專(zhuān)利名稱(chēng)：：7H－吡咯并[2,3－d]嘧啶衍生物及其治療可接受的鹽、含有它們的藥物制劑和制備該活...的制作方法
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：本發(fā)明涉及新的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物及其治療可接受的(therapeuticallyacceptable)鹽、含有它們的藥物制劑和制備該活性物質(zhì)的方法。通式(I)的化合物是下述藥物制劑的基本物質(zhì)，所述藥物制劑包括具有神經(jīng)原性和非神經(jīng)原性消炎以及止痛作用的制劑、減輕神經(jīng)病性痛覺(jué)過(guò)敏的制劑、用于防止風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者治療關(guān)節(jié)骨組織破壞或關(guān)節(jié)軟骨(chondrus)破壞的制劑、以及用于與其它炎癥過(guò)程相關(guān)的其它疾病——如哮喘、濕疹、銀屑病——的制劑。通式(I)的化合物是新化合物。它們的典型類(lèi)型可用通式(Ia)、(Ib)和(Ic)描述。不同于上述化合物的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物的化合物在專(zhuān)業(yè)文獻(xiàn)中已知為激酶(quinase)抑制劑和以該方式作用的抗腫瘤藥物。上述抑制激酶的已知的活性7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物的一個(gè)重要結(jié)構(gòu)特征在于，在7位的吡咯的氮原子和另一個(gè)連接在4位上的官能胺的氮原子中，只有一個(gè)氮原子可有取代基(J.Med.Chem.39(1996)2285-2292，Bioorg.Med.Chem.Letters11(2001)849-852)。對(duì)于本發(fā)明的化合物，以上所指出的兩個(gè)位置均有取代基。因此，本發(fā)明涉及通式(I)的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物及其治療可接受的鹽。在通式(I)中R1為烷基、芳基、雜芳基或芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、雜芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、嗎啉代-含1-4個(gè)碳原子的烷基、或二烷基氨基-含1-4個(gè)碳原子的烷基。R2、R3彼此獨(dú)立地為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或環(huán)丙基，或者R2和R3一起成為1，4-亞丁基。R4為或者或者其中R5為取代的或未取代的芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中R6、R7、R8和R9獨(dú)立地為氫、鹵素、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羥基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基或磺?；?，R10為氫或腈基，R11為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基或與X相連的四亞甲基環(huán)，R12為烷基、芳基、雜芳基、芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、雜芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、嗎啉代-含1-4個(gè)碳原子的烷基、或二烷基氨基-含1-4個(gè)碳原子的烷基，若R11是與X相連的四亞甲基環(huán)，則X為碳，除此之外X為氮、次甲基、甲基-次甲基、乙基-次甲基、丙基-次甲基、異丙基-次甲基、環(huán)丙基-次甲基、叔丁基-次甲基或苯基-次甲基。所述治療可接受的鹽有利地為酸加成鹽。通式(I)最典型的化合物可由式(Ia)、(Ib)和(Ic)定義，其中R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12和X同上所述。本發(fā)明還涉及含有作為活性物質(zhì)的通式(I)化合物和治療可接受的添加劑的藥物制劑。所述藥物制劑有利地為消炎和鎮(zhèn)痛制劑、減輕神經(jīng)病性痛覺(jué)過(guò)敏和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的制劑、用于防止骨組織破壞和軟骨破壞的制劑、可用于治療可能與其它炎癥過(guò)程相關(guān)的其它疾病——如哮喘、濕疹或銀屑病——的制劑。本發(fā)明還涉及制備通式(I)的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物的方法。所述方法的特征為，由3-羥基-2-丁酮以及等摩爾當(dāng)量的胺和丙二腈制得通式(II)的化合物，其中R1、R2、R3同上所述。加入5-10倍質(zhì)量過(guò)量的甲酸，混合物在回流溫度下攪拌1小時(shí)至2天，然后將混合物倒入冰水中。將沉淀出的產(chǎn)物分離、干燥，然后與所述產(chǎn)物5至10倍量的磷酰氯在回流溫度下反應(yīng)0.5至4小時(shí)，然后將混合物倒至冰上。將沉淀出的其中R1、R2、R3同上所述的通式(III)的亞氨氯(imidoylchloride)分離，并使其干燥、蒸發(fā)(evapotate)，然后A)將按上述方法所得的通式(III)的亞氨氯溶于非質(zhì)子溶劑中，并使其與等當(dāng)量的通式(II)或(IV)的胺反應(yīng)，其中通式(II)或(IV)的R1和R3同上所述，加入2-10倍摩爾當(dāng)量過(guò)量的NaH。反應(yīng)持續(xù)0.5-6小時(shí)。然后將混合物倒至冰上，分離并純化沉淀出的產(chǎn)物?；蛘連)在極性有機(jī)溶劑中，將按上述方法所得的通式(III)的亞氨氯與2-10倍摩爾當(dāng)量過(guò)量的水合肼反應(yīng)，然后分離出有機(jī)相中的反應(yīng)產(chǎn)物，干燥、蒸發(fā)有機(jī)相，然后用非極性溶劑將其研碎(bruise)。由此生成的肼衍生物與極性溶劑混合，并使其與等當(dāng)量的醛在20-120℃下反應(yīng)1-12小時(shí)，然后分離反應(yīng)產(chǎn)物?；蛘逤)將按B)方法制備的肼衍生物與極性有機(jī)溶劑混合，并與等當(dāng)量的靛紅反應(yīng)，然后分離反應(yīng)產(chǎn)物。通式(II)的化合物按下述方法制備使3-羥基-2-丁酮與等摩爾當(dāng)量的胺和丙二腈反應(yīng)。按此方法制得通式(II)的化合物。使用酸性或堿性催化劑，可在同一反應(yīng)混合物中進(jìn)行兩步反應(yīng)。在第一步中，使用水分離附加物，始終使用酸性催化劑(濃HCl或甲苯磺酸)，使3-羥基-2-丁酮與適宜的胺在非質(zhì)子溶劑中(有利地在甲苯或苯中)在回流溫度下反應(yīng)至所有產(chǎn)生的水均被除去，然后加入丙二腈，并使混合物保持在回流溫度直至除去等當(dāng)量的水。若使用苯胺類(lèi)的胺，則將溶劑改為質(zhì)子溶劑，有利地為甲醇、乙醇或異丙醇，并使用堿性介質(zhì)(KOH或NaOH水溶液)使苯胺類(lèi)的胺與丙二腈在惰性氣氛中反應(yīng)?；旌衔锢鋮s后過(guò)濾出通式(II)的中間體化合物，然后將其與5-10倍質(zhì)量過(guò)量的甲酸(85-98質(zhì)量％)在回流溫度下混合1小時(shí)至2天。將混合物倒至冰水上，通過(guò)過(guò)濾或用中性pH的乙酸乙酯萃取來(lái)分離沉淀出的產(chǎn)物。在兩種情況下均將產(chǎn)物充分干燥，然后將產(chǎn)物與5-10倍質(zhì)量過(guò)量的磷酰氯在回流溫度下反應(yīng)0.5-4小時(shí)。將含有磷酰氯的混合物倒至冰上，調(diào)pH至中性，并將沉淀出的通式(III)的亞氨氯濾出，或用乙酸乙酯萃取，然后將合并的有機(jī)相干燥、蒸發(fā)。將過(guò)濾或者萃取和蒸發(fā)后得到的通式(III)亞氨氯溶于非質(zhì)子溶劑(THF、二噁烷、DMSO或DMF)中或它們的混合物中。在方法A)中，加入2-10倍摩爾當(dāng)量過(guò)量的NaH，將通式(III)的亞氨氯與等當(dāng)量的通式(II)或(IV)的胺反應(yīng)0.5至6小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒至冰水中，并對(duì)其作處理，過(guò)濾沉淀出的產(chǎn)物，從二噁烷-乙酸乙酯-己烷混合物中結(jié)晶得到通式(Ia)的化合物。在方法B)中，使按上述方法所得的通式(III)的亞氨氯與2-10倍摩爾當(dāng)量過(guò)量的水合肼在極性有機(jī)溶劑中(有利地在甲醇、乙醇、異丙醇、DMF、DMSO中或在這些溶劑的任意比例的混合物中)反應(yīng)，之后減壓除去溶劑，然后將由此方法所得的產(chǎn)物在乙酸乙酯和水之間分離。干燥后蒸發(fā)有機(jī)相，用非極性溶劑(有利地為己烷或醚)處理剩余物得到肼衍生物，將其與醛在極性有機(jī)溶劑中(有利地在甲醇、乙醇、異丙醇、DMF、DMSO溶劑中或在冰醋酸中)在20-100℃的溫度下反應(yīng)1-12小時(shí)。若對(duì)溶劑進(jìn)行了適當(dāng)?shù)剡x擇，那么產(chǎn)物就會(huì)沉淀下來(lái)并可在混合物冷卻后過(guò)濾分離。用非極性溶劑(有利地為醚或己烷)洗滌后得到通式(Ib)的化合物。方法C)按類(lèi)似方法進(jìn)行，只是肼衍生物是與靛紅反應(yīng)。通式(Ic)的化合物按此方法制備。在本發(fā)明方法中所使用的中間體化合物，它們作為上述激酶抑制劑化合物的中間體產(chǎn)物——如im2_1至im3_3、im3_5和im4_1至4——的這一部分是已知的，它們有一部分是新的，如實(shí)施例3、5、6和8-11中所給出的化合物(見(jiàn)表1)。本發(fā)明的實(shí)質(zhì)也是基于這樣一個(gè)認(rèn)知，即通過(guò)使用實(shí)施例4所述的方法，將已知生物活性化合物的反應(yīng)活性中間體產(chǎn)物連接在一起，可產(chǎn)生新的結(jié)構(gòu)，并且獲得具有與已知化合物非常不同的作用的新結(jié)構(gòu)化合物。實(shí)施例4的方法的實(shí)質(zhì)，是通過(guò)加入氫化鈉可將溶于無(wú)水二甲基亞砜的通式(II)和(IV)的胺轉(zhuǎn)變成鈉鹽，并且所述鹽可與通式(III)表示的亞氨氯在室溫下結(jié)合，按該方法可獲得通式(Ia)的化合物。亞氨氯和雜環(huán)基胺在氫化鈉的存在下的連接，以及得到的吡唑基氨基衍生物和吡咯基氨基衍生物在文獻(xiàn)中未知。具有相同生物作用的化合物也可按下述方法獲得由通式(III)表示的亞氨氯首先在含乙醇的介質(zhì)中與水合肼反應(yīng)，然后如實(shí)施例7和12-15所述，由此獲得的4-肼基-7H-吡咯并-[2，3-d]嘧啶衍生物與醛或靛紅反應(yīng)，由此獲得通式(Ib)或(Ic)的化合物。苯甲醛和靛紅在含乙醇的介質(zhì)中的縮合反應(yīng)由文獻(xiàn)已知，但在可由4-肼基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物獲得的腙之中，目前僅在5位上有苯基取代基的上述腙有記載(J.Chem.Res.Miniprint12(1997)2771-2789)。已證實(shí)這些已知的5-苯基衍生物在本發(fā)明所述的炎癥模型中完全無(wú)效。表1本發(fā)明的化合物為鎮(zhèn)痛和消炎化合物，它們可為潛在的口服給藥化合物。出現(xiàn)了防止下述神經(jīng)原性炎癥的可能，所述炎癥中由初級(jí)傳入釋放的感覺(jué)神經(jīng)肽——如P物質(zhì)(SP)或降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)——具有重要作用，并且，還在對(duì)七肽生長(zhǎng)抑素類(lèi)似物TT-232有效性考察的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)了發(fā)現(xiàn)新型鎮(zhèn)痛藥的可能。根據(jù)先前的考察情況，發(fā)現(xiàn)TT-232是防止神經(jīng)原性和非神經(jīng)原性炎癥的有效鎮(zhèn)痛藥，它在神經(jīng)病性傷害性模型中也有效。由于TT-232是肽結(jié)構(gòu)且不能口服吸收，因此同時(shí)開(kāi)始了該化合物的臨床試驗(yàn)考察以考察其肽模擬類(lèi)似物，從而找到一種可口服吸收、并與TT-232類(lèi)似地具有廣譜消炎鎮(zhèn)痛作用的化合物。對(duì)分離的大鼠氣管的感覺(jué)神經(jīng)元元件(element)進(jìn)行電刺激以進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。在刺激的影響下由辣椒素敏感性神經(jīng)元元件釋放出神經(jīng)原性炎癥的介質(zhì)——P物質(zhì)，通過(guò)放射免疫測(cè)定法可測(cè)定水浴中的P物質(zhì)濃度。生長(zhǎng)抑素拮抗劑及TT-232阻止終神經(jīng)興奮，從而使得水浴中釋放的神經(jīng)肽量變少。關(guān)于TT-232對(duì)神經(jīng)原性和非神經(jīng)原性炎癥的消炎作用的實(shí)驗(yàn)曾主要針對(duì)大鼠進(jìn)行(如芥子油誘發(fā)的漿液外滲、葡聚糖(dextrane)水腫、弗氏佐劑誘導(dǎo)的慢性關(guān)節(jié)炎水腫、緩激肽(bradyquinine)誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)漿液滲出、角叉膠(carrageenine)水腫、角叉膠影響下的白細(xì)胞聚集)。在本專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)所述的生物實(shí)驗(yàn)中，用辣椒素的醇溶液誘導(dǎo)小鼠耳水腫，并通過(guò)測(cè)量耳的質(zhì)量和伊文思藍(lán)(Evans’sblue)累積水平來(lái)定量評(píng)價(jià)上述水腫程度。先前已在Wistar雌性大鼠上證實(shí)了TT-232對(duì)弗氏佐劑誘導(dǎo)的慢性炎癥的消炎作用。該模型為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?004年對(duì)患有風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者進(jìn)行了TT-232的II期臨床試驗(yàn)?？紤]到弗氏佐劑加重了Lewis系大鼠的癥狀，即Lewis系大鼠關(guān)節(jié)的顯著變形，所以除了考察由弗氏佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)腫脹外，還考察了TT-232對(duì)骨組織破壞、對(duì)滑膜淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞濾過(guò)、和對(duì)機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏的發(fā)展的影響。在本專(zhuān)利說(shuō)明書(shū)所述的實(shí)驗(yàn)中使用了以下裝置。由BrukerAC300裝置獲得了NMR圖。用于HPLC檢測(cè)的裝置為具有SupelcoDiscoveryRP-AmideC16柱的并帶有ZMDMS檢測(cè)器和Waters996DADUV檢測(cè)器的WatersHPLC，其中乙腈梯度為每6分鐘10至100％(甲酸含量0.05％)，流速為每分鐘3ml。BüchiMeltingPointB-540裝置用于測(cè)定熔點(diǎn)。在以下實(shí)施例中敘述本發(fā)明的化合物、制備它們的方法和確定它們的效用的實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例1制備2-氨基-4，5-二甲基-1-(3-氯苯基)-1H-吡咯并-3-甲腈的方法將18g(0.2mol)3-羥基-2-丁酮和21ml(0.2mol)3-氯苯胺溶于300ml甲苯中，然后加入0.2ml濃HCl。反應(yīng)混合物回流兩個(gè)半小時(shí)后在大氣壓下蒸發(fā)至一半體積，最后真空蒸除所有溶劑。將得到的物料溶于350ml乙醇中，先加入13.2ml(0.2mol)丙二腈，后向其中滴加11.2gKOH溶于50ml水的溶液，用冰冷卻?；旌衔锘亓?小時(shí)后冷卻。過(guò)濾所得的結(jié)晶產(chǎn)物，用己烷洗滌(45.2g；92％)。實(shí)施例2制備5，6-二甲基-7-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-醇(ole)的方法40g2-氨基-4，5-二甲基-1-(3-氯苯基)氨基-3-氰基-吡咯(實(shí)施例1)在200g甲酸中回流10小時(shí)。之后將混合物倒至冰上，并攪拌1小時(shí)。將沉淀出的物質(zhì)過(guò)濾，水洗滌。產(chǎn)物于室溫干燥，不作進(jìn)一步純化即用于下一反應(yīng)(27g；60％)。實(shí)施例3制備5，6-二甲基-4-氯-7-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶的方法。將26.9g4-羥基-5，6-二甲基-7-((3-氯苯基)氨基)吡咯并[2，3-d]嘧啶(實(shí)施例2)溶于125mlPOCl3中，混合物回流1小時(shí)后倒至體積至少大于其10倍的遠(yuǎn)遠(yuǎn)過(guò)量的冰水中，POCl3完全分解后濾出沉淀出的產(chǎn)物，水洗、干燥(26.28g；92％)。實(shí)施例4制備[5-叔丁基-2-(3-硝基-苯基)-2H-吡唑-3-基]-[7-(3-氯苯基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-胺的方法將0.292g(1mmol)5，6-二甲基-4-氯-7-((3-氯苯基)氨基)吡咯并[2，3-d]嘧啶(實(shí)施例3)和0.26g(1mmol)5-叔丁基-2-(3-硝基-苯基)-2H-吡唑-3-基-胺(im4_3)溶于4ml二甲基亞砜中，劇烈混合過(guò)程中分次加入200mg氫化鈉，然后將混合物室溫混合1小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒至冰上，過(guò)濾出沉淀出的沉積物，并將其在乙酸乙酯和己烷的混合物中重結(jié)晶(0.31g；60％)。實(shí)施例5制備[7-(3-氯苯基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼的方法2.92g(10mmol)4-氯-7-(3-氯苯基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(實(shí)施例3)與3ml水合肼一同在30ml乙醇中煮沸3小時(shí)，減壓蒸餾溶劑和多余的水合肼。蒸發(fā)后的剩余物分為水和乙酸乙酯層。將有機(jī)層干燥后蒸發(fā)。蒸發(fā)的剩余物用乙醚研碎，由此獲得[7-(3-氯苯基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼(1.9g；66％)。實(shí)施例6制備[7-芐基-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼的方法。按照實(shí)施例5所述方法制備題述化合物，不同點(diǎn)在于原料為已知的中間產(chǎn)物im3_1(2.71g原料)。(1.92g；74％)實(shí)施例7制備4-{[5，6-二甲基-7-(3-氯苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-亞肼基-甲基}-苯-1，2-二醇(diole)的方法將0.287g(1mmol)[7-(3-氯苯基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼(實(shí)施例5)和0.138g(1mmol)3，4-二羥基-苯甲醛在4ml乙醇中煮沸6小時(shí)，將沉淀出的產(chǎn)物——即4-{[7-(3-氯苯基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-苯-1，2-二醇——過(guò)濾并用乙醚洗滌(0.29g；68％)。實(shí)施例8制備2-氨基-4，5-二甲基-1-(3-嗎啉-4-基-丙基)-1H-吡咯-3-甲腈的方法。在包含附屬水分離器的裝置中，將8.8g(0.1mol)的3-羥基-2-丁酮(2-羥基-3-丁酮)和14.4ml(0.1mol)4-(3-氨基丙基)嗎啉溶于170ml甲苯中，加入0.1ml濃鹽酸后，使混合物回流，直至其在110℃沸騰，短時(shí)間冷卻后加入6.6ml丙二腈(malonitrile)。然后使混合物回流，直至其在110℃沸騰，然后經(jīng)Cellit過(guò)濾，冷卻。過(guò)濾沉淀出的晶體(17.31g，66％)。實(shí)施例9制備5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-醇的方法。3.761g(14.33mmol)2-氨基-4，5-二甲基-1-(3-嗎啉-4-基-丙基)-1H-吡咯并-3-甲腈(實(shí)施例8)在38ml甲酸中回流過(guò)夜。在此過(guò)程中用水稀釋混合物，并用NaHCO3中和，用乙酸乙酯振蕩搖出，然后將有機(jī)相蒸發(fā)，用己烷處理沉淀出的晶體，然后過(guò)濾(3.265g；78.5％)。實(shí)施例10制備5，6-二甲基-4-氯-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶的方法。3g(10.33mmol)5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-醇(實(shí)施例9)在15mlPOCl3中回流1小時(shí)。將混合物倒至冰上，用NaHCO3中和，用乙酸乙酯振蕩搖出，蒸發(fā)。得到棕色油狀物(2.71g；85％)。實(shí)施例11制備[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼的方法。將1.785g(5.78mmol)5，6-二甲基-4-氯-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(實(shí)施例10)溶于剛夠形成溶液的量(120ml)的乙醇中，隨后加入17.8ml水合肼，混合物回流約15min，然后蒸發(fā)，并將其分為水和乙酸乙酯層。干燥、蒸發(fā)有機(jī)相。將蒸發(fā)過(guò)程中沉淀出的晶體用己烷研碎，然后過(guò)濾(1.07g；61％)。實(shí)施例12制備4-{[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-鄰苯二酚(katechole)的方法。將304.4mg(1mmol)[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼(實(shí)施例11)和138.1mg(1mmol)3，4-二羥基-苯甲醛溶于6ml乙醇后回流半小時(shí)。濾出沉淀的晶體，然后用乙醇和己烷洗滌(45％)。實(shí)施例13制備4-{[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]亞肼基甲基}-2-硝基-苯酚的方法。304mg(1mmol)[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼(實(shí)施例11)和169mg(1mmol)3-硝基-4羥基-苯甲醛在6ml乙醇中回流4小時(shí)，然后冷卻，過(guò)濾，用乙醇和己烷洗滌(176mg；36％)。實(shí)施例14制備4-{[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-亞肼基甲基}-2-甲氧基-苯酚的方法。304mg(1mmol)[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼(實(shí)施例11)和152mg(1mmol)香草醛在6ml乙醇中回流，之后濾出沉淀的晶體，用乙醇和己烷洗滌(221.37mg；50％)。實(shí)施例15制備4，6-二氯-3-{[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-亞肼基}-1，3-二氫-吲哚-2-酮(indole-2-on)的方法。將108mg(0.5mmol)4，6-二氯-靛紅加至152.2mg(0.5mmol)[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-肼(實(shí)施例11)中，混合物在4ml乙醇中回流。濾出沉淀的橘黃色晶體，然后用乙醇和己烷洗滌(102mg；40％)。實(shí)施例16制備[5-叔丁基-2-(3-硝基-苯基)-2H-吡唑-3-基]-[5，6-二甲基-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-胺的方法。將650mg(2.5mmol)5-叔丁基-2-(3-硝基-苯基)-2H-吡唑-3-基-胺和722mg(2.5mmol)5，6-二甲基-4-氯-7-(3-嗎啉-4-基-丙基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(實(shí)施例10)溶于4mlDMSO中，然后加入200mgNaH，混合物室溫?cái)嚢璋胄r(shí)，然后將混合物倒至冰上。將混合物用EtOAc萃取，干燥并蒸發(fā)。柱分離所得的棕色油狀物，蒸發(fā)后用己烷研碎，過(guò)濾沉淀出的黃色晶體(272.2mg；20％)。實(shí)施例17至19表2中給出了實(shí)施例化合物的化學(xué)式和制備方法，表3中給出了化合物的物理和化學(xué)性質(zhì)。實(shí)施例92制備[5-叔丁基-2-(4-甲氧基-苯基)-2H-吡唑-3-基]-[5，6-二甲基-7-(6-甲基-吡啶-2-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基]-胺鹽酸鹽的方法。將48mg實(shí)施例91的化合物溶于1ml無(wú)水二噁烷中，向混合物中加入0.2ml4M鹽酸的乙醚溶液。過(guò)濾出沉淀的黃色沉積物，并用乙醚洗滌(36mg；70％)，熔點(diǎn)為97-98℃。表2表3物理-化學(xué)性質(zhì)實(shí)施例93(藥效研究)通過(guò)大鼠氣管體外放射免疫測(cè)定(RIA)方法檢測(cè)活性物質(zhì)對(duì)P物質(zhì)(SP)釋放的抑制在體外環(huán)境中對(duì)生物浴槽(biologicalbath)中的大鼠氣管(使用體重200-250g的Wistar大鼠)檢測(cè)活性物質(zhì)對(duì)SP釋放(500×10-9mol)的影響。用充氧的克諾卜氏溶液(Krebs′ssolution)灌注1小時(shí)后，8分鐘內(nèi)取樣3次。用10Hz、40V、0.1ms的電流，在8分鐘的中間時(shí)段刺激器官120s。通過(guò)特異的放射免疫測(cè)定方法測(cè)定樣品的SP含量。在附圖中按下述方式表示測(cè)量值空白柱表示電刺激前的測(cè)量值，黑色柱表示刺激后立即測(cè)得的測(cè)量值，陰影柱表示電刺激8分鐘后的測(cè)量值。使用下述放射免疫測(cè)定方法將碘同位素I125標(biāo)記的5000cpm單碘化SP用作RIA示蹤物。使用濃度范圍為0-100fmol(phentomoles)/ml的合成的SP作標(biāo)準(zhǔn)。相對(duì)于樣品組織濕重的神經(jīng)肽濃度以“fmol/mg”單位表示。圖8表示參比物質(zhì)TT-232和濃度為500nM的8種化合物對(duì)電刺激下P物質(zhì)釋放的抑制作用(見(jiàn)黑色柱)。附圖顯示了相對(duì)于對(duì)照組所得值的顯著值，對(duì)照組僅用溶劑處理標(biāo)本器官。實(shí)施例94(藥效研究)對(duì)體內(nèi)神經(jīng)原性炎癥的抑制作用的檢測(cè)(辣椒素誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹和血漿蛋白質(zhì)外滲)將18-20g的雄性BALB/c小鼠用氯胺酮(根據(jù)本發(fā)明使用100mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kgi.m.)麻醉。測(cè)量基準(zhǔn)耳厚度后，根據(jù)本發(fā)明按0.1ml/10g的量使用待測(cè)物質(zhì)。10min后向尾靜脈中注射伊文思藍(lán)染料125mg/kg(2.5％的溶液，0.05ml/10g)，5min后對(duì)每只動(dòng)物的左耳使用10μl96％乙醇，右耳使用10μl2.5％辣椒素溶液。伊文思藍(lán)標(biāo)記染料在循環(huán)過(guò)程中與血漿白蛋白結(jié)合。在血漿白蛋白由于炎癥作用離開(kāi)血管的地方，表面變?yōu)樗{(lán)色。30min后再次測(cè)量耳厚度，用初始厚度的百分比表示腫脹程度。隨后通過(guò)放血處死動(dòng)物，將其耳切下并測(cè)量耳重。用1.5ml甲酰胺在20℃下經(jīng)過(guò)72小時(shí)提取組織片中累積的染料。用分光光度計(jì)(帶有微平板讀數(shù)器)于620nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液的光密度。外滲的染料量(表示血漿白蛋白的量)以mg/每組織濕重量的單位表示。對(duì)于兩種動(dòng)物均用辣椒素處理的耳的測(cè)量值減去乙醇處理的耳的測(cè)量值。以溶劑處理的動(dòng)物作為對(duì)照。圖9顯示了給予參比物TT-232和給予100μg/kg本發(fā)明的11種化合物后，預(yù)先用溶劑處理的對(duì)照組(黑色柱)的伊文思藍(lán)累積量。非參數(shù)曼-惠特尼(Mann-Whitney)檢驗(yàn)用于結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。*p＜0.05；**p＜0.01。實(shí)施例95(藥效研究)芥子油誘導(dǎo)的小鼠耳血管擴(kuò)張和血漿蛋白質(zhì)外滲檢測(cè)。用氯胺酮(根據(jù)本發(fā)明使用100mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kgi.m.)麻醉雄性Balb/c小鼠，然后i.v.給予以0.1ml碘同位素I125標(biāo)記的白蛋白(30kBq活性/小鼠)。向每只小鼠的左耳兩面滴加10μl1％芥子油，然后涂開(kāi)。在耳上方用γ射線(xiàn)計(jì)數(shù)器每分鐘測(cè)量放射性，測(cè)量50min。放射性的增加表明血管擴(kuò)張和血漿蛋白外滲。根據(jù)本發(fā)明，在芥子油處理前給予20μg/kgTT-232和非肽跟蹤分子(nonpeptidefollowingmolecule)11527(10和100μg/kg)。對(duì)照組使用溶劑。ANOVA分析后使用邦弗朗尼(Bonferroni)修正檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)。*p＜0.05；**p＜0.01；每組n＝7(見(jiàn)圖10)。實(shí)施例96(藥效研究)神經(jīng)病性痛覺(jué)過(guò)敏檢測(cè)坐骨神經(jīng)(n.ishiadicus)的單側(cè)部分結(jié)扎(ligation)導(dǎo)致肢體的機(jī)械傷害感受閾值降低(Seltzer手術(shù))。用UgoBasile痛覺(jué)測(cè)量計(jì)檢測(cè)機(jī)械傷害感受(Randall-Selitto試驗(yàn))。將動(dòng)物的爪置于圓形末端的聚四氟乙烯錐體下，并向爪背部(beck)中心區(qū)域施加逐漸增大的力。動(dòng)物將腿拉出時(shí)的值即是疼痛閾值?？赏ㄟ^(guò)線(xiàn)性刻度(beforelinearscale)用手動(dòng)方式以“克”讀出該值。機(jī)械閾值的變化以本身初始閾值的百分比表示。進(jìn)行對(duì)照測(cè)量后，用戊巴比妥麻醉雄性Spague-Dawley大鼠大腿坐骨神經(jīng)的一側(cè)，然后小心地分離出1/3-1/2部分神經(jīng)，將其用6/0尺寸的無(wú)創(chuàng)傷線(xiàn)(Mersilene，Ethicon)系緊，然后封閉切口。手術(shù)后第7天再次測(cè)量機(jī)械傷害感受閾值。僅對(duì)與對(duì)照結(jié)果相比閾值減小至少20％的動(dòng)物進(jìn)行隨后的檢測(cè)。給予本發(fā)明的化合物18之后20min重復(fù)測(cè)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以相對(duì)于給藥前所測(cè)的初始值的百分比表示(由白色柱表示)，并與溶劑對(duì)照組比較。使用非參數(shù)曼-惠特尼檢驗(yàn)法確定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。*p＜0.05，**p＜0.01，每組n＝6-8(見(jiàn)圖11)。權(quán)利要求1.通式(I)的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物及其治療可接受的鹽，其特征在于結(jié)構(gòu)式中R1為烷基、芳基、雜芳基、芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、雜芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、嗎啉代-含1-4個(gè)碳原子的烷基、或二烷基氨基-含1-4個(gè)碳原子的烷基，R2、R3彼此獨(dú)立地為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或環(huán)丙基，或者R2和R3一起成為1，4-亞丁基。R4為或者或者，其中R5為取代的或未取代的芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中R6、R7、R8和R9彼此獨(dú)立地為氫、鹵素、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羥基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基或磺?；?，R10為氫或腈基，R11為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基或與X相連的四亞甲基環(huán)，R12為烷基、芳基、雜芳基、芳基-含1-4個(gè)碳原子的烷基、嗎啉代-含1-4個(gè)碳原子的烷基、或二烷基氨基-含1-4個(gè)碳原子的烷基，若R11為與X相連的四亞甲基環(huán)，則X為碳，除此之外X為氮、次甲基、甲基-次甲基、乙基-次甲基、丙基-次甲基、異丙基-次甲基、環(huán)丙基-次甲基、叔丁基-次甲基、或苯基-次甲基。2.權(quán)利要求1的通式(I)化合物，其特征在于所述化合物的結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)于通式(Ia)，其中R1、R2、R3、R10、R11、R12和X與權(quán)利要求1所述相同。3.權(quán)利要求1的通式(I)化合物，其特征在于所述化合物的結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)于通式(Ib)，其中R1、R2、R3和R5與權(quán)利要求1所述相同。4.權(quán)利要求1的通式(I)化合物，其特征在于所述化合物的結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)于通式(Ic)，其中R1、R2、R3、R6、R7、R8和R9與權(quán)利要求1所述相同。5.一種藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑含有通式(I)化合物和治療可接受的添加劑。6.權(quán)利要求5的藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑可用作消炎或鎮(zhèn)痛藥物。7.權(quán)利要求5的藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑可用作減輕神經(jīng)病性痛覺(jué)過(guò)敏的藥物。8.權(quán)利要求5的藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑可用作減輕風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物。9.權(quán)利要求5的藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑可用作防止骨組織破壞或軟骨破壞的藥物。10.權(quán)利要求5的藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑可用于治療與炎癥過(guò)程相關(guān)的疾病，如哮喘、濕疹或銀屑病。11.制備通式(I)的7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物的方法，其特征在于由3-羥基-2-丁酮以及等摩爾當(dāng)量的胺和丙二腈制得通式(II)的化合物，其中R1、R2和R3與通式(I)中所述相同，將所述化合物與5-10倍質(zhì)量過(guò)量的甲酸在回流溫度下混合1小時(shí)至2天的時(shí)間，然后將混合物倒入冰水中，將沉淀出的產(chǎn)物分離、干燥，然后與5-10倍質(zhì)量過(guò)量的磷酰氯在回流溫度下反應(yīng)0.5-4小時(shí)，然后將混合物倒至冰上，將沉淀出的其中R1、R2、R3與通式(I)所述相同的通式(III)的亞氨氯分離，并使其干燥、蒸發(fā)，然后A)將通式(III)的亞氨氯溶于非質(zhì)子溶劑中，并使其與等當(dāng)量的通式(II)或(IV)的胺反應(yīng)0.5-6小時(shí)，其中通式(II)或(IV)的R1和R3與上述相同，同時(shí)加入2-10倍摩爾當(dāng)量過(guò)量的NaH，將所得混合物倒至冰上，分離并純化沉淀出的產(chǎn)物，或者B)在極性有機(jī)溶劑介質(zhì)中，將由此獲得的通式(III)的亞氨氯與2-10倍摩爾當(dāng)量過(guò)量的水合肼反應(yīng)，將有機(jī)相中的反應(yīng)產(chǎn)物從混合物中分離，干燥、蒸發(fā)有機(jī)相，然后用非極性溶劑將有機(jī)相研碎，由此生成的肼衍生物與極性有機(jī)溶劑混合，并使其與等當(dāng)量的醛在20-120℃反應(yīng)1-12小時(shí)，然后分離反應(yīng)產(chǎn)物，或者C)將按方法B)制備的肼衍生物與極性有機(jī)溶劑混合，并與等當(dāng)量的靛紅反應(yīng)，然后分離反應(yīng)產(chǎn)物。全文摘要本發(fā)明涉及新的7H－吡咯并[2，3－d]嘧啶衍生物及其治療可接受的鹽、含有它們的藥物制劑和制備該活性物質(zhì)的方法。所述藥物制劑有利地為消炎和鎮(zhèn)痛制劑、減輕神經(jīng)病性痛覺(jué)過(guò)敏和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的制劑、用于防止骨組織軟骨破壞的制劑，可用于治療與其它炎癥過(guò)程有關(guān)的疾病——如哮喘、濕疹或銀屑病——的制劑。文檔編號(hào)A61P29/00GK1972946SQ200580020689公開(kāi)日2007年5月30日申請(qǐng)日期2005年4月25日優(yōu)先權(quán)日2004年4月29日發(fā)明者杰諾斯·蘇善宜,拉斯羅·歐飛,喬治·凱瑞,弗賴(lài)杰斯·瓦斯?jié)煽?艾瑞克·平特,祖善那·海牙斯,塔瑪斯·祖特,約瑟夫·耐邁斯申請(qǐng)人:杰諾斯·蘇善宜,拉斯羅·歐飛,喬治·凱瑞,弗賴(lài)杰斯·瓦斯?jié)煽?艾瑞克·平特,祖善那·海牙斯,塔瑪斯·祖特,約瑟夫·耐邁斯