專利名稱：石杉堿甲衍生物,其制備方法和其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的石杉堿甲衍生物，其制備方法，以化合物為活性成分的藥物組合物，及它們在制備抑制乙酰膽脂酶活性的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著世界人口平均壽命的逐年增加，老年性癡呆癥的發(fā)病率也隨著迅速上升，老年癡呆癥中有50％-70％為阿爾茨海默氏病(AD)，阿爾茨海默氏癥又稱早老年性癡呆癥，患者的腦功能逐漸率退，出現(xiàn)記憶力、抽象思維能力和語言表達(dá)能力減退、行動(dòng)不便和其它功能性障礙，影響神經(jīng)系統(tǒng)功能，最終導(dǎo)致死亡。AD是一種以進(jìn)行性認(rèn)知和記憶力損傷為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，估計(jì)全球世界阿爾茨海默氏病發(fā)病人數(shù)高達(dá)1200多萬。在發(fā)達(dá)國家此病是繼心血管病和腫瘤之后引起死亡的主要疾病。
治療AD的藥物主要有膽堿能類藥物、神經(jīng)細(xì)胞代謝增強(qiáng)劑、抗氧化劑、鈣離子拮抗劑、神經(jīng)生長因子、雌激素、抗炎藥、抗β淀粉樣蛋白藥物等。目前臨床上治療該病最成功的方法就是通過提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)——乙酰膽堿的水平，改善AD病人的癥狀。其中針對的通過抑制AChE對乙酰膽堿的降解作用而提高腦內(nèi)的乙酰膽堿的水平，是改善癥狀的有效途徑。臨床上有效的藥物如他克林(Cognex，tacrine)，安理申(Aricept，donepezil)，艾斯能(Exelon，rivastigmine)，加蘭他敏(Reminyl，galantamine)和石杉堿甲(Hup A)均為乙酰膽堿酯酶抑制劑，它們能有效升高腦內(nèi)乙酰膽堿水平，使人的認(rèn)知功能得以改善2。而作為乙酰膽堿酯酶抑制劑的著名天然產(chǎn)物石杉堿甲，其藥效得到了臨床的充分肯定，在此基礎(chǔ)上中國科學(xué)院上海藥物研究所合成一系列石杉堿甲的衍生物，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新型的抗老年癡呆的治療藥物“希普林”，目前在歐洲進(jìn)入了三期臨床，預(yù)計(jì)2-3年以后可以得到批準(zhǔn)上市。希普林是作為前藥，對AChE抑制劑活性和石杉堿甲相當(dāng)，選擇性略高，但生物利用度明顯提高。
迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)中未有石杉堿甲衍生物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種石杉堿甲衍生物1-8，其制備方法，以化合物1-8為活性成分的藥物組合物，及它在制備抑制乙酰膽脂酶活性的藥物中的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案下述結(jié)構(gòu)式所示的化合物1-8 化合物1對二甲胺基苯甲本醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物23-乙氧基-4羥基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺
化合物33，5-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物42，4-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物5對氰基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物62-磺酸鈉苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺
化合物7α-甲基肉桂酸-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物8對二甲胺基肉桂酸-石杉堿甲縮醛亞胺本發(fā)明同時(shí)提供了制備權(quán)利要求1化合物1-8的方法，取石杉堿甲A置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入無水甲醇攪拌并溶解，加入對二甲胺基苯甲醛或3-乙氧基-4羥基苯甲醛或3，5-二甲氧基苯甲醛或2，4-二甲氧基苯甲醛或?qū)η杌郊兹┗?-磺酸鈉苯甲醛或α-甲基肉桂酸或?qū)?二甲胺基肉桂酸溶于無水甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中，混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在50℃-55℃半小時(shí)，冷卻至室溫，減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱層析，并經(jīng)凝膠純化，得化合物1-8。
本發(fā)明的用于抑制乙酰膽脂酶活性的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物1-8中任一種或任幾種和/或藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明還提供了化合物1-8在制備抑制乙酰膽脂酶活性藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明技術(shù)方案的提出是受到希普林化學(xué)結(jié)構(gòu)的啟發(fā)，憑借對天然化合物的結(jié)構(gòu)及活性特點(diǎn)，試圖制備豆腐果苷的石杉堿甲衍生物，預(yù)期應(yīng)該具有顯著的乙酰膽堿酯酶抑制活性，以及更加廣泛的對神經(jīng)系統(tǒng)的活性，試驗(yàn)結(jié)果符合預(yù)期期望。
本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以加賦形劑以適當(dāng)制劑直接使用，或與其他藥物組成復(fù)方制劑使用。其余為藥物學(xué)上可接受的對人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。藥用載體或賦形劑是藥物學(xué)上可接受的對人和動(dòng)物無毒和惰性的固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)注射(靜注、肌注)和口服兩種形式給藥。使用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴(yán)重程度等變化進(jìn)行一次或多次使用。對成人來說，給藥量每天1～100mg比較合適。
本發(fā)明涉及到的原料石杉堿甲(HupA)的藥理及應(yīng)用石杉堿甲[(-)Huperzine A]是20世紀(jì)80年代我國學(xué)者從民間草藥蛇足石杉(千層塔)(Huperzia serrata)發(fā)現(xiàn)的一種新型石松生物堿類有效成分單體；并于90年代一些學(xué)者成功開發(fā)成為治療阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)的天然藥物，商品名為“雙益平”。與國際上同類AD治療藥物相比，石杉堿甲的化學(xué)結(jié)構(gòu)具有特異性，具有非常顯著的抑制腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶和增強(qiáng)腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)元的功能。同位素H3-石杉堿甲183ug/ml靜脈注射到小鼠15分鐘后，自顯影實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在外周及各腦區(qū)均有放射性藥物分布，3個(gè)小時(shí)后，主要分布在額、頂、顳葉皮質(zhì)，海馬，伏隔核，第四腦室基底部及腺垂體等區(qū)域，更加明顯。表明石杉堿甲十分易于進(jìn)入中樞，并選擇性分布在與學(xué)習(xí)、記憶有關(guān)的神經(jīng)通路區(qū)域，對腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶具有較高的選擇性抑制活性。
而石杉堿甲的神經(jīng)保護(hù)作用也十分明顯，研究表明細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激參與了AD和VD的病理過程，自由基引起的氧化損傷被認(rèn)為是不同原因誘發(fā)神經(jīng)退行性變的最后通路，除了AD和VD之外，動(dòng)脈粥樣硬化、腦缺血、癲癇、肌肉萎縮側(cè)索硬化、帕氏金森綜合癥等，都提示對抗細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激藥物可能阻止這些疾病的發(fā)展。石杉堿甲是通過提高抗氧化酶活力，具有顯著抗β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)毒性作用，能夠明顯改善老年大鼠衰老導(dǎo)致的氧化應(yīng)激，其抗氧化作用有助于延緩、阻止AD發(fā)展。石杉堿甲不但可以提高超氧化歧化酶(SOD)的活力加速體內(nèi)自由基的清除，減少氧自由基導(dǎo)致的損傷。提示石杉堿甲不但與抑制乙酰膽堿酯酶活性有關(guān)，還與其改善抗氧自由基功能、減少自由基導(dǎo)致的損傷有關(guān)。說明石杉堿甲抗老年癡呆作用不但與抑制乙酰膽堿酯酶活性有關(guān)，與改善抗氧自由基功能、減少自由基導(dǎo)致的損傷有關(guān)。Aβ前體蛋白APP(分泌型APP)被認(rèn)為具有神經(jīng)保護(hù)作用，大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射Aβ后能夠?qū)е路置谛虯PP與PKC水平下降。石杉堿甲能夠明顯上調(diào)PKC水平，增加分泌型APP的表達(dá)，而起到神經(jīng)元保護(hù)作用，改善由于Aβ引起的學(xué)習(xí)、記憶障礙。
石杉堿甲對成年、老年猴有促智作用，對東莨菪堿、電擊、還己酰亞胺、亞硝酸鈉或二氧化碳誘發(fā)的認(rèn)知障礙，腦內(nèi)注射膽堿能選擇性毒劑AF64A誘發(fā)的記憶障礙，側(cè)腦室內(nèi)注射Aβ1-40片段后誘發(fā)的大腦空間學(xué)習(xí)、記憶障礙，石杉堿甲均有改善作用。
石杉堿甲1994年應(yīng)用于臨床之后，在改善中老年良性衰老性記憶減退和早老性癡呆導(dǎo)致的記憶和認(rèn)知能力減退，及提高青少年記憶和學(xué)習(xí)成績提高取得明顯效果。
石杉堿甲(HupA)的結(jié)構(gòu)表征石杉堿甲，為白色或微黃色結(jié)晶性粉末，無臭，味微苦；C15H18N2O，分子量242.32，易溶于甲醇、氯仿，溶于乙醇，不溶于水；熔點(diǎn)224-229℃比旋光度[α]24.5D-150.4°(c＝0.498甲醇)；UVλmax231，313nm石杉堿甲的NMR數(shù)據(jù)1H NMRδ6.41(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.86(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.71(2H，ddd，J6α，6β＝16.8，J6α，7＝1.16，J6β，7＝0.52，6-H)，3.60(1H，brs，7-H)，5.39(1H，J＝4.6，8-H)，1.66(3H，d，J＝6.7，10-H)，5.47(3H，d，J＝6.7，11-H)，2.11(2H，s，14-H)，1.54(3H，s，16-H)，13.15(1H，s，NH).
13C NMRδ165.4(s，C-1)，116.9(d，C-2)，140.2(d，C-3)，122.8(s，C-4)，142.5(s，C-5)，35.2(t，C-6)，32.8(d，C-7)，124.2(d，C-8)，12.3(q，C-10)，11 1.2(d，C-11)，143.1(s，C-12)，54.3(s，C-13)，49.1(t，C-14)，134.1(s，C-15)，22.6(q，C-16).
化學(xué)結(jié)構(gòu) 化學(xué)名(5R，9R，11E)-5-氨基-11-亞乙基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-亞甲環(huán)芳辛并-2(1H)-吡啶酮；(英文[5R-(5α，9β，11E)]-5-amino-11-ethylid-ene-5，6，9，10-tetrahydro-7-methyl-5，9-Methanocycloocta[b]pyridine-2(1H)-one)
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1化合物1(對二甲胺基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備通過希夫堿制備石杉堿甲(HupA)衍生物?；衔飿悠返姆治鰯?shù)據(jù)由以下儀器測定紅外光譜用Shimadzu IR-450型儀紅外光譜儀側(cè)定；核磁共振譜用BrukerAV-400型和DRX-500核磁共振儀測定；質(zhì)譜用VG-AUTOSPEC-3000型質(zhì)譜儀測定。層析硅膠(200-300目)及TLC硅膠板為青島海洋化工廠產(chǎn)品。
試驗(yàn)中用的石杉堿甲(95％)購自長沙拓康生物技術(shù)有限公司。其余試劑購自百靈威化學(xué)試劑有限公司。
對二甲胺基苯甲醛與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備對二甲胺基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式
取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。對二甲胺基苯甲醛29.8mg(0.2mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中。混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在55℃左右，大約半小時(shí)后，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，并通過凝膠純化，得到產(chǎn)物1(40.0mg)，收率53.6％。
對二甲胺基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺(1)的表征化合物1為黃色固體，分子式C24H27N3O；熔點(diǎn)mp108-110℃；比旋光[α]20D8.70(c＝0.69，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)374([M+H]+，12)，125(7)；1H NMRδ(500MHz，CDCl3)6.34(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.17(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.80(2H，m，6-H)，3.67(1H，brs，7-H)，5.48(1H，d，J＝7.3，8-H)，1.61(3H，d，J＝6.8，10-H)，5.24(1H，q，J＝6.7，11-H)，2.20(2H，d，J＝16.1，14-H)，1.24(3H，s，16-H)，7.73(d，1H，J＝7.5，2’-H)，7.17(d，1H，J＝8.7，5’-H)，7.73(d，1H，J＝7.5，6’-H)，8.30(1H，s，7’-H)，3.02(6H，s，2xN-CH3).
13C NMRδ(125MHz，CDCl3)165.9(s，C-1)，117.2(d，C-2)，141.4(d，C-3)，121.7(s，C-4)，143.2(s，C-5)，35.4(t，C-6)，32.9(d，C-7)，124.4(d，C-8)，12.5(q，C-10)，114.6(d，C-11)，139.3(s，C-12)，63.9(s，C-13)，46.1(t，C-14)，134.1(s，C-15)，22.9(q，C-16)；131.9(s，C-1’)，129.8(d，C-2’)，111.0(d，C-3’)，152.5(s，C-4’)，111.0(d，C-5’)，129.8(d，C-6’)，161.1(d，C-7’)，40.0(q，N(CH3)2).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物1的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物1的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物1為對二甲胺基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例2化合物2(3-乙氧基-4羥基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備3-乙氧基-4羥基苯甲醛與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備3-乙氧基-4羥基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。3-乙氧基-4羥基苯甲醛50.0mg(0.3mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中。混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物2(57.6mg)，收率80.0％。
3-乙氧基-4羥基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征化合物2，黃色固體；分子式C24H26N2O3；熔點(diǎn)mp137-139℃；比旋光[α]20D-4.89(c＝1.53，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)391[M+H]+(36)，226(10)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.38(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.14(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.82(2H，m，6-H)，3.64(1H，brs，7-H)，5.48(1H，d，J＝3.5，8-H)，1.60(3H，d，J＝7.0，10-H)，5.19(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.21(2H，d，J＝16.1，14-H)，22.6(q，C-16)，1.24(3H，s，16-H)；7.91(1H，d，J＝1，2’-H)，6.97(1H，d，J＝8.1，5’-H)，7.19(1H，dd，J＝8.1，1.3，6’-H)，8.27(1H，s，7’-H)，4.15(2H，q，J＝7.0，3’-OCH2-)，1.42(3H，t，J＝7.0，3’-OCH2CH3).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.4(s，C-1)，117.4(d，C-2)，141.3(d，C-3)，121.5(s，C-4)，143.5(s，C-5)，35.2(t，C-6)，32.8(d，C-7)，124.5(d，C-8)，12.3(q，C-10)，114.3(d，C-11)，139.0(s，C-12)，64.1(s，C-13)，45.9(t，C-14)，133.8(s，C-15)，22.6(q，C-16)；128.9(s，C-1’)，109.4(d，C-2’)，146.6(s，C-3’)，149.1(s，C-4’)，114.6(d，C-5’)，124.3(d，C-6’)，161.1(d，C-7’)，64.7(t，C-OCH2-)，14.7(q，C-OCH2CH3).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物2的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物2的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物2為3-乙氧基-4羥基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例3化合物3(3，5-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備3，5-二甲氧基苯甲醛與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備3，5-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。3，5-二甲氧基苯甲醛58.0mg(0.35mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中?；旌弦捍帕嚢璨⒓訜?，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物3(66.0mg)，收率85.0％。
3，5-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征化合物3，白色固體；分子式C24H26N2O3；熔點(diǎn)113-115℃；比旋光[α]20D-2.59(c＝1.16，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)391([M+H]+，10)，226(8)，69(65)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.37(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.14(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.83(2H，dd，J1＝6.7，9.8，6-H)，3.70(1H，brs，7-H)，5.50(1H，d，J＝5.8，8-H)，1.64(3H，d，J＝7.1，10-H)，5.22(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.24(2H，d，J＝16.1，14-H)，1.27(3H，s，16-H)；7.02(1H，d，J＝2.3，2’-H)，6.59(1H，d，J＝2.3，4’-H)，7.02(1H，d，J＝2.3，6’-H)，8.35(1H，s，7’-H)，3.86(6H，s，3′，5′OCH3).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.3(s，C-1)，117.2(d，C-2)，141.0(d，C-3)，120.8(s，C-4)，143.5(s，C-5)，35.3(t，C-6)，32.8(t，C-7)，124.4(d，C-8)，12.5(q，C-10)，114.7(d，C-11)，138.2(s，C-12)，64.5(s，C-13)，45.9(t，C-14)，133.7(s，C-15)，22.9(q，C-16)；138.7(s，C-1’)，106.1(d，C-2’)，161.5(s，C-3’)，103.8(d，C-4’)，161.5(s，C-5’)，106.1(d，C-6’)，161.1(d，C-7’)，55.5(q，2xOCH3).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物3的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物3的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物3為3，5-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例4化合物4(2，4-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備2，4-二甲氧基苯甲醛與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備2，4-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。2，4-二甲氧基苯甲醛50.0mg(0.3mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中。混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物4(62.0mg)，收率80.0％。
2，4-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征化合物4，白色固體；分子式C24H26N2O3；熔點(diǎn)mp117-119℃；比旋光[α]20D-1.91(c＝1.57，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)391[M+H]+(17)，154(16)，69(75)；
1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.36(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.14(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.78(2H，m，6-H)，3.60(1H，brs，7-H)，5.49(1H，d，J＝6.6，8-H)，1.64(3H，d，J＝7.1，10-H)，5.22(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.24(2H，d，J＝18.4，14-H)，1.25(3H，s，16-H)；6.48(1H，s，3’-H)，6.43(1H，d，J＝9.4，5’-H)，7.91(1H，d，J＝9.4，6’-H)，8.77(1H，s，7’-H)，1.86(6H，s，2x OCH3).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.4(s，C-1)，117.0(d，C-2)，140.2(d，C-3)，121.9(s，C-4)，143.1(s，C-5)，35.3(t，C-6)，32.8(d，C-7)，124.3(d，C-8)，12.3(q，C-10)，114.5(d，C-11)，139.2(s，C-12)，64.2(s，C-13)，49.2(t，C-14)，134.1(s，C-15)，22.6(q，C-16)；128.4(s，C-1’)，160.4(s，C-2’)，111.2(d，C-3’)，163.4(s，C-4’)，117.1(d，C-5’)，124.4(d，C-6’)，156.0(d，C-7’)，55.5(q，2′，4′-OCH3).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物4的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物4的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物4為2，4-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例5化合物5(對氰基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備對氰基苯甲醛-與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備對氰基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。對氰基苯甲醛39.3mg(0.3mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中。混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物5。
對氰基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征化合物5，白色固體，分子式C23H21N3O；熔點(diǎn)mp160-161℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)6.39(1H，d，J＝9.4，H-2)；7.05(1H，d，J＝9.4，H-3)；2.78(2H，d，J1＝16.8，H-6)；3.61(1H，br.s，H-7)；5.49(1H，d，J＝6.5，H-8)；1.64(3H，d，J＝6.8，H-10)；5.08(1H，q，J＝6.9，H-11)；2.22(2H，d，J＝16.2，H-14)；1.25(3H，s，H-16)；7.96(1H，d，J＝8.1，H-2’，6’)；7.96(1H，d，J＝8.1，H-3’，5’)；8.44(1H，s，H-7’).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物5的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物5的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物5為對氰基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例6化合物6(2-磺酸鈉苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備2-磺酸鈉苯甲醛-與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備2-磺酸鈉苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。2-磺酸鈉苯甲醛52.1mg(0.25mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中?；旌弦捍帕嚢璨⒓訜幔瑴囟染S持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物6(60.0mg)，收率70.0％。
2-磺酸鈉苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征白色固體，分子式C22H21N2O4SNa；
熔點(diǎn)mp274-276℃；比旋光[α]20D1.24(c＝1.61，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)432[M+H]+(5)，176(8)，97(33)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.34(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.43(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.79(2H，d，J1＝16.2，6-H)，3.76(1H，brs，7-H)，5.51(1H，d，J＝6.4，8-H)，1.69(3H，d，J＝6.8，10-H)，5.33(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.22(2H，d，J＝16.1，14-H)，1.29(3H，s，16-H)；7.53(1H，m，3’-H)，8.02(1H，m，4’-H)，7.54(1H，overlap，5’-H)，8.01(1H，overlap，6’-H)，9.55(1H，s，7’-H).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.8(s，C-1)，117.8(d，C-2)，141.3(d，C-3)，122.2(s，C-4)，144.3(s，C-5)，35.9(t，C-6)，34.2(d，C-7)，125.4(d，C-8)，12.7(q，C-10)，115.8(d，C-11)，139.8(s，C-12)，65.8(s，C-13)，45.7(t，C-14)，134.4(s，C-15)，23.0(q，C-16)；135.5(s，C-1’)，193.9(s，C-2’)，128.4(d，C-3’)，131.4(d，C-4’)，128.5(d，C-5’)，131.5(d，C-6’)，163.5(d，C-7’).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物6的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物6的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物6為2-磺酸鈉苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例7化合物7(α-甲基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備α-甲基肉桂醛-與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備α-甲基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式 取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。α-甲基肉桂醛32.1mg(0.21mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中。混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物7(62.0mg)，收率84.0％α-甲基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征化合物7，白色固體；分子式C25H26N2O；熔點(diǎn)mp151-153℃；旋光比[α]20D3.24(c＝1.85，CHCl3)；(Negative)FABMS m/z(％)369[M-H]-(100)，339(12)，225(13)，(Negative)HRFABMS m/z(％)369.1956(cacl.d 396.1966，C25H25N2O)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.40(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.13(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.80(2H，d，J＝17.6，6-H)，3.68(1H，brs，7-H)，5.48(1H，d，J＝4.1，8-H)，1.64(3H，d，J＝7.2，10-H)，5.17(1H，q，J＝6.8，11-H)，2.22(2H，d，J＝16.0，14-H)，1.25(3H，s，16-H)；7.43(1H，m，2’-H)，7.30(1H，m，3’-H)，7.29(1H，m，4’-H)，7.29(1H，m，5’-H)，7.43(1H，m，6’-H)，6.90(1H，s，7’-H)，8.14(1H，s，9’-H)，2.26(3H，s，α-CH3).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.4(s，C-1)，117.1(d，C-2)，140.4(d，C-3)，121.2(s，C-4)，143.4(s，C-5)，35.2(t，C-6)，32.8(d，C-7)，124.4(d，C-8)，12.5(q，C-10)，114.3(d，C-11)，138.7(s，C-12)，64.1(s，C-13)，46.0(t，C-14)，133.8(s，C-15)，22.9(q，C-16)，136.5(s，C-1’)，129.4(d，C-2)，128.4(d，C-3’)，127.8(d，C-4’)，128.4(d，C-5’)，129.4(d，C-6’)，141.0(d，C-7’)，137.3(s，C-8’)，166.2(d，C-9’)，13.3(q，α-CH3).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物7的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物7的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物7為α-甲基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
實(shí)施例8化合物8(對-二甲胺基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺)的制備對-二甲胺基肉桂醛-與石杉堿甲縮醛反應(yīng)制備對-二甲胺基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺反應(yīng)式
取48.4mg(0.2mmol)HupA置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入4ml的無水甲醇攪拌并溶解。對-二甲胺基肉桂醛52.5mg(0.3mmol)溶于4ml的無甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中?；旌弦捍帕嚢璨⒓訜幔瑴囟染S持在55℃左右，通過TLC檢測，表明反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束。反應(yīng)物冷卻至室溫后，減壓濃縮，殘余物硅膠柱層析(CHCl3/CH3OH 40∶1，20∶1)，得到產(chǎn)物8(60.0mg)，收率75.0％。
對-二甲胺基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺的表征化合物8，紫黃色固體，分子式C26H29N3O；熔點(diǎn)mp144-146℃；比旋光[α]20D10.26(c＝1.17，CHCl3)；(Positive)FABMS m/z(％)400[M+H]+(100)，226(7)，175(15)；1H NMRδ(400MHz，CDCl3)6.39(1H，d，J＝9.4，2-H)，7.16(1H，d，J＝9.4，3-H)，2.78(2H，d，J＝16.8，6-H)，3.66(1H，brs，7-H)，5.45(1H，d，J＝4.7，8-H)，1.64(3H，d，J＝6.8，10-H)，5.16(1H，q，J＝6.9，11-H)，2.22(2H，d，J＝16.2，14-H)，1.25(3H，s，16-H)；7.40(1H，d，J＝8.8，2’-H)，6.69(1H，d，J＝8.8，3’-H)，6.69(1H，d，J＝8.8，5’-H)，7.40(1H，d，J＝8.8，6’-H)，8.04(1H，d，J＝6.4，7’-H)，6.94(1H，d，J＝6.4，8’-H)，12.9(1H，brs，9’-H)，2.99(6H，s，2xNCH3).
13C NMRδ(100MHz，CDCl3)165.2(s，C-1)，117.3(d，C-2)，141.3(d，C-3)，121.7(s，C-4)，143.2(s，C-5)，35.3(t，C-6)，32.9(d，C-7)，123.8(d，C-8)，12.5(q，C-10)，114.6(d，C-11)，139.3(s，C-12)，63.9(s，C-13)，46.1(t，C-14)，134.1(s，C-15)，22.9(q，C-16)；134.2(s，C-1’)，128.8(d，C-2’)，111.3(d，C-3’)，151.2(s，C-4’)，111.3(d，C-5’)，128.8(d，C-6’)，141.3(d，C-7’)，124.3(d，C-8’)，163.8(d，C-9’)，40.2(q，N(CH3)2).
根據(jù)起始原料的反應(yīng)過程，及以上波譜數(shù)據(jù)化合物8的結(jié)構(gòu)可以被確定。
化合物8的化學(xué)名稱由于系統(tǒng)命名比較復(fù)雜，按天然產(chǎn)物習(xí)慣，命名化合物8為對-二甲胺基肉桂醛-石杉堿甲縮醛亞胺。
下述的制劑實(shí)施例是按實(shí)施例1-8的方法先制得化合物1-8，按常規(guī)制成注射液、粉針劑、口服液以及加入賦形劑的粉劑、制粒壓片、膠囊。
片劑按照本領(lǐng)域已知的方法制備片劑，每片含有下述成分化合物1-8任一種 50mg乳糖 70mg硬脂酸鎂 3mg聚乙烯吡咯烷酮7mg合計(jì) 130mg如果需要，片劑可用羥丙基甲基纖維素、滑石和著色劑進(jìn)行膜包覆。
膠囊按照本領(lǐng)域已知的方法制備膠囊劑，每個(gè)膠囊中含有下述成分化合物1-8任一種 50mg乳糖 70mg玉米淀粉 25mg硬脂酸鎂 1mg聚乙烯吡咯烷酮4mg合計(jì) 150mg[制劑實(shí)施例3]注射劑按實(shí)施例1-8的方法先制得本發(fā)明化合物1-8，取化合物1-8中任一種按本領(lǐng)域已知的方法制備注射劑，加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
下述的試驗(yàn)例可進(jìn)一步說明本發(fā)明所述石杉堿甲衍生物(化合物1-8)及其藥物組合物的有益效果，試驗(yàn)例包括了本發(fā)明的藥效學(xué)試驗(yàn)等。
試驗(yàn)例1石杉堿甲衍生物(化合物1-8)的乙酰膽堿酯酶抑制實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase，AChE)的主要生理功能為通過快速水解神經(jīng)傳遞介質(zhì)乙酰膽堿(ACh)，中止膽堿能突觸中的脈沖傳遞，故AChE又稱乙酰膽堿水解酶(acetylcholine hydrolase)[2]。
CH3COOCH2CH2N+(CH3)3+ACh E→CH3CO-AChE+HOCH2CH2N+(CH3)3→CH3COO-+H++AChE乙酰膽堿酯酶與碘化硫代乙酰膽堿生成的產(chǎn)物，與5，5-二硫雙硝基苯甲酸生成一種黃色物質(zhì)，本模型利用該顏色反應(yīng)，來測定待測樣品對乙酰膽堿酯酶的抑制程度。
材料乙酰膽堿酯酶(AChE)、陽性對照他克林(Tacrine)購于SIGMA公司，碘化硫代乙酰膽堿購于FLUKA公司，5，5-二硫雙硝基苯甲酸購于ACROS公司，其它均為國產(chǎn)分析純。
化合物1對乙酰膽堿酯酶的抑制活性測定取5支磷酸鹽緩沖溶液的梨型管，依次加入不同的1.0mM的樣品DMSO溶液，使其用DMSO補(bǔ)齊至刻度體積后，將濃度控制為50.0，25.0，12.5，6.25，3.13(x10-9M)。分別加入一定量的4mg/mL 5，5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)和乙酰膽堿酯酶溶液(0.1mg/ml)，并在37℃保溫15min后。立即加入一定量2mg/mL硫代乙酰膽堿溶液，搖勻后測其在λ＝412nm處的A值(An)。參比用0.1M pH 8.0磷酸鹽緩沖溶液。以未加樣品所測得的Acontrol值作為100個(gè)活力單位相對酶活力＝(An/Acontrol)×100，然后以酶的相對活力對抑制劑濃度作圖，根據(jù)抑制曲線求得各種化合物的IC50值(抑制酶活力50％時(shí)的抑制劑濃度)。
化合物1-8對乙酰膽堿酯酶的抑制活性(表1)
表1 化合物1-8的初步篩選活性結(jié)果

他克林為陽性對照，具體的濃度和抑制率為濃度1×10-3M，抑制率97.36％％；濃度1×10-4M，抑制率94.46％；濃度1×10-5M，抑制率90.93％；濃度1×10-6M，抑制率71.91％；濃度1×10-7M，抑制率17.25％；濃度1×10-8M，抑制率0。
可見，化合物1-8在1×10-5mol/L的濃度下，對乙酰膽堿酯酶的抑制率到達(dá)3.41％-83.25％，而在同一實(shí)驗(yàn)中同一濃度下，石杉堿甲(HupA)對乙酰膽堿酯酶的抑制率到達(dá)81.9％，說明化合物1-8在此濃度下，對乙酰膽堿酯酶的抑制活性超過石杉堿甲(HupA)。鑒于化合物1-8對乙酰膽堿酯酶的抑制活性較強(qiáng)，進(jìn)一步重復(fù)實(shí)驗(yàn)測定了IC50(表2)
表2 化合物1-8對乙酰膽堿酯酶的抑制活性(IC50)


說明陽性對照用較他克林活性更強(qiáng)的p0407(乙酰水楊酸毒扁豆堿)。
篩選結(jié)果表明化合物1-8均具有顯著的乙酰膽堿酯酶的抑制活性；陽性對照p0407(乙酰水楊酸毒扁豆堿)和母體化合物石杉堿甲(HupA)的IC50(M)分別為2.13×10-8和1.14×10-8；而化合物3，4，5的IC50(M)分別為2.00×10-11，4.46×10-11和4.12×10-11；對乙酰膽堿酯酶的抑制活性要比臨床天然藥物石杉堿甲(HupA)明顯地更高。由于化合物1-8均以石杉堿甲(HupA)為母體化合物衍生而成的形成亞胺結(jié)構(gòu)的類似物，可能是結(jié)構(gòu)上與乙酰膽堿酯酶更為匹配，抑制活性更強(qiáng)；而在生物體內(nèi)或酶體系中，化合物1-8可能分解出活性臨床藥物石杉堿甲，形成前藥(潛藥)，因而是非常有應(yīng)用前景的活性結(jié)構(gòu)。
權(quán)利要求
1.如下述結(jié)構(gòu)式所示的化合物1-8 化合物1對二甲胺基苯甲本醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物23-乙氧基-4羥基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物33，5-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物42，4-二甲氧基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物5對氰基苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物62-磺酸鈉苯甲醛-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物7α-甲基肉桂酸-石杉堿甲縮醛亞胺 化合物8對二甲胺基肉桂酸-石杉堿甲縮醛亞胺
2.制備權(quán)利要求1化合物1-8的方法，取石杉堿甲A置于帶有冷凝管的三頸瓶中，加入無水甲醇攪拌并溶解，加入對二甲胺基苯甲醛或3-乙氧基-4羥基苯甲醛或3，5-二甲氧基苯甲醛或2，4-二甲氧基苯甲醛或?qū)η杌郊兹┗?-磺酸鈉苯甲醛或α-甲基肉桂酸或?qū)?二甲胺基肉桂酸溶于無水甲醇中，緩慢滴入三頸瓶中，混合液磁力攪拌并加熱，溫度維持在50℃-55℃半小時(shí)，冷卻至室溫，減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱層析，并經(jīng)凝膠純化，得化合物1-8。
3.用于抑制乙酰膽脂酶活性的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物1-8中任一種或任幾種和/或藥學(xué)上可接受的載體。
4.權(quán)利要求1石杉堿甲衍生物在制備抑制乙酰膽脂酶活性藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
石杉堿甲衍生物1－8對二甲胺基苯甲本醛－石杉堿甲縮醛亞胺、3－乙氧基－4羥基苯甲醛－石杉堿甲縮醛亞胺、3，5－二甲氧基苯甲醛－石杉堿甲縮醛亞胺、2，4－二甲氧基苯甲醛－石杉堿甲縮醛亞胺、對氰基苯甲醛－石杉堿甲縮醛亞胺、2－磺酸鈉苯甲醛－石杉堿甲縮醛亞胺、α－甲基肉桂酸－石杉堿甲縮醛亞胺、對二甲胺基肉桂酸－石杉堿甲縮醛亞胺，它們的制備方法，它們?yōu)樗幬镉行С煞纸M成的藥物組合物，它們在制備抑制乙酰膽脂酶活性藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P25/28GK101054363SQ20071006582
公開日2007年10月17日 申請日期2007年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月20日
發(fā)明者邱明華, 顏健, 楊付梅, 易平, 周琳, 楊小生, 孫黔云 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所