專利名稱：含有抗氧化劑的吸煙制品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多種協(xié)同性抗氧化劑、酶促輔因子如含硒的化合物和氨基酸在合適的輸送載體中的組合，它可用于通常所稱的“無煙煙草”中作為預(yù)防或緩解由這些制品損傷所引起的口咽腔的征兆和癥狀和并發(fā)癥的手段。
背景技術(shù)：
煙草是含有成癮性藥物尼古丁的植物紅葉煙草(Nicotiana tabacum)的干枝葉構(gòu)成的物質(zhì)。該植物原產(chǎn)于北美，但現(xiàn)在在全世界種植。濫用煙草被確認為是最可以預(yù)防的導(dǎo)致疾病、病態(tài)和死亡的原因。煙草含有并產(chǎn)生許多有毒的化學(xué)物質(zhì)和自由基。吸食煙草有3種主要方式1)吸煙；2)咀嚼和浸取，以及3)用鼻吸。50,000,000美國人吸煙，另有不計其數(shù)的人受到煙草煙的影響，即所謂二次或被動吸煙者。煙民的孩子也吸進二手煙，且比非吸煙者的孩子有更多的呼吸問題。吸煙者的不吸煙的配偶或同事患心臟病的頻率高于真正不吸煙的對照。
有多達14,000,000人使用無煙煙草，無煙煙草對口腔有害，而且還因頰粘膜吸收尼古丁和其它有害化學(xué)物質(zhì)而有全身性影響。使用無煙煙草的青少年正在增多。咀嚼松散的煙草葉和“浸漬”濕潤的經(jīng)研磨的鼻吸煙草是常見的不產(chǎn)生煙的煙草用法。在本國，很少有人使用“鼻吸”(即將煙草干粉“吸入”鼻通道)。無煙煙草對健康的危險性仍然非常顯著，它并不是吸煙的替代物。國立癌癥研究院已經(jīng)開展了大量的教育活動，對10-12歲使用無煙煙草的吸煙者的增長提出了警告。
由于口咽接觸環(huán)境，如皮膚接觸氧氣和紫外輻射一樣，口腔結(jié)構(gòu)會被吸入的、攝食的或咀嚼的有毒物質(zhì)以及氣體和顆粒破壞，而且會因體內(nèi)過程(如發(fā)炎反應(yīng)和藥物(異生素))而受損。有反應(yīng)性的氧化性物質(zhì)(如吸入的和咀嚼的煙草誘導(dǎo)產(chǎn)生的、臭氧和氮氧化物)是產(chǎn)生自由基并誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的重要因素。
粘膜白斑病是在吸煙者中發(fā)現(xiàn)的由煙草誘導(dǎo)在頰粘膜上產(chǎn)生的白斑，它是一種因直接接觸抽吸的煙草或無煙煙草所引起的局部刺激癥狀，它與吸煙的頻率和年數(shù)直接相關(guān)。雖然粘膜白斑病是一種良性口腔損傷，但它有變成惡性的可能，需要通過損傷活檢來排除癌癥可能。當中斷使用煙草制品后，粘膜白斑病會減退或完全消失?；鶎俞t(yī)師和牙醫(yī)經(jīng)常檢查口腔對于減少吸煙誘導(dǎo)的口齒疾病是非常重要的。
每年診斷新增30,000例口腔癌，其占所有新發(fā)現(xiàn)癌病例的2％至4％?？谇话┟磕暝斐?,000人死亡，每年確診病例中5年存活率僅為半數(shù)。這些患者中大多數(shù)是煙草制品使用者。其他危險的因素包括濫用酒精，營養(yǎng)不良和口腔衛(wèi)生不良。
另外，煙草還造成其他口腔癥狀或口腔、牙齦和牙齒疾病。煙草會造成口臭，造成味蕾麻木，干擾食物的香味和口味。它使牙齒發(fā)黃，造成齲齒。吸煙者的牙石多于非吸煙者。煙草還與牙齦炎、嚴重的牙周病和掉牙有關(guān)。急性壞死性潰瘍性牙齦炎(“戰(zhàn)壕口炎”)是一種破壞性，有痛感的炎癥，主要發(fā)生于吸煙者。
除了粘膜白斑病，另一種在頰粘膜上的彌散性白色代表著口粘膜下纖維變性。該疾病主要發(fā)生于印度，它是一種慢性漸行性惡變前的狀況。其病因是長期咀嚼煙草或檳榔或兩者。纖維變性(瘢痕形成)導(dǎo)致口張開受限制，并牽連上顎、扁桃體竇、頰粘膜及下面的肌肉?？谘拾┮才c該狀況有關(guān)，該疾病的印度的發(fā)病率很高，70％的病例與咀嚼煙草有關(guān)。使用無煙煙草和檳榔在巴基斯坦人、孟加拉國人和爪哇人以及移民到美國和英國的這些國家的人和印度人中也是常見的。
濫用煙草的有害作用是眾所周知的，管理機構(gòu)和公眾經(jīng)常對這些科學(xué)的和流行病學(xué)證據(jù)有所反應(yīng)。由于顯著的發(fā)病率和死亡率，煙草實際上是對全球公眾健康的危害。
受到因攝食無煙煙草而引起的氧化應(yīng)激的細胞會嚴重影響細胞功能，并對細胞膜的脂質(zhì)、蛋白、細胞骨架結(jié)構(gòu)和DNA造成傷害。已經(jīng)測定了自由基對DNA的損害，如形成單鏈斷裂，雙鏈斷裂和染色體畸變。還已經(jīng)證明，經(jīng)受離子輻射和香煙煙霧的細胞具有增加的細胞內(nèi)DNA損傷，因此，吸煙者口咽癌、食管癌和肺癌的發(fā)病率增高。
現(xiàn)已研究了無煙煙草對發(fā)炎以及前列腺素E2和白介素的牙齦下隙水平的影響。將大量的無煙煙草置于頰粘膜上會使這些分子的水平增加，結(jié)果有顯著的發(fā)炎。發(fā)現(xiàn)牙槽粘膜中的反應(yīng)比牙齦中的更嚴重，其程度為紅斑到潰瘍，這證實了無煙煙草對牙周組織有不利影響的結(jié)論。
研究表明，Maras粉末(土耳其使用的一種無煙煙草)影響慣用者中頰粘膜細胞的微核。這提供了無煙煙草具有遺傳毒性作用的證據(jù)及其與口腔癌的關(guān)系。另外，已經(jīng)表明無煙煙草萃取物在利用正常人血清的體外測試中激活了補體系統(tǒng)。研究了松散的咀嚼煙草葉以及干的和濕的鼻煙。研究表明，這三種煙草激活補體途徑，因此提出了這些制品提供了口粘膜中炎癥引發(fā)的推定機理。炎癥反應(yīng)進而產(chǎn)生了無數(shù)的自由基，這些自由基進一步破壞了牙齦組織和口粘膜細胞DNA。更近一段時間，已經(jīng)證實尼古丁對人原代牙周韌帶和牙齦成纖維細胞培養(yǎng)物有細胞毒性。因此，得出結(jié)論，尼古丁無疑是牙周病發(fā)展中的一個危險的因素。有趣的是，在瑞典進行的流行病學(xué)研究有力地暗示食用啤酒和烈性酒為口鼻煙誘生口腔癌提供了非常危險的因素。
普遍存在的非酶促硫醇三肽—谷胱甘肽(GSH)—在維持對反應(yīng)性氧自由基敏感的細胞組分的完整性中起重要作用。這種作用是通過其以還原型(GSH)作為抗氧化劑和作為輔因子的直接作用來實現(xiàn)的。已檢測到支氣管肺泡灌洗液中存在GSH。在細胞中，GSH在此過程中被氧化成GSSG，但抗氧化劑活性的細胞濃度通過谷胱甘肽還原酶消耗NADPH作為還原性等價物的來源來維持。在GSH耗盡狀態(tài)下，包括營養(yǎng)不良和嚴重的氧化應(yīng)激，例如吸煙和/或咀嚼煙草，細胞會受損和死亡。
發(fā)明概述本發(fā)明包括將抗氧化劑防御系統(tǒng)摻入無煙煙草。本發(fā)明利用具有協(xié)同作用的抗氧化劑，在使用無煙煙草時，它們被輸送到使用者的口咽，以預(yù)防和緩解這些制品誘導(dǎo)產(chǎn)生的自由基損傷。最廣義的說，本發(fā)明包含還原型谷胱甘肽和用于再生并與還原型谷胱甘肽協(xié)同作用的輔助成分，后一成分包含硒，較佳的是硒代氨基酸，例如硒代甲硫氨酸或硒代半胱氨酸。作為其它任選成分，組合物可考慮包含抗壞血酸和/或其衍生物之一，含硫氨基酸例如L-半胱氨酸、L-?；撬岷?或L-甲硫氨酸，α-生育酚和維生素A。還可包括其它抗氧化劑來發(fā)揮它們的抗氧化劑性質(zhì)，如工業(yè)上已知的來自綠茶和葡萄籽萃取物的那些。
發(fā)明詳述不局限于任何具體理論，我們發(fā)現(xiàn)，還原型谷胱甘肽通過氧化自身來保護細胞不受氧化應(yīng)激。所以，L-谷胱甘肽必須與其它酶系統(tǒng)組合來發(fā)揮作用，以便被還原而恢復(fù)行使其作為自由基清除者的作用。GSH還與需以硒為輔因子的谷胱甘肽過氧化物酶協(xié)同，發(fā)揮其生物抗氧化劑的功能。已知硒化合物能夠通過谷胱甘肽過氧化物酶的作用與還原型谷胱甘肽一起清除體內(nèi)以氧為中心的自由基。據(jù)信，硒-GSH過氧化物酶在還原型谷胱甘肽存在下催化有毒性的氫過氧化物酶。該反應(yīng)減少谷胱甘肽，生成氧化型谷胱甘肽GSSG。然后，GSSG又被谷胱甘肽還原酶還原成GSH，從而保持了充足的細胞GSH來重新清除自由基。
此外，谷胱甘肽和硒還具有體內(nèi)協(xié)同作用，因為它們都是同一酶系統(tǒng)的成員。GSH起著特異性供體底物的作用，通過飲食或口內(nèi)和局部應(yīng)用的硒制劑提供的硒或硒代氨基酸則提供GSH過氧化物酶的輔基。硒通過酶誘導(dǎo)增強了谷胱甘肽過氧化物酶的水平。谷胱甘肽與硒的抗氧化劑功能內(nèi)在地相互關(guān)聯(lián)，因為，通過保持過氧化物酶發(fā)揮作用，GSH與硒參與氧自由基歧化產(chǎn)物即過氧化氫的去除。廣義的說，GSH與硒調(diào)節(jié)由氫過氧化物引發(fā)或維持的自由基鏈。在本發(fā)明中，利用了硒的抗氧化劑作用，以及其抗致癌和抗誘變特性。
考慮將具有協(xié)同作用抗氧化劑復(fù)合物分散到大量的無煙煙草(如咀嚼煙草和鼻煙)中。抗氧化劑復(fù)合物可以水性乳液形式進行分散，或可包囊在微囊化脂質(zhì)體中，在使用無煙煙草制品時釋放。還可通過將活性組分摻入糖球(glycosphere)和納球(nanosphere)中使之被保護。用于口服和皮膚病用途的這些賦形劑是化妝品及藥物工業(yè)上熟知的。脂質(zhì)體是卵磷脂球，它在本發(fā)明活性組分組合物周圍形成了油保護膜。脂質(zhì)體所包裹的活性成分穿過煙草制品，傳遞到口腔，在此發(fā)揮其預(yù)防與治療雙重功能，中和各種反應(yīng)性氧和其它自由基。此外，抗氧化劑還可以象通常那樣由頰黏膜吸收而全身性使用，以進一步中和煙草制品產(chǎn)生的自由基。
松散的咀嚼煙草葉基本上是空氣熟化過的煙草，它通常用甘草和糖來處理。本發(fā)明的抗氧化劑復(fù)合物可在加工煙草時加入，此時可加入調(diào)味劑。代替可消化的糖，增甜劑宜為多元醇木糖醇，以幫助發(fā)揮口服的優(yōu)點。糖會發(fā)酵，因此引起齲齒，并有助于口腔內(nèi)微生物數(shù)目增加。木糖醇減少口腔內(nèi)變異鏈球菌的數(shù)目。因此，木糖醇有助于減少牙洞，在由推定的侵入細菌引起的牙齦炎和牙周炎中有作用。煙草塊從植物頂部沒有莖干的較重級別的葉子制得。這時將其浸在甘草和糖的混合物中并壓成塊。在生產(chǎn)的這一階段可加入本發(fā)明的抗氧化劑復(fù)合物。糖將被多元醇增甜劑木糖醇替代。然后用外包葉包覆該煙草塊，重新成形，這種塊就可由無煙煙草使用者放在臉頰和齒齦之間。煙草塊通常被咀嚼，從而使抗氧化劑復(fù)合物的治療和預(yù)防效果能清除和中和無煙煙草塊產(chǎn)生的自由基。
煙草股或卷從熟化的白肋煙(細纖維煙草)以及經(jīng)空氣熟化并經(jīng)煙熏的葉子制得。給其加味并搓成繩狀。在煙熏處理并使煙草冷卻易于調(diào)味后，在煙草股或卷中加入本發(fā)明的抗氧化劑。
在美國消費量增加的經(jīng)口鼻煙是從Kentucky和Tennessee的經(jīng)煙熏處理的煙草制得的，該過程需要數(shù)周，多個階段，而且與其它無煙類型不同，該過程經(jīng)歷發(fā)酵。然后將干的鼻煙加工成粉，其中可加入本專利申請的抗氧化劑復(fù)合物以及調(diào)味劑和芳香添加劑(包括香料)。經(jīng)口食用的美國干鼻煙與歐洲的經(jīng)鼻鼻煙非常相似，在后者中也可加入該抗氧化劑復(fù)合物來發(fā)揮其保護性優(yōu)點。
注意到Unger及其同事在1996年12月3日的美國專利5,580,573(納入本文作為參考)中說明了包含充氣脂質(zhì)體的治療性藥物輸送系統(tǒng)，脂質(zhì)體內(nèi)包囊有活性制劑。此前，Chakrabarti及其同事公開了用脂質(zhì)體作為輸送載體的包含脂類和改性肽的制劑。參見1995年1月10日的美國專利5,380,531，該專利納入本文作為參考。Knight及其同事在1991年9月17日的美國專利5,049,388(納入本文作為參考)中公開了包含脂質(zhì)體的小顆粒水性氣霧液滴。該專利權(quán)人指出，將會相互作用的藥物包含在脂質(zhì)體膜內(nèi)，這樣，當后者破裂時，活性組分不會從脂質(zhì)體內(nèi)流失。該發(fā)明人還說明了各種制備含活性顆粒的脂質(zhì)體的方法。相互作用的脂質(zhì)體-藥物組合顆粒被用于小顆粒治療。
本發(fā)明的活性組分如下1. L-谷胱甘肽，量為0.01-2.0％，最佳為0.1-1.0％。
2.硒源，如L-硒代甲硫氨酸或L-硒代半胱氨酸，其濃度為0.001-1.0％，最佳為0.01-0.10％。
任選的組分3. L-半胱氨酸和/或其酯，N-乙酰-L-半胱氨酸，范圍是0.01-3.0％，最佳為0.1-1.0％。
4.抗壞血酸或抗壞血酸棕櫚酸酯或其它抗壞血酸酯形式的維生素C，單獨存在或包囊在諸如脂質(zhì)體等微囊中，0.05-5.0％，較佳的0.1-3.0％，最佳的0.5-1.5％。
5.分散系的粉末形式的維生素E，如乙酸生育酚酯或琥珀酸生育酚酯或其它酯，用量為0.05-5.0％，較佳的為0.1-3.0％，最佳的為0.5-1.5％。維生素E也可以大致相同的劑量用于脂質(zhì)體。
6.維生素A，如β-胡蘿卜素或棕櫚酸視黃酯或其它維生素A穩(wěn)定化的酯，量在0.05-5.0％之間，較佳的為0.1-3.0％，最佳的為0.5-1.5％。維生素A組合物也可通過加入微囊如脂質(zhì)體中來給予。
7.至于其它任選的組分，上述的氨基酸甲硫氨酸和/或?；撬峥梢愿髯砸灾辽偌s0.01-3.0％、較佳的0.05-2.0％、最佳的0.1-1.0％的濃度加入。
在本發(fā)明的最佳實施方案中，相同組分可以水溶液加入煙草(可咀嚼煙草或鼻煙)中，其組成如下1. L-谷胱甘肽，至少0.01-2.0重量％，最佳為0.1-1.0重量％。
2. L-硒代甲硫氨酸，至少0.001-1.0％，最佳為0.01-0.10％。
3. L-半胱氨酸和/或其酯，N-乙酰-L-半胱氨酸，至少為0.01-3.0％，最佳為0.1-1.0％。
4.抗壞血酸或其酯，0.05-5.0％，較佳的為0.1-3.0％，最佳為0.5-1.5％。
5.維生素E或其酯之一，0.05-5.0％，較佳的為0.1-3.0％，最佳為0.5-1.5％。
6.維生素A或其酯之一，0.05-5.0％，較佳的為0.1-3.0％，最佳為0.5-1.5％。
7.氨基酸，?；撬岷?或甲硫氨酸，0.01-3.0％，較佳的為0.05-2.0％，最佳為0.1-1.0％。
在本發(fā)明的一個實施方案中，可將任選的組分，尤其是外源抗氧化劑加入?yún)f(xié)同性復(fù)合物中，例如日本綠茶(兒茶酸類)約0.5％proauthouganidins 約0.2％輔酶Q 約1.0％N-乙酰-L-肉毒堿 約0.5％在鼻煙中，可將活性組分，即本專利申請的抗氧化劑，以干粉形式(或作為抗氧化劑混合物，或作為在保護性脂質(zhì)體、納球或其它可接受的輸送載體中的復(fù)合物)加入。該粉末可在生產(chǎn)咀嚼煙草和鼻煙的最后過程中加入，也可含有本行業(yè)中常用的合適的調(diào)味劑或芳香劑。
權(quán)利要求
1.一種組合物，用于摻入大量的諸如咀嚼煙草或鼻煙的無煙煙草中以減少自由基誘導(dǎo)的對使用者口咽腔的損傷，所述組合物包含L-谷胱甘肽和硒源。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述硒源選自硒代氨基酸、硒代甲硫氨酸和硒代半胱氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物還包含維生素C，其形式選自棕櫚酸抗壞血酸酯和抗壞血酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物還包含選自L-半胱氨酸和N-乙酰-L-半胱氨酸的一個成員。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物還包含維生素E，其形式選自乙酸生育酚酯和琥珀酸生育酚酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物還包含維生素A。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物還包含選自甲硫氨酸和?；撬岬陌被?。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述無煙煙草是咀嚼煙草。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述無煙煙草是鼻煙。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，該組合物還包含增甜劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述增甜劑是木糖醇。
全文摘要
一種用于加入大量無煙煙草中的組合物。該抗氧化劑組合物能減少由食用無煙煙草產(chǎn)生的自由基對使用者口咽腔的損傷。該組合物包括L－谷胱甘肽和硒源。
文檔編號A24D1/00GK1338902SQ99814275
公開日2002年3月6日 申請日期1999年10月29日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月3日
發(fā)明者T·赫什, R·赫什 申請人:提翁國際股份有限公司