專利名稱：吡啶化合物在制備用于治療皮膚損傷的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了吡啶化合物在制備用于治療皮膚損傷例如傷口或皮膚潰瘍的藥物中的新應(yīng)用。本發(fā)明還提供了吡啶化合物在制備用于促進(jìn)表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的藥物中的新應(yīng)用。本發(fā)明還提供了治療皮膚損傷的方法，所述方法包括給需要這種治療的哺乳動(dòng)物施用吡啶化合物。
背景技術(shù)：
有多種因素會(huì)引起皮膚損傷例如傷口、褥瘡性潰瘍或熱潰瘍。引起顯著患者痛苦的這樣的皮膚損傷已經(jīng)被認(rèn)識(shí)到是醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)嚴(yán)重問題，因?yàn)槠浣?jīng)常需要長(zhǎng)期治療來修復(fù)皮膚損傷，尤其是對(duì)于慢性皮膚損傷例如褥瘡性潰瘍。
皮膚損傷一般是通過一系列事件完成的，這些事件包括(1)炎癥階段，(2)細(xì)胞增殖階段和(3)表皮/真皮重建階段。據(jù)認(rèn)為，在愈合過程中，有多種不同因子例如血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)等以高度復(fù)雜的關(guān)系進(jìn)行工作。從組織病理學(xué)方面來看，短暫的血管生成是皮膚損傷愈合過程中的必需事件。在這方面，在上述生長(zhǎng)因子當(dāng)中，VEGF是其中一個(gè)主要血管生成促進(jìn)因子，并且促進(jìn)皮膚損傷愈合(AmericanJournal of Pathology(2004)Vol.164(6)，pp1935-47，F(xiàn)ASEB Journal(2004)Vol.18(11)，pp1264-66)。
作為治療皮膚損傷的治療劑，前列腺素E2制劑(alprostadilalphadex)、二丁?；鵦AMP制劑(布拉地辛鈉)、蔗糖/聚乙烯吡咯烷酮碘制劑、維生素E維A酸酯制劑等是已知的。然而，在慢性皮膚損傷例如慢性皮膚潰瘍的治療中，這些治療劑并不總是有效的。
最近，開發(fā)了bFGF，一種上述生長(zhǎng)因子，這是因?yàn)槠浠诔衫w維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞增殖促進(jìn)活性的生理活性(血管生成促進(jìn)活性)，并且進(jìn)入了實(shí)際應(yīng)用。
有一些其它藥物會(huì)用作促進(jìn)皮膚損傷愈合的活性劑。例如，某些文獻(xiàn)報(bào)道，在動(dòng)物模型中，前列腺素I1(PGI1)衍生物表現(xiàn)出促進(jìn)傷口愈合的活性(Japanese Journal of Pharmacology(1995)Vol.67(Suppl.I)，p275(P3-116))，或者磷酸二酯酶5抑制劑例如西地那非已經(jīng)在臨床上用于治療勃起功能障礙，預(yù)計(jì)其可以促進(jìn)傷口愈合，這是因?yàn)橥ㄟ^細(xì)胞內(nèi)cGMP水平增加而介導(dǎo)的血管擴(kuò)張活性(WO2002/015893)。然而，這些藥物尚未進(jìn)入實(shí)際應(yīng)用。
另一方面，有些文獻(xiàn)報(bào)道，預(yù)計(jì)一些種類化合物例如含氧雜環(huán)化合物如苯并呋喃化合物(US專利6716987)或煙酸化合物(US專利出版2003/0195233)可表現(xiàn)出傷口愈合促進(jìn)作用。然而，其在傷口愈合過程中的機(jī)制以及臨床用途尚待證實(shí)。
同時(shí)，作為本發(fā)明活性組分的吡啶化合物(即吡啶基取代的萘化合物和吡啶基取代的異喹啉化合物)已知用作抗哮喘劑，其具有支氣管收縮抑制活性和氣道炎癥抑制活性，這是通過其PDE4-抑制活性介導(dǎo)的(EP748805，EP848000)。但是其皮膚損傷愈合促進(jìn)活性沒有報(bào)道過。
發(fā)明公開本發(fā)明涉及下式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽在制備用于治療皮膚損傷的藥物或者在制備用于促進(jìn)表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用 其中R是具有下式的取代的吡啶基
R0是C1-6烷氧基-C1-6烷基，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基，X是式＝N-的基團(tuán)或下式所示基團(tuán) 環(huán)A是任選具有取代基的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基，并且虛線是指存在或不存在雙鍵。
本發(fā)明藥物可用于促進(jìn)皮膚損傷例如傷口(創(chuàng)傷性傷口、手術(shù)后傷口等)、褥瘡性潰瘍、慢性皮膚潰瘍(熱潰瘍，血管阻塞性潰瘍，包括腿潰瘍、糖尿病性潰瘍等)的愈合。
化合物[I]或其可藥用鹽在皮膚損傷愈合中的精確機(jī)制有待研究。在現(xiàn)在，其對(duì)于表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的促進(jìn)活性可導(dǎo)致一個(gè)可能的假設(shè)，也就是有一個(gè)反應(yīng)鏈在皮膚損傷愈合中起重要作用，該反應(yīng)鏈包括由這樣的吡啶化合物誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性mytogen(VEGF)的表達(dá)增加以及VEGF誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移和增殖，之后是促進(jìn)目標(biāo)組織中的血管生成，雖然其它生長(zhǎng)因子例如由VEGF誘導(dǎo)的FGF也可以合作參與該過程。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式作為本發(fā)明活性組分的化合物[I]的實(shí)例包括其中R是下式所示基團(tuán)的化合物 在環(huán)A中的10元含氮雜二環(huán)基是任選還含有選自氮原子、氧原子和硫原子的雜原子的10元含氮雜二環(huán)基(所述雜環(huán)基可以是部分或完全氫化的)。這樣的雜環(huán)基包括喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、酞嗪基(phtharadinyl)、萘基、喹喔啉基和苯并噻嗪基(所述雜環(huán)基可以是部分或完全氫化的)。所述10元雜二環(huán)基可具有一個(gè)或多個(gè)取代基。這樣的取代基包括選自下列的基團(tuán)羥基、氧代基、飽和或不飽和6元含氮雜單環(huán)基取代的C1-6烷氧基、二(C1-6烷基)苯基和飽和或不飽和6元含氮雜單環(huán)基。當(dāng)雜二環(huán)基上的取代基是或者包括飽和或不飽和6元含氮雜單環(huán)基時(shí)，這樣的雜環(huán)基的實(shí)例包括吡啶基、二氫吡啶基、嘧啶基、嗎啉代基團(tuán)、哌啶基等。
在上述取代的環(huán)A當(dāng)中，環(huán)A的優(yōu)選實(shí)例包括被至少一個(gè)氧代基和/或羥基取代的10元含氮雜二環(huán)基。這樣的雜環(huán)基的實(shí)例包括下列式的基團(tuán) 同時(shí)，除了氧代基和/或羥基以外，所述雜二環(huán)基還可以具有如上所例舉的其它取代基。
更具體地，作為本發(fā)明活性組分的化合物[I]的實(shí)例是下列式[I-A]或[I-B]的化合物或其可藥用鹽 其中R11是下式的基團(tuán)
環(huán)A是(i)氧代基取代的二氫或四氫喹啉基，其任選被選自羥基和吡啶基的基團(tuán)取代，(ii)羥基取代的二氫或四氫喹啉基，(iii)氧代基取代的六氫喹啉基，其任選被羥基取代，(iv)氧代基取代的二氫或四氫異喹啉基，其任選被選自下列的基團(tuán)取代羥基、嗎啉代-C1-6烷氧基、吡啶基-C1-6烷氧基、哌啶基-C1-6烷氧基和嗎啉代基團(tuán)，(v)氧代基取代的二氫或四氫-酞嗪基，其任選被選自下列的基團(tuán)取代羥基、二(C1-6烷基)氨基苯基、吡啶基和嘧啶基，(vi)氧代基取代的二氫或四氫-喹唑啉基，其任選被羥基取代，(vii)氧代基取代的二氫或四氫-喹喔啉基，其任選被羥基取代，或(viii)氧代基取代的二氫或四氫-萘基，其任選被羥基取代，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基。
作為本發(fā)明活性組分的化合物[I]的另一個(gè)具體實(shí)例包括這樣的化合物[I]，其中R是下式所示的2-氧代-1-取代的吡啶-4-基 且X是下式的基團(tuán) 在它們當(dāng)中，更優(yōu)選的實(shí)例包括其中R0是甲氧基甲基，且R1和R2是乙氧基的化合物。
在上述吡啶化合物[I]當(dāng)中，在藥理學(xué)上優(yōu)選的化合物包括這樣的化合物[I-A]或[I-B]，其中R11是下式所示的2-取代的吡啶-4-基 并且R1和R2是相同或不同的，并且是甲氧基或乙氧基。
在上述化合物當(dāng)中，在藥理學(xué)上更優(yōu)選的化合物包括這樣的化合物[I-A]或[I-B]，其中R11中的環(huán)A是(a)羥基-取代的二氫或四氫-喹啉基，(b)氧代基取代的二氫或四氫-異喹啉基，其被選自吡啶基-取代的C1-6烷氧基和嗎啉代-C1-6烷氧基的基團(tuán)取代，(c)氧代基取代的二氫或四氫-酞嗪基，其被選自吡啶基、嘧啶基和二(C1-6烷基)氨基苯基的基團(tuán)取代，或(d)氧代基取代的二氫或四氫-喹唑啉基。
在上述吡啶化合物[I]當(dāng)中，藥理學(xué)上優(yōu)選的另外化合物包括這樣的化合物[I-A]或[I-B]，其中環(huán)A是下式的基團(tuán) 在它們當(dāng)中，在藥理學(xué)上特別優(yōu)選的化合物包括選自下列的化合物2-(4-羥基-1，2，3，4-四氫喹啉-1-基)-4-[2，3-二(羥基甲基)-6，7-二甲氧基萘-1-基]吡啶；4-[2，3-二(羥基甲基)-6，7-二甲氧基萘-1-基]-2-[1-氧代-1，2-二氫-5-(2-嗎啉代乙氧基)-異喹啉-2-基]吡啶；4-[2，3-二(羥基甲基)-6，7-二甲氧基萘-1-基]-2-[1-氧代-1，2-二氫-5-(3-吡啶基甲氧基)-1-異喹啉-2-基]吡啶；4-(3-羥基甲基-6，7-二甲氧基異喹啉-1-基)-2-[4-(3-吡啶基)酞嗪-1(2H)-酮-2-基]吡啶；和4-[(3S)-3-羥基甲基-3，4-二氫-6，7-二甲氧基異喹啉-1-基]-2-[1-氧代-5-(3-吡啶基甲氧基)-1，2-二氫異喹啉-2-基]吡啶；或其可藥用鹽。
當(dāng)本發(fā)明化合物[I]在其分子中具有不對(duì)稱中心時(shí)(例如在二氫異喹啉部分或在環(huán)A中)，由于其所述不對(duì)稱碳原子，其可以以其立體異構(gòu)體形式存在(非對(duì)映體、旋光異構(gòu)體)，并且本發(fā)明也包括任一種立體異構(gòu)體及其混合物。
本發(fā)明藥物可用于促進(jìn)皮膚損傷例如皮膚損傷例如傷口(創(chuàng)傷性傷口、手術(shù)后傷口等)、褥瘡性潰瘍、慢性皮膚潰瘍(熱潰瘍，血管阻塞性潰瘍，包括腿潰瘍、糖尿病性潰瘍等)的愈合。
化合物[I]的可藥用鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸鹽例如鹽酸鹽、硫酸鹽或氫溴酸鹽，和有機(jī)酸鹽例如乙酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、甲磺酸鹽或馬來酸鹽。
化合物[I]或其可藥用鹽可通過描述在例如EP748805B1、EP848000B1或US專利5342941中的已知方法制得。
化合物[I]或其可藥用鹽可以直接或間接局部給藥到損傷部位上，并且其劑量可以根據(jù)需要治療皮膚損傷的個(gè)體/患者的年齡、體重和身體狀況或者皮膚損傷的種類和程度而改變。例如，劑量通常為約0.05-100mg/皮膚損傷，優(yōu)選0.1-10mg/皮膚損傷?？砂凑招枰m當(dāng)?shù)卮_定給藥頻率。例如，通常每天給藥1-4次，優(yōu)選每天給藥1或2次。
本發(fā)明治療皮膚損傷的藥物具有促進(jìn)表皮微血管細(xì)胞增殖的活性，并且因此可用于治療(例如促進(jìn)愈合)皮膚損傷例如傷口(創(chuàng)傷性傷口、手術(shù)后傷口等)、褥瘡性潰瘍或慢性皮膚潰瘍(熱潰瘍，血管阻塞性潰瘍，包括腿潰瘍、糖尿病性潰瘍等)。
此外，作為本發(fā)明活性組分的化合物[I]包括至少在治療皮膚損傷的有效劑量范圍內(nèi)基本上不表現(xiàn)出一些不利副作用例如細(xì)胞毒性、光敏性等。從安全性方面來看，包含這樣的化合物的本發(fā)明用于治療皮膚損傷的藥物可以作為治療劑使用。
如果需要的話，除了用作活性組分的化合物[I]或其可藥用鹽以外，可以向本發(fā)明藥物中引入一種或多種可藥用添加劑例如滲透促進(jìn)劑、pH-調(diào)節(jié)劑、防腐劑、矯味劑、分散劑、潤(rùn)濕劑、穩(wěn)定劑、抗菌劑、懸浮劑或表面活性劑。
滲透促進(jìn)劑的實(shí)例包括具有20個(gè)碳原子或少于20個(gè)碳原子的一元醇，例如乙醇、異丙醇和硬脂醇，吡咯烷酮化合物例如2-吡咯烷酮和1-甲基-2-吡咯烷酮，脲化合物例如脲和硫脲，環(huán)糊精化合物例如α-環(huán)糊精，薄荷醇，1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷-2-酮，巰基乙酸鈣，檸檬烯等。所述滲透促進(jìn)劑的用量可以根據(jù)制劑形式或載體基質(zhì)而改變。滲透促進(jìn)劑的量通常為，從有效表現(xiàn)出滲透促進(jìn)活性的角度來看，0.1w/w％或更大，優(yōu)選0.3w/w％或更大，并且，從抑制不利藥物反應(yīng)的角度來看，為10w/w％或更小，或優(yōu)選5w/w％或更小。
pH調(diào)節(jié)劑可以為無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、硫酸或磷酸，和有機(jī)酸例如乙酸、琥珀酸或蘋果酸或其金屬鹽。所述pH調(diào)節(jié)劑的用量可以根據(jù)制劑的形式或載體基質(zhì)而改變。其用量通常是這樣的，使得目標(biāo)組合物的pH為4-8。
防腐劑可以是對(duì)羥基苯甲酸酯、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、氯丁醇、苯甲醇等。
矯味劑可以是薄荷醇、玫瑰油、桉樹油、d-樟腦等。
分散劑可以是偏磷酸鈉、聚磷酸鉀、無(wú)水硅酸。
潤(rùn)濕劑可以是丙二醇、甘油、山梨醇、乳酸鈉、透明質(zhì)酸鈉等。
穩(wěn)定劑可以是亞硫酸鈉、生育酚、乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸等。
懸浮劑可以是粉末黃蓍膠、粉末阿拉伯膠、膨潤(rùn)土、羧甲基纖維素等。
表面活性劑可以是聚氧乙烯氫化蓖麻油、脫水山梨醇脂肪酸酯例如脫水山梨醇倍半油酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯等。
本發(fā)明用于治療皮膚損傷的藥物可以用作局部用制劑，以膏劑、霜?jiǎng)?、洗劑、搽劑、泥敷劑、硬膏劑、貼劑、凝膠劑、溶液劑等的形式直接施加到損傷/傷口部位上。
對(duì)于上述膏劑或霜?jiǎng)梢允褂糜托曰|(zhì)或乳劑基質(zhì)。油性基質(zhì)可以是烴例如C12-32-烴，包括液體石蠟、白凡士林、角鯊烯、角鯊?fù)椤⒃鏊芑|(zhì)(plastibase)等，高級(jí)醇例如一元C12-30-脂族醇，包括月桂醇、鯨蠟醇、硬脂醇、油醇等，高級(jí)脂肪酸例如飽和或不飽和C6-32-脂肪酸，包括棕櫚酸和硬脂酸，高級(jí)脂肪酸酯例如棕櫚酸肉豆蔻酯、硬脂酸十八烷基酯，與一元C14-32-脂族醇形成的脂肪酸酯，包括lanorine和巴西棕櫚蠟，飽和或不飽和C10-22-脂族酸與甘油的酯，包括甘油一月桂酸酯或其氫化衍生物，二醇化合物，包括乙二醇、丙二醇和聚乙二醇，植物油和動(dòng)物油。
乳劑基質(zhì)可以是水包油基質(zhì)、油包水基質(zhì)或懸浮基質(zhì)。水包油基質(zhì)的實(shí)例包括通過以下方法制得的基質(zhì)在或不在表面活性劑存在下，將油性組分例如羊毛脂、丙二醇、硬脂醇、凡士林、硅油、液體石蠟、甘油單硬脂酸酯、聚乙二醇等用水乳化或分散。油包水基質(zhì)的實(shí)例包括通過以下方法制得的基質(zhì)在或不在表面活性劑存在下，將油性組分例如白凡士林、液體實(shí)例等與水混合，然后將混合物乳化或分散。懸浮基質(zhì)可以是通過將懸浮劑例如淀粉、甘油、高粘度羧甲基纖維素、羧基乙烯基聚合物等混合而制得的凝膠形式的水基質(zhì)。
本發(fā)明用于治療皮膚損傷的藥物可以通過常規(guī)方式制成局部用制劑，例如通過把基質(zhì)材料混合、乳化或懸浮，將活性組分和其它添加劑與基質(zhì)混合，然后將其在混合器例如螺桿混合器中混合。
本發(fā)明用于治療皮膚損傷的藥物可以以懸浮液、乳液或溶液型洗劑的形式使用。用于懸浮液型洗劑的基質(zhì)的實(shí)例包括含有以下組分的混合物懸浮劑例如樹膠，包括阿拉伯膠和黃蓍膠，纖維素化合物，包括甲基纖維素和羥乙基纖維素，粘土，包括膨潤(rùn)土和水。用于乳液型洗劑的基質(zhì)的實(shí)例包括乳液，所述乳液含有水和油例如脂肪酸，包括硬脂酸和油酸，或高級(jí)脂族醇，包括鯨蠟醇。用于溶液型洗劑的基質(zhì)的實(shí)例包括水和醇例如乙醇、甘油或丙二醇。這樣的洗劑可以這樣制得將基質(zhì)與水混合，攪拌混合物，把活性組分與其合適的添加劑混合，并且如果需要的話，過濾這樣的混合物。
用于搽劑的基質(zhì)的實(shí)例包括植物油例如橄欖油，醇例如乙醇或異丙醇，以及這樣的油與水的混合物。所述搽劑可以這樣制得將活性組分溶解，并且如果需要的話，把合適的添加劑與混合物混合。
用于泥敷劑的實(shí)例包括水溶性聚合物例如聚丙烯酸、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。所述泥敷劑可以這樣制得將活性組分、基質(zhì)與合適的添加劑混合，加熱，然后把混合物冷卻。
用于硬膏劑或貼劑的基質(zhì)的實(shí)例包括載體例如無(wú)紡織物，彈性體例如天然橡膠或異戊二烯橡膠，填充劑例如鋅白或氧化鈦，粘合劑例如萜烯樹脂，剝落劑例如乙酸乙烯酯，軟化劑例如液體石蠟或抗氧化劑例如二丁基羥基甲苯(BHT)的組合。所述硬膏劑和貼劑可以通過常規(guī)方式例如溶液方法等來制得。
用于溶液的溶劑的實(shí)例包括水、乙醇、異丙醇、苯甲醇、聚乙二醇例如PEG400、丙二醇、碳酸丙烯酯及其混合物?？梢詫⑺鋈芤簱饺氲郊啿蓟蚍罅蟽?nèi)。
活性組分的用量可以根據(jù)制劑的形式來改變，并且可以為，對(duì)于膏劑，0.0025-5w/w％，優(yōu)選0.005-0.5w/w％，對(duì)于溶液，0.1-200mg/ml，優(yōu)選0.1-20mg/mL。
本發(fā)明用于治療皮膚損傷的藥物還可以與用于治療傷口或皮膚潰瘍的其它活性劑聯(lián)合使用。此外，如果需要的話，可以將具有促進(jìn)皮膚損傷/傷口愈合的生理活性物質(zhì)(例如生長(zhǎng)因子例如PDGF、TGF-α、TGF-β、bFGF、EGF等)摻入到本發(fā)明藥物制劑內(nèi)。
通過下列實(shí)施例/實(shí)驗(yàn)來更詳細(xì)地舉例說明本發(fā)明，但是不是對(duì)本發(fā)明的限制。如表1中所示的下列化合物(No.1-11)包括在作為本發(fā)明活性組分的化合物[I]的范圍內(nèi)。同時(shí)，在表1的化合物當(dāng)中，除非描述了旋光異構(gòu)體，否則具有不對(duì)稱中心的每一種化合物是外消旋混合物形式的化合物。
表1(No.1)
*鹽酸鹽表1(No.2)
*鹽酸鹽表1(No.3)
表1(No.4) *鹽酸鹽表1(No.5) *鹽酸鹽表1(No.6)
*鹽酸鹽表1(No.7) 表1(No.8)
*鹽酸鹽表1(No.9) *鹽酸鹽表1(No.10) *鹽酸鹽表1(No.11) 通過下列實(shí)驗(yàn)來更詳細(xì)地舉例說明本發(fā)明，但是不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)驗(yàn)1[本發(fā)明吡啶化合物對(duì)于人表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HDMEC)增殖的體外促進(jìn)活性]方法通過以下方法，在對(duì)于HDMEC增殖的促進(jìn)活性方面評(píng)估受試化合物的傷口愈合促進(jìn)活性。在本實(shí)驗(yàn)中使用正常成人表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Hybridoma(1996)Vol.15(4)，pp279-288)作為HDMEC。
將上述HDMEC的懸浮液(2×104個(gè)細(xì)胞/mL，Cryo HMVEC-Ad；Cambrex Inc.的注冊(cè)商標(biāo))接種到48-孔平板(250μL/孔)上。將細(xì)胞在增殖培養(yǎng)基(BletKit EGM-2-MV；Cambrex Inc.的注冊(cè)商標(biāo))中培養(yǎng)1天。用分析培養(yǎng)基(450μL，不含bFGF、EGF和VEGF的BletKit EGM-2-MV；Cambrex Inc.的注冊(cè)商標(biāo))替換增殖培養(yǎng)基后，向每個(gè)孔中加入受試化合物的二甲亞砜溶液(0.1v/v％，50μL)，將這些孔培養(yǎng)96小時(shí)。培養(yǎng)后，通過抽吸除去分析培養(yǎng)基，把殘余細(xì)胞懸浮在含有0.05％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸的Isoton II溶液(500μL；Beckmann-Coulter Ltd.)中。將懸浮液用Isoton II溶液(5mL)稀釋(11-倍)，通過Coulter-Counter Z1(Beckmann-CoulterLtd.)計(jì)數(shù)細(xì)胞的數(shù)目。
作為陰性對(duì)照組，將HDMEC以與上述相同的方式培養(yǎng)，但是沒有受試化合物存在。作為陽(yáng)性對(duì)照，將HDMEC以相同方式培養(yǎng)，但是使用bFGF溶液(0.1μg/mL培養(yǎng)基)來代替受試化合物溶液。
結(jié)果每一種受試化合物對(duì)于HDMEC-增殖的促進(jìn)活性描述在表2-5中。從這些結(jié)果中可以清楚地看到，每一種受試化合物(0.1-1μM)表現(xiàn)出等效的對(duì)于作為bFGF的HDMEC增殖的促進(jìn)活性(0.1μg/mL培養(yǎng)基)。
表2
表3
*鹽酸鹽表4
*鹽酸鹽表5
*鹽酸鹽實(shí)驗(yàn)2[本發(fā)明吡啶化合物對(duì)于傷口愈合的促進(jìn)活性]方法飼養(yǎng)自發(fā)性糖尿病雄性小鼠(C57BL/KsJ-db/db Jcl，齡9周，體重30-40g；Nippon-Clair；4只小鼠/組)直至其達(dá)到10-12周齡。在戊巴比妥麻醉下，剃去小鼠背部的毛發(fā)，并且用乙醇擦拭。在小鼠背部制作一個(gè)環(huán)形全層皮膚傷口(2cm2)。將受試化合物在生理鹽水中的溶液(20μL；10μg/傷口)滴加到傷口部位上，并且將傷口部位用膜敷料(Bioclusive，Johnson & Johnson Inc.的注冊(cè)商標(biāo))覆蓋。施用受試化合物，替換膜敷料，清潔傷口部位并且測(cè)定傷口面積，每2-4天進(jìn)行一次，直至傷口完全愈合。期間，給對(duì)照組小鼠施用生理鹽水溶液(20μL)來代替受試化合物溶液。
結(jié)果結(jié)果如表6-8所示。從這些結(jié)果中可以清楚看出，在受試化合物治療組中，傷口完全愈合所需要的時(shí)間顯著短于對(duì)照組。
表6
表7
*鹽酸鹽表8
*鹽酸鹽工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明用于治療皮膚損傷的藥物具有促進(jìn)表皮微血管細(xì)胞增殖的活性，并且因此可用于治療(例如促進(jìn)愈合)皮膚損傷例如傷口(創(chuàng)傷性傷口、手術(shù)后傷口等)、褥瘡性潰瘍或慢性皮膚潰瘍(熱潰瘍，血管阻塞性潰瘍，包括腿潰瘍、糖尿病性潰瘍等)。
權(quán)利要求
1.式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽在制備用于治療皮膚損傷的藥物中的應(yīng)用 其中R是具有下式的取代的吡啶基 R0是C1-6烷氧基-C1-6烷基，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基，X是式＝N-的基團(tuán)或下式所示基團(tuán) 環(huán)A是任選具有取代基的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基，并且虛線是指存在或不存在雙鍵。
2.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中R是下式所示基團(tuán) 其中在環(huán)A中的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基還可以含有選自氮原子、氧原子和硫原子的雜原子。
3.權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中所述環(huán)A中的10元含氮雜二環(huán)基是喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、酞嗪基、萘基、喹喔啉基或苯并噻嗪基，并且所述雜二環(huán)基可以是部分或完全氫化的。
4.權(quán)利要求3的應(yīng)用，其中環(huán)A是10元含氮雜二環(huán)基，所述雜二環(huán)基任選被選自下列的基團(tuán)取代羥基、氧代基、飽和或不飽和6元含氮雜單環(huán)基取代的C1-6烷氧基、二(C1-6烷基)氨基苯基和飽和或不飽和6元含氮雜單環(huán)基。
5.權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中所述飽和或不飽和6元含氮雜單環(huán)基是吡啶基、二氫吡啶基、嘧啶基、嗎啉代基團(tuán)或哌啶子基。
6.權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中環(huán)A是被至少氧代基和/或羥基取代的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基。
7.權(quán)利要求6的應(yīng)用，其中所述吡啶化合物是下式[I-A]或[I-B]的化合物或其可藥用鹽 其中R11是下式的基團(tuán) 環(huán)A是(i)氧代基取代的二氫或四氫喹啉基，其任選被選自羥基和吡啶基的基團(tuán)取代，(ii)羥基取代的二氫或四氫喹啉基，(iii)氧代基取代的六氫喹啉基，其任選被羥基取代，(iv)氧代基取代的二氫或四氫異喹啉基，其任選被選自下列的基團(tuán)取代羥基、嗎啉代-C1-6烷氧基、吡啶基-C1-6烷氧基、哌啶基-C1-6烷氧基和嗎啉代基團(tuán)，(v)氧代基取代的二氫或四氫-酞嗪基，其任選被選自下列的基團(tuán)取代羥基、二(C1-6烷基)氨基苯基、吡啶基和嘧啶基，(vi)氧代基取代的二氫或四氫-喹唑啉基，其任選被羥基取代，(vii)氧代基取代的二氫或四氫-喹喔啉基，其任選被羥基取代，或(viii)氧代基取代的二氫或四氫-萘基，其任選被羥基取代，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基。
8.權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中R是下式所示取代的吡啶基 且X是下式的基團(tuán)
9.權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中R0是甲氧基甲基，且R1和R2是乙氧基。
10.權(quán)利要求7的應(yīng)用，其中R是下式所示取代的吡啶基 R1和R2是相同或不同的，并且選自甲氧基和乙氧基。
11.權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中環(huán)A是(a)羥基-取代的二氫或四氫-喹啉基，(b)氧代基取代的二氫或四氫-異喹啉基，其被選自吡啶基-取代的C1-6烷氧基和嗎啉代-C1-6烷氧基的基團(tuán)取代，(c)氧代基取代的二氫或四氫-酞嗪基，其被選自吡啶基、嘧啶基和二(C1-6烷基)氨基苯基的基團(tuán)取代，或(d)氧代基取代的二氫或四氫-喹唑啉基。
12.權(quán)利要求11的應(yīng)用，其中環(huán)A是下式的基團(tuán)
13.選自下列的化合物或其可藥用鹽在制備用于治療皮膚損傷的藥物中的應(yīng)用2-(4-羥基-1，2，3，4-四氫喹啉-1-基)-4-[2，3-二(羥基甲基)-6，7-二甲氧基萘-1-基]吡啶；4-[2，3-二(羥基甲基)-6，7-二甲氧基萘-1-基]-2-[1-氧代-1，2-二氫-5-(2-嗎啉代乙氧基)-異喹啉-2-基]吡啶；4-[2，3-二(羥基甲基)-6，7-二甲氧基萘-1-基]-2-[1-氧代-1，2-二氫-5-(3-吡啶基甲氧基)-1-異喹啉-2-基]吡啶；4-(3-羥基甲基-6，7-二甲氧基異喹啉-1-基)-2-[4-(3-吡啶基)酞嗪-1(2H)-酮-2-基]吡啶；和4-[(3S)-3-羥基甲基-3，4-二氫-6，7-二甲氧基異喹啉-1-基]-2-[1-氧代-5-(3-吡啶基甲氧基)-1，2-二氫異喹啉-2-基]吡啶。
14.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述皮膚損傷是急性或慢性傷口。
15.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述皮膚損傷是褥瘡性潰瘍(壓迫潰瘍)。
16.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述皮膚損傷選自熱潰瘍，血管阻塞性潰瘍，包括腿潰瘍，糖尿病性潰瘍，創(chuàng)傷性潰瘍和手術(shù)后潰瘍。
17.用于治療皮膚損傷的藥物，所述藥物包含下式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽作為活性組分 其中R是具有下式的取代的吡啶基 R0是C1-6烷氧基-C1-6烷基，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基，X是式＝N-的基團(tuán)或下式所示基團(tuán) 環(huán)A是任選具有取代基的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基，并且虛線是指存在或不存在雙鍵。
18.式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽在制備用于促進(jìn)表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用 其中R是具有下式的取代的吡啶基 R0是C1-6烷氧基-C1-6烷基，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基，X是式＝N-的基團(tuán)或下式所示基團(tuán) 環(huán)A是任選具有取代基的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基，并且虛線是指存在或不存在雙鍵。
19.治療哺乳動(dòng)物中皮膚損傷的方法，所述方法包括給需要所述治療的哺乳動(dòng)物局部施用治療有效量的下式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽 其中R是具有下式的取代的吡啶基 R0是C1-6烷氧基-C1-6烷基，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基，X是式＝N-的基團(tuán)或下式所示基團(tuán) 環(huán)A是任選具有取代基的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基，并且虛線是指存在或不存在雙鍵。
20.促進(jìn)哺乳動(dòng)物中表皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的方法，所述方法包括將所述細(xì)胞用藥理學(xué)有效量的下式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽處理 其中R是具有下式的取代的吡啶基 R0是C1-6烷氧基-C1-6烷基，R1和R2是相同或不同的，并且是C1-6烷氧基，X是式＝N-的基團(tuán)或下式所示基團(tuán) 環(huán)A是任選具有取代基的飽和或不飽和10元含氮雜二環(huán)基，并且虛線是指存在或不存在雙鍵。
全文摘要
本發(fā)明涉及式[I]的吡啶化合物或其可藥用鹽在制備用于治療皮膚損傷的藥物中的應(yīng)用，其中R是具有下式的取代的吡啶基，R
文檔編號(hào)A61K31/5415GK101052400SQ20058003761
公開日2007年10月10日 申請(qǐng)日期2005年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月29日
發(fā)明者高木保, 直塚敦子 申請(qǐng)人:田邊制藥株式會(huì)社