本發(fā)明涉及一類新化合物、其制備方法與應(yīng)用，具體是n-(5-酰基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺、其制備方法及其在制備抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

gurdal等[jenzymeinhibitionandmedchem，2015，30(4):649-654]描述了4-吡啶基哌嗪乙酰胺衍生物1對人結(jié)腸癌細胞hct-116、人乳腺癌細胞mcf-7和人肝癌細胞huh-7的抑制活性較好；其中，對hct-116和huh-7的抑制活性優(yōu)于5-氟尿嘧啶。abou-seri等[eurjmedchem，2016，107:165-179]描述了4-噠嗪基哌嗪乙酰胺衍生物2對血管內(nèi)皮生長因子受體-2(vegfr-2)激酶的抑制活性，其ic50為0.40±0.04μm，與瓦他拉尼(ic500.18±0.02μm)接近。

el-messery和hassan等[eurjmedchem，2012，54:615-625；bioorg&medchemlett，2012，22(20):6318-6323]描述了n-[噻唑-2-基]哌嗪乙/丙酰胺衍生物3對多種癌細胞的體外抑制活性較高。

hoi等[bioorg&medchemlett，2012，22(16):5297-5302]描述了4-乙酰基哌嗪丙酰胺衍生物4對野生型(wild-type)致癌激酶(oncogenickinase)bcr-abl的抑制活性，其ec50為5.21μm。

張妹等[中國藥物化學(xué)雜志，2016(1):1-9]通過生物電子等排原理和拼合原理，以nucleozin為先導(dǎo)化合物，設(shè)計并合成了異噁唑哌嗪環(huán)酰胺類流感病毒核蛋白抑制劑，活性測試發(fā)現(xiàn)部分化合物抗流感病毒活性優(yōu)于陽性對照利巴韋林；其中,異噁唑甲酰哌嗪化合物5活性較好，ec50值為2.7μm。

張艷梅等[cn104447625b，2016.08.12]描述了含哌嗪環(huán)的苯甲酰胺類化合物，其能在體外明顯的阻斷病毒核蛋白進入宿主細胞，表現(xiàn)出顯著的抑制流感病毒的活性。活性較好的化合物6～8的ic50值分別為1.2μm、1.1μm和0.8μm。

hung等[antiviralresearch,2009,81(2):123-131]通過高通量篩選測定了多種用途的上市藥物對流感神經(jīng)氨酸酶的抑制活性，其中酮康唑(9)在50μm測試濃度下的na抑制活性為72.2％。

ye等[eurjmedchem,2012,54(12):764-770]測試了用哌嗪環(huán)修飾的扎那米韋類似物對流感na的抑制活性，其中含哌嗪環(huán)的化合物10和11對h3n2的ic50值分別為836.3±267.2μm和271.3±153.3μm，對h5n1的ic50值分別為760.8±30.5μm和122.3±60.5μm。

wen等[bioorg&medchem,2010,18(11):4074-84]描述了c-4位修飾的扎那米韋類似物對流感病毒神經(jīng)氨酸酶的抑制活性；其中含哌嗪環(huán)的化合物12和13對h1n1na的ic50值分別為2.15μm和6.50μm；ec50值分別為0.77μm和10.7μm。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一類n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺、其制備方法、藥物組合物和用途。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面提供了一類如結(jié)構(gòu)式ⅰ所示的n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺及其在藥學(xué)上可接受的鹽：

式中r¹選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基、c1～c2烷氧基、c3～c4直鏈烷氧基或c3～c4支鏈烷氧基；r³選自：h、c1～c2烷基、c3～c6直鏈烷基；r⁴選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；r⁵選自：c1～c2烷基、c3～c6直鏈烷基或c3～c6支鏈烷基、羥甲基或羥乙基；n選自：1、2、3、4、5或6。

本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面還提供了一類如結(jié)構(gòu)式ⅱ所示的n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺及其在藥學(xué)上可接受的鹽：

式中r¹選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基、c1～c2烷氧基、c3～c4直鏈烷氧基或c3～c4支鏈烷氧基；r³—r⁴選自：h、c1～c2烷基、c3～c6直鏈烷基或c3～c6支鏈烷基；n選自：1、2、3、4、5或6；y¹選自：氫、c1～c2烷基、羥基、c1～c2烷氧基或sh；y²選自：氫、c1～c2烷基；y³選自：氫、c1～c2烷基、羥基、c1～c2烷氧基、羥甲基、羥乙基或sh。

進一步的，優(yōu)選的化合物選自：

n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰胺、n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰胺、n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-苯基哌嗪-1-基)乙酰胺、n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪-1-基)]乙酰胺、n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-苯基哌嗪-1-基)丙酰胺、n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)]丙酰胺、n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-甲基哌嗪-1-基)]丙酰胺或n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-(4-羥基苯基)哌嗪-1-基)]丙酰胺。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面是提供了第一方面所述通式ⅱ所示的n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

式中r¹選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基、c1～c2烷氧基、c3～c4直鏈烷氧基或c3～c4支鏈烷氧基；r³選自：h、c1～c2烷基、c3～c6直鏈烷基；r⁴選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基；r⁵選自：c1～c2烷基、c3～c6直鏈烷基或c3～c6支鏈烷基、羥甲基或羥乙基；n選自：1、2、3、4、5或6；x選自：氯、溴或碘。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面是提供了第一方面所述通式ⅱ所示的n-(5-酰基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

式中r¹選自：h、c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基；r²選自：c1～c2烷基、c3～c4直鏈烷基或c3～c4支鏈烷基、c1～c2烷氧基、c3～c4直鏈烷氧基或c3～c4支鏈烷氧基；r³—r⁴選自：h、c1～c2烷基、c3～c6直鏈烷基或c3～c6支鏈烷基；n選自：1、2、3、4、5或6；y¹選自：氫、c1～c2烷基、羥基、c1～c2烷氧基或sh；y²選自：氫、c1～c2烷基；y³選自：氫、c1～c2烷基、羥基、c1～c2烷氧基、羥甲基、羥乙基或sh；x選自：氯、溴或碘。

本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明的n-(5-酰基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺及其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選的含有藥用載體。其中所述的藥用載體指藥學(xué)領(lǐng)域常用的藥用載體；該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑組合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在其藥物組合物中的含量通常為0.1％～95％重量百分比。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。

給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括o/w型、w/o型和復(fù)乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。

為了將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。

還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼瑁僦糜谟材z囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的膠囊劑。

為將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、ph調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；ph調(diào)劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

為達到用藥目的，增強治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。

本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面是提供本發(fā)明第一方面所述n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺及其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用。

有益技術(shù)效果：

本發(fā)明的n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺是一類新結(jié)構(gòu)類型的具有流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性的化合物。

具體實施方式

以下實施例旨在說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的進一步限定。

實施例1

n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺的制備

75mmol3-氯丙酸和75mmoldcc溶于60ml二氯甲烷，投入催化劑dmap2g，體系變成黃色，室溫下攪拌10分鐘后加入2-氨基-4-甲基噻唑-5-乙酮的氫溴酸鹽4.8g，黃色消失，室溫攪拌約48h，抽濾，二氯甲烷洗滌濾餅，濾液依次用飽和食鹽水和飽和nahco3洗滌數(shù)次，水層用二氯甲烷萃取，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，柱層析(v石油醚：v乙酸乙酯＝2:1)，旋蒸回收溶劑干燥得白色粉末n-(4-甲基-5-乙酰基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺5.84g，收率70.3％，m.p.163～166℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.52(s，3h，ch3)，2.64(s，3h，ch3)，2.96(t，j＝6.3hz，2h，coch2)，3.90(t，j＝6.2hz，2h，ch2)。

實施例2

n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰胺的制備

0.86mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-氯乙酰、5mlthf、1.72mmoln-甲基哌嗪和0.86mmol三乙胺，常溫攪拌8h；反應(yīng)完后，旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，抽濾，濾餅用石油醚和少量無水乙醇洗，干燥，得淡黃色粉末n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰胺0.19g，收率74.5％，m.p.135～137℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.34(s，3h，nch3)，2.52(s，7h，哌嗪+ch3)，2.67(s，7h，哌嗪+ch3co)，3.28(s，2h，coch2)，10.34(s，1h，nh)。

實施例3

n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰胺的制備

0.64mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-氯乙酰、5mlthf、1.28mmoln-乙基哌嗪和0.64mmol三乙胺，常溫攪拌6h；反應(yīng)完后，旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，抽濾，濾餅用石油醚和少量無水乙醇洗，干燥得淡黃色粉末n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰胺0.15g，收率75.2％，m.p.138～141℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.11(t，j＝7.2hz，3h，ch3)，2.47(q，j＝7.2hz，2h，ch2)，2.52(s，4h，哌嗪)，2.57(s，3h，ch3)，2.66(s，4h，哌嗪)，2.68(s，3h，ch3co)，3.28(s，2h，coch2)，10.35(s，1h，nh)。

實施例4

n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-苯基哌嗪-1-基)乙酰胺的制備

0.60mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-氯乙酰、5mlthf、1.28mmoln-苯基哌嗪和0.60mmol三乙胺，常溫攪拌5h；旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗滌，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，乙醇重結(jié)晶，抽濾，濾餅用石油醚和冰乙醇洗滌，干燥得白色粉末n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-苯基哌嗪-1-基)乙酰胺0.13g，收率60.5％，m.p.175～178℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.52(s，3h，ch3)，2.66(s，3h，ch3co)，2.80(t，j＝4.4hz，4h，哌嗪)，3.28(t，j＝4.4hz，4h，哌嗪)，3.35(s，2h，coch2)，6.90～7.30(m，5h，c6h5)，10.37(s，1h，nh)。

實施例5

n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪-1-基)]乙酰胺的制備

1.50mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-氯乙酰胺、5mlthf、0.90mmol1-(4-羥基苯基)哌嗪和0.60mmol三乙胺，常溫攪拌23h；旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗滌，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，乙醇重結(jié)晶，抽濾，濾餅用石油醚和冰乙醇洗滌，干燥得白色粉末n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-[4-(4-羥基苯基)哌嗪-1-基]乙酰胺0.16g，收率28.5％，m.p.200～202℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.53(s，3h，ch3)，2.68(s，3h，ch3co)，2.73(t，j＝4.0hz，4h，哌嗪)，2.89(t，j＝4.0hz，4h，哌嗪)，3.32(s，2h，coch2)，6.76(d，j＝8.8hz，2h，c6h42，6-h)，6.81(d，j＝8.8hz，2h，c6h43，5-h)。

實施例6

n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-苯基哌嗪-1-基)丙酰胺的制備

0.813mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-氯丙酰、5mlthf、1.6mmoln-苯基哌嗪和0.86mmol三乙胺，常溫攪拌8h；旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗滌，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，乙醇重結(jié)晶，抽濾，濾餅用石油醚和冰乙醇洗滌，干燥得灰白色粉末n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-(4-苯基哌嗪-1-基)丙酰胺0.22g，收率73％，m.p.184～186℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.49(s，3h，ch3)，2.60(s，3h，ch3co)，2.66～2.70(m，2h，coch2)，2.79～2.81(m，2h，ch2)，2.81～2.85(m，4h，哌嗪)，3.35～3.40(m，4h，哌嗪)，6.91～7.30(m，5h，c6h5)，12.71(s，1h，nh)。

實施例7

n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)]丙酰胺的制備

0.813mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-氯丙酰、5mlthf、1.6mmol1-(2-甲氧苯基)哌嗪和0.86mmol三乙胺，常溫攪拌7h；旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗滌，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，乙醇重結(jié)晶，抽濾，濾餅用石油醚和冰乙醇洗滌，干燥后得白色粉末n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-2-[4-(2-甲氧苯基)哌嗪-1-基]丙酰胺0.26g，收率80％，m.p.164～166℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.50(s，3h，ch3)，2.62(s，3h，ch3co)，2.69(s，2h，coch2)2.86(m，6h，哌嗪，ch2)，3.27(s，4h，哌嗪)，3.89(s，3h，och3)，6.90～7.06(m，4h，c6h4)，12.89(s，1h，nh)。

實施例8

n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-甲基哌嗪-1-基)]丙酰胺的制備

0.813mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺、5mlthf、0.813mmol甲基哌嗪和0.86mmol三乙胺，常溫攪拌，tlc監(jiān)測，反應(yīng)18h；旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗滌，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，乙酸乙酯重結(jié)晶，抽濾，濾餅用石油醚和冰乙醇洗滌，干燥后得淡黃色粉末狀固體n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-甲基哌嗪-1-基)]丙酰胺0.18g，收率72.0％，m.p.169～171℃，¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：2.33(s，3h，ch3)，2.46(s，3h，ch3)，2.57～2.63(m，13h，ch2nch2×2+coch2+nch3)，2.74(t，j＝5.6hz，2h，nch2)，4.81(s，1h，nh)。

實施例9

n-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-(4-羥基苯基)哌嗪-1-基)]丙酰胺的制備

0.813mmoln-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺、5mlthf、1.60mmol4-羥基苯基哌嗪和0.86mmol三乙胺，常溫攪拌，tlc監(jiān)測，反應(yīng)18h；旋蒸回收溶劑，二氯甲烷溶解，飽和食鹽水洗滌，收集、合并有機層，無水硫酸鈉干燥，加石油醚析出固體，乙醇重結(jié)晶，抽濾，濾餅用石油醚和冰乙醇洗滌，干燥后得淡紫色粉末狀固體n-(5-乙?；?4-甲基噻唑-2-基)-3-[4-(4-羥基苯基)哌嗪-1-基)]丙酰胺0.22g，收率69.8％，m.p.171～173℃，¹hnmr(400mhz，dmso)δ：2.47(s，3h，ch3)，2.55(d，j＝6.0hz，7h，ch3+(ch2)2)，2.68(m，4h，哌嗪)，2.94(s，4h，哌嗪)，6.77(d，j＝8.5hz，2h，c6h4)，8.80(s，1h，nh)，12.49(s，1h，oh)。

實施例10

n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺及其鹽的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性

1.實驗原理

化合物munana是神經(jīng)氨酸酶的特異性底物，在神經(jīng)氨酸酶作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在360nm照射激發(fā)下，可產(chǎn)生450nm熒光，熒光強度的變化可以靈敏地反映神經(jīng)氨酸酶活性。酶均來自a/pr/8/34(h1n1)病毒毒株。

2.實驗方法

在酶反應(yīng)體系中，一定濃度樣品與流感病毒神經(jīng)氨酸酶na懸浮于反應(yīng)緩沖液中(ph6.5)，加入熒光底物munana啟動反應(yīng)體系，37℃孵育40分鐘后，加反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長為450nm的參數(shù)條件下，測定熒光強度值。根據(jù)熒光強度的減少量可以計算化合物對na活性的抑制率。

3.檢測樣品：實施例化合物

4.活性結(jié)果

優(yōu)選化合物在反應(yīng)系統(tǒng)中檢測濃度40.0μg/ml時對神經(jīng)氨酸酶的抑制率及其ic50值列入下表1：

表1n-(5-?；邕?2-基)哌嗪基酰胺對神經(jīng)氨酸酶的抑制活性

n-(5-酰基噻唑-2-基)哌嗪基酰胺具有良好的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性，可用于制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。