專(zhuān)利名稱(chēng)：一種燈盞花乙素注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種燈盞花乙素注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
燈盞花素是從民間用藥的基礎(chǔ)上從燈盞花(燈盞細(xì)辛)中分離出的一類(lèi)黃酮類(lèi)成分，主要含燈盞花乙素(為5，6，7，4’-四輕基黃酮-7-O-葡萄糖醛酸昔)、燈盞花甲素及其他有關(guān)物質(zhì)，其中燈盞花乙素是活性最強(qiáng)的有效成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，燈盞花素具有以下作用1、增加腦血流量，降低血管阻力，提高血腦屏障通透性；2、對(duì)抗由二磷酸腺昔引起的血小板聚集及高粘滯血癥，抑制血栓形成；3、有效降低腦梗塞患者的血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血小板聚集率和纖維蛋白原，抑制缺血性腦血管病患者的脂蛋白代謝異常；4、心肌營(yíng)養(yǎng)血量，改善微循環(huán)，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，減慢心率，降低心肌收縮力，降低外周阻力，減少心肌耗氧量，抗心肌缺血。燈盞花素用于治療閉塞性腦血管疾病所致的癱瘓、腦出血所致的后遺癥及缺血性腦血管疾病。如腦血栓形成、腦栓塞、腦溢血所致的頭暈、頭痛、頭重、口語(yǔ)不清、四肢麻木中風(fēng)偏癱、癱瘓等。
燈盞花素注射液(部頒中藥20冊(cè))標(biāo)準(zhǔn)中從檢查項(xiàng)下對(duì)有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定可以看出，燈盞花乙素(燈盞乙素)的重量百分含量?jī)H在90％左右。在其注意項(xiàng)下則說(shuō)明使用本品后，偶見(jiàn)全身發(fā)癢、胸悶、乏力、皮疹、心悸等現(xiàn)象?？梢?jiàn)，燈盞花注射液在使用時(shí)，伴有不良反應(yīng)的發(fā)生。有不少文獻(xiàn)也有燈盞花素注射液不良反應(yīng)的報(bào)道，并分析是由于純度不高引起的。為了提高燈盞花乙素的純度，許多研究人員作出了很大的努力申請(qǐng)?zhí)朇N200410000002.7的專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)了一種高純度的燈盞花乙素注射劑，其中的燈盞花乙素的純度達(dá)到90％-99.5％，其含量范圍區(qū)間很大，說(shuō)明對(duì)于其它成分的去除效果有限；而且說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有提到高純度燈盞花乙素的制備方法和來(lái)源。申請(qǐng)?zhí)朇N03130257.2的專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)了一種含燈盞乙素活性成分的經(jīng)注射給藥的制劑及其制備方法，其中的燈盞花乙素的含量為98％-102％，但是說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有公開(kāi)高純度燈盞花乙素的制備方法，使得本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)法實(shí)施。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明研究人員對(duì)燈盞花素中的活性最強(qiáng)的有效成分燈盞花乙素的純化方法進(jìn)行了深入研究，最終使得燈盞花乙素的含量達(dá)到了98％以上。本發(fā)明研究人員在實(shí)驗(yàn)中意外的發(fā)現(xiàn)，對(duì)于燈盞花乙素純度的提高不僅僅是去除了易引發(fā)類(lèi)熱原反應(yīng)及過(guò)敏反應(yīng)的雜質(zhì)、進(jìn)一步提高了藥用成分的純度和穩(wěn)定性，而是大大提高了藥物的療效。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種燈盞花乙素注射制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述注射制劑的制備方法。
本發(fā)明燈盞花乙素是以燈盞花素為原料制備而成的。
上述的燈盞花素是從藥材燈盞花(燈盞細(xì)辛)中提取的以黃酮類(lèi)成分為主的提取物。
上述的原料燈盞花素可以是燈盞花藥材按照部頒中藥20冊(cè)燈盞花素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的制法制備而成的，也可以是符合其標(biāo)準(zhǔn)的市售產(chǎn)品，其中燈盞花乙素的含量在90％左右。
本發(fā)明所述燈盞花乙素注射制劑中所含的活性成分燈盞花乙素的純度為98％-99.6％，是將燈盞花素通過(guò)制備型反相高效液相色譜柱純化的方法得到的。
具體的說(shuō)，上述的燈盞花乙素是通過(guò)將燈盞花素通過(guò)以十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)為填充劑的制備型反相高效液相色譜柱純化的方法得到的。
更具體的說(shuō)，上述的燈盞花乙素是通過(guò)以下方法制備的將燈盞花素用少量乙醇溶解，加到填料直徑20-40μm、內(nèi)徑10-20cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑4-5倍的制備型C18高效液相色譜柱上，用40-80％乙醇溶液洗脫，檢測(cè)器在波長(zhǎng)335nm處檢測(cè)，收集富含燈盞花乙素的洗脫液，合并，旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，即得燈盞花乙素，其純度大于98％。
上述的制備型C18高效液相色譜柱，優(yōu)選為填料直徑30μm、內(nèi)徑20cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑4倍。
上述的洗脫液，優(yōu)選為60-70％的乙醇溶液。
上述的燈盞花乙素可以制備成藥劑學(xué)上所述的各種劑型，包括口服制劑和注射制劑，優(yōu)選為注射制劑。
上述的注射制劑中包括小容量注射液和大容量注射液，其次還包括粉針劑和凍干粉針劑，優(yōu)選為大容量注射液。
本發(fā)明燈盞花乙素注射制劑的制備方法如下小容量注射液的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成小容量注射液。
大容量注射液的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入等滲調(diào)節(jié)劑，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成大容量注射液。
粉針制劑的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入水溶性注射用賦形劑，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑。
凍干粉針制劑的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入水溶性注射用賦形劑，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑。
上述大容量注射液的制備方法中，所述的等滲調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、葡萄糖等，優(yōu)選為葡萄糖。
上述的制備方法中，所述的水溶性注射用賦形劑，可以是甘露醇、果糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐等中的一種、兩種或幾種的混合物。
本發(fā)明的燈盞花乙素大容量注射液，性狀為無(wú)色或黃色的澄明液體，規(guī)格可以為100ml、250ml、500ml，最優(yōu)選的規(guī)格為250ml，每瓶含燈盞花乙素20mg和等滲調(diào)節(jié)劑12.5g。
本發(fā)明所述的燈盞花乙素注射液在臨床應(yīng)用時(shí)，肌內(nèi)注射，一次5mg，一日2次；靜脈滴注，一次1瓶，一日1次。
本發(fā)明的燈盞花乙素注射制劑具有活血化淤，通絡(luò)止痛的功效，在臨床上可用于腦血栓形成、腦栓塞、短暫性腦缺血發(fā)作、腦動(dòng)脈硬化癥、血管性癡呆等缺血性腦血管疾病及其后遺癥；出血性腦血管疾病的后遺癥；冠心病、心絞痛、心肌梗塞等缺血性心腦血管疾?。灰磺腥毖鞍橛形⒀h(huán)障礙性疾??；多臟器損傷、急性腦衰、腎衰、呼衰等病癥。
燈盞花乙素為燈盞細(xì)辛中提取的黃酮類(lèi)物質(zhì)，它能使血栓中血小板含量減少，并減輕血小板的破壞與5-羥色胺釋放反應(yīng)，對(duì)血小板與血管內(nèi)皮細(xì)胞的花生四烯酸代謝物TXB2與6-Keto-PEG1α的生成均具有抑制作用；燈盞花乙素還能明顯降低腦血管阻力和外周血壓；此外，燈盞花乙素還能增加冠脈流量，引起人體外血小板cAMP含量增高，提高血腦屏障通透性。
燈盞花乙素純度的提高，去除了易引發(fā)類(lèi)熱原反應(yīng)及過(guò)敏反應(yīng)的雜質(zhì)、進(jìn)一步提高了藥用成分的純度和穩(wěn)定性。
本發(fā)明研究人員對(duì)本發(fā)明的6批燈盞花乙素的純度進(jìn)行了測(cè)定。方法按照《中國(guó)藥典》2005年版燈盞細(xì)辛(燈盞花)下的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
表1燈盞花乙素純度測(cè)定結(jié)果

由上述含量測(cè)定結(jié)果可以看出，6批燈盞花乙素的純度在98.0％-99.6％之間。
本發(fā)明研究人員將2g的燈盞花素和本發(fā)明燈盞花乙素分別制備成100瓶的燈盞花素大容量注射液和本發(fā)明燈盞花乙素大容量注射液。在正常環(huán)境下放置2年，觀察穩(wěn)定性。
結(jié)果燈盞花素大容量注射液穩(wěn)定性較差，在2年內(nèi)有顏色異常、沉淀異物析出的情況發(fā)生；而本發(fā)明燈盞花素大容量注射液穩(wěn)定性好，在2年內(nèi)極少有異常現(xiàn)象發(fā)生。
本發(fā)明研究人員以燈盞花素注射液為對(duì)照藥，對(duì)本發(fā)明燈盞花乙素注射液進(jìn)行了過(guò)敏反應(yīng)觀察。
過(guò)敏反應(yīng)即變態(tài)反應(yīng)，屬于B型不良反應(yīng)，是與藥物常規(guī)藥理作用無(wú)關(guān)的異常反應(yīng)，通常難以預(yù)測(cè)在具體病人身上是否會(huì)出現(xiàn)，在藥物研究階段的常規(guī)毒理學(xué)試驗(yàn)中難以發(fā)現(xiàn)，一般與用藥劑量無(wú)關(guān)。變態(tài)反應(yīng)是外來(lái)性抗原物質(zhì)與體內(nèi)抗體間所發(fā)生的一種非正常免疫反應(yīng)。中藥注射液中的半抗原物質(zhì)與體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合成全抗原，從而引起過(guò)敏反應(yīng)。
為了便于比較，本發(fā)明研究人員將過(guò)敏反應(yīng)分為輕度、中度、重度3個(gè)等級(jí)輕度者表現(xiàn)皮膚瘙癢伴有紅色斑丘疹等；中度者則呼吸困難，頭痛、心慌、胸悶、呼吸急促，同時(shí)伴有不同程度的皮膚過(guò)敏反應(yīng)；重度者表現(xiàn)為過(guò)敏性休克，患者氣短胸悶，呼吸困難，面色蒼白，四肢冰冷，口唇發(fā)紺，大汗淋漓，血壓降低。
臨床應(yīng)用資料患者60人，對(duì)照組和本發(fā)明藥物組各30人，男女對(duì)半。靜脈滴注給予對(duì)照藥物燈盞花素注射液和本發(fā)明燈盞花乙素注射液，觀察結(jié)果。
結(jié)果對(duì)照組有4例出現(xiàn)了變態(tài)反應(yīng)，其中2例為輕度反應(yīng)，2例為中度反應(yīng)；本發(fā)明藥物組則未出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)。說(shuō)明本發(fā)明燈盞花乙素注射制劑比對(duì)照藥更加安全。
本發(fā)明研究人員發(fā)現(xiàn)，燈盞花乙素純度的提高不僅僅是去除了易引發(fā)類(lèi)熱原反應(yīng)及過(guò)敏反應(yīng)的雜質(zhì)、進(jìn)一步提高了藥用成分的純度和穩(wěn)定性，而是可以大大提高藥物的療效。
本發(fā)明研究人員發(fā)現(xiàn)燈盞花素注射液的劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)不穩(wěn)定，隨著給藥劑量的增大，藥物所產(chǎn)生的效應(yīng)是波動(dòng)式的提高。即在某一給藥劑量范圍內(nèi)，高劑量所產(chǎn)生的效應(yīng)反而小于低劑量產(chǎn)生的效應(yīng)。而本發(fā)明的燈盞花乙素的劑量-效應(yīng)曲線(xiàn)呈正相關(guān)，即隨著給藥劑量的增大，藥物所產(chǎn)生的效應(yīng)也在增大。當(dāng)燈盞花素注射液和本發(fā)明燈盞花乙素注射制劑的給藥劑量相同的條件下，本發(fā)明燈盞花乙素注射制劑產(chǎn)生的效應(yīng)明顯高于燈盞花注射液。說(shuō)明，本發(fā)明燈盞花乙素注射制劑中燈盞花乙素純度的提高，能明顯提高藥物的療效。
具體實(shí)施例方式
下面實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但所述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。
實(shí)施例1將燈盞花藥材按照部頒中藥20冊(cè)中的燈盞花素項(xiàng)下的制法制備成燈盞花素。
實(shí)施例2將上述燈盞花素用少量乙醇溶解，加到填料直徑20μm、內(nèi)徑20cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑5倍的制備型C18高效液相色譜柱上，用40％乙醇溶液洗脫，檢測(cè)器在波長(zhǎng)335nm處檢測(cè)，收集富含燈盞花乙素的洗脫液，合并，旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，即得燈盞花乙素。
實(shí)施例3將市售符合標(biāo)準(zhǔn)的燈盞花素用少量乙醇溶解，加到填料直徑40μm、內(nèi)徑10cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑4倍的制備型C18高效液相色譜柱上，用80％乙醇溶液洗脫，檢測(cè)器在波長(zhǎng)335nm處檢測(cè)，收集富含燈盞花乙素的洗脫液，合并，旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，即得燈盞花乙素。
實(shí)施例4將上述燈盞花素用少量乙醇溶解，加到填料直徑30μm、內(nèi)徑15cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑5倍的制備型C18高效液相色譜柱上，用60％乙醇溶液洗脫，檢測(cè)器在波長(zhǎng)335nm處檢測(cè)，收集富含燈盞花乙素的洗脫液，合并，旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，即得燈盞花乙素。
實(shí)施例5將上述燈盞花素用少量乙醇溶解，加到填料直徑30μm、內(nèi)徑20cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑4倍的制備型C18高效液相色譜柱上，用70％乙醇溶液洗脫，檢測(cè)器在波長(zhǎng)335nm處檢測(cè)，收集富含燈盞花乙素的洗脫液，合并，旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，即得燈盞花乙素。
實(shí)施例6取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，調(diào)pH值為6.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成小容量注射液。
實(shí)施例7取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入葡萄糖，調(diào)pH值為6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成大容量注射液。
實(shí)施例8取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入甘露醇和葡聚糖，調(diào)pH值為7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑。
實(shí)施例9取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐，調(diào)pH值為6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑。
權(quán)利要求
1.一種燈盞花乙素注射制劑，其特征在于，所述注射制劑中所含的活性成分燈盞花乙素的純度為98％-99.6％，是將燈盞花素通過(guò)制備型反相高效液相色譜柱純化的方法得到的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射制劑，其特征在于，所述燈盞花乙素是將燈盞花素通過(guò)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的制備型反相高效液相色譜柱純化的方法得到的。
3.權(quán)利要求1或2所述注射制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟將燈盞花素用少量乙醇溶解，加到填料直徑20-40μm、內(nèi)徑10-20cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑4-5倍的制備型C18高效液相色譜柱上，用40-80％乙醇溶液洗脫，檢測(cè)器在波長(zhǎng)335nm處檢測(cè)，收集富含燈盞花乙素的洗脫液，合并，旋轉(zhuǎn)刮膜濃縮，干燥，即得燈盞花乙素。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的色譜柱填料直徑30μm、內(nèi)徑20cm、柱長(zhǎng)為內(nèi)徑4倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述的洗脫液為60-70％的乙醇溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，還包括以下步驟小容量注射液的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成小容量注射液；大容量注射液的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入等滲調(diào)節(jié)劑，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成大容量注射液；粉針制劑的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入水溶性注射用賦形劑，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑；凍干粉針制劑的制備取上述燈盞花乙素用注射用水溶解，加入水溶性注射用賦形劑，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述的等滲調(diào)節(jié)劑為葡萄糖。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述的水溶性注射用賦形劑，可以是甘露醇、果糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、右旋糖酐等中的一種、兩種或幾種的混合物。
9.權(quán)利要求1或2所述的注射制劑，具有活血化瘀、通絡(luò)止痛的功效。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種燈盞花乙素注射制劑及其制備方法。其中活性成分燈盞花乙素的純度為98％－99.6％，是將燈盞花素通過(guò)制備型反相高效液相色譜柱純化的方法制備的。本發(fā)明注射制劑與現(xiàn)有制劑比較，穩(wěn)定性更好、不良反應(yīng)更小、治療效果更好，具有活血化瘀、通絡(luò)止痛的功效。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1823803SQ200510135500
公開(kāi)日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2005年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月31日
發(fā)明者張玉梅 申請(qǐng)人:阿爾貝拉醫(yī)藥控股(通化)有限公司