專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取石杉?jí)A甲的方法，特別涉及一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法。
背景技術(shù)：
隨著世界老齡人口的迅速增加,老年癡呆癥(Alzheimer' s disease,AD)病人日益增多，已成為繼心血管疾病、腫瘤病后威脅老年人生命的第三位疾病。AD臨床上主要變現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能減退，并伴有行為障礙及情緒異常等，直至生活不能自理。在65歲以上人群中，西方人的患病率為5%左右，我國(guó)60歲以上人的患病率為3. 4 3. 9%。AD病理改變主要為皮質(zhì)彌漫性萎縮，溝回增寬，腦室擴(kuò)大，神經(jīng)元大量減少，并可見(jiàn)老年斑(SP)，神經(jīng) 原纖維結(jié)(NFT)等病變，膽堿乙?；讣耙阴Ｄ憠A含量顯著減少。神經(jīng)病理學(xué)的研究表明，在AD病人那個(gè)，學(xué)習(xí)和記憶能力的喪失與乙酰膽堿神經(jīng)功能的下降有直接的關(guān)系。所以目前治療策略的研究多集中在乙酰膽堿的能替代療法，即尋找新的中樞擬膽堿藥。其中乙酰膽堿酯酶抑制劑是目前研究最多并廣泛應(yīng)用于臨床的一類(lèi)藥物。該類(lèi)藥物通過(guò)抑制乙酰膽堿酶(acetylcholinesterase, AChE)對(duì)乙酰膽堿的水解作用而提高突觸間的乙酰膽堿濃度。石杉?jí)A甲作為第二代乙酰膽堿酶抑制劑，由于其獨(dú)特的藥理特征和低毒性，越來(lái)越引起人們的高度重視。石杉喊甲(huperzine A)是從石杉科植物蛇足石杉[Huperzm serrata(Thumb.)Trey.]中提取的一種石松生物堿。20世紀(jì)80年代由中國(guó)科學(xué)家首先發(fā)現(xiàn)，石杉?jí)A甲易通過(guò)血腦屏障進(jìn)入中樞，兼具有中樞及外周治療作用，在治療老年性癡呆癥、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶作用、改善空間記憶障礙等方面取得了可喜成就，成為全世界關(guān)注的研究熱點(diǎn)之一。近年來(lái)，石杉?jí)A甲藥理作用的研究不斷深化擴(kuò)展，顯示出多方位、多角度的抗衰促智作用。目前，石杉?jí)A甲作為食品添加劑或營(yíng)養(yǎng)保健品已在美國(guó)互聯(lián)網(wǎng)上銷(xiāo)售，用于提高記憶功能，在國(guó)內(nèi)，它也已經(jīng)作為治療AD的新藥被批準(zhǔn)上市。由于原料短缺，現(xiàn)在市場(chǎng)上石杉?jí)A甲供不應(yīng)求。目前，石杉?jí)A甲主要是從中草藥千層塔中提取，其生產(chǎn)主要步驟是原料處理(挑選、粉碎)一浸潰(酸水浸泡)一濃縮一萃取一柱層析一精制等，收率底，純度受限制，生產(chǎn)規(guī)模小，不能滿足市場(chǎng)需求。現(xiàn)已有企業(yè)米用有機(jī)溶劑回流提取、超聲提取和微波提取，回收率聞，但是廣品的純度低，對(duì)后續(xù)分離純化帶來(lái)困難；而采用酸水冷浸和酸水滲漉法產(chǎn)品純度相對(duì)較高，但是提取率較低。精制方法中，現(xiàn)有企業(yè)采用“高效液相色譜法”或“高速逆流色譜分離法”分離出石杉?jí)A甲含量雖高，但生產(chǎn)量小，大多局限于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，若用于大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，不僅設(shè)備昂貴而且對(duì)技術(shù)操作人員素質(zhì)要求非常高；工業(yè)化生產(chǎn)大多采用樹(shù)脂層析法來(lái)進(jìn)行純化，分離出的產(chǎn)品雖然純度提高，但回收率低。再加上，千層塔資源分布星散，資源更新周期較長(zhǎng)，可供開(kāi)采的天然資源少，藥材價(jià)格成倍增長(zhǎng)，而且有效成分在全草中含量很低。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明旨在提供一種有利于大生產(chǎn)、產(chǎn)品得率高且純度高的從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法。本提供提供一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，包括以下步驟步驟a :備料，將千層塔原料粉碎至10-20目；步驟b :提取，將粉碎好的千層塔原料投入到連續(xù)的逆流提取機(jī)組中，用酸水溶液浸泡，之后，控制提取溫度及流速，再用酸水動(dòng)態(tài)提取，收集提取液；步驟c :萃取，在提取液中加入堿液，氯仿萃取至水溶液中生物堿被氯仿萃取完全，將氯仿萃取液倒入減壓回收器，減壓濃縮浸膏；步驟d:柱層析，將浸膏用低濃度乙醇溶解，采用反向?qū)游?，用高濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味；步驟e :結(jié)晶，向回收乙醇后的洗脫液中加入丙酮-氯仿進(jìn)行結(jié)晶，洗滌，干燥。優(yōu)選地，所述酸水溶液是PH值為2-3的硫酸溶液。優(yōu)選地，所述堿液的PH值為8-10。優(yōu)選地，所述堿液用氨水溶液調(diào)節(jié)pH值為9。優(yōu)選地，其特征在于，所述步驟c用碘化鉍鉀試劑在酸性溶液中與生物堿生成桔紅色沉淀，來(lái)檢測(cè)以確定萃取完全。優(yōu)選地，所述步驟d用10 %乙醇水溶液溶解，采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，用40%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。優(yōu)選地，所述步驟b為連續(xù)逆流提取法，提取過(guò)程為動(dòng)態(tài)提取，通過(guò)控制提取溫度，不斷更新溶劑，加快有效成分的溶出。本發(fā)明提供的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，具有如下有益效果(I)采用連續(xù)逆流提取法，提取過(guò)程為動(dòng)態(tài)提取，通過(guò)控制提取溫度，不斷更新溶齊U，加快有效成分的溶出，提高石杉?jí)A甲回收率，縮短提取時(shí)間。不但解決了溶劑回流提取等帶來(lái)的產(chǎn)品純度低的問(wèn)題，還解決了酸水冷浸和酸水滲漉法產(chǎn)品提取率低的問(wèn)題；(2)采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，由于石杉?jí)A甲對(duì)硅膠、氧化鋁、C18不可逆吸附比較嚴(yán)重，分離出的產(chǎn)品雖然純度提高，但回收率低，而腈基鍵合硅膠樹(shù)脂對(duì)石杉?jí)A甲具有特殊選擇性，回收率、純度都可提高到百分之九十以上，加之進(jìn)一步結(jié)晶產(chǎn)品純度可以達(dá)到98%以上；(3)采用連續(xù)逆流提取法，適用于大批量生產(chǎn)，在提高了產(chǎn)品回收率的基礎(chǔ)上，避免使用大量有機(jī)溶劑提取，還大大減少了酸水的用量，以及縮短了提取時(shí)間；(4)采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，洗脫劑毒性非常小。


圖I為本發(fā)明提出的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法的流程示意圖；圖2為本發(fā)明提出的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法的具體流程圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖并通過(guò)具體實(shí)施方式
來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案請(qǐng)參照?qǐng)D1，本發(fā)明提供的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法主要包括步驟a備料、步驟b提取、步驟c萃取、步驟d柱層析及步驟e結(jié)晶等步驟。請(qǐng)參照?qǐng)DI和圖2，每一所述步驟具體如下步驟a :備料，將千層塔原料粉碎至10-20目；步驟b :提取，將粉碎好的千層塔原料投入到連續(xù)的逆流提取機(jī)組中，用酸水溶液浸泡，之后，控制提取溫度及流速，再用酸水動(dòng)態(tài)提取，收集提取液；
步驟c :萃取，在提取液中加入堿液，氯仿萃取至水溶液中生物堿被氯仿萃取完全，將氯仿萃取液倒入減壓回收器，減壓濃縮浸膏；步驟d:柱層析，將浸膏用低濃度乙醇溶解，采用反向?qū)游?，用高濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味；步驟e :結(jié)晶，向回收乙醇后的洗脫液中加入丙酮-氯仿進(jìn)行結(jié)晶，洗滌，干燥。本實(shí)施例中，步驟b所用的所述酸水溶液是PH值為2-3的硫酸溶液,約浸泡12小時(shí)，之后采用6倍量硫酸水溶液，溫度控制在50°C，動(dòng)態(tài)提取8小時(shí)。步驟c中所用的所述堿液的PH值可以在8-10之間，但所述堿液優(yōu)選用氨水溶液調(diào)節(jié)pH值為9，。步驟c可用碘化鉍鉀試劑在酸性溶液中與生物堿生成桔紅色沉淀，來(lái)檢測(cè)以確定萃取完全。步驟d用10 %乙醇水溶液溶解，采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，用4-6倍柱體積的40%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。步驟b為連續(xù)逆流提取法，提取過(guò)程為動(dòng)態(tài)提取，通過(guò)控制提取溫度，不斷更新溶齊U，加快有效成分的溶出。本發(fā)明提供的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，具有如下有益效果(I)采用連續(xù)逆流提取法，提取過(guò)程為動(dòng)態(tài)提取，通過(guò)控制提取溫度，不斷更新溶齊U，加快有效成分的溶出，提高石杉?jí)A甲回收率，縮短提取時(shí)間。不但解決了溶劑回流提取等帶來(lái)的產(chǎn)品純度低的問(wèn)題，還解決了酸水冷浸和酸水滲漉法產(chǎn)品提取率低的問(wèn)題；(2)采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，由于石杉?jí)A甲對(duì)硅膠、氧化鋁、C18不可逆吸附比較嚴(yán)重，分離出的產(chǎn)品雖然純度提高，但回收率低，而腈基鍵合硅膠樹(shù)脂對(duì)石杉?jí)A甲具有特殊選擇性，回收率、純度都可提高到百分之九十以上，加之進(jìn)一步結(jié)晶產(chǎn)品純度可以達(dá)到98%以上；(3)采用連續(xù)逆流提取法，適用于大批量生產(chǎn)，在提高了產(chǎn)品回收率的基礎(chǔ)上，避免使用大量有機(jī)溶劑提取，還大大減少了酸水的用量，以及縮短了提取時(shí)間；(4)采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，洗脫劑毒性非常小。上面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了示例性的描述，顯然本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)并不受上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行的各種改進(jìn)，或未經(jīng)改進(jìn)將本發(fā)明的構(gòu)思和技術(shù)方案直接應(yīng)用于其它場(chǎng)合的，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟a :備料，將千層塔原料粉碎至10-20目； 步驟b :提取，將粉碎好的千層塔原料投入到連續(xù)的逆流提取機(jī)組中，用酸水溶液浸泡，之后，控制提取溫度及流速，再用酸水動(dòng)態(tài)提取，收集提取液； 步驟c :萃取，在提取液中加入堿液，氯仿萃取至水溶液中生物堿被氯仿萃取完全，將氯仿萃取液倒入減壓回收器，減壓濃縮浸膏； 步驟d:柱層析，將浸膏用低濃度乙醇溶解，采用反向?qū)游?，用高濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無(wú)醇味； 步驟e :結(jié)晶，向回收乙醇后的洗脫液中加入丙酮-氯仿進(jìn)行結(jié)晶，洗滌，干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述酸水溶液是PH值為2-3的硫酸溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述堿液的PH值為8-10。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述堿液用氨水溶液調(diào)節(jié)pH值為9。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述步驟c用碘化鉍鉀試劑在酸性溶液中與生物堿生成桔紅色沉淀，來(lái)檢測(cè)以確定萃取完全。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述步驟d用10%乙醇水溶液溶解，采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，用40%乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述步驟b為連續(xù)逆流提取法。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，所述提取過(guò)程為動(dòng)態(tài)提取，通過(guò)控制提取溫度，不斷更新溶劑，加快有效成分的溶出。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法，主要包括備料、提取、萃取、柱層析及結(jié)晶等步驟。所述提取采用連續(xù)逆流提取法，可加快有效成分的溶出，提高石杉?jí)A甲回收率，縮短提取時(shí)間。所述柱層析采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，回收率、純度可提高到百分之九十以上；采用腈基鍵合硅膠樹(shù)脂反相層析，洗脫劑毒性非常小。
文檔編號(hào)C07D221/22GK102702101SQ20121017490
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月23日
發(fā)明者劉軍, 王彬, 袁智 申請(qǐng)人:長(zhǎng)沙市惠瑞生物科技有限公司