專利名稱：一種燈盞花素納米注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種燈盞花素納米注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米中藥主要是指運(yùn)用納米技術(shù)制造的，粒徑小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。生物機(jī)體對藥物的吸收、代謝是一個復(fù)雜的過程，中藥制劑產(chǎn)生的藥理效應(yīng)不能僅僅歸之于藥物特有的化學(xué)組成還與該制劑的物理狀態(tài)密切相關(guān)。因此，改變藥物制劑的物理狀態(tài)是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態(tài)方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當(dāng)顆粒尺寸進(jìn)入納米量級時由于量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，納米粒子呈現(xiàn)出新奇的物理化學(xué)和生物學(xué)特性。這就是應(yīng)用納米技術(shù)于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產(chǎn)生新的特性依據(jù)所在。
同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。
目前納米技術(shù)在中藥研究中存在以下的問題。第一，納米中藥的制備困難我國雖已制備一些納米級的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化。第二，納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了顯著的變化，這些變化對人體是否有毒副反應(yīng)均未有有關(guān)的研究報(bào)道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會進(jìn)入細(xì)胞器內(nèi)，是否會直接參與或作為催化劑擾亂機(jī)體正常的化學(xué)反應(yīng)，均未見有關(guān)報(bào)道。此外，納米中藥還可以通過機(jī)體的屏障系統(tǒng)，那它是否會影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，精子的生成及其活力、胎兒的發(fā)育等，這些問題均無法回避。第三，中藥在納米級粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來很大的困難。第四，成本提高由于現(xiàn)有技術(shù)水平及設(shè)備的限制，造成納米中藥在制備中的花費(fèi)比傳統(tǒng)中藥的制備要高出不少。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級，對大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因?yàn)橹兴幱行С煞趾陀行Р课惶貏e是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。
燈盞花素是從中草藥燈盞花[Erigeron breriscapus(vant)Hand mazz]中提取分離的黃酮類有效成分，為燈盞花乙素為主和含有少量燈盞花甲素的混合物，在治療腦血栓形成、腦梗塞、中風(fēng)后癱瘓、冠心病心絞痛等心腦血管疾病上有非常顯著的效果，燈盞花素口服時在胃和小腸中主要以游離的分子形式存在而難以溶解，造成吸收差，生物利用度低，燈盞花素注射劑由于燈盞乙素本身不穩(wěn)定且難溶于水，一般在堿性pH下溶解配制注射液，但受多成分及降解的影響，澄明度和穩(wěn)定性均難以保證，生產(chǎn)中采用吐溫80增溶，但當(dāng)將注射液加入到輸液中稀釋給病人靜脈注射時，由于吐溫80被稀釋和pH值的改變，增溶效果下降，輸液往往產(chǎn)生沉淀，尤其在給藥劑量較大時更為嚴(yán)重，帶來不安全因素。用冷凍干燥技術(shù)可以制備注射用粉針，對提高貯存穩(wěn)定性有一定作用，但不能解決稀釋過程中的溶解和安全性問題。
專利(申請?zhí)?1100676.5)公開了一種“納米燈盞花素制劑藥物及其制備方法”，該專利實(shí)用性較差。也有將燈盞花素制備成脂質(zhì)體的相關(guān)報(bào)道，該方法提高了原料要的溶解性，具有靶向功能，但是脂質(zhì)體在體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、分布過程中不穩(wěn)定，缺乏對血管的通透性，藥物包封率相對較低，貯藏過程中穩(wěn)定性欠佳，且脂質(zhì)體易發(fā)生聚結(jié)現(xiàn)象，隨時間變化，脂質(zhì)堆積，產(chǎn)生鄰近的脂質(zhì)體顆粒合并成大顆粒，甚至導(dǎo)致脂膜破裂、滲漏增加。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本發(fā)明研究人員經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究，將燈盞花素與適宜脂質(zhì)、乳化劑等輔料結(jié)合用本發(fā)明方法制備成本發(fā)明納米注射制劑，本發(fā)明方法簡便，易于大生產(chǎn)，采用本發(fā)明方法制備的制劑溶解性好，理化性質(zhì)穩(wěn)定，載藥量大，且制劑穩(wěn)定性顯著提高，本發(fā)明制劑能顯著提高燈盞花素通過血腦屏障的能力，更有利于發(fā)揮燈盞花素對腦梗塞、中風(fēng)后癱瘓等心腦血管疾病的療效，本發(fā)明制劑安全性更好、刺激性小，藥理實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明制劑藥理作用更顯著。
本發(fā)明旨在提供一種溶解性好、質(zhì)量穩(wěn)定、療效好的燈盞花素納米注射制劑。
本發(fā)明還提供了上述燈盞花素納米注射制劑的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一、工藝制法(1)制劑處方重量份組成為燈盞花素1份，脂質(zhì)10-20份，乳化劑10-20份。
(2)取處方量的燈盞花素、乳化劑、脂質(zhì)，加入10-40份羥丙基-β-環(huán)糊精，在80±5℃水浴條件下，攪拌溶于適量無水乙醇中，回收乙醇，迅速轉(zhuǎn)移至0℃冰箱中冷凍2-4小時，取適量甘油和poloxamer188分散于注射用水中，加入上述凍干固體，攪拌均勻，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)40-65MPa壓力下乳勻5次，迅速冷至室溫形成主藥混懸液。
(3)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑。
本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑，其特征在于燈盞花素干燥品以燈盞乙素計(jì)含量大于等于90％。
本發(fā)明所用的脂質(zhì)可以為脂肪酸甘油酯類(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯)及脂肪酸類(如硬脂酸、棕櫚酸)等。
本發(fā)明所用乳化劑可以為磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)、Pluronic F68、泊洛沙姆、聚山梨醇、膽酸鹽、四丁酚醛等。
由于燈盞花素水溶性差，與脂質(zhì)、乳化劑結(jié)合力弱，本發(fā)明在制備過程中加入10-40份羥丙基-β-環(huán)糊精，可以顯著提高燈盞花素的溶解性，減少脂質(zhì)等的用量，顯著提高制劑的包封率。
本發(fā)明納米注射制劑可以為納米水針劑、納米粉針劑、納米輸液制劑。
本發(fā)明納米水針劑、納米輸液劑加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制劑的穩(wěn)定性。
本發(fā)明納米粉針制劑的賦形劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一種或兩種。
除上述方法外，本發(fā)明制劑所用納米載體還可以通過以下方法制備得到方法一、按處方稱取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質(zhì)加入處方量燈盞花素，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得。
方法二、取燈盞花素，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入處方量的乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相，另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2h，即得。
方法三、取燈盞花素，溶于50％-80％乙醇中；將脂質(zhì)的一種或多種溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得。
方法四將燈盞花素的油溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同10份無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液40份(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
二、質(zhì)量檢測儀器H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺式高速離心機(jī)。
檢測依據(jù)參照《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄XIX E指導(dǎo)原則項(xiàng)下的方法。
1、形態(tài)觀察及粒徑將本發(fā)明納米藥物在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察，可見呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無粘連。根據(jù)納米藥物的光學(xué)顯微照片測定了500個，平均粒徑為76.3nm，最大粒徑為93.5nm，最小粒徑為25.1nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。
2、包封率和載藥量測定采用反相高效液相色譜法進(jìn)行含量測定(參照中藥部頒標(biāo)準(zhǔn)20分冊燈盞花素注射液項(xiàng)下的含量測定方法)，并用下述公式計(jì)算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量-游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量-游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。結(jié)果平均包封率為93.5％，載藥量為2％-6％。
3、穩(wěn)定性考察將本發(fā)明納米藥物分別置于小瓶內(nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀測納米藥物的外觀、大小、再分散性等。結(jié)果均未見明顯變化，3種條件下的納米藥物再分散性保持良好，無聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見表1。
表1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三、藥理實(shí)驗(yàn)試藥與動物燈盞花素注射液(哈爾濱圣泰制藥有限公司)；注射用燈盞花素(昆明龍津藥業(yè)有限公司)；本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室制備)；新西蘭家兔，體重約2.5kg；Wistar大鼠，體重180-220g；小鼠，體重18-22g。
1、血腦屏障透過實(shí)驗(yàn)取新西蘭家兔30只，體重約2.5kg，雌雄不限，分為5組，即燈盞花素注射液組、注射用燈盞花素組和本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑組(包括水針劑組、粉針劑組和輸液組)，靜脈注射各組制劑，給藥劑量為2.0mg/kg，燈盞花素注射液組、注射用燈盞花素組和本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑組(包括水針劑組、粉針劑組和輸液組)，在不同時間抽取0.5ml左右腦脊液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取樣時間分別為注射藥物后的5、10、20、30、60min、90min、120min。取腦脊液0.25ml加適量溶劑混懸15min后，靜置15min，以10000r/min離心1min，取上清液20μl進(jìn)樣，含量測定方法參照燈盞花素注射液項(xiàng)下的含量測定方法。結(jié)果見表2。
表2腦脊液中藥物濃度的測定(μg/ml)


上述結(jié)果表明燈盞花素注射液和注射用燈盞花素透過血腦屏障的量少，且消除迅速，30min后即難以檢測到有效成分，而本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑通過血腦屏障的量顯著提高，且藥物維持時間更長，。
2、對實(shí)驗(yàn)性大鼠急性腦缺血的影響取健康雄性Wistar大鼠70只，隨機(jī)分成7組，每組10只，分別為對照組，腦缺血模型組，燈盞花素注射液組、注射用燈盞花素組和本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑組(包括水針劑組、粉針劑組和輸液組)，給藥劑量為3.3mg/kg，每日尾靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥6d，末次給藥后10min，以烏拉坦1g/kg劑量腹腔注射麻醉，背位固定，手術(shù)分離雙側(cè)頸總動脈，于給藥后30min股靜脈注射伊文思藍(lán)50mg/kg，對照組不結(jié)扎雙側(cè)頸動脈，其它各組均于注射伊文思藍(lán)5min后立即結(jié)扎雙側(cè)頸動脈結(jié)扎3h后斷頭取腦稱重計(jì)算腦指數(shù)(mg/g)，另取部分腦稱重后，置4ml甲酰胺溶液中，置于45℃恒溫箱中72h，離心，取上層液于620nm處測定OD值，計(jì)算出腦內(nèi)伊文思藍(lán)含量(μg/g腦濕重)。將離心后腦組織置110℃烘箱中至恒重，計(jì)算腦含水量[％＝(濕重-干重)/濕重×100％]。結(jié)果見表3表3對實(shí)驗(yàn)性大鼠急性腦缺血的影響

與對照組比較**p＜0.01，與模型組比較Δp＜0.05ΔΔp＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明燈盞花素制劑對動物腦指數(shù)、腦含水量和伊文思藍(lán)含量均有改善作用，而本發(fā)明燈盞花素納米制劑作用更為顯著，說明本發(fā)明納米制劑對實(shí)驗(yàn)性大鼠急性腦缺血的保護(hù)作用更強(qiáng)。
3、對大鼠血液血栓形成的影響取健康大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分6組，每組10只，分別為生理鹽水組，燈盞花素注射液組、注射用燈盞花素組和本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑組(包括水針劑組、粉針劑組和輸液組)，給藥劑量和方法同2，生理鹽水組給予等容量生理鹽水，于末次給藥后10min，以烏拉坦1g/kg劑量腹腔注射麻醉，固定，分離右側(cè)頸總動脈及左側(cè)頸外靜脈，按旁路法進(jìn)行血栓形成測定，使右側(cè)動脈插管血液流經(jīng)置有棉線(6cm)的聚乙烯管進(jìn)入左側(cè)頸外靜脈，循環(huán)15min后，立即取出棉線稱重，計(jì)算血栓濕重及抑制率。結(jié)果見表4。
表4大鼠血液血栓形成的影響

與對照組比較**p＜0.01，與燈盞花素注射液、注射用燈盞花素比較Δp＜0.05以上結(jié)果表明燈盞花素制劑均能顯著減輕大鼠血栓濕重，而本發(fā)明燈盞花素納米制劑與燈盞花素注射液、注射用燈盞花素比較有顯著性意義，表明本發(fā)明納米制劑具有更強(qiáng)的抑制血栓形成的作用。
4、對小鼠血液凝血時間的影響取健康小鼠60只，雌雄近半，隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為生理鹽水組，燈盞花素注射液組、注射用燈盞花素組和本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑組(包括水針劑組、粉針劑組和輸液組)，給藥劑量為5mg/kg(0.2ml)，每日尾靜脈注射給藥一次，連續(xù)給藥6d，生理鹽水組給予等容量生理鹽水，末次給藥后30min眶靜脈取血，采用毛細(xì)管法，觀察藥物對小鼠血液凝血時間的影響。結(jié)果見表5。
表5對小鼠血液凝血時間的影響

與對照組比較**p＜0.01，與燈盞花素注射液、注射用燈盞花素比較Δp＜0.05以上結(jié)果表明燈盞花素制劑均能顯著延長小鼠血液凝血時間，而本發(fā)明燈盞花素納米制劑與燈盞花素注射液、注射用燈盞花素比較有顯著性意義，表明本發(fā)明納米制劑具有更好的的延長小鼠血液凝血時間的作用。
5、血管刺激性考察取健康大耳家兔3只，將動物固定于兔箱內(nèi)，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈處注射本發(fā)明納米藥物溶液，于另一側(cè)對應(yīng)部位注射同一體積的生理鹽水作為對照。每日注射1次，連續(xù)3次，觀察兔耳緣靜脈反應(yīng)。于末次給藥24h后將兔放血處死，取下兩耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm處，解剖取出靜脈，做組織切片檢查，觀察注射部位的反應(yīng)。
結(jié)果試驗(yàn)過程中，肉眼觀察兩耳靜脈注射部位處，未見紅腫、熱等刺激表現(xiàn)。表明給藥組切片部位組織形態(tài)無明顯差異，未見本品毒性所致的病理形態(tài)學(xué)改變(血管結(jié)構(gòu)正常，無內(nèi)皮細(xì)胞損傷，無血栓形成及其他病理性變化)。
6.溶血毒性考察2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗(yàn)方法取試管6支，按表中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時后，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。結(jié)果見表6。
表6溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見有紅細(xì)胞破裂，說明本品不溶血，安全性好。
7.急性毒性實(shí)驗(yàn)取小鼠100只，雌雄各半。禁食24h，隨機(jī)分5組，每組20只。稀釋成相同的生藥濃度，各組分別尾靜脈注射燈盞花素100mg/kg，每天給藥3次，連續(xù)7天，觀察小鼠死亡情況，記錄數(shù)據(jù)，按改良寇氏法計(jì)算各組的LD50，結(jié)果見表7。
表7各實(shí)驗(yàn)組LD50比較

以上急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明燈盞花素納米注射制劑與市售燈盞花素注射液、注射用燈盞花素相比，LD50相當(dāng)，說明本發(fā)明將燈盞花素制成納米注射制劑后安全性沒有變化。
結(jié)論以上全部實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明燈盞花素納米制劑療效顯著增加，藥物血腦屏障通過率增加，維持時間延長，而安全性與原制劑比較沒有變化四、制備實(shí)施例實(shí)施例1(1)取燈盞花素2.5g、羥丙基-β-環(huán)糊精100g、卵磷脂40g、硬脂酸50g，在80±5℃水浴條件下，攪拌溶于適量無水乙醇中，回收乙醇，迅速轉(zhuǎn)移至0℃冰箱中冷凍2-4小時，取甘油4g和poloxamerl88 20g分散于注射用水中，加入上述凍干固體，攪拌均勻，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)40-65MPa壓力下乳勻5次，迅速冷至室溫形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇20g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例2(1)取燈盞花素4g、羥丙基-β-環(huán)糊精40g、卵磷脂80g、單硬脂酸甘油酯40g，在80±5℃水浴條件下，攪拌溶于適量無水乙醇中，回收乙醇，迅速轉(zhuǎn)移至0℃冰箱中冷凍2-4小時，取甘油4g和poloxamer188 20g分散于注射用水中，加入上述凍干固體，攪拌均勻，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)40-65MPa壓力下乳勻5次，迅速冷至室溫形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖30g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例3(1)取燈盞花素5g、羥丙基-β-環(huán)糊精100g、Pluronic F68 50g、硬脂酸60g，在80±5℃水浴條件下，攪拌溶于適量無水乙醇中，回收乙醇，迅速轉(zhuǎn)移至0℃冰箱中冷凍2-4小時，取甘油5g和poloxamer188 20g分散于注射用水中，加入上述凍干固體，攪拌均勻，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)40-65MPa壓力下乳勻5次，迅速冷至室溫形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；
輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖20g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例4(1)取卵磷脂40g，吐溫802g，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取三窬酸甘油酯40g加入燈盞花素2.5g，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐20g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例5(1)取燈盞花素2.5g，硬脂酸25g和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入處方量的卵磷脂30g，微熱使溶成有機(jī)相，另取泊洛沙姆20g溶于250ml水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮到約500ml，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的100ml水相，繼續(xù)攪拌2h，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡聚糖30g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例6(1)取燈盞花素5g，溶于50％乙醇中；將三肉豆蔻酸甘油酯60g溶于正己烷，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和正己烷溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；
輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇20g和乳糖10g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例7(1)取燈盞花素2.5g，溶于80％乙醇中；將硬脂酸30g和單硬脂酸甘油酯20g的溶于正己烷，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和正己烷溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)刮膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖10g和右旋糖酐20g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例8(1)將燈盞花素2.5g溶于聚丙交酯-乙交酯30g，同500ml無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液2000ml(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖10g和乳糖15g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
實(shí)施例9(1)將燈盞花素2.5g溶于聚氰基丙烯酸烷酯40g、同500ml無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液2000ml(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖15g和葡聚糖15g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑500瓶。
權(quán)利要求
1.一種燈盞花素納米注射制劑，其特征在于該藥物包括下述重量份的組成成分燈盞花素1份，脂質(zhì)10-20份，乳化劑10-20份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的燈盞花素納米注射制劑，其制備方法為(1)取處方量的燈盞花素、乳化劑、脂質(zhì)，加入10-40份羥丙基-β-環(huán)糊精，在80±5℃水浴條件下，攪拌溶于適量無水乙醇中，回收乙醇，迅速轉(zhuǎn)移至0℃冰箱中冷凍2-4小時，取適量甘油和poloxamer188分散于注射用水中，加入上述凍干固體，攪拌均勻，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)40-65MPa壓力下乳勻5次，迅速冷至室溫形成主藥混懸液。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的燈盞花素納米注射制劑，其制備方法為(1)主藥混懸液的制備方法一、按處方稱取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質(zhì)加入處方量燈盞花素，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲時間5-8分鐘，即得。方法二、取燈盞花素，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入處方量的乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相，另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在1000r/min攪拌速度下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系在1000r/min攪拌下快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2h，即得。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明燈盞花素納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.5-7.5，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明燈盞花素粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種燈盞花素納米注射制劑及其制備方法，將燈盞花素與適宜量的脂質(zhì)、乳化劑與其它輔料采用本發(fā)明工藝方法制成納米載體，并制備成水針劑、粉針劑和輸液劑，本發(fā)明制劑穩(wěn)定性好，易通過血腦屏障，藥理作用表明本發(fā)明納米注射制劑具有更好的療效且安全性好。
文檔編號A61K9/107GK1879645SQ20051007750
公開日2006年12月20日 申請日期2005年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日
發(fā)明者張晴龍 申請人:張晴龍