專利名稱：防治流感病毒感染的寡核苷酸藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制流感病毒復制和增強宿主抗病毒力的寡核苷酸。本發(fā)明還涉及含此寡核苷酸的藥物組合物以及用途。
背景技術(shù)：
流感是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。該病潛伏期短，傳播迅速。在流行季節(jié)，可造成世界人口約20％的感染率，每年由于該傳染病死亡的人數(shù)達25至50萬人(世界衛(wèi)生組織2002年報告，11月26日)。流感病毒分甲、乙、丙三型，其中甲型流感病毒威脅性最大。根據(jù)其神經(jīng)氨酸酶(NA)和血凝素(HA)的變異，甲型病毒又可分為許多不同的亞型。目前已確定的HA亞型為15種，NA為9種(Cox和Subbarao，The Lancet，3541277-1282，1999)，不同HA和NA亞型的組合形成了大量甲型病毒的亞型。流感病毒為RNA病毒，致病力強，易發(fā)生變異，若人群對變異株缺乏免疫力，則很容易發(fā)生爆發(fā)性流行。近年來，人類在努力控制人流感病毒感染的同時，禽流感病毒對人類的潛在威脅也愈來愈受到重視。
當前，防治流感的最有效手段之一是使用滅活流感病毒疫苗來降低流感的發(fā)病率。但由于所制備疫苗具有病毒株特異性，每年的疫苗均需使用當年可能流行的病毒株進行制備。另外，疫苗所誘導的免疫反應(yīng)為IgG型，一般只能保持6個月左右(Castle，ClinicalInfectious Diseases，31578-585，2000)。用于治療流感病毒感染的另一種手段是使用抗病毒制劑。這些制劑包括Amamtadine，Rimatadine，Relenza和Tamiflu。臨床結(jié)果證明，盡管使用這些制劑對部分患者有一定的療效，但其很容易誘導產(chǎn)生病毒抗性株和具有很強的副作用，特別對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響很大(Wenzel，Journal of AmericanMedicial Assiciation，2831057-1059，2000)。
由此可見，人類面臨的巨大挑戰(zhàn)是尋找一種療效高、副作用小或無副作用、不易誘導產(chǎn)生變異病毒株的新型抗流感病毒制劑和方法。本發(fā)明可提供一種滿足這一迫切需要的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類有效的抑制流感病毒復制和/或相關(guān)宿主基因表達的藥物。
流感病毒侵染細胞后，通過病毒基因的表達和與宿主多種不同基因產(chǎn)物的相互作用造成細胞病變。很顯然，通過對病毒和異常表達的宿主基因的調(diào)節(jié)，可以達到防治流感的目的。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)某些寡核苷酸具有治療流感病毒感染和調(diào)節(jié)宿主抗病毒能力的作用。
所述的寡核苷酸的特征是(1)含有7～75個核苷酸；(2)含有通過非手性5′到3′磷酸核苷間鍵連接的7～75個鄰接的核糖基團；(3)互補于流感病毒基因和宿主相關(guān)靶基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止區(qū)；(4)具有75℃～115℃的熔解溫度(Tm，1毫摩爾濃度)當本發(fā)明所述寡核苷酸用作治療流感病毒感染時，可使用一種，也可使用二種或更多種。當使用多種寡核苷酸時，這幾種寡核苷酸將各自與相同或不同的靶基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止區(qū)的不同區(qū)域互補，所述靶基因包括流感病毒基因和宿主細胞相關(guān)基因。
例如，當使用二種寡核苷酸時，這二種寡核苷酸可以與同一個流感病毒基因或宿主細胞基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始位點、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止位點的不同區(qū)域互補；二種寡核苷酸也可以與不同的流感病毒基因或宿主細胞基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始位點、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止位點的區(qū)域互補；還可以第一種寡核苷酸與流感病毒基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始位點、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止位點的區(qū)域互補，第二種寡核苷酸與宿主細胞基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始位點、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止位點的區(qū)域互補。
優(yōu)選地，上述寡核苷酸由10～26個核苷酸組成，具有40℃～85℃的熔解溫度(Tm，l微微摩爾濃度)。
所述寡核苷酸還可經(jīng)化學修飾成為修飾性寡核苷酸，如在糖基2′位上帶有取代基團的修飾性寡核苷酸，其也具有較好的抗流感病毒的作用，這些基團包括氧、甲氧基、丙氧基、甲氧-乙氧基、氟、氯、溴、碘。
在一些實例中，修飾性寡核苷酸在3′端和/或5′端帶有保護基團。
所述修飾性寡核苷酸還可以是3′末端封閉和/或5′末端封閉的。
本發(fā)明所述的寡核苷酸包括核糖寡核苷酸和脫氧核糖寡核苷酸。所述寡核苷酸序列選自SEQ ID NO1-43。
本發(fā)明所述的寡核苷酸可以是反義寡核苷酸，包括靶向流感病毒基因的反義寡核苷酸序列和靶向動物或人基因的反義寡核苷酸序列。代表性的反義寡核苷酸的序列見表2和表3。
用本發(fā)明所述的寡核苷酸作為活性物質(zhì)可以制備多種抗流感病毒的藥物組合物，適用于動物和人。所述的動物包括鳥類、禽類，如雞等。所述藥物組合物中可以含有各種藥學上可接受的賦形劑、輔劑。所述藥物組合物中，可以含有一種或幾種所述寡核苷酸，比如，可含二種、三種、四種、五種或五種以上的修飾性寡核苷酸。
在有些實例中，本發(fā)明提供一種含二種或二種以上抑制流感病毒或宿主基因表達的寡核苷酸的藥物組合物，其中至少有一種寡核苷酸的靶基因是流感病毒基因，至少有一種寡核苷酸的靶基因不是流感病毒基因。
本發(fā)明所指的流感病毒和宿主相關(guān)基因包括，但不限于，表1所列。在有些實例中，藥物組合物所含的反義寡核苷酸可從表2、3中選出。
本發(fā)明提供的寡核苷酸對于動物或人的給藥劑量為每公斤體重0.01～100mg。
發(fā)明的詳細描述本發(fā)明涉及可用于抑制流感病毒復制及相關(guān)宿主基因表達的寡核苷酸及其藥物組合物，以及用此寡核苷酸抗流感病毒的方法。因此，發(fā)明所提供的藥物既可用于治療流感病毒感染相關(guān)疾病，又可用于預(yù)防流感病毒的感染。
本發(fā)明的藥物組合物，方法是利用基因調(diào)控寡核苷酸來調(diào)節(jié)靶基因表達，這些基因調(diào)控寡核苷酸(或稱為調(diào)控分子)包括反義寡核苷酸。調(diào)控的方式可以是用一種調(diào)控分子去控制一種涉及流感病毒復制的基因，例如流感病毒RNA聚合酶(PA，PB1，PB2)，非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)，NA，NP，HA和M基因。調(diào)控還可以采用多種組合的方式，例如，采用不同類型調(diào)控分子的組合；針對同一基因，但不同位點的多種調(diào)節(jié)分子組合；針對不同基因的多種調(diào)節(jié)分子組合及上述各種組合方式形成的新的組合。
本發(fā)明的修飾性寡核苷酸具有特定的結(jié)構(gòu)和物理化學特性，例如經(jīng)過對堿基、糖基及核苷酸之間的磷酸酯鍵的修飾，末端保護，質(zhì)子化處理等化學修飾，形成含非手性磷酸酯鍵、修飾性核糖和脫氧核糖取代基等特定結(jié)構(gòu)，使之具有抗酸性、抗核酸酶等物理化學特性。
本發(fā)明的藥物組合物中含有一種或多種能夠抗流感病毒感染和增強抗病毒力的寡核苷酸。這些寡核苷酸包括反義寡核苷酸。寡核苷酸的靶位點可以是某一基因的一個或多個區(qū)域，也可以是多個基因的一個以上的位點。
本發(fā)明的藥物組合物和應(yīng)用方法適用于任何與流感病毒感染有關(guān)的基因，改變或調(diào)節(jié)這些基因的表達可以對流感病毒感染的產(chǎn)生治療效果。盡管在病毒感染過程中，一些主要基因起著重要的作用，但在大多數(shù)情況下，疾病往往涉及多個病毒基因以及與病毒發(fā)生相互作用的宿主細胞內(nèi)基因。因此，本發(fā)明不僅提供了針對單一基因(例如，流感病毒RNA聚合酶)的藥物，而且還提供了針對多個基因或單一基因的不同區(qū)域的藥物組合，或以上兩種藥物的組合。
在表1中列出了代表性靶基因，這些基因可用于設(shè)計基因調(diào)節(jié)藥物。
I本發(fā)明的藥物A.調(diào)節(jié)基因表達的藥物任何以核酸為基礎(chǔ)的制劑均可用于本發(fā)明的藥物，其中包括反義寡核苷酸。這些技術(shù)方法的共同點是通過Watson-Crick堿基配對原理，與其靶基因mRNA結(jié)合。因此，本發(fā)明涉及在嚴格條件下，多核苷酸與相關(guān)基因序列之間的雜交。這里所指的嚴格條件是一定程度的錯配，可導致雜交體核酸無法形成。多核苷酸指的是可用于抑制流感病毒相關(guān)基因表達的分子，其也可作為探針或引物，用于疾病診斷和實驗室研究。
寡核苷酸指的是含核苷酸(核糖核酸，脫氧核糖核酸或兩者)的分子，這些核苷酸通過5′與3′端或5′與2′端連接，所用的核苷酸可以是天然的，也可以是化學合成的類似物，這些類似物可與天然核酸形成配對。例如，氮雜(aza)和脫氮雜(deaza)嘧啶類似物，氮雜(aza)和脫氮雜(deaza)嘌呤類似物，及其它雜環(huán)堿基類似物。這些堿基類似物包括在嘧啶或嘌呤中的一個或多個碳氮原子由氧、硫、硒、磷等取代。
反義寡核苷酸是化學合成的短DNA或RNA，其可通過堿基配對與mRNA靶結(jié)合，從而阻斷mRNA的翻譯或通過激活RNaseH降解mRNA。反義寡核苷酸的作用可通過抑制RNA的拼接、翻譯和細胞核與細胞質(zhì)之間的輸送過程來實現(xiàn)。作用機理受寡核苷酸的母體結(jié)構(gòu)改變的影響。反義寡核苷酸可以互補于整個基因序列，也可以互補于靶基因的一部分。
典型的設(shè)計反義寡核苷酸的方法包括(1)選擇一個與靶區(qū)域鄰近或重迭的寡核苷酸，(2)測定與靶基因結(jié)合的Gibbs自由能水平，(3)分析雜交熔解溫度(Tm)，(4)進行序列庫分析，以確定其靶位點所處區(qū)域，例如，5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止區(qū)。優(yōu)選的反義寡核苷酸一般鄰近于翻譯起始區(qū)或至少有一個核苷酸與翻譯起始點重迭。在有些實例中這種重迭不少于三個核苷酸。
基于RNA的二級和高級結(jié)構(gòu)特征，反義RNA或DNA的設(shè)計一般可選在5′端區(qū)域。在有些情況下，可選在3′端區(qū)域，或在RNA拼接點周圍。
本發(fā)明的反義寡核苷酸可通過Gibbs自由能分析來確定其與靶RNA的結(jié)合強度。這一分析可通過計算機程序進行，常用的程序可在ftp://rna.chem.rochester.edu網(wǎng)站找到，并可參考Matthews等(J.Mol.Biol，1999，288，911-940和RNA，1999，5，1458-1469)。寡核苷酸與靶RNA雜交分子的Gibbs自由能一般≤-20kcal(37℃)，優(yōu)選為≤-25kcal。對于一個12-14個單位的寡核苷酸，其自由能為≤-15kcal；15-17單位的寡核苷酸的雜交自由能為≤-20kcal；18-20單位的寡核苷酸的雜交自由能為≤-25kcal；21-23單位的寡核苷酸的雜交自由能為≤-30kcal；24-26個單位的寡核苷酸的雜交自由能為≤-35kcal。
因此，本發(fā)明所提供的寡核苷酸長度為7～75個核苷酸，優(yōu)選長度為10～26個核苷酸；熔解溫度(Tm)約為75℃～115℃(1毫摩爾濃度)，優(yōu)選熔解溫度40℃～85℃(1微微摩爾濃度)；互補于靶基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)或終止區(qū)。靶基因可以是表1中的任選基因，或其它基因，其表達的調(diào)節(jié)可對流感病毒感染相關(guān)的病癥產(chǎn)生治療效果。
本發(fā)明所述的一個反義寡核苷酸的長度可以是5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100或多于100個核苷酸。優(yōu)選用長度為5～75個核苷酸，更優(yōu)選長度為12～26個核苷酸。
反義寡核苷酸可利用在本技術(shù)領(lǐng)域熟知的方法，通過化學合成或酶連接的方式進行制備。另外，反義寡核苷酸還可以利用表達載體在生物體內(nèi)產(chǎn)生。盡管在表3、4、5中所例舉的反義寡核苷酸均為脫氧核糖核酸，其也可以是核糖核酸，例如，用尿嘧啶取代胸腺嘧啶，用核糖基代替脫氧核糖基。因此，本發(fā)明的寡核苷酸可以完全由脫氧核糖核酸組成，也可以完全由核糖核酸組成，或由脫氧核糖核酸和核糖核酸混合組成。
本發(fā)明所提供的反義寡核苷酸可以是完全同源于表2、3中所列舉的序列，但也可以與所列序列的同源性≥60％，如具有百分之60，70，80，90，95或99的同源性。這種序列同源性分析可采用在本技術(shù)領(lǐng)域熟知的方法進行測定，例如，F(xiàn)asta程序(OxfordMolecular Group lnc)，BLAST(WWW.ncbi.nlm.nih.gov)(Atschul等，1997，NucleicAcids Res，25，3389-3402)。程序的分析參數(shù)均采用程序推薦設(shè)制。
本發(fā)明的反義寡核苷酸的G∶C成份一般為大于35％，優(yōu)選的比例為大于40％，最佳比例為大于45％。
B.核酸的化學修飾為了有效地在體內(nèi)應(yīng)用寡核苷酸，對其進行化學修飾可顯著地增加寡核苷酸抗酸和抗酶降解的穩(wěn)定性，例如，2′-O-甲基、2′-O-烯丙基、交接式核酸(locked nucleic acids，LNA)和肽鏈核酸(peptide nucleic acids，PNA)。
本發(fā)明所提供的寡核苷酸可以用化學的方式進行修飾。所述修飾是在分子水平上對天然核酸分子結(jié)構(gòu)進行一處或多處化學修飾。
包括以下化學修飾1)對堿基、糖基及核苷酸之間的磷酸酯鍵的修飾，包括增加一些取代基，例如，二胺(diamine)、膽固醇或其它親脂性基團。
2)末端保護在分子的末端加入保護基團，以防止分子的降解。這種保護可以是5′端，也可以是3′端，或是兩端均被保護。
3)質(zhì)子化當該分子溶于中性水時，會引起pH值的降低。質(zhì)子化可通過將分子在酸性溶液中處理后完成。通過這一過程，寡核苷酸所帶有的質(zhì)子受體被質(zhì)子結(jié)合，所述的質(zhì)子受體存在于取代的或未取代的磷酸基團或存在于中心基團和末端保護基團上。許多核酸的主干結(jié)構(gòu)在低pH下(例如pH1-3)均不穩(wěn)定。本發(fā)明通過引入某些修飾，可使核酸在pH2～pH1的條件下，仍具有滿意的穩(wěn)定性，這些修飾包括2′-鹵化物、2′-O-烷基、3′-O-烷基、2′-O-烷基-n(O-烷基)等。由于抗酸性的增加，使這些寡核苷酸更容易被制成藥物組合物。
本發(fā)明還提供了抗核酸內(nèi)解酶降解的核酸分子。這種抗酶特性可以通過多種化學修飾而獲得，包括2′-O-甲基磷酸二酯鍵、2′-O-甲烷、2′-O-甲烷-n(O-甲烷)、2′-氟、雜合連接鍵及其它主干結(jié)構(gòu)的修飾。另外，這些修飾還包括對堿基的修飾，例如，甲基化堿基、羥甲基化的堿基等。
本發(fā)明還提供了抗核酸外解酶降解的核酸分子。寡核苷酸可以通過對其5′端和/或3′端修飾而獲得這種抗酶特性。這些末端修飾包括反向連接堿基，雙脫氧核苷酸，甲磷酸基，烷基，芳基，cordycepin，cytosine arabanoside，2′-甲氧基、乙氧基核苷酸，phosphorothioate連接鍵，3′-O-甲基堿基，熒光素，肽鍵連接，二氮苯基，膽固醇，生物素，acridine，rhodamine psoralen，glyceryl，丁醇基，己醇基和3′-O-烷基。優(yōu)選的丁醇基結(jié)構(gòu)為-CH2CH2CH2CH2-OH。
修飾性核苷酸還包括對糖基的修飾，例如在2′位或3′位取代的核糖核酸或脫氧核糖核酸。核糖基和單核苷酸之間的連接鍵稱為核酸的主干結(jié)構(gòu)。對主干結(jié)構(gòu)的修飾包括連接鍵以及其它可以增強穩(wěn)定性和親和性的修飾，例如，對糖結(jié)構(gòu)的修飾。具體的例子有在堿基相對于天然右旋異構(gòu)體糖為反向時，可使用左旋(L-)異構(gòu)體脫氧核糖；或?qū)⑻腔?′-羥基團用2′-鹵素元素，2′-O-烷基，2′-O-烷基-n(O-烷基)取代。對主干結(jié)構(gòu)修飾的具體例子還包括但不限于2′-O-甲基磷酸二酯鍵，2′-O-乙基，2′-O-丙基，丁基，2′-O-烷基-n(烷基)，2′-甲氧乙氧基，2′-氟，2′-脫氧erythropentofuranosyl，3′-O-甲基，異丁基寡核苷酸，2′-O-(CH2CH2)XCH3以及丁炔連接鍵。本發(fā)明的寡核苷酸可具有部分修飾，或全部修飾，或是不同修飾的組合。
本發(fā)明優(yōu)選修飾性寡核苷酸的連接鍵是非手性的(achiral)，可以含至少3～8個連續(xù)的非手性連接鍵，優(yōu)選為7～12個連續(xù)的非手性連接鍵；最為優(yōu)選的是全部的連接鍵為非手性的。在某些情況下，非手性連接鍵和手性連接性可以相間存在，例如，兩個連續(xù)非手性連接鍵后接一個手性連接鍵，再跟二個連續(xù)非手性連接鍵；或三個連續(xù)的非手性鍵接一個手性連接鍵；或四個連續(xù)的非手性連接鍵跟二個手性連接鍵等。非手性連接鍵包括，但不限于，磷酸二酯鍵、硫代磷酸二酯鍵。
磷酸二酯鍵可以是5′至3′，5′至2′或5′至5′或以上方式的組合。這種連接鍵的修飾可以是分子內(nèi)的(單一或重復)，也可以是在RNA或DNA的末端。
本發(fā)明所提供的藥物組合物的功能效應(yīng)可用本領(lǐng)域熟知的方法進行測定。這些方法包括體內(nèi)和體外的，例如，在細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中分析藥物組合物對靶基因表達的影響和對細胞表型的影響；在體內(nèi)模型和臨床試驗中，測定藥物組合物的生物學效應(yīng)，包括藥效、藥理、藥劑、毒理等。體內(nèi)模型包括建立的疾病動物模型和正常動物。
C.藥物組合物的構(gòu)成本發(fā)明提供的藥物組合物含有抑制流感病毒復制和宿主相關(guān)基因表達的一種或一種以上的寡核苷酸。根據(jù)寡核苷酸的數(shù)量、類型、靶基因等，藥物組合物中寡核苷酸可以有多種不同的組合方式。寡核苷酸的靶基因可從表1中選擇。
藥物組合物中可以只含單一寡核苷酸，其靶基因可以是流感病毒復制基因，也可以是非流感病毒基因。
藥物組合物中可以含一種以上的寡核苷酸，寡核苷酸的種類可以達100種以下，優(yōu)選的為2～20種。
藥物組合物中的寡核苷酸可以是靶向單一基因的，其可以是一種類型的寡核苷酸，例如反義寡核苷酸，靶向一個以上的靶位點，例如5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)、翻譯終止區(qū)等。
藥物組合物中的寡核苷酸也可以靶向多種基因，例如，二種以上的寡核苷酸，靶向流感病毒基因；二種以上的寡核苷酸靶向宿主相關(guān)基因；二種以上的寡核苷酸，混合靶向流感病毒和宿主相關(guān)基因。
藥物組合物中寡核苷酸可以靶向人的基因，也可以靶向不同動物基因，例如雞等禽類動物。
D.藥用的寡核苷酸組合物本發(fā)明還進一步提供了藥用的寡核苷酸組合物。
本發(fā)明包括的藥物組合物至少含一種本發(fā)明所提供的寡核苷酸。在有些藥物組合物中，可以含100種以下不同的寡核苷酸，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、75種。在有些藥物組合物中，一種或多種寡核苷酸是修飾性寡核苷酸。在有些化合物中，含一種以上的反義寡核苷酸，其可以是部分或全部修飾的藥物組合物。藥物組合物中還含有適合于藥用的賦形劑和其它輔劑。
本發(fā)明的靶向基因可以是單一的，也可以是多種基因的組合。靶向多種基因的藥物組合物，可以對流感病毒復制過程不同基因和宿主細胞相關(guān)基因，例如細胞凋亡基因進行抑制，將比靶向單一基因的方法更為有效。另外，由于使用的多個寡核苷酸中的每個寡核苷酸的量相對比較低，因此會大大降低產(chǎn)生毒性的可能性。本發(fā)明使用的寡核苷酸為修飾性的，因此要比天然寡核苷酸更加穩(wěn)定，且與目前常用的修飾方法相比，例如，硫代磷酸二酯鍵，本發(fā)明的寡核苷酸的毒性更低。
本發(fā)明的藥物組合物可以采用非腸道的、口服或局部的給藥方式。
本發(fā)明的藥物組合物可按本技術(shù)領(lǐng)域熟知的技術(shù)進行制備。藥用載體的選擇可根據(jù)制劑類型和給藥途徑，例如，靜脈注射、口服、局部、噴霧劑、栓劑、非腸道或骨髓注射等。賦形劑可含幾種藥用載體。另外，藥物組合物中所含的穩(wěn)定劑、防腐劑以及其它的成份一般為藥物組合物重量的0.5％～2％。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員可確定出適當?shù)慕o藥方式和遞藥系統(tǒng)。
本發(fā)明的藥物組合物可按要求制成不同的劑型，包括液體、片劑、藥丸、粒狀、粉末、軟膏、乳劑、針劑或栓劑。任何藥物可接受的介質(zhì)和輔劑均可使用，例如，水、甘油、油類、乙醇、調(diào)味劑、防腐劑、食物染料等用于液體制劑，淀粉、糖、稀釋劑、顆粒劑、潤滑劑、粘合劑、分散劑等用于制備固體制劑。
注射用制劑為寡核苷酸的水溶液，溶劑為符合藥用標準的水或生理鹽水。注射用液體還以含適當?shù)囊后w介質(zhì)、懸浮劑、可以調(diào)節(jié)滲透壓的制劑以及防腐劑等。實際制作方法和程序?qū)τ谝粋€本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是熟知的。
局部用藥劑型可以制成乳劑、敷料、凝膠、洗液、軟膏、液體等?？梢约尤氡砻婊钚詣┮栽黾铀幬锏纳顚哟┩?。這些表面活性劑包括天然的，也可以是化學合成的，例如異丙十四烷酸鹽。在有些情況下，藥物組合物可采用化妝品用的制劑成分。
噴霧劑型的制備可采用將寡核苷酸溶于或懸浮于噴發(fā)劑或噴發(fā)劑與溶劑中，例如乙醇作為溶劑。在局部用藥劑型和噴霧劑型中，藥物比例(寡核苷酸)一般為總重量的0.001％～40％。
栓劑的制備可以將寡核苷酸與脂質(zhì)介質(zhì)混合而制成，例如theobroma油、可可奶油、甘油、明膠或聚氧乙烯二醇。
寡核苷酸還可以制成脂質(zhì)體，以增加寡核苷酸在體內(nèi)的半衰期。所用脂類包括，但不限于cardiolipin，dimyristoyl，dipalmitoyl，dioleoyl phosphatidyl choline，phosphatidyl glycerol，palmitoyloleoyl phosphatidyl choline或phosphatidylglycerol，phosphatidic acid，lysophosphatidic acid，phosphatidyl serine，phosphatidyl inositol，cholesterol。
本發(fā)明的藥物組合物的給藥劑量為每公斤體重0.01～100mg所述寡核苷酸。優(yōu)選的劑量為每公斤0.01mg～10mg。
當口服給藥時，每1～10天可給藥一個劑量單位，或每天給藥，每天1～10個劑量單位，直到治愈，或癥狀得到減輕。在有些情況下，用藥劑量為每天1～4次。在有些情況下，病人按醫(yī)囑每天用藥2～3個劑量單位。
II本發(fā)明的方法本發(fā)明進一步提供了使用本發(fā)明提供的藥物組合物治療流感病毒感染相關(guān)疾病的方法。這些方法包括應(yīng)用該藥物組合物抑制流感病毒復制和調(diào)節(jié)細胞內(nèi)基因表達的方法；用該藥物組合物治療流感病毒感染及相關(guān)疾病的方法用于預(yù)防流感病毒感染的方法；以及使用本藥物組合物輔助其它治療的方法。
A.流感病毒感染及相關(guān)疾病人的流感病毒主要是通過空氣飛沫和人類呼吸道傳播的，潛伏期短，且流感病毒每年都會發(fā)生部分變異，因此人群對其普遍易感，尤以新生兒、年老體虛者易感。在人群集中的公共場所極易暴發(fā)或流行。流感的傳染性很強，發(fā)病快，病情除具有普通感冒癥狀外，還有明顯的怕冷、發(fā)熱甚至高燒、劇烈咳嗽、頭痛、全身肌肉酸痛等病征。更嚴重的是，它極易引起支氣管炎、肺炎、心肌炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥等疾病，孕婦發(fā)生流感還可能導致胎兒死亡。
高致病性禽流感發(fā)病率和死亡率都很高，危害極大。禽流感是由流感病毒引起的一種禽類(家禽和野禽)傳染病，被高致病性禽流感感染后，禽類出現(xiàn)較嚴重的全身性、出血性、敗血性癥狀，死亡率極高。許多家禽和野禽、鳥類都對禽流感病毒敏感，可從體內(nèi)分離出病毒。家禽中火雞、雞、鴨是自然條件下最常受感染的禽種。其他包括珍珠雞、家鵝、鵪鶉、雉雞、鴿、鷓鴣、鸚鵡、虎皮鸚鵡等，以及野禽和野生水禽，如鵝、燕鷗、野鴨、鹱、海岸鳥和海鳥等。
人類直接接觸受感染的家禽及其糞便或病毒本身都會受到感染，此外，接觸飛沫及呼吸道分泌物也可能受到傳染。而一旦禽流感病毒與人類病毒重組，從理論上說，就有可能通過人與人傳播。人類患上禽流感后，早期癥狀與其它流感非常相似，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、頭痛、全身不適，部分患者可有惡心、腹瀉、腹痛、稀水樣便等消化道癥狀，有些患者可見眼結(jié)膜炎，體溫大多持續(xù)在39℃以上，一些患者胸部X線還會顯示單側(cè)或雙側(cè)肺炎，少數(shù)患者伴胸腔積液。在免疫力低下的人群、治療過遲的患者病情會迅速發(fā)展成進行性肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細胞減少、腎衰竭、敗血癥休克等多種并發(fā)癥而死亡。
B.治療用的靶基因用于治療的靶基因已列入表1，但不僅限于表中所列。有關(guān)基因的詳細描述如下流感病毒基因病毒吸附在細胞表面含唾液酸的糖蛋白受體上，然后通過受體介導的細胞內(nèi)吞作用，病毒進入細胞。這包括暴露于核內(nèi)體內(nèi)的低pH，導致HA的構(gòu)象改變與介導膜融合。這樣，核衣殼便進入胞漿并移向胞核。流感病毒利用獨特的機理轉(zhuǎn)錄。啟動轉(zhuǎn)錄時，病毒的核酸內(nèi)切酶從宿主細胞的mRNA上切下5′帽子結(jié)構(gòu)，并以此作為病毒轉(zhuǎn)錄酶進行轉(zhuǎn)錄的引物。產(chǎn)生出6個單順反子的mRNA，并轉(zhuǎn)譯成HA、NA、NP和三種聚合酶(PB1、PB2和PA)。NS和M基因的mRNA進行拼接，每一個產(chǎn)生出兩個mRNA，依不同閱讀框架進行轉(zhuǎn)譯，產(chǎn)生NS1、NS2、M1和M2蛋白。HA和NA在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)糖基化，在高爾基體內(nèi)修飾，然后轉(zhuǎn)運到表面，植入細胞膜中，HA需要宿主細胞蛋白酶將其裂解成HA1和HA2，但兩者仍以二硫鍵相連，這種裂解可生成傳染性病毒，并以出芽方式從質(zhì)膜排出細胞。
RNA聚合酶基因(PB2，PB1，PA)此三個基因分別定位于流感病毒基因組中的節(jié)段1、2和3?；虮磉_的產(chǎn)物(PB2，PB1和PA)以非共價的方式形成一種復合體參與病毒的復制和轉(zhuǎn)錄。
血凝素基因(HA)HA位于流感病毒基因組中的節(jié)段4。該基因產(chǎn)物是由3條糖基化多肽分子以非共價形式聚合而成的三聚體，其C末端有一疏水區(qū)插入病毒囊膜的雙層脂質(zhì)膜中，是HA與病毒囊膜的結(jié)合部位。N末端有一疏水區(qū)，具有膜融合活性，對病毒侵入宿主細胞是必須的。
核心蛋白基因(NP)NP基因位于流感病毒基因組中的節(jié)段5。該基因產(chǎn)物為病毒核心蛋白，主要參與病毒RNA的合成。
神經(jīng)氨酸酶基因(NA)NA基因位于流感病毒基因組的節(jié)段6。其產(chǎn)物神經(jīng)氨酸酶是由4條相同的糖基化多肽所組成的蘑菇狀四聚體，具有酶活性，可水解宿主細胞表面糖蛋白末端的N乙酰神經(jīng)氨酸，有利于成熟病毒的釋放(抗神經(jīng)氨酸酶抗體能抑制病毒從細胞釋放，但沒有中和作用)。神經(jīng)氨酸酶的抗原結(jié)構(gòu)較易發(fā)生變異，它是流感病毒亞型的劃分依據(jù)之一。
非結(jié)構(gòu)蛋白基因(NS1，NS2)NS基因位于流感病毒基因組的節(jié)段8。其產(chǎn)物包括NS1和NS2非結(jié)構(gòu)蛋白，主要功能包括調(diào)節(jié)病毒復制和轉(zhuǎn)錄，以及病毒與宿主細胞的相互作用。
宿主細胞基因流感病毒侵染細胞后誘導產(chǎn)生許多細胞因子，導致細胞發(fā)生細胞凋亡。這種細胞凋亡是流感病毒造成細胞和組織病變的生物學基礎(chǔ)。研究表明，許多細胞凋亡相關(guān)基因均參與流感病毒的感染過程(Cherry-Schultz S和Krug RM，Induction of Apoptosis byInfluenza Virus，Seminars in Virology，8491-495，1998).這些基因包括Fas(細胞凋亡受體)、Fas-L(細胞凋亡配體)、TNF-α(腫瘤壞死因子-α)和TACE(腫瘤壞死因子-α轉(zhuǎn)換酶)等。另外，最新研究顯示，許多炎癥性細胞因子(cytokines)和化學因子(chemokines)在流感病毒的侵染過程起著非常重要的作用，例如CXCL1基因產(chǎn)物。
綜上所述，本發(fā)明提供的方法是利用本發(fā)明的藥物在細胞內(nèi)調(diào)節(jié)一種或多個基因的表達，這些基因均與流感病毒感染和復制有關(guān)，代表性靶基因列于表1中。
本發(fā)明中所指的療效是治愈、緩解和預(yù)防所對應(yīng)的癥狀。對于預(yù)防性效果，本發(fā)明的藥物組合物可用于有潛在易受流感病毒感染可能的人，如老人、幼兒或免疫力低下者。因此，本發(fā)明的治療方法包括對動物和人的任何治療，包括以下內(nèi)容(1)防止尚未診斷出，但有可能出現(xiàn)的癥狀；(2)抑制癥狀發(fā)展；(3)減輕或逆轉(zhuǎn)癥狀。
用于人和動物的寡核苷酸藥物組合物的劑量取決于所治療的癥狀，給藥途徑，受治個體的生理狀況。
在表4中舉例列舉了單一或組合靶基因，用以制備不同寡核苷酸組合物。表中不同基因的組合中，每個基因之間用“/”分開，例如A/B/C，表示寡核苷酸靶基因A、B、C的組合。
本發(fā)明的藥物組合物還可用于治療一些動物，例如，鳥類、禽類。在藥物組合物中寡核苷酸對應(yīng)的靶基因序列為種屬特異的。
表1.代表性流感病毒和宿主相關(guān)基因

表2.代表性靶向流感病毒基因的反義寡核苷酸

表3.代表性靶向宿主相關(guān)基因的反義寡核苷酸


表4.舉例說明混合使用反義寡核苷酸的靶基因

具體實施例方式
以下實施例的列出是為了詳細說明本發(fā)明，并不對發(fā)明的內(nèi)容加以限制，如表2、3中所列的反義寡核苷酸序列為代表性的分子，任何其它可以對流感病毒感染產(chǎn)生療效的反義寡核苷酸，均可用于本發(fā)明的藥物組合物中。
實施例1RNA寡核甘酸對禽流感病毒在細胞內(nèi)的抑制效應(yīng)一.實驗?zāi)康谋緦嶒灋樵诩毎津炞CRNA寡核甘酸對流感病毒復制的抑制作用，并篩選出活性較強的分子。
二.實驗材料細胞取9～10日齡SPF雞胚常規(guī)方法制備雞胚成纖維細胞(CEF)，進行細胞計數(shù)。
RNA寡核甘酸2′-O-methyl修飾的3′-端封閉的寡核甘酸。其序列詳細見下表表5.實驗用寡核苷酸序列

三.實驗方法1)、禽流感病毒(AIV)在雞胚成纖維細胞(CEF)上的適應(yīng)1、取9～10日齡SPF雞胚常規(guī)方法制備CEF，進行細胞計數(shù)。
2、用MEM培養(yǎng)液將細胞濃度調(diào)整為1.5×105個/ml，25ml細胞瓶內(nèi)加5ml細胞懸液，置CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
3、待細胞長成單層后，用PBS洗3次，加入0.5ml的AIV，37℃孵育1h后，倒掉病毒液，加入1％的MEM維持液37℃繼續(xù)培養(yǎng)，同時設(shè)立不攻毒的正常CEF對照。
4、待細胞出現(xiàn)80％～90％病變后，將細胞反復凍融3次，收獲病毒。
5、檢測收獲病毒液的血凝效價(HA Titer)。
6、用新收獲病毒，重復進行傳代，直至病毒產(chǎn)生穩(wěn)定的細胞病變。
2)、細胞轉(zhuǎn)染與攻毒1、轉(zhuǎn)染細胞的準備①取9～10日齡SPF雞胚常規(guī)方法制備CEF，進行細胞計數(shù)。
②將24孔細胞培養(yǎng)板每孔加入1.5～3×105個細胞，每孔0.5ml。
③置CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h細胞長成單層。
2、寡核苷酸樣品的準備①對于每個寡核苷酸樣品準備A、B兩個無菌EP管。
②A管100μl Opti-MEM1+2μl LF-2000(需要摸索最佳條件)；B管100μl Opti-MEM1+xμl寡核苷酸(使寡核苷酸終濃度為2μM)。
③將A、B管分別混勻后，室溫下放置5分鐘。
④將A、B管的液體混合，輕輕混勻一下，室溫靜置20分鐘。
3、細胞轉(zhuǎn)染①從培養(yǎng)箱內(nèi)取出CEF已長成單層的24孔細胞培養(yǎng)板。
②吸去孔內(nèi)含有血清的培養(yǎng)基，用PBS洗2次。
③將混合后的A、B管的200μl液體加到孔板中，輕輕混勻，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4h。
注每種寡核苷酸設(shè)三個重復孔，制備轉(zhuǎn)染混合物時可在準備寡核苷酸樣品時將設(shè)計體積擴大三倍，然后分別將1/3混合物加入各孔。
4、細胞攻毒①培養(yǎng)4h后，輕輕吸棄孔內(nèi)液體，用PBS洗3次。
②每孔加入103TCID50的AIV，置CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，同時設(shè)正常CEF對照、寡核苷酸樣品對照以及病毒對照。
③隨時觀察細胞病變(CPE)情況。
④當病毒對照細胞出現(xiàn)80％～90％病變時，分別收獲各孔細胞液。
⑤進行HA檢測，分析試驗結(jié)果。
四.實驗結(jié)果抗禽流感病毒(H5N1)RNA寡核甘酸轉(zhuǎn)染進入雞胚成纖維細胞(2μM)，再作病毒侵染(5TCID50)，38小時后取樣測定HA滴度。從表6中可見，七種RNA寡核甘酸均呈現(xiàn)出不同程度的抗病毒效應(yīng)，其中OE1、OE2、OE3及OE5的抑制效應(yīng)最為顯著。
表6.七種RNA寡核苷酸細胞內(nèi)的抗病毒效應(yīng)

#HA單位由平均Log2eLD50換算得到。
*與病毒對照相比獲得。
實施例2單一和組合型RNA寡核甘酸對禽流感病毒在細胞內(nèi)的抑制效應(yīng)一.實驗?zāi)康谋緦嶒炘趩我还押烁仕岷Y選實驗的基礎(chǔ)上，選出活性較強的分子進行不同組合，以測定多種寡核甘酸組合物是否具有更強的抗病毒效應(yīng)。
二.實驗材料1)細胞取9至11日齡SPF雞胚按常規(guī)方法制備CEF，鋪于24孔板每板，設(shè)計3個重復。
2)RNA寡核甘酸OE1，OE2，OE3，OE5，OE6(見實施例1表5)。
3)轉(zhuǎn)染制劑Lipofectamine 2000(LF2000)(Invitrogen公司)三.實驗方法1).轉(zhuǎn)染過程使用前將LF-2000管輕輕混勻一下。
1、每個寡核苷酸樣品根據(jù)需要計算出其所需量，按100μl Opti-MEM1+4μl寡核苷酸混合物(最終濃度為2μM)配好(共6管)。
2、計算出LF-2000總量，按100μl Opti-MEM1+2μl LF-2000的比例配好。
3、分別混勻后，室溫下放置5分鐘。
4、5分鐘后，將寡核苷酸各管分別取出800μl與800μl LF-2000稀釋液混合，輕輕混勻一下，室溫靜置20-30分鐘，不能超過30分鐘。
5、處理細胞取出培養(yǎng)細胞的24孔板，吸去有血清的培養(yǎng)基，用PBS洗1-2遍，20-30分鐘后，將混合后的液體的液體加到24孔板中，每組6個孔，每孔200μl，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)4小時。
6、加5TCID50病毒液100μl，37度孵育1小時后，補1％的Opti-MEM1 400μl，37℃培養(yǎng)至病毒對照出現(xiàn)病變。凍融一次后，收集各孔細胞液，測血凝效價。
2).寡核甘酸的準備共設(shè)5組寡核甘酸組合，分別為1)OE12)OE53)OE1+OE54)OE1+OE2+OE3+OE55)OE1+OE2+OE3+OE5+OE66)DNA對照7)病毒對照8)細胞對照各種組合的寡核甘酸終濃度相同，即每種組合在細胞培養(yǎng)孔中的濃度均為2μM。
四.實驗結(jié)果表7總結(jié)了本實驗的結(jié)果。很顯然，組合型寡核甘酸的抗病毒效應(yīng)要好于單一寡核甘酸，從而驗證了采取針對多靶位點的策略是一種更為有效的抗病毒手段。
表7.單一和組合型RNA寡核苷酸細胞內(nèi)的抗病毒效應(yīng)

#HA單位由平均Log2eLD50換算得到。
*與病毒對照相比獲得。
實施例3混合型RNA寡聚核甘酸在動物體內(nèi)對禽流感病毒的抑制作用一、實驗?zāi)康母鶕?jù)細胞實驗的結(jié)果，下列實驗將不同RNA寡核甘酸進行組合，觀察其在禽類動物中對流感病毒的作用，以證實混合型RNA寡核甘酸的抗流感病毒的預(yù)防和治療效應(yīng)。
二、實驗材料實驗動物 10日齡SPF雞。每組含9只雞。
轉(zhuǎn)染制劑Lipofectamine 2000(LF2000)(Invitrogen公司)RNA寡核甘酸2′-O-methyl修飾和3′-端封閉寡聚核甘酸，序列見下實施例1的寡核甘酸表(表5)。本實驗所用組合型寡核甘酸包括OE1+OE2+OE3+OE5+OE6。
三、實驗步驟
1、取10日齡SPF雞以點眼、滴鼻的方式接種RNA寡核苷酸(寡核苷酸30μl+PBS70μl)；2、24h后，以點眼、滴鼻的方式接種寡核苷酸+LF2000+病毒的混合物?；旌衔镏苽浞椒ㄈ缦?)22.5μl LF2000和22.5μl的PBS混合(共45μl)，1mM的寡核苷酸置室溫。
2)室溫放置5-10分鐘。
3)將LF2000的上述稀釋液和1mM的寡核苷酸以3∶2的比例混合，即45μl+30μl寡核苷酸，室溫放置20-30分鐘。
4)上述75μl混合液與25μl病毒液混合(10000ELD50)。
5)以點眼、滴鼻的方式接種SPF雞。
3、接毒后24h，每組隨機取出3只雞，無菌取肺，-80℃儲存留做蝕斑試驗。
4、然后每隔6小時觀察雞的狀態(tài)及死亡情況，并做記錄。
四、實驗結(jié)果從以下結(jié)果可見，本發(fā)明所提供的RNA寡聚核甘酸組合可在動物體內(nèi)抑制禽流感病毒的復制，增強感染動物的存活率。
表8.累計死亡情況統(tǒng)計結(jié)果

備注DNA對照為無關(guān)寡核甘酸對照；試驗組為五種RNA寡核甘酸的組合。
序列表<110>奧林格斯技術(shù)有限公司<120>防治流感病毒感染的寡核苷酸藥物<130>JSP060001<160>43<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>20<212> DNA<213>人工序列<400>1cauuucgaau caguaccugc20<210>2<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>2ucccuucucc uucgugac 18<210>3<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>3cagcacugcc auaacuau 18<210>4<211>18<212>DNA<13>人工序列<400>4
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<213>人工序列<400>35cacugcacgc cccacagc 18<210>36<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>36aggagcagac augauaua 18<210>37<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>37acacuggcua uaaacgcu 18<210>38<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>38eageaccuca cgccgccc 18<210>39<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>39gagucucaug guccgagc 18<210>40<211>18<212>DNA<213>人工序列
<400>40ggaggcagcg ggacauca18<210>41<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>41uggcucuuga uuaucaga18<210>42<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>42uaugucuguc aucauggc18<210>43<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>43uuagcaagga aaguagaa18
權(quán)利要求
1.一種抑制流感病毒感染的寡核苷酸，特征是(1)含有7～75個核苷酸；(2)含有通過非手性5′到3′磷酸核苷間鍵連接的7～75個鄰接的核糖基團；(3)互補于與流感病毒或宿主細胞相關(guān)靶基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止區(qū)；(4)具有75℃～115℃的熔解溫度(Tm，1毫摩爾濃度)。
2.如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于該寡核苷酸由10～26個核苷酸組成，具有40℃～85℃的熔解溫度(Tm，1微微摩爾濃度)。
3.如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于該寡核苷酸包括核糖寡核苷酸和脫氧核糖寡核苷酸。
4.如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于該寡核苷酸是經(jīng)化學修飾的修飾性寡核苷酸。
5.如權(quán)利要求4所述的寡核苷酸，其特征在于所述修飾性寡核苷酸是在糖基2′位上帶有取代基團的，所述取代基團選自氧、甲氧基、丙氧基、甲氧-乙氧基、氟、氯、溴、碘。
6.如權(quán)利要求4所述的寡核苷酸，其特征在于所述修飾性寡核苷酸在3′端和/或5′端帶有保護基團。
7.如權(quán)利要求4所述的寡核苷酸，其特征在于所述修飾性寡核苷酸是3′末端封閉和/或5′末端封閉的。
8.如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于該寡核苷酸是反義寡核苷酸。
9.如權(quán)利要求8所述的寡核苷酸，其特征在于所述反義寡核苷酸包括靶向流感病毒基因的反義寡核苷酸序列和靶向宿主細胞基因的反義寡核苷酸序列。
10.如權(quán)利要求9所述的寡核苷酸，其特征在于所述反義寡核苷酸的序列選自SEQ ID NO1～SEQ ID NO43。
11.一種防治流感病毒感染的寡核苷酸組合物，含有權(quán)利要求1-10中任一權(quán)利要求所述的寡核苷酸中的一種或多種。
12.如權(quán)利要求11所述的組合物，其特征在于當使用多種寡核苷酸時，這幾種寡核苷酸將各自與相同或不同的靶基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止區(qū)的不同區(qū)域互補，所述靶基因包括流感病毒基因和宿主細胞基因。
13.如權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述靶基因選自流感病毒基因PA、PB1、PB2、HA、NP、NA、M和NS1，人細胞調(diào)亡基因Fas、Fas-L、TACE、TNF-R1、TNF-α和Caspase-3，人炎癥細胞因子基因及雞細胞調(diào)亡基因Caspase-3、Fas、Fas-L、TNF-α和TACE。
14.如權(quán)利要求1-13中任一權(quán)利要求所述的寡核苷酸或其組合物制備防治人或動物流感病毒感染制劑的用途。
15.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述的動物是禽類。
全文摘要
本發(fā)明涉及防治流感病毒感染的寡核苷酸藥物。所述寡核苷酸含有7～75個核苷酸；含有通過非手性5′到3′磷酸核苷間鍵連接的7～75個鄰接的核糖基團；互補于與流感病毒或宿主細胞相關(guān)靶基因的5′端非翻譯區(qū)、翻譯起始區(qū)、3′端非翻譯區(qū)和/或翻譯終止區(qū)；具有75℃～115℃的熔解溫度(Tm，1毫摩爾濃度)。所述的寡核苷酸包括核糖寡核苷酸和脫氧核糖寡核苷酸，并可經(jīng)化學修飾。本發(fā)明的寡核苷酸可用于制備防治動物或人流感的制劑。
文檔編號A61K31/7088GK1840203SQ200610000900
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月17日
發(fā)明者羅德瑞克·M·K·戴爾, 孫侖泉 申請人:奧林格斯技術(shù)有限公司