專利名稱：一種含甲羥茋苷的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含甲羥茋苷的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
甲羥茋苷即4′-甲氧基-5-羥基茋-3-O-β-葡萄糖苷。所述甲羥茋苷的分子式為C21H24O8，化學(xué)結(jié)構(gòu)為 中國(guó)專利200510010757.X公開了甲羥茋苷在缺血性心腦血管疾病治療中的用途。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，甲羥茋苷水溶性較差。經(jīng)檢測(cè)，室溫下，甲羥茋苷在純水中的溶解度低于0.06mg/ml。采用常規(guī)條件下的助溶劑和增溶劑以及調(diào)節(jié)pH值等方法難以獲得適合臨床給藥需要的注射用溶液，因此制備適合非胃腸道途徑給藥的注射液存在困難。
調(diào)節(jié)pH值、加熱、添加表面活性劑等是提高化合物溶解度的常用方法。研究表明，對(duì)于制備穩(wěn)定的藥效濃度的甲羥茋苷藥物組合物，這些方法的價(jià)值有限。
例如，調(diào)節(jié)溶液pH值可以增加甲羥茋苷的溶解度，但室溫下，獲得濃度大于1mg/ml的甲羥茋苷水溶液，溶劑pH值約為12以上。本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員均熟知，臨床用溶液一般要求pH4.0~9.0范圍內(nèi)。此外，甲羥茋苷在高pH值的溶液中穩(wěn)定性較差，因此高pH值甲羥茋苷藥物組合物制劑的臨床應(yīng)用將進(jìn)一步受到限制。
加熱可以提高甲羥茋苷在水溶液中的溶解性，但提高的溶解度有限，而且加熱所得甲羥茋苷水溶液，在溫度下降時(shí)甲羥茋苷將重新析出，顯然，該方法并不適合制備成藥制劑。
研究表明，表明活性劑可以一定程度地提高甲羥茋苷的溶解度，但作用有限。例如，采用土溫80配制含1mg/ml甲羥茋苷水溶液，在pH4～9范圍內(nèi)，土溫80用量需達(dá)7.52～0％，然而供臨床使用的注射液一般要求土溫80用量應(yīng)當(dāng)在0.5％以內(nèi)。
顯然，在臨床制劑允許的范圍內(nèi)，通過調(diào)節(jié)pH值、添加吐溫類表面活性劑均不能獲得理想的臨用甲羥茋苷注射液的制劑方案。因此，研究開發(fā)含藥效濃度甲羥茋苷的穩(wěn)定的溶液型藥物組合物對(duì)于實(shí)現(xiàn)甲羥茋苷的臨床應(yīng)用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種含甲羥茋苷的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物可包含藥效濃度的甲羥茋苷，在低溫貯存時(shí)能夠保持穩(wěn)定，該組合物按照臨床常規(guī)用法用量配伍，可保持配伍溶液穩(wěn)定、澄明。
本發(fā)明含甲羥茋苷的藥物組合物征在于所述含甲羥茋苷的藥物組合物是一種含甲羥茋苷的溶液，該溶液包含甲羥茋苷以及用于溶解甲羥茋苷的溶劑，以體積計(jì)，所述溶劑包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇，其余量為水。
所述甲羥茋苷在上述溶劑中的濃度為2.5mg～75mg/ml。
所述甲羥茋苷在上述溶劑中的濃度最好為10mg～50mg/ml。
以體積計(jì)，在含甲羥茋苷的藥物組合物中，所述溶劑包含30～80％的乙醇，10～40％的丙二醇，其余量為水。
以體積計(jì)，在含甲羥茋苷的藥物組合物中，所述溶劑包含50％的乙醇，30％的丙二醇，其余量為水。
在含甲羥茋苷的藥物組合物中，所述水為純化水、注射用水、生理鹽水、葡萄糖溶液、葡萄糖氯化鈉溶液或緩沖溶液。
在含甲羥茋苷的藥物組合物中，所述緩沖溶液的pH值為6.0～9.0。
在含甲羥茋苷的藥物組合物中，所述藥物組合物的劑型為注射液、口服溶液。
含甲羥茋苷的藥物組合物在制備治療或預(yù)防缺血性心腦血管病藥物中的應(yīng)用。所述疾病為冠心病、腦梗死。
中國(guó)專利200510010757.X公開了以乙醇作為溶劑提取甲羥茋苷，但是甲羥茋苷在乙醇溶劑中的溶解特性以及乙醇在制備含甲羥茋苷藥用制劑中的用途并不明確。研究表明，甲羥茋苷在乙醇中具有良好的溶解度而在純水中的溶解度很低(＜0.06mg/ml)。一般地，一種溶質(zhì)在良溶劑中溶解后，加入低溶解度溶劑，將使溶質(zhì)在良溶劑中的溶解度顯著下降。中藥及天然藥物領(lǐng)域中采用“水提醇沉”或“醇提水沉”法分離提取物或利用混合溶劑進(jìn)行重結(jié)晶均是基于此原理。但是，本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，甲羥茋苷在乙醇-水混合溶劑中具有獨(dú)特的溶解行為，其規(guī)律與上述一般規(guī)律完全不同。作為甲羥茋苷良溶劑的乙醇，與甲羥茋苷低溶解度溶劑水混合時(shí)，在一定比例范圍內(nèi)，不良溶劑增加，混合溶劑對(duì)甲羥茋苷的溶解性沒有下降，反而出乎意料地有所升高。例如，室溫條件下，甲羥茋苷在純水中的溶解度＜0.06mg/ml；在無水乙醇中的溶解度約7mg/ml；出乎意料的是，在約50％~95％(v/v)的乙醇水溶液中，甲羥茋苷的溶解度均大于20mg/ml。此結(jié)果表明，50％~95％(v/v)的乙醇水溶液對(duì)甲羥茋苷具有“潛溶”作用，即一定比例范圍內(nèi)，乙醇-水混合溶劑對(duì)甲羥茋苷的溶解性優(yōu)于其中純水和純乙醇之任何一種單一溶劑。研究還發(fā)現(xiàn)，在15％乙醇-水溶液中，甲羥茋苷的溶解度約為0.2mg/ml；在30％乙醇-水溶液中，其溶解度約為1.5mg/ml；也就是說，超過一定的比例范圍，混合溶劑的“潛溶”性質(zhì)將不復(fù)存在。
本發(fā)明人還進(jìn)一步意外地發(fā)現(xiàn)，在上述乙醇-水溶液中，若加入一定量的丙二醇組成新的混合溶劑，則甲羥茋苷在該混合溶劑的一定比例范圍內(nèi)，溶解度可進(jìn)一步提高，即分別高于其在對(duì)應(yīng)單一溶劑(乙醇-水、丙二醇)中的溶解度。例如，以60％乙醇-水與丙二醇按照10∶5(v/v)的比例組成新的混合溶劑，則甲羥茋苷的溶解度約為67mg/ml，遠(yuǎn)高于其在60％乙醇-水及溶劑丙二醇中的溶解度(分別約為37mg/ml及20mg/ml)。該溶液經(jīng)低溫貯存考察，穩(wěn)定性良好。研究也發(fā)現(xiàn)，超過一定的比例范圍，混合溶劑的“潛溶”性質(zhì)亦將不再存在。
對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，注射液所含乙醇濃度不能過高。鑒于此，本發(fā)明采用注射用濃溶液實(shí)現(xiàn)可靜脈內(nèi)連續(xù)滴注給藥的注射劑。所謂注射用濃溶液是指在臨用前采用注射用生理鹽水稀釋至規(guī)定倍數(shù)，然后再通過靜脈推注或靜脈滴注途徑給藥的注射劑。試驗(yàn)表明，以乙醇-水或水-乙醇-丙二醇混合溶劑配制的甲羥茋苷注射液在注射用生理鹽水中的配伍穩(wěn)定性良好，而以丙二醇-水配制的樣品溶液，配伍不穩(wěn)定。此外，研究顯示，在一定條件下，混合溶劑的臨床配伍穩(wěn)定性優(yōu)于乙醇-水，且混合溶劑配制比例不同，樣品溶液的配伍穩(wěn)定性也有所區(qū)別。
由此可見，本發(fā)明首次闡明合適比例的乙醇-水和/或丙二醇混合溶劑可以對(duì)甲羥茋苷產(chǎn)生特定的“潛溶”作用；只有合適比例的乙醇-水和/或丙二醇混合溶劑才可以制備具有配伍穩(wěn)定性的注射用濃溶液，且該溶液可長(zhǎng)期低溫貯存，這些性質(zhì)對(duì)于制備可實(shí)際應(yīng)用于臨床的藥用制劑具有非常重要的意義。
由于水、乙醇、丙二醇均為藥學(xué)上可接受的溶劑，因此，基于本發(fā)明的目的及上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了一種可以包含高濃度甲羥茋苷的溶液型藥物組合物。在本文中，有時(shí)將含甲羥茋苷的藥物組合物簡(jiǎn)稱為甲羥茋苷藥物組合物。
本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物，包含甲羥茋苷，以及用于溶解甲羥茋苷的溶劑，以體積計(jì)，所述溶劑包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇，以及余量的水。
在本文中，如無特別說明，所述百分含量均為體積百分含量。根據(jù)中國(guó)藥典，溶劑乙醇如無特殊說明即指95％乙醇。
在本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物中，甲羥茋苷在所述溶劑中的濃度通常應(yīng)為不低于2.5mg/ml。
進(jìn)一步的，甲羥茋苷在所述溶劑中的濃度為5mg～100mg/ml。
優(yōu)選的，甲羥茋苷在所述溶劑中的濃度為10mg～50mg/ml。
在本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物中，甲羥茋苷的濃度應(yīng)不低于2.5mg/ml。根據(jù)本發(fā)明人進(jìn)行的藥理學(xué)活性試驗(yàn)結(jié)果，甲羥茋苷單次有效給藥劑量約為5mg/kg體重或以上；根據(jù)本領(lǐng)域內(nèi)常規(guī)的體表面積計(jì)算法，與這些劑量相對(duì)應(yīng)的人用劑量(以70kg體重計(jì)算)應(yīng)當(dāng)為56mg/次以上。顯然，如果采用1~20ml的常規(guī)臨床注射劑規(guī)格，則其溶液中所需甲羥茋苷濃度應(yīng)當(dāng)不低于2.5mg/ml。
本發(fā)明所用的溶劑可以顯著提高甲羥茋苷在溶液中的溶解度，同時(shí)提高甲羥茋苷藥物組合物在低溫保存時(shí)的穩(wěn)定性，由此實(shí)現(xiàn)甲羥茋苷的濃度不低于2.5mg/ml，以利于藥物制劑的制備和臨床用藥。
鑒于本發(fā)明之溶液可以采用生理鹽水、注射用水等稀釋，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，當(dāng)應(yīng)用本發(fā)明的溶劑時(shí)，即使甲羥茋苷的濃度低于2.5mg/ml，也應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的范圍。
在本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物中，所述溶劑還可進(jìn)一步包含水。
以體積計(jì)，所述溶劑優(yōu)選包含50～80％的乙醇，0～50％的丙二醇以及余量的水。
優(yōu)選的，所述溶劑為含有一定量丙二醇的混合溶劑，以體積計(jì)，所述溶劑包含30％～80％的乙醇，10％～40％的丙二醇，以及余量的水。
更優(yōu)選的，以體積計(jì)，所述溶劑包含40％～60％的乙醇，10％～30％的丙二醇，以及余量的水。
最優(yōu)選的，以體積計(jì)，所述溶劑包含50％的乙醇，30％的丙二醇，以及余量的水。
本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物中，所述混合溶劑中的水可以是純化水、注射用水、生理學(xué)上可接受的氯化鈉溶液或葡萄糖溶液(例如，0.9％氯化鈉水溶液、5％葡萄糖溶液、或葡萄糖氯化鈉溶液)、或生理學(xué)上可接受的緩沖溶液，例如Na2CO3-NaHCO3緩沖液、Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液、Tris緩沖液和Hepes緩沖液等。當(dāng)所述甲羥茋苷藥物組合物用于不同途徑給藥時(shí)，可以根據(jù)需要從上述種類的水中加以選擇，例如，用于注射給藥時(shí)，通常溶劑中的水應(yīng)為注射用水、生理鹽水、或緩沖液等；用于口服給藥等時(shí)，通?？捎眉兓?。
優(yōu)選的，所述混合溶劑中的水為pH6.0～9.0的生理學(xué)上可接受的緩沖溶液，例如pH約為6.0～9.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液等。
更優(yōu)選的，所述混合溶劑中的水優(yōu)選為pH為7.5～9.0的生理學(xué)上可接受的緩沖溶液。
最優(yōu)選的，所述混合溶劑中的水為pH約8.5的生理學(xué)上可接受的緩沖溶液，例如pH8.5的Na2CO3-NaHCO3緩沖液或Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液等。
本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物可用于胃腸外注射給藥。其中，用于靜脈給藥時(shí)，可直接滴注給藥或?qū)⑸鲜黾琢u茋苷注射液稀釋于0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液滴注給藥；用于肌內(nèi)給藥時(shí)，可直接注射給藥或以生理鹽水稀釋至適當(dāng)濃度后給藥。本發(fā)明的甲羥茋苷藥物組合物還可以用作口服給藥溶液，以及其它適合采用溶液形式給藥的制劑。
因此，本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物的劑型可為注射液、口服溶液、噴劑等。
進(jìn)一步的，本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物含有單位劑量的活性成分，單位劑量可以含甲羥茋苷5～1500mg，優(yōu)選含甲羥茋苷10～500mg，更優(yōu)選含甲羥茋苷50～200mg，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，含甲羥茋苷50mg。
包含單位劑量甲羥茋苷的溶液體積可以為0.5～250ml，優(yōu)選1～20ml，更優(yōu)選1～10ml，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，溶液體積為5ml。
本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物還可以任選含有其它藥學(xué)上常規(guī)使用的藥用輔料，例如，本發(fā)明的甲羥茋苷藥物組合物可任選增加混懸液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、甲基纖維素等；可任選含有合適的穩(wěn)定劑或抗氧劑，如亞硫酸氫鈉、維生素C等；當(dāng)用于口服給藥時(shí)，還可添加適當(dāng)?shù)某C味劑等，以改善口感。
本發(fā)明還提供了含甲羥茋苷的藥物組合物在制備治療或預(yù)防缺血性心血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，與空白對(duì)照組和陽性藥對(duì)照組相比，甲羥茋苷注射液對(duì)腦缺血和冠脈缺血具有顯著的治療作用。
本發(fā)明經(jīng)過大量試驗(yàn)研究，探索出一種采用混合溶劑改善藥物溶解度的方法。將該方法用于藥物制備，可以提供含有根據(jù)已知研究成果測(cè)算的有效治療量的甲羥茋苷的溶液，由此，本發(fā)明使得藥學(xué)活性成分甲羥茋苷能夠以治療有效量應(yīng)用于臨床，此與現(xiàn)有的技術(shù)水平相比有質(zhì)的改進(jìn)和提高。動(dòng)物試驗(yàn)及溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的甲羥茋苷藥物組合物安全有效、穩(wěn)定性良好，因此，該溶液具有較佳的臨床應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下文通過對(duì)本發(fā)明較佳實(shí)施方式的描述，詳細(xì)說明但不限制本發(fā)明。
在以下試驗(yàn)中所使用的甲羥茋苷均由昆明翔昊科技有限公司提供，純度99.1％，批號(hào)20060302。
本發(fā)明所用其它試驗(yàn)材料，如無特別說明，均為市售購買產(chǎn)品。
1.甲羥茋苷注射液的制備材料無水乙醇(或乙醇)，分析純；純水，自制；0.9％氯化鈉溶液，以純水配制；氯化鈉葡萄糖溶液，以注射用水配制；丙二醇，分析純，磷酸鹽緩沖溶液，以適量磷酸氫二鈉及磷酸二氫鈉及純水配制，溶液pH8.5～9.0。
實(shí)施例1一、處方原料 用量甲羥茋苷 250.00g無水乙醇 3.50L注射用水 至 5.00L制成 1000支二、制法無水乙醇3.50L，加入甲羥茋苷250.00g，40℃超聲使溶，注射用水定容至刻度，0.2μm微孔濾膜過濾，灌封于1000支安瓿瓶中。臨用時(shí)以0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液稀釋至適當(dāng)濃度。
實(shí)施例2一、處方原料 用量甲羥茋苷 50.00g無水乙醇 2.00L制成 1000支二、制法取處方量乙醇，加入甲羥茋苷50g，40℃超聲使溶，乙醇定容至刻度，0.2μm微孔濾膜過濾，灌封于1000支安瓿瓶中。
實(shí)施例3一、處方原料 用量甲羥茋苷 100.00g丙二醇 1.50L無水乙醇 2.50LNa2HPO4-NaH2PO4緩沖液 至 5.00L制成 1000支二、制法量取2.50L無水乙醇，加入1.50L丙二醇以及磷酸鹽緩沖液，混勻，加入甲羥茋苷100.00g，超聲使溶，緩沖液定容至刻度。過0.45μm的微孔濾膜，粗濾。續(xù)濾液過0.22μm的微孔濾膜，過1萬截留分子量的聚醚砜膜除熱原。棕色瓶充氮?dú)夤喾狻?br> 實(shí)施例4一、處方原料 用量甲羥茋苷 100.00g丙二醇 0.40L無水乙醇 0.80L0.9％氯化鈉溶液至2.00L制成 1000支二、制法量取處方量無水乙醇、丙二醇，混勻，加入甲羥茋苷100.00g，40℃超聲使溶，0.9％氯化鈉溶液定容至刻度。過0.45μm的微孔濾膜粗濾。續(xù)濾液過0.22μm的微孔濾膜，1萬截留分子量的PES膜除熱原。棕色瓶充氮?dú)夤喾?。臨用時(shí)以0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液稀釋至適當(dāng)濃度。
實(shí)施例5一、處方原料 用量甲羥茋苷 150.00g丙二醇 1.25L乙醇 10.50L葡萄糖氯化鈉溶液 至25.00L制成 1000瓶二、制法量取處方量乙醇、丙二醇以及氯化鈉葡萄糖溶液，混勻，加入甲羥茋苷150.00g，40℃超聲使溶，氯化鈉葡萄糖溶液定容至刻度。0.45μm的微孔濾膜粗濾。續(xù)濾液過0.22μm的微孔濾膜，1萬截留分子量的PES膜除熱原。棕色瓶充氮?dú)夤嘌b。
2.甲羥茋苷口服溶液的制備實(shí)施例6一、處方原料 用量甲羥茋苷 200.00g丙二醇 0.50L乙醇 3.00L純水 至 10.00L分裝成 1000支二、制法量取處方量乙醇、丙二醇及純水，混勻，加入110.00g甲羥茋苷，40℃超聲使溶，純水定容至刻度。0.45μm微孔濾膜過濾后，分裝到1000支玻璃瓶中。
3.甲羥茋苷在不同溶劑及混合溶劑中的溶解度比較實(shí)施例6pH對(duì)甲羥茋苷溶解度的影響一、材料去離子水；氫氧化鈉；鹽酸。
二、方法以0.2N氫氧化鈉及0.2N鹽酸溶液調(diào)節(jié)去離子水，使pH為5.0~12.0。精密量取上述溶液各20ml，分別加入適量甲羥茋苷，40℃超聲20min，溶液過飽和，室溫下靜置8小時(shí)后，0.45μm微孔濾膜過濾，該濾液為甲羥茋苷在不同pH值水溶液中的飽和溶液。HPLC法測(cè)定濾液中的甲羥茋苷含量，計(jì)算甲羥茋苷的溶解度。
三、結(jié)果結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，室溫下，當(dāng)溶劑pH值≤11.0，甲羥茋苷水溶液的溶解度均低于0.5mg/ml；溶劑pH值12，甲羥茋苷濃度約為1.0mg/ml，其終溶液pH約為11.3。
表1.pH對(duì)甲羥茋苷溶解度的影響

實(shí)施例7甲羥茋苷在乙醇-水溶液以及生理鹽水中的溶解度一、材料無水乙醇分析純；純水，自制；0.9％氯化鈉注射液。
二、方法以無水乙醇和純水配制系列濃度為15％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％(v/v)的乙醇水溶液。精密量取水、無水乙醇、0.9％氯化鈉注射液(生理鹽水)以及上述系列濃度的乙醇水溶液各20ml，分別加入適量甲羥茋苷，40℃超聲20min，溶液過飽和，室溫下靜置8小時(shí)后，0.45μm微孔濾膜過濾，該濾液為甲羥茋苷在不同濃度乙醇水溶液中的飽和濃度。采用HPLC法測(cè)定濾液中的甲羥茋苷含量，計(jì)算甲羥茋苷的溶解度。
三、結(jié)果結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明，室溫下，甲羥茋苷在純水以及生理鹽水中的溶解度均低于0.06mg/ml，在無水乙醇中溶解度約6.23mg/ml，最高溶解度是在一定濃度范圍的乙醇水溶液中，例如，在70％(v/v)乙醇水溶液中，甲羥茋苷溶解度高達(dá)52mg/ml。在50％~95％乙醇水溶液中，甲羥茋苷溶解度大于20mg/ml，均高于其在無水乙醇中的溶解度。結(jié)果表明，50％~95％乙醇水溶液對(duì)甲羥茋苷具有“潛溶”作用。
表2.甲羥茋苷在乙醇-水溶液以及生理鹽水(NS)中的溶解度

實(shí)施例8甲羥茋苷在丙二醇-水溶液中的溶解度一、材料1，2-丙二醇，分析純；純水，自制。
二、方法以丙二醇和純水配制系列濃度自20％(v/v)起的丙二醇水溶液。精密量取丙二醇以及上述系列濃度溶液各20ml，分別加入適量甲羥茋苷，40℃超聲20min，溶液過飽和，室溫下靜置8小時(shí)后，0.45μm微孔濾膜過濾，該濾液為甲羥茋苷在不同濃度丙二醇水溶液中的飽和濃度。HPLC法測(cè)定濾液中的甲羥茋苷含量，計(jì)算甲羥茋苷的溶解度。
三、結(jié)果結(jié)果如表3所示。
結(jié)果表明，室溫下，甲羥茋苷在丙二醇水溶液中的溶解度隨著溶液中丙二醇濃度的增加，溶解度也相應(yīng)增加，最高溶解度約20mg/ml。在35％的丙二醇水溶液中，甲羥茋苷的溶解度約為3.1mg/ml，該溶液不穩(wěn)定，室溫放置12小時(shí)后有溶質(zhì)甲羥茋苷析出。
表3 甲羥茋苷在丙二醇-水溶液中的溶解度

實(shí)施例9甲羥茋苷在乙醇-丙二醇-水混合溶劑中的溶解度一、材料無水乙醇，分析純；1，2-丙二醇，分析純；純水，自制。
二、方法精密量取45％、60％、75％(v/v)的乙醇水溶液，按體積比10∶1、10∶2、10∶2.5、10∶3、10∶4的比例精密加入丙二醇，制備混合溶劑。所得混合溶劑中，實(shí)際含丙二醇約為10％~30％(v/v)，含乙醇約32％~68％(v/v)。精密量取上述混合溶劑各20ml，分別加入適量甲羥茋苷，40℃超聲20min，溶液過飽和，室溫下靜置8小時(shí)后，0.45μm微孔濾膜過濾，該濾液為甲羥茋苷在不同混合溶液中的飽和濃度。HPLC法測(cè)定濾液中的甲羥茋苷含量，計(jì)算甲羥茋苷的溶解度。
三、結(jié)果結(jié)果如表4所示。結(jié)果表明，(1)以60％、75％乙醇-水與丙二醇按照一定比例配制的混合溶劑，對(duì)甲羥茋苷的溶解度既高于混合前的乙醇-水溶液，也高于單一溶劑丙二醇，也就是說，相對(duì)于乙醇-水與丙二醇而言，一定比例范圍的混合溶劑對(duì)甲羥茋苷具有“潛溶”作用。(2)鑒于本領(lǐng)域內(nèi)的一般技術(shù)要求(采用乙醇作為注射用溶劑，其最高濃度約60％，以75％或60％的乙醇-水與丙二醇按照10∶2.0~10∶4.0的比例配制混合溶劑，此時(shí)溶液中乙醇的實(shí)際含量均不大于50％，甲羥茋苷的濃度均高于30mg/ml。
表4.甲羥茋苷在乙醇-丙二醇-水混合溶劑中的溶解度 注(1)*不含丙二醇；(2)甲羥茋苷在丙二醇中的溶解度約為20mg/ml4.甲羥茋苷藥物組合物的藥效學(xué)研究一.材料受試藥物 甲羥茋苷注射液，按實(shí)施例3制備，批號(hào)20060106。
對(duì)照藥品 注射用燈盞花素(粉針)，50mg/瓶，批準(zhǔn)文號(hào)國(guó)藥準(zhǔn)字Z53020666，昆明龍津藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20050616；尼莫地平片，20mg/片，批準(zhǔn)文號(hào)國(guó)藥準(zhǔn)字H14022821，山西亞寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)050207。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 超重全雄SD大鼠，8～10月齡，體重400～500g；SPF級(jí)ICR小鼠，3～4周齡，雌雄兼用，體重18～24g；由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證SCXK(滇)2005-0008，發(fā)證機(jī)關(guān)云南省科學(xué)技術(shù)廳。
實(shí)驗(yàn)儀器 TMS-1024全自動(dòng)生化分析儀，日本東京株市會(huì)社；C2000-4血凝儀及LBY-NS血小板聚集儀，北京普利生集團(tuán)；BS110S電子分析天平，德國(guó)賽多利司有限公司；Centrifuge5810R冷凍離心機(jī)，Eppendorf公司；Millipore超純水處理系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司。
實(shí)驗(yàn)試劑 紅四氮唑(TTC)，試劑級(jí)，AMRESCO分裝，批號(hào)0765，上海生工出品；AST(紫外動(dòng)力學(xué)法、批號(hào)20050524)、LDH(紫外動(dòng)力學(xué)法、批號(hào)20050511)測(cè)定試劑盒，上?？迫A科技有限公司出品；TT(批號(hào)105030)、PT(批號(hào)105023)、APTT(批號(hào)1110071)及FIB(批號(hào)1320062)測(cè)定試劑盒，上海太陽生物技術(shù)有限公司出品。
統(tǒng)計(jì)方法 采用DAS ver1.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以x±SD表示，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，方差不齊用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)。
二.實(shí)驗(yàn)方法大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注(MCAO)模型雄性SD大鼠66只，體重400～500g，按體重隨機(jī)分為6組假手術(shù)組；模型組；陽性對(duì)照燈盞花素注射液10mg/kg組；甲羥茋苷樣品5、15mg/kg組；每組11只。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用3％的水合氯醛以300mg/kg的劑量腹腔注射麻醉動(dòng)物，頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)，由CCA分叉處向頭端依次游離，結(jié)扎頸外動(dòng)脈(ECA)的所有分支，然后分離頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，夾閉CCA。將做好的栓線經(jīng)ECA主干切口緩緩向ICA入顱方向推進(jìn)，以CCA分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)約2.5cm到達(dá)大腦中動(dòng)脈起始部，由此阻斷了MCA的血液供應(yīng)，扎緊ECA根部松扣，松開CCA，縫合皮膚，腹腔注射1ml生理鹽水補(bǔ)充體液。1h后拔出栓線進(jìn)行再灌注，恢復(fù)MCA的血液供應(yīng)，完成局灶性腦缺血-再灌注模型。假手術(shù)組除了不插入線栓外，其余步驟相同。各組動(dòng)物在手術(shù)完成即刻和缺血再灌注后6小時(shí)由尾靜脈注射給藥，假手術(shù)組和模型組注射等容量的生理鹽水2ml/kg。
表5

以上標(biāo)準(zhǔn)滿分為10分，分?jǐn)?shù)越高，表明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重動(dòng)物于術(shù)后6h和缺血再灌注后24小時(shí)，根據(jù)運(yùn)動(dòng)行為表現(xiàn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，以此作為腦功能障礙指標(biāo)。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表5再灌注24h，經(jīng)神經(jīng)功能評(píng)分后，腹主動(dòng)脈插管取血，一份分離血清于-20℃保存，用于AST、LDH的活性測(cè)定；一份用3.8％枸櫞酸鈉以1∶9抗凝，1400rpm離心10min制備富血小板血漿(PRP)，4000rpm離心10min制備貧血小板血漿(PPP)。按比濁法測(cè)定ADP-2Na誘導(dǎo)的血小板聚集率，ADP的終濃度為6mol/L，按試劑盒方法分別測(cè)定TT、PT、APTT及FIB。取血后快速斷頭取腦，放入冰生理鹽水中去除嗅球、小腦和低位腦干，吸干水分稱取腦重，沿冠狀切成5片，置入5ml含有4％TTC及1mol/L K2HPO40.1ml的溶液中，避光于37℃溫孵30min，其間每隔5~8min翻動(dòng)一次。經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗死組織呈白色，將梗塞部位剪下稱重，以重量求面積法計(jì)算梗死組織重量占雙側(cè)大腦半球重的百分比作為腦梗塞范圍。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能障礙及腦梗塞范圍的影響由表6可見，模型大鼠清醒后活動(dòng)減少，出現(xiàn)不同程度的運(yùn)動(dòng)障礙，與假手術(shù)組相比差異顯著。陽性對(duì)照燈盞花素、甲羥茋苷兩劑量組，能明顯減輕MCAO再灌注大鼠的神經(jīng)功能障礙，顯著降低腦梗塞范圍。
表6.甲羥茋苷對(duì)MCAO大鼠神經(jīng)功能障礙及腦梗塞范圍的影響(X±SD)

與假手術(shù)組相比△△P＜0.01；與模型組相比*P＜0.05，**P＜0.01；(2)對(duì)模型大鼠ADP誘導(dǎo)的血小板聚集及凝血的影響由表7可見，造模大鼠纖維蛋白原含量明顯增加，陽性對(duì)照燈盞花素能顯著降低FIB的含量；甲羥茋苷15mg/kg能顯著延長(zhǎng)APTT時(shí)間，降低血小板聚集率，5mg/kg對(duì)FIB的含量有顯著降低作用；其余各組對(duì)纖維蛋白原含量有降低趨勢(shì)。
表7甲羥茋苷對(duì)MCAO再灌注大鼠血凝及血小板聚集的影響(X±SD)

與假手術(shù)組相比△P＜0.05；與模型組相比*P＜0.05，**P＜0.01；(3)對(duì)模型大鼠血清AST、LDH的影響由表8可見，模型大鼠血清LDH活性明顯高于假手術(shù)組，陽性對(duì)照燈盞花素、甲羥茋苷兩劑量組能顯著降低造模大鼠LDH的釋放，但對(duì)AST活性無明顯影響。
表8 QHQ粉針對(duì)MCAO再灌注大鼠血清AST及LDH的影響(x±SD)

與假手術(shù)組相比△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組相比*P＜0.05，**P＜0.01四.結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)室條件下，甲羥茋苷注射液于手術(shù)后即刻和缺血再灌注6h靜脈注射5、15mg/kg，能明顯減少M(fèi)CAO再灌注大鼠的腦梗塞范圍，使行為障礙程度得到明顯改善，并能明顯降低血清中LDH的釋放，降低纖維蛋白原的含量，抑制血小板聚集率。結(jié)果表明甲羥茋苷注射液對(duì)缺血性心腦血管疾病有明顯保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1.一種含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物是一種含甲羥茋苷的溶液，該溶液包含甲羥茋苷以及用于溶解甲羥茋苷的溶劑，以體積計(jì)，所述溶劑包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇，其余量為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于所述甲羥茋苷在上述溶劑中的濃度為2.5mg～75mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在所述甲羥茋苷在上述溶劑中的濃度為10mg～50mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于，以體積計(jì)，所述溶劑包含30～80％的乙醇，10～40％的丙二醇，其余量為水。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于，以體積計(jì)，所述溶劑包含50％的乙醇，30％的丙二醇，其余量為水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、4～5所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于所述水為純化水、注射用水、生理鹽水、葡萄糖溶液、葡萄糖氯化鈉溶液或緩沖溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于所述緩沖溶液的pH值為6.0～9.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含甲羥茋苷的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物的劑型為注射液、口服溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含甲羥茋苷的藥物組合物在治療或預(yù)防缺血性心腦血管病藥物中的應(yīng)用，其特征在于含甲羥茋苷的的藥物組合物用于治療或預(yù)防疾病為冠心病、腦梗死。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含甲羥茋苷的藥物組合物溶液及其制備方法，該組合物包含甲羥茋苷以及用于溶解甲羥茋苷的溶劑。以體積計(jì)，所述溶劑包含50％～90％的乙醇，0％～60％的丙二醇以及剩余量的水。所述組合物中，甲羥茋苷的濃度可不低于2.5mg/ml。低溫貯存時(shí)，該組合物的穩(wěn)定性較好。該組合物可通過靜脈滴注、肌肉注射等胃腸外途徑給藥，也可用于口服給藥。
文檔編號(hào)A61K47/10GK101036663SQ20071006581
公開日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2007年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日
發(fā)明者胡琳, 胡群, 何金星, 戴家紅, 趙金華 申請(qǐng)人:昆明翔昊科技有限公司