗氧化劑。本發(fā)明還涉及提供根據(jù)上述抗氧化劑的制造方法得到的具有高SOD活性的抗氧化劑。本發(fā)明還涉及豆渣的畢赤酵母屬(Pichia)的發(fā)酵提取物作為抗氧化劑的用途。本發(fā)明還涉及提供豆渣的畢赤酵母屬(Pichia)的發(fā)酵提取物在制造(活性氧清除劑)中的用途。本發(fā)明還涉及提供配合有上述抗氧化劑的食品、化妝品、醫(yī)藥品。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明所涉及的抗氧化劑的制造方法，能夠利用特定微生物，以食品加工業(yè)等的副產(chǎn)物豆渣作為培養(yǎng)基的主原料，低成本且高效地得到抗氧化劑，該抗氧化劑具有活性氧清除效果，安全性優(yōu)異，容易操作，因而能夠用于食品、化妝品、醫(yī)藥品等領(lǐng)域。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所使用的微生物是畢赤酵母屬(Pichia)的微生物。作為同屬微生物，可以列舉出異常畢赤酵母(Pichia anomala)、季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)、 伯頓畢赤酵母(Pichia burtonii)、膜醭畢赤酵母(Pichia membranaefaciens)、克魯弗畢赤酵母(Pichia Kluyveri)等；還包括根據(jù)通常方法得到的這些微生物的變異株。這些微生物如下所述發(fā)揮作用，通過(guò)在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，從而從其上清液中可以得到具有高SOD活性的抗氧化劑。其中，使用異常畢赤酵母(Pichia anomala)或季也蒙畢赤酵母 (Pichia guilliermondii)能夠得到具有更高的活性氧清除效果的抗氧化劑，因而優(yōu)選。本發(fā)明所涉及的畢赤酵母屬(Pichia)的微生物都可以從中國(guó)普通微生物保藏管理中心(CGMCC)、中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)、江南大學(xué)工業(yè)微生物資源和信息中心 (CICIM)等商業(yè)渠道購(gòu)買(mǎi)得到。本發(fā)明的抗氧化劑的制造方法通過(guò)在含有豆渣的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)上述微生物，并從其上清液中得到抗氧化劑。該方法的具體步驟如下所示。<培養(yǎng)基>在本發(fā)明中，液體培養(yǎng)基的主要成分是豆渣，其他成分還有糖類和水等，也可以適當(dāng)添加蛋白胨、酵母粉。由于豆渣容易獲得，因而，本發(fā)明的培養(yǎng)基具有成本低的優(yōu)點(diǎn)。
其中，豆渣是指，將大豆浸泡在水中使其充分吸收水分后，再經(jīng)粉碎、過(guò)濾除去水而得到的物質(zhì)；也可以使用食品產(chǎn)業(yè)中壓榨豆?jié){等的豆制品制造后剩下的豆渣。作為糖類，可以單獨(dú)使用葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等中的任意一種，或者混合使用。從提高發(fā)酵生產(chǎn)性和利用性的觀點(diǎn)出發(fā)，其中優(yōu)選葡萄糖。在本發(fā)明中，為了提高SOD活性，本發(fā)明的培養(yǎng)基優(yōu)選由豆渣、葡萄糖和水構(gòu)成， 進(jìn)一步優(yōu)選培養(yǎng)基中的豆渣的含量為5 15W/v%、更優(yōu)選為8 12W/v%，特別優(yōu)選為 10W/v%。豆渣的含量在該范圍時(shí)才能得到高SOD活性。并且，從該觀點(diǎn)出發(fā)，葡萄糖的含量?jī)?yōu)選為0. 2 2w/v%，更優(yōu)選為0. 8 1. 2w/v%。下面，將上述這種用于制造抗氧化劑的培養(yǎng)基稱為“抗氧化劑制造培養(yǎng)基”。<發(fā)酵培養(yǎng)條件>在發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，可以使用上述微生物中的1種或2種以上。在使用2種以上微生物的情況下，可以將微生物順次或同時(shí)添加到抗氧化劑制造培養(yǎng)基中使其發(fā)酵。作為用于制造抗氧化劑的發(fā)酵培養(yǎng)條件，從最優(yōu)化畢赤酵母屬(Pichia)微生物的成長(zhǎng)所必需的溫度、時(shí)間，以及提高SOD活性的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選在20 40°C、更優(yōu)選在 27 35°C的培養(yǎng)溫度下，培養(yǎng)1 7天，優(yōu)選培養(yǎng)48 96小時(shí)，更優(yōu)選培養(yǎng)68 76小時(shí)。<抗氧化劑的回收、精制>在本發(fā)明中，可以通過(guò)離心分離等從培養(yǎng)液除去菌體，回收離心后的培養(yǎng)上清液 (以下，有時(shí)也稱為“豆渣發(fā)酵提取物”)直接作為抗氧化劑利用。另外，也可以通過(guò)適當(dāng)?shù)墓姆蛛x、精制技術(shù)，例如，通過(guò)超過(guò)濾、硫酸銨分級(jí)沉淀等進(jìn)一步精制。本發(fā)明中的抗氧化劑(即，活性氧清除劑)的抗氧化效果，即，活性氧清除效果，由測(cè)定SOD活性值來(lái)確認(rèn)。SOD活性值越大，SOD活性越高，提高消除活性氧的能力，從而能夠抑制由皮膚氧化引起的老化等。本發(fā)明中的“高SOD活性”是指，根據(jù)下述實(shí)施例的方法測(cè)定計(jì)算的SOD活性值為75%以上。在此我們規(guī)定，本發(fā)明的抗氧化劑(活性氧清除劑) 的SOD活性為75%以上且小于100%時(shí)，表示具有中等的高SOD活性，而SOD活性為100 120%時(shí)，表示具有更高的高SOD活性。如下述實(shí)施例所示，通過(guò)培養(yǎng)本發(fā)明的畢赤酵母屬(Pichia)微生物得到的豆渣發(fā)酵提取物具有高SOD活性。通過(guò)使用該發(fā)酵提取物，可以得到抗氧化、抗老化等優(yōu)異的活性氧清除效果。因此，通過(guò)培養(yǎng)本發(fā)明的畢赤酵母屬(Pichia)微生物得到的豆渣發(fā)酵提取物，可以作為治療目的或非治療目的的抗氧化劑(活性氧清除劑)使用。非治療目的的使用是以美容為目的的使用，或?yàn)榫S持健康狀態(tài)的使用等。并且，所述抗氧化劑(活性氧清除劑)的治療目的的使用和非治療目的的使用是可以完全區(qū)分地進(jìn)行的。另外，通過(guò)培養(yǎng)本發(fā)明的畢赤酵母屬(Pichia)微生物得到的豆渣發(fā)酵提取物，還可以用于制造抗氧化劑(活性氧清除劑)。本發(fā)明的抗氧化劑(活性氧清除劑)具有極高的活性氧清除效果，同時(shí)安全性極高，可以用于預(yù)防或改善由生物體內(nèi)活性氧量的增大所引起的高血壓、動(dòng)脈硬化、糖尿病及癌癥等疾病、以及成為美容方面障礙的諸多癥狀。本發(fā)明的抗氧化劑(活性氧清除劑)還可以制成制劑配合于通常的食品、化妝品或醫(yī)藥品中，賦予活性氧清除效果，提高商品價(jià)值。另外，作為食品形態(tài)，例如，可以采用蛋糕、巧克力、口香糖、糖、飲料等通常的食品形態(tài)。作為化妝品形態(tài)，例如，可以制成化妝水、乳液、凝膠劑、精華劑、面膜、沖洗劑、沐浴齊U、粉底、口紅、軟膏等適用于皮膚的皮膚外用劑。另外，作為醫(yī)藥品形態(tài)，例如，可以制成散齊U、顆粒劑、片劑、膠囊劑、懸浮劑、液劑、乳劑、注射液等。這些食品、化妝品和醫(yī)藥品中可以根據(jù)目的使用對(duì)應(yīng)的任意成分。本發(fā)明的抗氧化劑(活性氧清除劑)的配合量，可以根據(jù)其使用形態(tài)進(jìn)行適當(dāng)變化，相對(duì)于食品、化妝品、醫(yī)藥品等的總量，換算為固形物，優(yōu)選配合0.01 10w/V%，更優(yōu)選配合0. 01 lW/v%。當(dāng)配合量小于0. 01W/v%時(shí)難以得到充分的活性氧清除效果；而當(dāng)配合量大于10W/V%時(shí)，其效果反而不會(huì)提高因而不經(jīng)濟(jì)。此外，作為添加方法，可以預(yù)先添加，也可以在制造工程中添加，可以考慮操作性進(jìn)行適當(dāng)選擇。實(shí)施例下面，基礎(chǔ)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不限定于這些實(shí)施例。(抗氧化劑(活性氧清除劑)的制造)實(shí)施例1 實(shí)施例8作為從豆渣制造抗氧化劑(活性氧清除劑)的微生物，使用以下表1所示的畢赤酵母屬(Pichia)的微生物。表 權(quán)利要求
1.一種抗氧化劑的制造方法，其中，在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)畢赤酵母屬(Pichia)的微生物，從其上清液中得到抗氧化劑。
2.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中，所述畢赤酵母屬(Pichia)的微生物是異常畢赤酵母(Pichia anomala)或季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)。
3.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中， 所述培養(yǎng)基中所述豆渣的含量為5 15W/v%。
4.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中， 所述培養(yǎng)基中所述豆渣的含量為8 12W/v%。
5.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中， 所述培養(yǎng)基中所述豆渣的含量為10w/V%。
6.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中， 所述培養(yǎng)溫度為27 35°C。
7.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中， 所述培養(yǎng)時(shí)間為1 7天。
8.如權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的制造方法，其中，將通過(guò)所述培養(yǎng)獲得的培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離，從而得到所述上清液作為抗氧化劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8中任意一項(xiàng)所述的抗氧化劑的制造方法得到的具有高SOD活性的抗氧化劑。
10.如權(quán)利要求9所述的抗氧化劑，其中， 所述抗氧化劑的SOD活性為75 120%。
11.如權(quán)利要求9所述的抗氧化劑，其中，所述抗氧化劑的SOD活性為75%以上且小于100%。
12.如權(quán)利要求9所述的抗氧化劑，其中， 所述抗氧化劑的SOD活性為100 120%。
13.豆渣發(fā)酵提取物作為抗氧化劑的用途，其中，所述豆渣發(fā)酵提取物是在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)畢赤酵母屬(Pichia)的微生物得到的。
14.豆渣發(fā)酵提取物在制造抗氧化劑中的用途，其中，所述豆渣發(fā)酵提取物是在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)畢赤酵母屬(Pichia)的微生物得到的。
15.如權(quán)利要求13或14所述的用途，其中，所述畢赤酵母屬(Pichia)的微生物是異常畢赤酵母(Pichia anomala)或季也蒙畢赤酵母(Pichia guilliermondii)。
16.一種食品，其特征在于，配合有如權(quán)利要求9 12中任意一項(xiàng)所述的抗氧化劑。
17.一種化妝品，其特征在于，配合有如權(quán)利要求9 12中任意一項(xiàng)所述的抗氧化劑。
18. 一種醫(yī)藥品，其特征在于，配合有如權(quán)利要求9 12中任意一項(xiàng)所述的抗氧化劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗氧化劑的制造方法。本發(fā)明提供一種抗氧化劑的制造方法，其中，在含有豆渣的培養(yǎng)基中培養(yǎng)畢赤酵母屬(Pichia)的微生物，從其上清液中得到抗氧化劑。本發(fā)明還提供由上述制造方法得到的具有高SOD活性的抗氧化劑。根據(jù)本發(fā)明的制造方法，能夠利用特定微生物，以食品加工業(yè)等的副產(chǎn)物豆渣作為培養(yǎng)基的主原料，從而低成本且高效地獲得抗氧化劑。
文檔編號(hào)A61K36/48GK102533866SQ201010624759
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者孔凡旗 申請(qǐng)人:花王株式會(huì)社