專利名稱：扁蕾芴酮及其衍生物和它們的制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥化合物，具體地說是從濕生扁蕾全草中分離得到的一種新化合物(扁蕾芴酮)及其衍生物和它們?cè)谥苽渌幬锓矫娴挠猛尽?br> 背景技術(shù)：
濕生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma)屬于龍膽科扁蕾屬植物，藏藥名稱又叫機(jī)合斗，是一年生草本植物，主要分布在我國的西北地區(qū)。濕生扁蕾是全草入藥，具有清熱解毒的功效，治急性黃疸性肝炎、結(jié)膜炎、高血壓、腸胃炎、腹瀉、痔瘡腫毒。藏醫(yī)用全草治流行性感冒及膽病引起的發(fā)燒。用濕生扁蕾研制的扁蕾?zèng)_劑，在治療小兒腹瀉方面，療效顯著。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種扁蕾芴酮新化合物及其衍生物和它們的制備與在制備藥物方面的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明利用現(xiàn)代分離技術(shù)和結(jié)構(gòu)測定手段對(duì)濕生扁蕾進(jìn)行化學(xué)成分研究過程中，從中分離得到了一種通式(1)的新化合物及其衍生物，并發(fā)現(xiàn)它們具有抗氧化、抗菌和平滑肌舒張的作用。
扁蕾芴酮及其衍生物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下式(1)， 式(1)其中R1、R2和R3可為H或-CH3。
其制備過程如下以濕生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma)全草為原料，經(jīng)用75％乙醇水溶液回流提取得浸膏，浸膏懸浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反復(fù)萃取，得到正丁醇部分；正丁醇部分經(jīng)80-100目的聚酰胺柱層析，再經(jīng)硅膠柱層析，PTLC分離純化，得到R1＝R2＝R3＝H的式(1)化合物。
所述扁蕾芴酮及其衍生物可在制備治療高血壓、腸胃炎、腹瀉、流行性感冒藥物中應(yīng)用；具有式(1)化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物也可作為食品抗氧化劑、植物殺菌劑，及藥物中的鈣離子拮抗劑。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1)用本發(fā)明提供的方法對(duì)化合物A進(jìn)行提取分離，簡單方便，容易操作。
2)本發(fā)明化合物A結(jié)構(gòu)新穎，為新化合物，藥效高，可做為先導(dǎo)化合物，來設(shè)計(jì)開發(fā)出新型高效藥物。
3)本發(fā)明具有抗氧化、抗菌和平滑肌舒張等活性；可用于制備醫(yī)療藥物，特別是食品抗氧化劑、植物殺菌劑及鈣離子拮抗劑等方面的藥物。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 化合物A的提取分離以濕生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma)全草(1.0kg)為原料，經(jīng)用75％乙醇回流提取得浸膏237g。浸膏懸浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反復(fù)萃取，得到正丁醇部分69g。正丁醇部分(60g)經(jīng)聚酰胺柱(80-100目)層析，水、30％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇洗脫，分為5個(gè)部分。50％乙醇部分經(jīng)硅膠柱(200-300目)層析，石油醚-乙酸乙酯(10∶1-0∶10)洗脫，TLC檢測洗脫液中的化學(xué)成分，化學(xué)成分相同的合并，共合并為I-IV4個(gè)部分。部分II用PTLC(300-400目)分離純化，展開劑為石油醚-乙酸乙酯(2.5∶1)，展開后薄板上出現(xiàn)兩條黃色的色譜帶，把其中顏色較深的條帶刮下來，用甲醇溶解，過濾，得到R1＝R2＝R3＝H的式(1)化合物(即化合物A，7mg)。
實(shí)施例2 化合物A的結(jié)構(gòu)鑒定化合物A，黃色粉末(甲醇沉淀)，體積濃度10％H2SO4乙醇溶液顯色為黃色，F(xiàn)eCl3反應(yīng)呈陽性，提示有酚羥基的存在。結(jié)合質(zhì)譜(APIESMS273.0[M-1]-)、高分辨質(zhì)譜(HREIMS274.0481)確定分子式為C14H10O6，由此推出分子的不飽和度為10。
紅外光譜提示分子中存在羥基(3444cm-1)，烷基(2925，2854cm-1)，羰基(1654cm-1)以及苯環(huán)骨架(1600，1575cm-1)。1H-NMR譜顯示2個(gè)芳香氫δ7.26，7.08(各1H，d，J＝9.0Hz)，提示苯環(huán)上有兩個(gè)鄰位氫；2個(gè)烯鍵氫δ5.89，5.79(各1H，s)，提示有兩個(gè)獨(dú)立的雙鍵氫；δ3.78(3H，s)處的氫信號(hào)提示有甲氧基的存在。13C-NMR譜給出14個(gè)碳信號(hào)，δ178.0，173.5提示兩個(gè)羰基的存在。因?yàn)榉肿拥牟伙柡投葹?0，所以該分子的結(jié)構(gòu)除了有1個(gè)苯環(huán)，2個(gè)雙鍵，2個(gè)羰基外，還有2個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)。COSY譜顯示Hδ7.26與7.08相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了這兩個(gè)苯環(huán)氫相鄰；HSQC譜顯示的碳?xì)湎嚓P(guān)信號(hào)有Hδ7.26與Cδ122.7，δ7.08與112.6，δ5.89與94.6，δ5.79與99.9，δ3.78與60.9；在HMBC譜中，苯環(huán)氫δ7.08與雙鍵氫δ5.89都與碳δ178.0遠(yuǎn)程相關(guān)，雙鍵氫δ5.89，5.79與碳δ173.5，99.6都有相關(guān)，由此確定了另外兩個(gè)環(huán)B，C的結(jié)構(gòu)。此外，甲氧基的位置也由HMBC譜確定(氫δ3.78與碳δ145.2相關(guān))。因此，該化合物的結(jié)構(gòu)鑒定為4，4a，6-三羥基-5-甲氧基-2，9-芴二酮，命名為扁蕾芴酮(gentianopfluorenone)。
化合物A結(jié)構(gòu)測定的試驗(yàn)數(shù)據(jù)mp 229-231℃；APIES-MS273[M-H]-，HREI-MS274.0481，分子式C14H10O6；IR(KBr)cm-13444，2925，2854，1654，1600，1580，1428，1380，1315，1282，1174，1058，819；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.25(1H，d，J＝8.8Hz，H-7)，7.06(1H，d，J＝8.8Hz，H-8)，5.89(1H，s，H-1)，5.79(1H，s，H-3)，3.78(3H，s，5-OCH3)；13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ94.56(C-1)，173.49(2-C＝O)，99.90(C-3)，162.87(C-4)，99.56(C-4a)，146.72(C-4b)，145.23(C-5)，148.89(C-6)，122.69(C-7)，112.62(C-8)，115.00(C-8a)，157.19(C-8b)，178.03(9-C＝O)，60.94(-OCH3)。
實(shí)施例3 化合物A的抗氧化作用化合物A和DPPH(二苯三硝基苯肼)分別溶于乙醇中，配成所需濃度，化合物A為10-4M、5×10-4M、10-3M，DPPH為2×10-4M。然后在水解管中等體積混合，通入氮?dú)庖灾脫Q出其中的空氣，立即旋緊蓋子。避光反應(yīng)1h后測定反應(yīng)液的OD＝517，計(jì)算DPPH的清除效率，DPPH清除效率＝(A0-A1)×100％/A0，其中，A0DPPH溶液+有機(jī)溶劑的吸光度；A2有機(jī)溶劑+抗氧化劑溶液的吸光度，DPPH的清除效率分別為42％，65％，97％；結(jié)果表明化合物A對(duì)DPPH有清除作用，具有一定的抗氧化活性。
實(shí)施例4 化合物A的抗菌作用利用K-B紙片擴(kuò)散法和生長速率法分別測定了化合物A的抗細(xì)菌作用和抗真菌作用，細(xì)菌菌種為為金黃色葡萄球菌、白菜軟腐病菌、柑桔潰瘍、枯草芽孢桿菌，真菌為玉米大斑病菌、番茄早疫病菌、瓜類枯萎病菌、辣椒疫霉、毛霉、煙草炭疽。結(jié)果表明化合物A對(duì)所測試的菌種都有抑制作用，且對(duì)辣椒疫霉的作用最強(qiáng)。
實(shí)施例5 化合物A對(duì)離體平滑肌的作用化合物A與阿拉伯膠粉研磨，加蒸餾水配成待試液(0.1，0.2，0.3mg/ml)。取不同劑量的(0.05ml，0.1ml，0.2ml)待試液分別用蒸餾水稀釋到1ml，依次加入到懸掛有離體腸管的臺(tái)氏液24ml中，通過生物信號(hào)系統(tǒng)(BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司)可觀察到三個(gè)劑量的化合物A對(duì)離體平滑肌的自發(fā)收縮均有抑制作用，且其高劑量抑制作用顯著(P＜0.01)。
權(quán)利要求
1.扁蕾芴酮及其衍生物，其特征在于其化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下式(1)， 式(1)其中R1、R2和R3可為H或-CH3。
2.按照權(quán)利要求1所述扁蕾芴酮及其衍生物，其特征在于其中通式中的R1＝R2＝R3＝H。
3.一種權(quán)利要求2所述扁蕾芴酮的制備，其特征在于以濕生扁蕾全草為原料，經(jīng)乙醇水溶液回流提取得浸膏，浸膏懸浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反復(fù)萃取，得到正丁醇部分；正丁醇部分經(jīng)80-100目的聚酰胺柱層析，再經(jīng)硅膠柱層析，PTLC分離純化，得到R1＝R2＝R3＝H的式(1)化合物。
4.一種權(quán)利要求1所述扁蕾芴酮及其衍生物在制備治療高血壓、腸胃炎、腹瀉或流行性感冒藥物中的應(yīng)用。
5.一種權(quán)利要求1所述扁蕾芴酮及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于具有式(1)化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物可作為食品抗氧化劑。
6.一種權(quán)利要求1所述扁蕾芴酮及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于具有式(1)化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物可作為植物殺菌劑。
7.一種權(quán)利要求1所述扁蕾芴酮及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于具有式(1)化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物作為鈣離子拮抗劑在藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥化合物，具體地說是扁蕾芴酮及其衍生物和它們的制備與應(yīng)用，其化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下式(1)，其中R
文檔編號(hào)A61P9/00GK1990447SQ20051013673
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月28日
發(fā)明者杜昱光, 王煥弟, 譚成玉, 白雪芳 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所