專利名稱：：8-乙酰氧基山梔苷甲酯的醫(yī)藥新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：獨一味為唇形科植物獨一味Lamiophlomisrotata(Benth)Kudo的全稱，為我國藏族、蒙古族、納西族等民間常用草藥。1992年張承忠等從獨一味地上部分分得8—乙酰氧基山梔苷甲酯劉阿麗，李麗，仝武軍，獨一味的研究進展及臨床應(yīng)用，中國療養(yǎng)醫(yī)學2007年4月第16巻第4期。但目前8-乙酰氧基山梔苷甲酯對心腦血管疾病的作用還未見報道，基于此，本發(fā)明人通過大量的實驗研究，提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防冠心病、心絞痛、心肌缺血或心肌梗塞等藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防腦損傷、腦缺血等藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的8—乙酰氧基山梔苷甲酯可以與各種常規(guī)輔料制成各種藥物劑型，可以是注射劑、粉針劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、微粒劑，優(yōu)選凍干粉針劑。本發(fā)明提供的8—乙酰氧基山梔苷甲酯在用于心腦血管疾病時，其注射使用劑量范圍是30mg5000mg，優(yōu)選為30mg2500mg;其口服使用劑量范圍是200mg10000rag，優(yōu)選為200mg5000mg。本發(fā)明人進行了下列試驗來證實8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的作用，但不僅限于此。具體實施例方式制備例l:制備8-乙酰氧基山梔苷甲酯取獨一味藥材20kg，將其粉碎，過10目篩，加8倍量(V/W)70%乙醇浸泡過夜，回流提取兩次,每次2小時，提取液回收乙醇至無醇味，過濾,濾液上處理好聚酰胺柱，水洗6倍柱體積，收集洗脫液，上處理好的AB-8大孔樹脂柱，水洗至流出液無色,再用10%乙醇洗脫10倍柱體積，最后用25%乙醇洗脫4倍柱體積，收集25%乙醇洗脫液,上氧化鋁柱,95%丙酮洗脫，收集洗脫液，蒸干，得含量為98%的8-乙酰氧基山梔苷甲酯白色粉末。制備例2:制備8-乙酰氧基山梔苷甲酯取獨一味藥材20kg，將其粉碎，過10目篩，加10倍量(V/W)30。/6乙醇浸泡2小時，回流提取兩次，每次1.5小時，提取液回收乙醇至無醇味，過濾,濾液上處理好聚酰胺柱,水洗6倍柱體積，收集洗脫液,上處理好的D101大孔樹脂柱，水洗至流出液無色，再用15%乙醇洗脫8倍柱體積，最后用50%乙醇洗脫4倍柱體積，收集50%乙醇洗脫液，上氧化鋁柱，95%丙酮洗脫，收集洗脫液，蒸干,得含量為95%的8-乙酰氧基山梔苷甲酯白色粉末。制備例3:8-乙酰氧基山梔苷甲酯注射液處方8-乙酰氧基山梔苷甲酯3.0g氯化鈉89g注射用水10000ml制成10000ml按處方量取8-乙酰氧基山梔苷甲酯3.0g，氯化鈉89g，用注射用水10000ml溶解，攪拌；加入活性炭50g，攪拌20分鐘，溶液經(jīng)過微孔濾膜過濾澄明，分裝于125ml輸液瓶中，每瓶100mL,滅菌，檢査合格后包裝即可。其它檢查項應(yīng)該符合中華人民共和國藥典2005年版注射液項目要求。制備例4:8-乙酰氧基山梔苷甲酯凍干粉針取30g，混合后加注射用水2000ml，加甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含30mg的凍干粉針。制備例5:8-乙酰氧基山梔苷甲酯片劑處方8-乙酰氧基山梔苷甲酯200g淀粉150g羧甲基淀粉鈉50g微晶纖維素.100g硬脂酸鎂5g50%乙醇適i制成1000粒4按處方量取8-乙酰氧基山梔苷甲酯200g，淀粉150g，羧甲基淀粉鈉50g，微晶纖維素100g，硬脂酸鎂5g，混和，加入50%乙醇適量制粒，干燥，整粒，壓片，檢査合格后，包裝。試驗例l:8-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠心肌缺血損傷的影響Cl)材料8-乙酰氧基山梔苷甲酯，按制備例l方法制備。氯化硝基四氮唑藍(N-BT)，由軍事醫(yī)學科學院藥材供應(yīng)站提供。實驗動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g—350g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。(2)方法與結(jié)果動物隨機分為模型對照組(生理鹽水)、硝苯地平組(6mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組l(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組l(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)。每組10只。禁食12小時后，ip.烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體n導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣lcm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。硝苯地平組在麻醉前灌胃給藥，灌胃給藥組連續(xù)給藥3天，于第2天給藥后禁食16小時后，第3天給藥30分鐘后手術(shù)，其余各組術(shù)后隨既靜脈注射相應(yīng)藥物。記錄給藥前及給藥后1.5h、3h心電圖，測量心電圖J點的升高值，6h后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-2(TC冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.25MN-BT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37。C水浴振搖1015min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)=梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)x100。/。。數(shù)據(jù)用X士s表示，以組間f檢驗進行統(tǒng)計學處理。結(jié)果如表1所示，心肌缺血6小時后，模型組大鼠心肌出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達到26%左右。8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組1(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山5梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、S-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組l(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)降低肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點的升高、減少缺血面積(與模型組比較，p<0.05或p〈0.01);8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射高劑量組5(250mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)比較，對肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點的升高及缺血面積無明顯差異(p〉0.05);8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈灌胃組3(500mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃組4(1000mg/kg)比較，對肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點的升高及缺血面積無明顯差異(p>0.05)。表18-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠心肌缺血損傷的影響(11=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>胃劑量組4_與模型對照組比較，*P<0.05，P<0.01。試驗例2:8-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料8-乙酰氧基山梔苷甲酯，按制備例l方法制備。紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4%溶液。實驗動物普通級SD大鼠，雄性，體重280g—350g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。(2)方法與結(jié)果動物隨機分為模型對照組(生理鹽水)、尼莫地平組(1.0mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組l(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組l(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)。每組10只。每組10只。禁食12小時后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離右側(cè)頸總動脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24111111尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成右側(cè)大腦中動脈缺血模型;假手術(shù)組僅進行右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈的分離(以上實驗均在23'C25'C進行)。灌胃給藥組連續(xù)給藥3天，于第2天給藥后禁食16小時后，第3天給藥30分鐘后手術(shù)，其余各組術(shù)后靜脈注射相應(yīng)藥物。24小時后按文獻劉小光，徐理納，一種能評價溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學學報，1995，30:662所述方法及標準觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為O分，如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計為1分，肘屈曲計為2分，肩內(nèi)旋計為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力，計為O分，如向手術(shù)對側(cè)推動時阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計為1，2禾[13分。(C)將動物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對側(cè)肌張力下降程度不同計為l，2和3分。(D)動物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計為1分。根據(jù)標準評分，滿分為11分，分數(shù)越高，表示動物行為障礙越嚴重。行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用亍士s表示，以組間f檢驗進行統(tǒng)計學處理。結(jié)果如表2所示，缺血24小時后，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達到全腦24%左右。8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組1(3mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組2(7.5mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組3(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組4(50mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組1(20mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組2(100mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組3(500mg/kg)、8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑量組4(1000mg/kg)顯著改善大鼠行為障礙、減少缺血面積(與模型組比較，p〈0.05或p〈0.01)，8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組5(250mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注射劑量組6(500mg/kg)比較，對改善大鼠行為障礙、減少缺血面積無明顯差異(p〉0.05);8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃組3(500mg/kg)與8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃組4(1000mg/kg)比較，對改善大鼠行為障礙、減少缺血面積無明顯差異(p〉0.05)。表28-乙酰氧基山梔苷甲酯對大鼠腦缺血損傷的影響(n-10)組別劑量(mg/kg)行為障礙缺血面積(％)模型對照組生理鹽水9.70±0.9023.80±5.03Nim組1.06.20±2.61"14.61±3.51**8-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注38.80±1.03'19.65士3.61'射劑量組18-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注7.56.90±1.58'*17.1±2.80**射劑量組28-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注206.60±1.58**15.l土2.80"射劑量組38-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注506.20±1.45"14.6±2.50**射劑量組48-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注2505.65±1.60"13.2±2.95**射劑量組58-乙酰氧基山梔苷甲酯靜脈注5005.50±1.48"13.1±2.89**射劑量組68-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑208.61±0.99*19.50±3.07*量組l8-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑507.50土1.48**16.9±2.8(T量組28-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑5006.50±1.55"15.4±2.70**量組38-乙酰氧基山梔苷甲酯灌胃劑畫6.45±1.80"15.2±2.75**_量組4_與模型對照組比較，*P<0.05,"P<0.01。8權(quán)利要求1.8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。2.8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防冠心病、心絞痛、心肌缺血或心肌梗塞的藥物中的應(yīng)用。3.8-乙酰氧基山梔苷甲酯在制備治療或預(yù)防腦損傷、腦缺血的藥物中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求1一3任一所述的應(yīng)用，其中8—乙酰氧基山梔苷甲酯的制備方法為獨一味藥材粉碎、過篩、浸泡、回流提取后提取液回收乙醇至無醇味，過濾，濾液上處理好的聚酰胺柱，水洗，收集洗脫液上處理好的大孔樹脂柱，水洗至流出液無色，醇洗，收集洗脫液上氧化鋁柱，洗脫，收集洗脫液，蒸干既得。全文摘要本發(fā)明提供了8-乙酰氧基山梔苷甲酯的醫(yī)藥新用途，具體涉及其在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，以及8-乙酰氧基山梔苷甲酯的制備方法。文檔編號A61K31/7042GK101485671SQ20081001386公開日2009年7月22日申請日期2008年1月16日優(yōu)先權(quán)日2008年1月16日發(fā)明者建侯,張達磊,彭湘林,徐本明,蔣王林,鄭勝國申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司