專利名稱：：胸腺五肽衍生物及其制備方法以及該衍生物及其含該衍生物的組合物在制備藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及胸腺五肽衍生物，包括其化學(xué)合成方法，以及醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
：胸腺(thymus)為機(jī)體的重要淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)。胸腺分泌胸腺激素增強(qiáng)人的免疫功能。人體血液中胸腺素濃度越高，免疫功能越強(qiáng)，對(duì)機(jī)體防癌、抗感染及延緩衰老有著重要的作用。胸腺生成素II是從胸腺激素中分離出來(lái)的單一多肽化合物，胸腺五肽(Thymopoietin,TP-5)是胸腺生成素II的32-36氨基酸片段，是其活性部位，其功能與胸腺生成素相同，由精氨酸、賴氨酸、天門(mén)冬氨酸、纈氨酸、酪氨酸五種氨基酸組成，其氨基酸序列為Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>胸腺五肽具有免疫調(diào)節(jié)作用。胸腺五肽可以誘導(dǎo)T細(xì)胞分化，選擇性地誘導(dǎo)Thy-l-的前胸腺細(xì)胞轉(zhuǎn)化為T(mén)hy-l+的T細(xì)胞。其T細(xì)胞分化作用由胞內(nèi)AMP水平升高介導(dǎo)。胸腺五肽與成熟外周血T細(xì)胞的特異受體結(jié)合，使胞內(nèi)CAMP水平上升，從而誘發(fā)一系列胞內(nèi)反應(yīng)，這也是它免疫調(diào)節(jié)功能的基礎(chǔ)。在正常機(jī)體狀態(tài)下胸腺五肽顯現(xiàn)免疫剌激作用，能顯著增高脾淋巴細(xì)胞的E玫瑰花結(jié)形成率及轉(zhuǎn)化率，對(duì)免疫應(yīng)答的初次或再次反應(yīng)的不同階段都有增強(qiáng)作用，能增多IgM類型和IgG或IgA類型的抗體形成細(xì)胞。胸腺五肽還可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白細(xì)胞的酶和吞噬功能，升高循環(huán)抗體含量，增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD4和CD8陽(yáng)性細(xì)胞，使專一的Tc細(xì)胞壽命維持更長(zhǎng)時(shí)間，同時(shí)也可活化Th細(xì)胞，誘導(dǎo)Ts細(xì)胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治療作用與它增進(jìn)TC細(xì)胞活性相關(guān)。在抗感染免疫中適量胸腺五肽可明顯增加干擾素的產(chǎn)生。誘導(dǎo)和促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟；調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群比例使CD4/CD8趨于正常；增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能；增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能；提高自然殺傷細(xì)胞的活力；提高白介素-2的產(chǎn)生水平與受體表達(dá)水平；增強(qiáng)外周血單核細(xì)胞Y干擾素的產(chǎn)生；增強(qiáng)血清中SOD活性。并且，在免疫平衡受損的動(dòng)物模型中，胸腺五肽具有使之平衡的特點(diǎn)。無(wú)論是免疫反應(yīng)過(guò)高或過(guò)低，胸腺五肽均能實(shí)現(xiàn)平衡調(diào)節(jié)，使它在免疫平衡失調(diào)相關(guān)的人類疾病治療中很有前途。并且在迄今為止的實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)研究、臨床藥理學(xué)研究以及臨床應(yīng)用均未發(fā)現(xiàn)胸腺五肽有任何毒副作用。胸腺五肽作為免疫功能雙向調(diào)節(jié)藥物，由于其顯著的臨床相關(guān)免疫調(diào)節(jié)活性，應(yīng)用廣泛。于1985年以Timunox的商品名在意大利上市。應(yīng)用于惡性腫瘤病人經(jīng)放化療免疫功能損傷者、乙型肝炎的治療、大外科手術(shù)及嚴(yán)重感染、自身免疫性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，紅斑狼瘡等)、II型糖尿病、更年期綜合征、年老體衰免疫功能低下者等等。目前，美國(guó)數(shù)家藥廠仍在研究開(kāi)發(fā)相關(guān)藥物。在胸腺五肽應(yīng)用中，由于胸腺五肽為氨基酸組合肽類，口服給藥時(shí)被胃酶降解，多采用靜脈給藥胃腸外給藥的方式。胸腺五肽進(jìn)入人體血槳后，很快被蛋白酶和氨肽酶降為氨基酸，半衰期為30秒。達(dá)到治療目的，常大量及長(zhǎng)期給藥。因此研究一種胸腺五肽衍生物，延長(zhǎng)其在體內(nèi)作用時(shí)間，增加病人耐受程度提高用藥方便度，有著較好的應(yīng)用前景。中國(guó)專利200510081540.8、200510082777.8、200510075584.X通過(guò)乳化分散、溶劑揮發(fā)、噴霧干燥、低溫噴霧干燥方法制備胸腺五肽緩釋微球制劑。將生物可降解藥用高分子材料先溶解于二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯等溶劑中，將溶有胸腺五肽的水相溶液加入有機(jī)相內(nèi)，使之乳化，加入乳化穩(wěn)定劑，通過(guò)多步驟得到胸腺五肽緩釋微球。中國(guó)專利200710043570.9用生物可降解的聚丙交酯與丙交酯-乙交酯等共聚物與胸腺五肽制作成長(zhǎng)效植入劑，植入人體，達(dá)到長(zhǎng)效作用。中國(guó)專利200310U7356.5采用聚乙二醇與胸腺五肽交聯(lián)得到聚乙二醇化衍生物?，F(xiàn)有研究表明，經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾后藥物的性質(zhì)可以發(fā)生較大改變。蛋白類藥物經(jīng)交聯(lián)劑修飾后能保持較好的生物活性，并能顯著延長(zhǎng)生物體內(nèi)的半衰期。肽類藥物與蛋白類藥物在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有許多相似之處，肽類經(jīng)交聯(lián)劑修飾同樣可以達(dá)顯著延長(zhǎng)生物體內(nèi)的半衰期，達(dá)到長(zhǎng)效制劑的效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供胸腺五肽的衍生物。一種胸腺五肽衍生物，該衍生物的結(jié)構(gòu)為在胸腺五肽的N-端氨基、側(cè)鏈的氨基偶聯(lián)有能夠交聯(lián)氨基和巰基的交聯(lián)劑，形成通式為RrR廠TP-5O腺五肽的衍生物，其中仏為-&，R2至少為下述25種結(jié)構(gòu)式之-QQ-(CH2)2——N:-(CH2)5—N:-(CH2)io—N_(CH2)3——N:CH2——N.(CH2)2—N—(CH2)5——N1(CH2)/Oo、人,?！禖H3HO-CAS/^CH3OH2H-Br-(CH2)Io匿N(xiāo)HH2.C—N(CH2)!H'N、'C—NH2CH3N-《《CH2)5—N、—(CH2)3一N0，-(CH2)io一N,0，10本發(fā)明還提供了一種胸腺五肽衍生物的制備方法，主要是以能夠交聯(lián)氨基和巰基的交聯(lián)劑R-RrR2與氨基酸序列為Arg-Lys-Asp-Val-Tyr的胸腺五肽TP-5在溶劑中反應(yīng)，使交聯(lián)劑偶聯(lián)在胸腺五肽的N端氨基、側(cè)鏈的氨基上，形成胸腺五肽衍生物，其反應(yīng)式為R-R廣R2+TP-5—R2-R「TP-5。所述的交聯(lián)劑按式中R的不同，可分為以下三類，其結(jié)構(gòu)如表l所示表l交聯(lián)劑的結(jié)構(gòu)交聯(lián)劑RRiR2第一類不含琥珀酰亞胺的交聯(lián)劑o1BMPAHO-II-C2EMCAHO--(CH2)2—N-(CH2)5——N第二類含有未取代琥珀酰亞胺的交聯(lián)劑4GMBSN—O-o-(CH2)3—N3KMUAHO--(CH2)io——N、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>13SBAP14SIA15SIABN—O-OON一O一O0N—O一O-c-16SMCCN—O一17SMPB18SMPH19SMPT20SPDPN—O-00N一O-00N—O-OON—O—O一c-第三類含有磺酸鈉取代琥珀酰亞胺的交聯(lián)劑>一iiii>一o=co^=co=co^=co^=co^=c13<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>本發(fā)明所使用GMBS等交聯(lián)劑，與胸腺五肽的N-端氨基或側(cè)鏈氨基縮合，進(jìn)入人體后，與人血漿蛋白巰基結(jié)合，延長(zhǎng)藥物在生物體內(nèi)的半衰期，達(dá)到長(zhǎng)效作用，有著極大的研究意義。本發(fā)明的另一目的是公開(kāi)胸腺五肽衍生物、或含該衍生物及藥物輔料的組合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物包括治療18歲以上的慢性乙型肝炎患者的藥物，治療各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷病的藥物，治療某些自身免疫性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等)的藥物，治療各種細(xì)胞免疫功能低下的疾病藥物以及用于腫瘤的輔助治療的藥物。本發(fā)明的這種胸腺五肽衍生物，通過(guò)用交聯(lián)劑進(jìn)行修飾，能保持較好的生物活性，并能顯著延長(zhǎng)生物體內(nèi)的半衰期。具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。第一類不含琥珀酰亞胺交聯(lián)劑的胸腺五肽衍生物實(shí)施例lBMPA-胸腺五肽的合成稱取胸腺五肽，用Na2HPCVNaH2P04形成的pH為10.0的溶液溶解胸腺五肽，制成10mg/ml溶液。BMPA在二氯甲垸溶液中，滴加氯化亞砜酰氯化，減壓抽干，并用DMF溶解成10mg/ml溶液，分裝后-2(TC保存。以胸腺五肽:BMPA:3:1質(zhì)量或體積冰浴混合，升溫至室溫后反應(yīng)30分鐘。混合物用含10%(v/v)乙腈和0.1%(v/v)三氟乙酸的混合水溶液稀釋3倍，用l%(v/v)三氟乙酸調(diào)pH至2.03.0，溶液上柱純化。固定相為C18，流動(dòng)相為A:0.1%(v/v)三氟乙酸、10%(v/v)乙腈，B:0.1%(v/v)三氟乙酸、70%(v/v)乙腈，按15-20倍柱體積從A—B100%的不同梯度比混合液，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，收集BMPA-胸腺五肽峰出峰物，凍干后得原料藥。實(shí)施例2-3胸腺五肽衍生物的合成表1中交聯(lián)劑序號(hào)為2-3與胸腺五肽偶聯(lián)形成衍生物的合成方法同實(shí)施例1。實(shí)施例4BMPA-胸腺五肽組合物及其制備方法BMPA-胸腺五肽1.22g(相當(dāng)于胸腺五肽1.Og)甘露醇50.Og注射用水1000ml按處方比例將BMPA-胸腺五肽、甘露醇加入到注射用水800ml中，攪拌溶解，溶解完全后補(bǔ)加注射用水至1000ml，以0.22ym微孔濾膜過(guò)濾除菌，分裝成1000支，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用函PA-胸腺五肽成品。實(shí)施例5BMPA-胸腺五肽的安全性評(píng)價(jià)1、過(guò)敏性評(píng)價(jià)受試藥物注射用BMPA-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。陽(yáng)性對(duì)照品卵白蛋白，由聯(lián)星生物有限公司提供，Sigma公司進(jìn)口分裝。以生理鹽水配制成0.4%(w/w)濃度供試驗(yàn)用。動(dòng)物白色豚鼠，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK灘)20080001。購(gòu)進(jìn)后預(yù)詞養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重280-300g。飼養(yǎng)條件用金屬鼠籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225"C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807001。試驗(yàn)方法取健康豚鼠Hartley種雄性豚鼠18只，按體重隨機(jī)分為三組(每組6只)，分別為注射用BMPA-胸腺五肽組、卵白蛋白陽(yáng)性組及氯化鈉注射液陰性對(duì)照組。各組動(dòng)物按無(wú)菌操作隔日分別腹腔給予注射用BMPA-胸腺五肽溶液(0.5mg/ml)、0.4%卵白蛋白和氯化鈉注射液，0.5ml/只，共三次致敏。將各組動(dòng)物分為2批，每批3只，一批于首次注射受試藥后14天靜脈注射受試藥品lml/只攻擊，另一批于首次給藥后第21天靜脈注射受試品lml/只攻擊。試驗(yàn)結(jié)果注射用注射用BMPA-胸腺五肽及氯化鈉注射液陰性對(duì)照組動(dòng)物兩次攻擊后，未見(jiàn)明顯異常癥狀，試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。而陽(yáng)性對(duì)照組可使受試動(dòng)物出現(xiàn)抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克死亡等表現(xiàn)。2、溶血性評(píng)價(jià)受試藥物注射用BMPA-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。動(dòng)物及飼料新西蘭兔，雌雄兼用，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080002。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3-2.6kg。飼養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225'C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807003。儀器LXJ-II型離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)；HH-W21-600型恒溫水浴鍋，上海醫(yī)用設(shè)備常生產(chǎn)。試驗(yàn)方法取試管7支，分別加入不等量的注射用BMPA-胸腺五肽(0.5mg/ml)0.1、0.2、0.3、0.4和0.5ml，第6管不加受試品，作為空白對(duì)照，第7管也不加受試品，用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血陽(yáng)性對(duì)照。將各管輕輕搖勻，在37。C水浴中保溫4小時(shí)，觀察各管有無(wú)溶血現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性對(duì)照管(7號(hào)管)加入蒸餾水后即刻出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。加入注射用BMPA-胸腺五肽溶液后，0.25l小時(shí)，16管紅細(xì)胞開(kāi)始下沉，上層液體無(wú)色澄明；2小時(shí)，16管上清液無(wú)色澄明，大量紅細(xì)胞沉于管底；4小時(shí)，16管溶液紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明。經(jīng)振搖后可見(jiàn)紅細(xì)胞均勻散開(kāi)，證明無(wú)紅細(xì)胞凝聚，顯微鏡檢紅細(xì)胞外形正常。3、血管刺激性評(píng)價(jià)受試藥物注射用BMPA-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。動(dòng)物及飼料新西蘭兔，雌雄兼用，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXKC湘)20080002。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3-2.6kg。詞養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠詞養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225。C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)詞字200807003。試驗(yàn)方法取健康、耳緣無(wú)損傷家兔6只，按體重隨機(jī)分為兩組，即注射用BMPA-胸腺五肽溶液試驗(yàn)組和氯化鈉注射液對(duì)照組。本品臨床成人一日靜脈注射劑量為0.05mg/kg。按成人(60kg)臨床用量40mg/day計(jì)算，本試驗(yàn)設(shè)注射用注射用BMPA-胸腺五肽溶液劑量為0.667mg/kg/day，取凍干粉劑配制成濃度為0.075mg/ml，家兔左側(cè)耳緣靜脈推注給藥，給藥體積4ml/kg，對(duì)照組給予等容積氯化鈉注射液。每日給藥一次，共七天。試驗(yàn)結(jié)果與氯化鈉注射液組相比，靜脈滴注給予注射用BMPA-胸腺五肽溶液，給藥期間及末次給藥48小時(shí)后，兔耳血管紋路均清晰，周?chē)M織無(wú)水腫。組織切片檢查可見(jiàn)兔耳靜脈血管規(guī)則，管壁薄，內(nèi)壁平滑，腔內(nèi)充滿血液，管周無(wú)炎性滲出物。表明本實(shí)驗(yàn)條件下注射用BMPA-胸腺五肽溶液對(duì)家兔耳緣靜脈無(wú)明顯剌激作用。實(shí)施例6BMPA-胸腺五肽的活性評(píng)價(jià)注射用胸腺五肽和注射用BMPA-胸腺五肽對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)的作用。實(shí)驗(yàn)方法取昆明小鼠30只雌雄不限，體重在18-20g左右。隨機(jī)分為3組，分別為空白組、注射用胸腺五肽組和注射用BMPA-胸腺五肽組。注射用胸腺五肽組每天腹腔給2微克/10g的胸腺五肽，連續(xù)給藥6天。注射用BMPA-胸腺五肽組實(shí)驗(yàn)的第1、4天腹腔注射2微克/10g的注射用BMPA-胸腺五肽?？瞻捉M每天腹腔注射等體積的生理鹽水。末次給藥半小時(shí)后尾靜脈采血，涂片用Giemsa-weigh液染色，鏡檢外周血T淋巴細(xì)胞被激活的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算轉(zhuǎn)化率。末次給要l小時(shí)后心臟采血加肝素抗凝，力卩3%(w/w)的明膠等體積，37度水浴30分鐘。吸取全部的上清液，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。取上清加Hanks液2ml沖洗離心，棄上清，反復(fù)沖洗4次。沉淀均為淋巴細(xì)胞懸液，取0.5ml的淋巴細(xì)胞懸液加l。/。的綿羊紅細(xì)胞懸液lml，加小牛血清O.lml，置37度水浴15分鐘。500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，置4度冰箱2小時(shí)，棄部分上清液將細(xì)胞沉淀輕輕搖勻，力Q0.8。/。(v/v)的戊二醛溶液0.1ml，混勻后4度冰箱固定15分鐘。將洗凈的載玻片用Hanks液沾濕，滴一小滴細(xì)胞懸液讓其自然散開(kāi)，自然干燥后滴加甲醇固定5分鐘，用Giemsa-weigh液染色，水洗，干燥，鏡檢。凡是吸附3個(gè)或3個(gè)以上紅細(xì)胞的淋巴細(xì)胞判定為一個(gè)E-玫瑰花環(huán)，每一標(biāo)本檢查200個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算E-玫瑰環(huán)的形成率。頸椎處死小鼠，無(wú)菌取出小鼠的胸腺和脾臟，計(jì)算小鼠的胸腺指數(shù)。表2:實(shí)驗(yàn)結(jié)果外周T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率E-玫瑰花環(huán)形成率胸腺指數(shù)(%)(%)空白組4.89±0.1214.5±0.218.9±0.219注身寸用BMPA-胸I;5五月太9.41±0.2327.5±0.327.7±0.5注射用胸腺五肽8.57±0.1823.4±0.120.2±0.2結(jié)果評(píng)價(jià)所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS10.0統(tǒng)計(jì)。結(jié)果顯示:由表2可以看出注射用BMPA-胸腺五肽和注射用胸腺五肽的胸腺指數(shù)，外周T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和E-玫瑰花環(huán)形成率和空白組比較均有顯著性差異(P<0.05)。說(shuō)明注射用BMPA-胸腺五肽和注射用胸腺五肽均能夠提高小鼠的細(xì)胞免疫功能。注射用BMPA-胸腺五肽在體內(nèi)能夠起到長(zhǎng)效的效果。第二類含有未取代琥珀酰亞胺交聯(lián)劑的胸腺五肽衍生物實(shí)施例7GMBS-胸腺五肽的合成稱取胸腺五肽，用Na2HP(VNaH2P04(pH10.0)溶解胸腺五肽，制成10mg/ml溶液。GMBS用DMF溶解成10mg/ml溶液，分裝后-2(TC保存。以胸腺五肽:GMBS:3:1質(zhì)量或體積冰浴混合，升溫至室溫后反應(yīng)30分鐘?；旌衔镉?0%(v/v)乙腈和0.1%(v/v)三氟乙酸的混合水溶液稀釋3倍，用1%(v/v)三氟乙酸調(diào)pH至2.03.0，溶液上柱純化。固定相為C18，流動(dòng)相為A:0.1%(v/v)三氟乙酸、10%(v/v)乙腈，B:0.1%(v/v)三氟乙酸、70%(v/v)乙腈，按15-20倍柱體積從A—B100%的不同遞度比混合液，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，收集GMBS-胸腺五肽峰出峰物，凍干后得原料藥。實(shí)施例8-24胸腺五肽衍生物的合成表1中序號(hào)為4-20的交聯(lián)劑與胸腺五肽偶聯(lián)的衍生物合成方法同實(shí)施例7。實(shí)施例25GMBS-胸腺五肽組合物及其制備方法GMBS-胸腺五肽1.24g(相當(dāng)于胸腺五肽1.0g)甘露醇50.0g注射用水1000ml按處方比例將GMBS-胸腺五肽、甘露醇加入到注射用水800ml中，攪拌溶解，溶解完全后補(bǔ)加注射用水至1000ml，以0.22ym微孔濾膜過(guò)濾除菌，分裝成1000支，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用GMBS-胸腺五肽成品。實(shí)施例26GMBS-胸腺五肽的安全性評(píng)價(jià)1、過(guò)敏性評(píng)價(jià)受試藥物注射用GMBS-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。陽(yáng)性對(duì)照品卵白蛋白，由聯(lián)星生物有限公司提供，Sigma公司進(jìn)口分裝。以生理鹽水配制成0.4%(w/w)濃度供試驗(yàn)用。動(dòng)物白色豚鼠，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080001。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重280-300g。飼養(yǎng)條件用金屬鼠籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒伺料，室溫2225'C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807001。試驗(yàn)方法取健康豚鼠Hartley種雄性豚鼠18只，按體重隨機(jī)分為三組(每組6只)，分別為注射用GMBS-胸腺五肽組、卵白蛋白陽(yáng)性組及氯化鈉注射液陰性對(duì)照組。各組動(dòng)物按無(wú)菌操作隔日分別腹腔給予注射用GMBS-胸腺五肽溶液(0.5mg/ml)、0.4%卵白蛋白和氯化鈉注射液，0.5ml/只，共三次致敏。將各組動(dòng)物分為2批，每批3只，一批于首次注射受試藥后14天靜脈注射受試藥品lml/只攻擊，另一批于首次給藥后第21天靜脈注射受試品lml/只攻擊。試驗(yàn)結(jié)果注射用注射用GMBS-胸腺五肽及氯化鈉注射液陰性對(duì)照組動(dòng)物兩次攻擊后，未見(jiàn)明顯異常癥狀，試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。而陽(yáng)性對(duì)照組可使受試動(dòng)物出現(xiàn)抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克死亡等表現(xiàn)。2、溶血性評(píng)價(jià)受試藥物注射用GMBS-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。動(dòng)物及飼料新西蘭兔，雌雄兼用，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080002。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3-2.6kg。詞養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225'C，濕度60%左右。顆粒伺料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807003。儀器LXJ-II型離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)；HH-W21-600型恒溫水浴鍋，上海醫(yī)用設(shè)備常生產(chǎn)。試驗(yàn)方法取試管7支，分別加入不等量的注射用GMBS-胸腺五肽(0.5mg/ml)0.1、0.2、0.3、0.4和0.5ml，第6管不加受試品，作為空白對(duì)照，第7管也不加受試品，用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血陽(yáng)性對(duì)照。將各管輕輕搖勻，在37。C水浴中保溫4小時(shí)，觀察各管有無(wú)溶血現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性對(duì)照管(7號(hào)管)加入蒸餾水后即刻出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。加入注射用GMBS-胸腺五肽溶液后，0.25l小時(shí)，16管紅細(xì)胞開(kāi)始下沉，上層液體無(wú)色澄明；2小時(shí)，16管上清液無(wú)色澄明，大量紅細(xì)胞沉于管底；4小時(shí)，16管溶液紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明。經(jīng)振搖后可見(jiàn)紅細(xì)胞均勻散開(kāi)，證明無(wú)紅細(xì)胞凝聚，顯微鏡檢紅細(xì)胞外形正常。3、血管剌激性評(píng)價(jià)受試藥物注射用GMBS-胸腺五肽，規(guī)格LOmg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。動(dòng)物及飼料新西蘭兔，雌雄兼用，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080002。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3-2.6kg。詞養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225。C，濕度60。/^左右。顆粒詞料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807003。試驗(yàn)方法取健康、耳緣無(wú)損傷家兔6只，按體重隨機(jī)分為兩組，即注射用GMBS-胸腺五肽溶液試驗(yàn)組和氯化鈉注射液對(duì)照組。本品臨床成人一日靜脈注射劑量為0.05mg/kg。按成人(60kg)臨床用量40mg/day計(jì)算，本試驗(yàn)設(shè)注射用注射用GMBS-胸腺五肽溶液劑量為0.667mg/kg/day，取凍干粉劑配制成濃度為0.075mg/ml，家兔左側(cè)耳緣靜脈推注給藥，給藥體積4ml/kg，對(duì)照組給予等容積氯化鈉注射液。每日給藥一次，共七天。試驗(yàn)結(jié)果與氯化鈉注射液組相比，靜脈滴注給予注射用GMBS-胸腺五肽溶液，給藥期間及末次給藥48小時(shí)后，兔耳血管紋路均清晰，周?chē)M織無(wú)水腫。組織切片檢査可見(jiàn)兔耳靜脈血管規(guī)則，管壁薄，內(nèi)壁平滑，腔內(nèi)充滿血液，管周無(wú)炎性滲出物。表明本實(shí)驗(yàn)條件下注射用GMBS-胸腺五肽溶液對(duì)家兔耳緣靜脈無(wú)明顯刺激作用。實(shí)施例27GMBS-胸腺五肽的活性評(píng)價(jià)注射用胸腺五肽和注射用GMBS-胸腺五肽對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)的作用。實(shí)驗(yàn)方法取昆明小鼠30只雌雄不限，體重在18-20g左右。隨機(jī)分為3組，分別為空白組、注射用胸腺五肽組和注射用GMBS-胸腺五肽組。注射用胸腺五肽組每天腹腔給2微克/10g的胸腺五肽，連續(xù)給藥6天。注射用GMBS-胸腺五肽組實(shí)驗(yàn)的第1、4天腹腔注射2微克/10g的注射用GMBS-胸腺五肽?？瞻捉M每天腹腔注射等體積的生理鹽水。末次給藥半小時(shí)后尾靜脈采血，涂片用Giemsa-wdgh液染色，鏡檢外周血T淋巴細(xì)胞被激活的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算轉(zhuǎn)化率。末次給要l小時(shí)后心臟采血加肝素抗凝，力[]3%(w/w)的明膠等體積，37度水浴30分鐘。吸取全部的上清液，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。取上清加Hanks液2ml沖洗離心，棄上清，反復(fù)沖洗4次。沉淀均為淋巴細(xì)胞懸液，取0.5ml的淋巴細(xì)胞懸液加l。/。(Wv)的綿羊紅細(xì)胞懸液lml，加小牛血清O.lml，置37度水浴15分鐘。500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，置4度冰箱2小時(shí)，棄部分上清液將細(xì)胞沉淀輕輕搖勻，力叫.8%(v/v)的戊二醛溶液O.lml，混勻后4度冰箱固定15分鐘。將洗凈的載玻片用Hanks液沾濕，滴一小滴細(xì)胞懸液讓其自然散開(kāi)，自然干燥后滴加甲醇固定5分鐘，用Giemsa-weigh液染色，水洗，干燥，鏡檢。凡是吸附3個(gè)或3個(gè)以上紅細(xì)胞的淋巴細(xì)胞判定為一個(gè)E-玫瑰花環(huán)，每一標(biāo)本檢查200個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算E-玫瑰環(huán)的形成率。頸椎處死小鼠，無(wú)菌取出小鼠的胸腺和脾臟，計(jì)算小鼠的胸腺指數(shù)。表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果外周T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率E-玫瑰花環(huán)形成率胸腺指數(shù)(%)(%)空白組4.96±0.1414.7±0.219.1±0.3注射用GMBS-胸腺9.42±0.2127.3±0.427.8±0.6五肽注身寸用月匈腺五月太8.59±0.1923.1±0.120.1±0.4結(jié)果評(píng)價(jià)所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS10.0統(tǒng)計(jì)。結(jié)果顯示:表3所示注射用GMBS-胸腺五肽和注射用胸腺五肽的胸腺指數(shù)，外周T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和E-玫瑰花環(huán)形成率和空白組比較均有顯著性差異(P<0.05)。說(shuō)明注射用GMBS-胸腺五肽和注射用胸腺五肽均能夠提高小鼠的細(xì)胞免疫功能。注射用GMBS-胸腺五肽在體內(nèi)能夠起到長(zhǎng)效的效果。第三類含有磺酸鈉取代的琥珀酰亞胺交聯(lián)劑的胸腺五肽衍生物實(shí)施例28Sulfo-EMCS-胸腺五肽的合成稱取胸腺五肽，用Na2HP(VNaH2P04(pH10.0)溶解胸腺五肽，制成10mg/ml溶液。Sulfo-EMCS用水溶解成10mg/ml溶液，分裝后-2(TC保存。以胸腺五肽Sulfo-EMCS=3:1質(zhì)量或體積冰浴混合，升溫至室溫后反應(yīng)30分鐘?；旌衔镉?0%(v/v)乙腈和0.1%(v/v)三氟乙酸的混合水溶液稀釋3倍，用l^三氟乙酸調(diào)pH至2.03.0，溶液上柱純化。固定相為C18，流動(dòng)相為A:0.1%(v/v)三氟乙酸、10%(v/v)乙腈，B:0.1%(v/v)三氟乙酸、70%(v/v)乙腈，按15-20倍柱體積從A—B100%的不同遞度25比混合液，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，收集Sulfo-EMCS-胸腺五肽峰出峰物，凍干后得原料藥。實(shí)施例29-33胸腺五肽衍生物的合成表l中21-25號(hào)交聯(lián)劑與胸腺五肽偶聯(lián)形成衍生物合成方法同實(shí)施例28。實(shí)施例34Sulfo-EMCS-胸腺五肽組合物及其制備方法Sulfo-EMCS-胸腺五肽1.28g(相當(dāng)于胸腺五肽1.0g)甘露醇50.0g注射用水1000ml按處方比例將BMPA-胸腺五肽、甘露醇加入到注射用水800ml中，攪拌溶解，溶解完全后補(bǔ)加注射用水至1000ml，以0.22pm微孔濾膜過(guò)濾除菌，分裝成1000支，預(yù)凍與干燥，軋蓋，得注射用麗PA-胸腺五肽成品。實(shí)施例35Sulfo-EMCS-胸腺五肽的安全性評(píng)價(jià)1、過(guò)敏性評(píng)價(jià)受試藥物注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。陽(yáng)性對(duì)照品卵白蛋白，由聯(lián)星生物有限公司提供，Sigma公司進(jìn)口分裝。以生理鹽水配制成0.4%(w/w)濃度供試驗(yàn)用。動(dòng)物白色豚鼠，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080001。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重280-300g。詞養(yǎng)條件用金屬鼠籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225。C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807001。試驗(yàn)方法取健康豚鼠Hartley種雄性豚鼠18只，按體重隨機(jī)分為三組(每組6只)，分別為注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽組、卵白蛋白陽(yáng)性組及氯化鈉注射液陰性對(duì)照組。各組動(dòng)物按無(wú)菌操作隔日分別腹腔給予注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽溶液(0.5mg/ml)、0.4。％卵白蛋白和氯化鈉注射液，0.5ml/只，共三次致敏。將各組動(dòng)物分為2批，每批3只，一批于首次注射受試藥后14天靜脈注射受試藥品lml/只攻擊，另一批于首次給藥后第21天靜脈注射受試品1ml/只攻擊。試驗(yàn)結(jié)果注射用注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽及氯化鈉注射液陰性對(duì)照組動(dòng)物兩次攻擊后，未見(jiàn)明顯異常癥狀，試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。而陽(yáng)性對(duì)照組可使受試動(dòng)物出現(xiàn)抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙攣、休克死亡等表現(xiàn)。2、溶血性評(píng)價(jià)受試藥物注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。動(dòng)物及詞料新西蘭兔，雌雄兼用，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080002。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3-2.6kg。飼養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠詞養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225"C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807003。儀器LXJ-II型離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)用分析儀器廠生產(chǎn)；HH-W21-600型恒溫水浴鍋，上海醫(yī)用設(shè)備常生產(chǎn)。試驗(yàn)方法取試管7支，分別加入不等量的注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽(0.5mg/ml)0.1、0.2、0.3、0.4和0.5ml，第6管不加受試品，作為空白對(duì)照，第7管也不加受試品，用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血陽(yáng)性對(duì)照。將各管輕輕搖勻，在37。C水浴中保溫4小時(shí)，觀察各管有無(wú)溶血現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性對(duì)照管(7號(hào)管)加入蒸餾水后即刻出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。加入注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽溶液后，0.25l小時(shí)，16管紅細(xì)胞開(kāi)始下沉，上層液體無(wú)色澄明；2小時(shí)，16管上清液無(wú)色澄明，大量紅細(xì)胞沉于管底；4小時(shí)，16管溶液紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無(wú)色澄明。經(jīng)振搖后可見(jiàn)紅細(xì)胞均勻散開(kāi)，證明無(wú)紅細(xì)胞凝聚，顯微鏡檢紅細(xì)胞外形正常。3、血管刺激性評(píng)價(jià)受試藥物注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽，規(guī)格l.Omg/支，加氯化鈉注射液配成0.5mg/ml。氯化鈉注射液，250ml/瓶，批號(hào)0709261，海南東聯(lián)長(zhǎng)富制藥有限公司。動(dòng)物及詞料新西蘭兔，雌雄兼用，由長(zhǎng)沙東創(chuàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，許可證號(hào)SCXK(湘)20080002。購(gòu)進(jìn)后預(yù)飼養(yǎng)兩周，用于試驗(yàn)時(shí)體重2.3-2.6kg。飼養(yǎng)條件用金屬兔籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水，給予顆粒飼料，室溫2225'C，濕度60%左右。顆粒飼料由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)粵動(dòng)飼字200807003。試驗(yàn)方法取健康、耳緣無(wú)損傷家兔6只，按體重隨機(jī)分為兩組，即注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽溶液試驗(yàn)組和氯化鈉注射液對(duì)照組。本品臨床成人一日靜脈注射劑量為0.05mg/kg。按成人(60kg)臨床用量40mg/day計(jì)算，本試驗(yàn)設(shè)注射用注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽溶液劑量為0.667mg/kg/day，取凍干粉劑配制成濃度為0.075mg/ml，家兔左側(cè)耳緣靜脈推注給藥，給藥體積4ml/kg，對(duì)照組給予等容積氯化鈉注射液。每曰給藥一次，共七天。試驗(yàn)結(jié)果與氯化鈉注射液組相比，靜脈滴注給予注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽溶液，給藥期間及末次給藥48小時(shí)后，兔耳血管紋路均清晰，周?chē)M織無(wú)水腫。組織切片檢査可見(jiàn)兔耳靜脈血管規(guī)則，管壁薄，內(nèi)壁平滑，腔內(nèi)充滿血液，管周無(wú)炎性滲出物。表明本實(shí)驗(yàn)條件下注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽溶液對(duì)家兔耳緣靜脈無(wú)明顯刺激作用。實(shí)施例36Sulfo-EMCS-胸腺五肽的活性評(píng)價(jià)注射用胸腺五肽和注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)的作用。實(shí)驗(yàn)方法取昆明小鼠30只雌雄不限，體重在18-20g左右。隨機(jī)分為3組，分別為空白組、注射用胸腺五肽組和注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽組。注射用胸腺五肽組每天腹腔給2微克/10g的胸腺五肽，連續(xù)給藥6天。注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽組實(shí)驗(yàn)的第l、4天腹腔注射2微克/10g的注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽?？瞻捉M每天腹腔注射等體積的生理鹽水。末次給藥半小時(shí)后尾靜脈采血，涂片用Giemsa-weigh液染色，鏡檢外周血T淋巴細(xì)胞被激活的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算轉(zhuǎn)化率。末次給要l小時(shí)后心臟采血加肝素抗凝，力[]3%的明膠等體積，37度水浴30分鐘。吸取全部的上清液，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。取上清加Hanks液2ml沖洗離心，棄上清，反復(fù)沖洗4次。沉淀均為淋巴細(xì)胞懸液，取0.5ml的淋巴細(xì)胞懸液加1。/。(v/v)的綿羊紅細(xì)胞懸液lml，加小牛血清0.1ml，置37度水浴15分鐘。500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，置4度冰箱2小時(shí)，棄部分上清液將細(xì)胞沉淀輕輕搖勻，力叫.8。/。(v/v)的戊二醛溶液0.1ml，混勻后4度冰箱固定15分鐘。將洗凈的載玻片用Hanks液沾濕，滴一小滴細(xì)胞懸液讓其自然散開(kāi)，自然干燥后滴加甲醇固定5分鐘，用Giemsa-weigh液染色，水洗，干燥，鏡檢。凡是吸附3個(gè)或3個(gè)以上紅細(xì)胞的淋巴細(xì)胞判定為一個(gè)E-玫瑰花環(huán)，每一標(biāo)本檢查200個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算E-玫瑰環(huán)的形成率。頸椎處死小鼠，無(wú)菌取出小鼠的胸腺和脾臟，計(jì)算小鼠的胸腺指數(shù)。表4實(shí)驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表4表明注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽和注射用胸腺五肽的胸腺指數(shù),外周T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和E-玫瑰花環(huán)形成率和空白組比較均有顯著性差異(P<0.05)。說(shuō)明注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽和注射用胸腺五肽均能夠提高小鼠的細(xì)胞免疫功能。注射用Sulfo-EMCS-胸腺五肽在體內(nèi)能夠起到長(zhǎng)效的效果。權(quán)利要求1、一種胸腺五肽衍生物，該衍生物的結(jié)構(gòu)為在胸腺五肽的N-端氨基、側(cè)鏈的氨基偶聯(lián)有能夠交聯(lián)氨基和巰基的交聯(lián)劑，形成通式為R2-R1-TP-5的胸腺五肽的衍生物，其中R1為id="icf0001"file="A2009101189810002C1.tif"wi="7"he="12"top="52"left="125"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>R2至少為下述25種結(jié)構(gòu)式(1)-(25)中之一-(CH2)I(14)，2、一種權(quán)利要求l所述胸腺五肽衍生物的制備方法，是以能夠交聯(lián)氨基和巰基的通式為R-RrR2的交聯(lián)劑，與氨基酸序列為Arg-Lys-Asp-Val-Tyr的胸腺五肽TP-5在溶劑中反應(yīng)，使交聯(lián)劑偶聯(lián)在胸腺五肽的N端氨基、側(cè)鏈的氨基上，形成胸腺五肽衍生物，其反應(yīng)式為R畫(huà)R廣R2+TP畫(huà)5—R2-R「TP-5。3、如權(quán)利要求2所述的胸腺五肽衍生物的制備方法，其特征在于所述的交聯(lián)劑為BMPA、EMCA、KMUA、GMBS、AMAS、BMPS、EMCS、LC-SMCC、LC-SPDP、纖S、SATA、SATP、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、SMPT、SPDP、Sulfo-EMCS、Sulfo國(guó)GMBS、Sulfo畫(huà)KMUS、Sulfo-LC國(guó)SMPT和Sulfo誦LC-SPDP之一。4、如權(quán)利要求2或3所述的胸腺五肽衍生物的制備方法，其特征在于所述的胸腺五肽先用pH為10.0的Na2HPCVNaH2PO4溶解；所述的交聯(lián)劑用溶劑溶解，以胸腺五肽:交聯(lián)劑為3:1質(zhì)量或體積冰浴混合，升溫至室溫后反應(yīng)30分鐘。5、如權(quán)利要求2或3所述的胸腺五肽的制備方法，其特征在于反應(yīng)完成后的混合物還用乙腈、三氟乙酸稀釋，并調(diào)節(jié)pH至2.0-3.0，溶液上柱純化，以進(jìn)一步分離出胸腺五肽衍生物。6、如權(quán)利要求5所述的胸腺五肽的制備方法，其特征在于所述純化用的裝柱條件為固定相為C18，流動(dòng)相A為體積百分比為0.1%的三氟乙酸、體積百分比為10%的乙腈，B:體積百分比為O.l%的三氟乙酸、體積百分比為70%的乙腈，按15-20倍柱體積從A—B100%的不同遞度比混合液，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，收集胸腺五肽衍生物峰出峰物，凍干后得原料藥。7、一種權(quán)利要求1所述的胸腺五肽衍生物在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物為治療慢性乙型肝炎、原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷、自身免疫性疾病、細(xì)胞免疫功能低下的疾病或腫瘤的藥物。8、一種含有權(quán)利要求1所述的胸腺五肽衍生物的組合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述的藥物為治療慢性乙型肝炎、原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷、自身免疫性疾病、細(xì)胞免疫功能低下的疾病或腫瘤的藥物，所述的組合物除含有胸腺五肽衍生物外還含有適于藥物中應(yīng)用的輔料。全文摘要一種胸腺五肽衍生物，該衍生物的結(jié)構(gòu)為在胸腺五肽的N-端氨基、側(cè)鏈的氨基偶聯(lián)有能夠交聯(lián)氨基和巰基的交聯(lián)劑，形成通式為R₂-R₁-TP-5的胸腺五肽的衍生物。本發(fā)明還公開(kāi)了胸腺五肽衍生物的制備方法。這種胸腺五肽衍生物能夠保持胸腺五肽的活性，且可以達(dá)到長(zhǎng)效效果。文檔編號(hào)A61P37/02GK101560246SQ20091011898公開(kāi)日2009年10月21日申請(qǐng)日期2009年3月11日優(yōu)先權(quán)日2009年3月11日發(fā)明者夏中寧,張麗杰,軍舒,郭榮芳申請(qǐng)人:海南四環(huán)心腦血管藥物研究院有限公司;海南四環(huán)醫(yī)藥有限公司