專利名稱：7－位取代高喜樹堿類化合物及作為藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種新的具有抗腫瘤活性的高喜樹堿類化合物及作為藥物的用途。
背景技術(shù)：
喜樹堿(camptothecin，CPT)是一種從喜樹中提取得到的天然生物堿，具有稠合的五環(huán)剛性結(jié)構(gòu)，如下所示 喜樹堿是最重要的拓撲異構(gòu)酶I抑制劑，對多種人腫瘤細胞株表現(xiàn)出抗腫瘤活性。多年的構(gòu)效研究得到了一大批具有開發(fā)價值的衍生物，其中伊立替康(Irinotecan，CPT-11)和拓撲替康(Topotecan，TPT)先后由FDA批準(zhǔn)上市。
喜樹堿的六元內(nèi)酯環(huán)E環(huán)在體內(nèi)易水解開環(huán)成無活性的羧酸鹽形式，使其體內(nèi)活性顯著降低，并且導(dǎo)致了其明顯的毒性。為提高喜樹堿類化合物在體內(nèi)的穩(wěn)定性從而增強活性，研究者最初將20-位羥基酯化成前藥，這樣可以有效的阻止分子內(nèi)氫鍵的形成從而抑制內(nèi)酯環(huán)水解。Olivier Lavergne等人在WO97/00876提出了一類全新的具有七元β-羥基內(nèi)酯環(huán)的喜樹堿類似物，又稱高喜樹堿(homocamptothecin，hCPT)。顯示了增強的抗腫瘤活性，并具有代謝穩(wěn)定性增強的優(yōu)點。Pittsburgh大學(xué)的David Bom在WO00/61146提出了7-位硅烷基取代的高喜樹堿，更增強了酯溶性，與其他為提高水溶性不同，這樣可透過血腦屏障。另外，張萬年等在CN1557814A提供了一種不同與以上兩位的全新的制備高喜樹堿的方法，并合成了7-位氯甲基取代的高喜樹堿衍生物。然而藥物的水溶性和高毒性仍是需要不斷解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了新的抗腫瘤活性的7-位取代高喜樹堿化合物，包括外消旋體、對映異構(gòu)體形式以及其這些形式的任意混合物或其藥用鹽，結(jié)構(gòu)如通式(I) 其中R1表示-C(R6)＝N-R7基團，其中R7表示苯基或[N＝X]雜環(huán)基，并且至少具有一個或多個下列取代基團氫、羥基、鹵素、酮、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基、-NR8R9；或R1表示(CH2)mOCO(CH2)kR10，R10表示氫、低級烷基、低級鹵代烷基、取代或未取代的[N＝X]雜環(huán)基、低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、酮、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基、-NR8R9；R2、R3、R4獨立地表示下列基團氫、鹵素、低級烷基、OR11、硝基、氨基，或者R2和R3一起形成3或4元的鏈，或R3和R4一起形成3或4元的鏈，其中該鏈的元素選自CH2、O，如亞甲二氧基或亞乙二氧基；
R5表示低級烷基，優(yōu)選甲基、乙基、丙基，特別優(yōu)選乙基；R6表示氫、低級烷基、低級烷氧基、含3至10個碳原子環(huán)烷基、低級芳烷基，其中取代基是鹵素、低級烷基或低級鹵代烷基。
R8和R9獨立地表示氫或低級烷基；R11表示氫或低級烷基；[N＝X]表示4至7元雜環(huán)基，X表示構(gòu)成雜環(huán)基所需要的鏈并選自CH、CH2、O、S、N或NR12；R12表示氫或低級烷基；m、k分別表示0-6之間的整數(shù)；本發(fā)明中所謂低級烷基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、異丙基等；低級烷氧基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷氧基；低級鹵代烷基為含1至3個鹵原子取代的低級烷基；低級芳烷基為連接有芳基的低級烷基。鹵素指氟、氯、溴、碘。
本發(fā)明化合物的β-羥基內(nèi)酯環(huán)中含一個非對稱碳原子，有R和S兩種構(gòu)型。其外消旋體可通過拆分的方法[如Olivier Lavergne等的方法J.Med.Chem.415410(1998)]得到光學(xué)純的對映體。另外，7-位取代中的碳氮雙鍵具有順反異構(gòu)體。本發(fā)明包括這些對映體構(gòu)型和他們的各種結(jié)合，以及外消旋化合物。
本發(fā)明還提供了該類高喜樹堿類化合物的制備方法。合成路線如下
用下面描述的并且對于本發(fā)明優(yōu)選化合物舉例的方法能制備式(I)化合物。
起始三環(huán)關(guān)鍵中間體9-乙基-9-羥基-2，3，4，8-四氫-5H-6-氧雜-3a-氮雜環(huán)庚茚-1，4，7-三酮(VI)可以參照專利CN1557814A得到，不同取代的鄰氨基乙二醇縮醛可參照文獻方法[Sugasawa等J.Org.Chem.44578(1979)；Sugasawa等J.Am.Chem.Soc.100484(1978)]得到。然后將它們進行經(jīng)典的Frielander縮合反應(yīng)可得到在A環(huán)上具有不同取代基的高喜樹堿衍生物。下面以高喜樹堿為例，詳細說明具體合成步驟1、對于式(I)化合物，R2、R3、R4都是氫時，將三環(huán)關(guān)鍵中間體(VI)與鄰氨基乙二醇縮醛進行Frielander縮合反應(yīng)得到的是高喜樹堿，通常采用極性或非極性溶劑如苯、甲苯、乙醇、乙酸等，優(yōu)選苯、甲苯等非極性溶劑。Frielander縮合所用的催化劑為酸性催化劑，包括有機酸和無機酸，優(yōu)選的是有機酸如對甲苯磺酸、乙酸、甲酸等，特別優(yōu)選對甲苯磺酸。
2、將高喜樹堿在酸性條件下用甲醇和合適的氧化系統(tǒng)反應(yīng)得到7-羥甲基取代高喜樹堿(III)。此處的酸為無機酸，包括鹽酸、不同溶度的硫酸等，優(yōu)選不同溶度的硫酸如96％、90％、80％、75％的硫酸，特別優(yōu)選75％的硫酸。氧化系統(tǒng)包括還原劑(如硫酸亞鐵、氧化亞鐵等)及氧化劑(如過氧化氫、過氧乙酸等)的組合，優(yōu)選硫酸亞鐵/過氧化氫系統(tǒng)。
3、將7-羥甲基取代高喜樹堿(III)用類陽離子氧化劑氧化就可得到7-醛基取代高喜樹堿(II)。這里的類陽離子氧化劑包括硫酸、乙酸、三氯氧磷、氯化亞砜等，溶劑包括水、二氧六環(huán)、吡啶、N，N-二甲基甲酰胺(N，N-dimethylformamide，DMF)或無等。優(yōu)選的類陽離子氧化劑是乙酸，溶劑優(yōu)選不采用其他溶劑。
另外，將酸與7-羥甲基取代高喜樹堿(III)在酸性條件或縮合劑存在下反應(yīng)可以得到酯類化合物。酸性條件是指無機酸，包括鹽酸、硫酸、磷酸等，優(yōu)選硫酸，縮合劑指的是各種酯類縮合劑，包括二環(huán)己基碳化二亞胺(dicyclohexylcarbodiimide，DCC)、N，N′-二異丙基碳化二亞胺(N，N′-Diisopropylcarbodiimide，DIPC)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride，EDCI)等，優(yōu)選DCC。溶劑選用極性或非極性溶劑如二氯甲烷、苯、二甲亞砜(dimethylsulfoxide，DMSO)等，優(yōu)選二氯甲烷。
4、7-醛基取代高喜樹堿(II)與胺在酸性催化下反應(yīng)可得到亞胺類化合物，這里的酸包括有機酸及無機酸，如乙酸、對甲苯磺酸、硫酸、三氟甲磺酸鐿水合物(ytterbium trifluoromethanesulfonate hydrate，Yb(OTf)3)等，優(yōu)選Yb(OTf)3。溶劑選用極性或非極性溶劑如二氯甲烷、苯、DMSO等，優(yōu)選二氯甲烷。
應(yīng)當(dāng)明確的是，當(dāng)R2、R3、R4分別有取代時，采用同樣的方法也可得到類似的化合物，如R3是甲氧基時，首先得到10-甲氧基高喜樹堿；R3、R4均有F取代時即為10，11-二氟高喜樹堿；R3、R4成亞乙二氧基，即得10，11-亞乙二氧基高喜樹堿。然后按上述路線就可得相應(yīng)的7-亞胺和7-酯類衍生物。
本發(fā)明的某些化合物可按照常規(guī)方法制備位藥用鹽的形式。包括其有機酸鹽及無機酸鹽無機酸包括(但不限于)鹽酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氫溴酸、硝酸等，有機酸包括(但不限于)乙酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、對甲苯磺酸、水楊酸、草酸等。
本發(fā)明的式(I)化合物具有抑制拓撲異構(gòu)酶的作用，并具有抗腫瘤活性?，F(xiàn)有技術(shù)暗示本發(fā)明的化合物具有抗病毒活性[Chiang.J.Li等，The Journal ofBiological Chemistry，2697051(1994)]及抗真菌活性[Fostel J.等，F(xiàn)EMSMicrobiology Letters，138105(1996)]，因此本發(fā)明的化合物可用于制備相應(yīng)的治療藥物。
本發(fā)明的化合物具有抗腫瘤活性，它們可用于治療腫瘤，包括食道、胃、腸、直腸、口腔、咽、喉、肺、結(jié)腸、乳腺、子宮、子宮內(nèi)膜、卵巢、前列腺、睪丸、膀胱、腎、肝、胰腺、骨、結(jié)締組織、皮膚、眼、腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等部位發(fā)生的癌癥，以及甲狀腺癌、白血病、霍金氏病、淋巴瘤和骨髓瘤等。
本發(fā)明的化合物還可以用于治療病毒感染及真菌感染。
本發(fā)明化合物的藥理活性使其可以用于制備抗腫瘤、抗真菌及抗病毒藥物，因此本發(fā)明還包括以這些化合物及其藥用鹽作為活性成分的藥物組合物。該藥物組合物可以是固體形式或是液體形式。
本發(fā)明還包括式(I)化合物及其外消旋體、對映異構(gòu)體形式以及這些形式的任意混合物或其藥用鹽在制備下列藥物方面的用途抑制拓撲異構(gòu)酶的藥物、抗腫瘤藥物，抗真菌藥物和抗病毒藥物方面。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作詳細描述，但下列實施例不應(yīng)看作對本發(fā)明范圍的限制。
實施例1 高喜樹堿的合成將1.00g 9-乙基-9-羥基-2，3，8，9-四氫-5H-6-氧雜-3a-氮雜-環(huán)庚茚-1，4，7-三酮和0.80g鄰氨基苯甲醛乙二醇縮醛于800mL甲苯中，回流分水，30分鐘后，加入0.10g對甲苯磺酸，繼續(xù)回流1h，冷卻后過濾，以丙酮及甲醇洗滌，得0.98g黃色固體高喜樹堿(70.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.86(q，2H)，3.06(d，1H)，3.49(d，1H)，5.28(s，2H)，5.39(d，1H)，5.53(d，1H)，6.03(s，1H)，7.42(s，1H)，7.72(t，1H)，7.87(t，1H)，8.15(q，2H)，8.69(s，1H)。
實施例2 7-羥甲基高喜樹堿的合成向懸浮于30mL甲醇和25mL水的0.98g高喜樹堿滴加25mL 75％的硫酸，然后加入0.80g的FeSO4.7H2O。用冰水冷卻至0℃，滴加5mL 30％H2O2，繼續(xù)攪拌至室溫反應(yīng)14h。用200mL水稀釋后析出固體，過濾，用熱DMF洗滌，將濾液蒸去溶劑，在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 100∶4)，得0.61g黃色固體7-羥甲基高喜樹堿(64.7％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，1.87(q，2H)，3.06(d，1H)，3.47(d，1H)，5.27(d，2H)，5.41(s，2H)，5.40(d，1H)，5.53(d，1H)，5.80(t，1H)，6.03(s，1H)，7.40(s，1H)，7.71(t，1H)，7.86(t，1H)，8.16(d，1H)，8.20(d，1H)。
實施例3 7-醛基高喜樹堿的合成將0.61g 7-羥甲基高喜樹堿于200mL乙酸中加熱至回流反應(yīng)6h，蒸去溶劑，在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 100∶4)，得0.32g黃色固體7-醛基高喜樹堿(52.7％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.88(q，2H)，3.07(d，1H)，3.49(d，1H)，5.42(d，1H)，5.52(s，2H)，5.55(d，1H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.92(t，1H)，7.98(t，1H)，8.31(d，1H)，9.04(d，1H)，11.10(s，1H)。
實施例4 7-(4-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成將50mg 7-醛基高喜樹堿，10mg Yb(OTf)3，70mg對甲苯胺和15mL二氯甲烷室溫攪拌10h，過濾后蒸去溶劑，在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 100∶2)，得16mg黃色固體7-(4-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(26.0％)1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.87(q，2H)，2.40(s，3H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.59(s，2H)，6.05(s，1H)，7.36(d，2H)，7.46(s，1H)，7.53(d，2H)，7.84(t，1H)，7.94(t，1H)，8.26(d，1H)，9.00(d，1H)，9.72(s，1H)。
實施例5 7-(2-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以鄰甲苯胺代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(2-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(24.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，2.50(s，3H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.54(d，1H)，5.59(s，2H)，6.05(s，1H)，7.29(t，1H)，7.35(t，1H)，7.38(d，1H)，7.46(s，1H)，7.50(d，1H)，7.83(t，1H)，7.95(t，1H)，8.26(d，1H)，8.99(d，1H)，9.66(s，1H)。
實施例6 7-(3-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以間甲苯胺代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(3-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(24.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，2.44(s，3H)，3.09(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.60(s，2H)，6.04(s，1H)，7.22(t，1H)，7.39(d，1H)，7.41(s，1H)，7.43(d，1H)，7.46(s，1H)，7.84(t，1H)，7.96(t，1H)，8.27(d，1H)，9.00(d，1H)，9.71(s，1H)。
實施例7 7-(2-羥基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以鄰氨基酚代替對甲苯胺，得到10mg黃色固體7-(2-羥基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(16.2％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.67(s，2H)，6.05(s，1H)，6.95(t，1H)，6.96(d，1H)，7.01(d，1H)，7.20(t，1H)，7.46(s，1H)，7.47(s，1H)，7.83(t，1H)，7.96(t，1H)，8.27(d，1H)，8.93(d，1H)，9.49(s，1H)，9.66(s，1H)。
實施例8 7-(2-溴苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以鄰溴苯胺代替對甲苯胺，得到13mg黃色固體7-(2-溴苯基)亞甲氨基高喜樹堿(18.6％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.54(d，1H)，5.70(s，2H)，6.05(s，1H)，7.33(t，1H)，7.47(s，1H)，7.57(t，1H)，7.72(d，1H)，7.84(d，1H)，7.86(t，1H)，7.96(t，1H)，8.28(d，1H)，9.02(d，1H)，9.74(s，1H)。
實施例9 7-(4-溴苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以對溴苯胺代替對甲苯胺，得到14mg黃色固體7-(2-溴苯基)亞甲氨基高喜樹堿(20.1％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.58(s，2H)，6.05(s，1H)，7.46(s，1H)，7.56(d，2H)，7.74(d，2H)，7.84(t，1H)，7.95(t，1H)，8.27(d，1H)，8.99(d，1H)，9.72(s，1H)。
實施例10 7-(3，5-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3，5-二甲基代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(3，5-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(23.7％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.89(q，2H)，2.39(s，6H)，2.92(d，1H)，3.08(d，1H)，5.42(d，1H)，5.56(d，1H)，5.58(s，2H)，6.07(s，1H)，7.04(s，1H)，7.32(s，2H)，7.46(s，1H)，7.84(t，1H)，7.96(t，1H)，8.27(d，1H)，8.99(d，1H)，9.69(s，1H)。
實施例11 7-(2-甲氧基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以鄰氨基苯甲醚代替對甲苯胺，得到16mg黃色固體7-(2-甲氧基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(25.2％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.09(d，1H)，3.48(d，1H)，3.92(s，3H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.57(s，2H)，6.04(s，1H)，7.09(t，1H)，7.19(d，1H)，7.35(t，1H)，7.46(s，1H)，7.47(d，1H)，7.83(t，1H)，7.95(t，1H)，8.26(d，1H)，8.94(d，1H)，9.67(s，1H)。
實施例12 7-(3-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以間氯苯胺代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(3-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(23.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.59(s，2H)，6.05(s，1H)，7.43(d，1H)，7.46(s，1H)，7.52(d，1H)，7.57(t，1H)，7.71(s，1H)，7.83(t，1H)，7.95(t，1H)，8.27(d，1H)，9.02(d，1H)，9.73(s，1H)。
實施例13 7-(2-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以間氯苯胺代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(2-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(23.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.64(s，2H)，6.05(s，1H)，7.41(t，1H)，7.46(s，1H)，7.52(t，1H)，7.67(d，1H)，7.75(d，1H)，7.85(t，1H)，7.95(t，1H)，8.28(d，1H)，9.03(d，1H)，9.75(s，1H)。
實施例14 7-(4-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以對氯苯胺代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(4-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(23.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.09(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.47(s，2H)，5.52(d，1H)，6.05(s，1H，OH)，7.44(s，1H)，7.59(d，2H)，7.61(d，2H)，7.81(t，1H)，7.93(t，1H)，8.23(d，1H)，8.95(d，1H)，9.68(s，1H)。
實施例15 7-(2，4-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以2，4-二氯苯胺代替對甲苯胺，得到18mg黃色固體7-(2，4-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(26.3％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，1.87(q，2H)，3.08(d，1H)，3.46(d，1H)，5.42(d，1H)，5.54(d，1H)，5.62(s，2H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.62(d，1H)，7.82(s，1H)，7.84(d，1H)，7.86(t，1H)，7.96(t，1H)，8.28(d，1H)，9.02(d，1H)，9.76(s，1H)。
實施例16 7-(2，4-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以2，4-二甲基苯胺代替對甲苯胺，得到16mg黃色固體7-(2，4-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(25.3％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.54(d，1H)，5.57(s，2H)，6.06(s，1H)，7.16(d，1H)，7.20(s，1H)，7.45(s，1H)，7.49(d，1H)，7.82(t，1H)，7.94(t，1H)，8.25(d，1H)，8.99(d，1H)，9.69(s，1H)。
實施例17 7-(2，5-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以2，5-二氯苯胺代替對甲苯胺，得到17mg黃色固體7-(2，5-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(24.8％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.54(d，1H)，5.63(s，2H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.48(d，1H)，7.69(d，1H)，7.86(t，1H)，7.95(t，1H)，7.97(s，1H)，8.29(d，1H)，9.06(d，1H)，9.78(s，1H)。
實施例18 7-(3，4-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3，4-二氯苯胺代替對甲苯胺，得到17mg黃色固體7-(3，4-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(24.8％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.54(d，1H)，5.60(s，2H)，6.07(s，1H)，7.47(s，1H)，7.58(d，1H)，7.80(d，1H)，7.85(t，1H)，7.95(s，1H)，7.96(t，1H)，8.28(d，1H)，9.01(d，1H)，9.75(s，1H)。
實施例19 7-(3-氯-4-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3-氯-4-甲基苯胺代替對甲苯胺，得到13mg黃色固體7-(3-氯-4-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(19.7％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，1.88(q，2H)，2.36(s，3H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.58(s，2H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.50(d，1H)，7.52(d，1H)，7.75(s，1H)，7.84(t，1H)，7.95(t，1H)，8.26(d，1H)，9.02(d，1H)，9.74(s，1H)。
實施例20 7-苯基亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以苯胺代替對甲苯胺，得到14mg黃色固體7-苯基亞甲氨基高喜樹堿(23.5％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.60(s，2H)，6.05(s，1H)，7.41(t，2H)，7.46(s，1H)，7.54(d，2H)，7.59(m，1H)，7.84(t，1H)，7.96(t，1H)，8.27(d，1H)，9.01(d，1H)，9.72(s，1H)。
實施例21 7-(4-乙酰基苯基)業(yè)甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以對氨基苯乙酮代替對甲苯胺，得到10mg黃色固體7-(4-乙?；交?亞甲氨基高喜樹堿(15.4％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.88(q，2H)，2.65(s，3H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.61(s，2H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.65(d，2H)，7.86(t，1H)，7.91(t，1H)，8.13(d，2H)，8.30(d，1H)，9.02(d，1H)，9.74(s，1H)。
實施例22 7-(4-叔丁基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以叔丁基苯胺代替對甲苯胺，得到12mg黃色固體7-(4-叔丁基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(18.0％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.35(s，9H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.59(s，2H)，6.05(s，1H)，7.46(s，1H)，7.54(d，2H)，7.56(d，2H)，7.83(t，1H)，7.95(t，1H)，8.27(d，1H)，9.00(d，1H)，9.71(s，1H)。
實施例2 37-(3-氯-4-氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3-氯-4-氟苯胺代替對甲苯胺，得到15mg黃色固體7-(3-氯-4-氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿(22.6％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.88(q，2H)，3.09(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.57(s，2H)，6.05(s，1H)，7.45(s，1H)，7.58(d，1H)，7.61(d，1H)，7.84(t，1H)，7.94(t，1H)，7.95(s，1H)，8.26(d，1H)，9.01(d，1H)，9.74(s，1H)。
實施例24 7-(4-氰基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以對氨基苯腈代替對甲苯胺，得到10mg黃色固體7-(4-氰基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(15.9％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，1.88(q，2H)，3.08(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.59(s，2H)，6.06(s，1H)，7.47(s，1H)，7.68(d，2H)，7.85(t，1H)，7.97(t，1H)，8.02(d，2H)，8.28(d，1H)，8.98(d，1H)，9.71(s，1H)。
實施例25 7-(3，4-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3，4-二甲基苯胺代替對甲苯胺，得到16mg黃色固體7-(3，4-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿(25.3％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，1.88(q，2H)，2.31(s，3H)，2.34(s，3H)，3.09(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.58(s，2H)，6.05(s，1H)，7.30(d，1H)，7.36(d，1H)，7.43(s，1H)，7.46(s，1H)，7.83(t，1H)，7.95(t，1H)，8.26(d，1H)，9.00(d，1H)，9.72(s，1H)。
實施例26 7-(3，4-二氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3，4-二氟苯胺代替對甲苯胺，得到11mg黃色固體7-(3，4-二氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿(17.1％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，1.88(q，2H)，3.09(d，1H)，3.48(d，1H)，5.42(d，1H)，5.55(d，1H)，5.58(s，2H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.47(s，1H)，7.62(d，1H)，7.83(d，1H)，7.85(t，1H)，7.96(t，1H)，8.28(d，1H)，9.01(d，1H)，9.73(s，1H)。
實施例27 7-(3-氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以間氟苯胺代替對甲苯胺，得到9mg黃色固體7-(3-氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿(14.5％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.87(q，2H)，3.07(d，1H)，3.47(d，1H)，5.42(d，1H)，5.52(s，2H)，5.55(d，1H)，6.05(s，1H)，7.25(d，1H)，7.46(s，1H)，7.49(d，1H)，7.53(t，1H)，7.89(s，1H)，7.91(t，1H)，7.98(t，1H)，8.30(d，1H)，9.03(d，1H)，9.73(s，1H)。
實施例28 7-(3，5-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿的合成按照實施例4的方法，以3，5-二氯代替對甲苯胺，得到21mg黃色固體7-(3，5-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿(30.7％)。
1HNMR(DMSO)，δ0.89(t，3H)，1.89(q，2H)，2.39(s，6H)，2.92(d，1H)，3.08(d，1H)，5.42(d，1H)，5.56(d，1H)，5.59(s，2H)，6.06(s，1H)，7.46(s，1H)，7.63(s，1H)，7.68(s，2H)，7.84(t，1H)，7.96(t，1H)，8.27(d，1H)，9.01(d，1H)，9.74(s，1H)。
實施例29 7-苯甲酰氧甲基高喜樹堿的合成將39mg 7-羥甲基高喜樹堿，21mg DCC，12mg 4-二甲基吡啶，14mg苯甲酸和15mL二氯甲烷室溫攪拌10h，蒸去溶劑，在硅膠色譜柱上純化(洗脫劑CH2Cl2/CH3OH 100∶2)，得11mg淡黃色固體7-苯甲酰氧甲基高喜樹堿(22.2％)1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.87(q，2H)，3.06(d，1H)，3.48(d，1H)，5.40(d，1H)，5.50(s，2H)，5.53(d，1H)，6.03(s，2H)，6.04(s，1H)，7.43(s，1H)，7.53(t，2H)，7.67(t，1H)，7.81(t，1H)，7.92(t，1H)，8.01(t，2H)，8.22(d，1H)，8.44(d，1H)。
實施例30 7-乙酰氧甲基高喜樹堿的合成按照實施例29的方法，以乙酸代替苯甲酸，得10mg淡黃色固體7-乙酰氧甲基高喜樹堿(23.0％)1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，1.87(q，2H)，2.10(s，3H)，3.06(d，1H)，3.48(d，1H)，5.40(d，1H)，5.42(s，2H)，5.53(d，1H)，5.75(s，2H)，6.04(s，1H)，7.42(s，1H)，7.78(t，1H)，7.90(t，1H)，8.20(d，1H)，8.29(d，1H)。
實施例31 7-苯乙酰氧甲基高喜樹堿的合成按照實施例29的方法，以苯乙酸代替苯甲酸，得13mg淡黃色固體7-苯乙酰氧甲基高喜樹堿(25.5％)1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，2.03(q，2H)，3.19(d，1H)，3.48(d，1H)，3.76(s，2H)，5.33(d，1H)，5.36(s，2H)，5.45(d，1H)，5.69(s，2H)，5.72(s，1H)，7.26-7.30(m，5H)，7.52(s，1H)，7.56(t，1H)，7.73(t，1H)，7.95(d，1H)，8.06(d，1H)。
實施例32 7-苯丙酰氧甲基高喜樹堿的合成按照實施例29的方法，以苯丙酸代替苯甲酸，得9mg淡黃色固體7-苯丙酰氧甲基高喜樹堿(17.2％)1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，2.05(q，2H)，2.95(t，2H)，3.13(d，1H)，3.50(d，1H)，5.38(d，1H)，5.51(s，2H)，5.59(d，1H)，5.68(s，2H)，5.79(s，1H)，7.05-7.26(m，5H)，7.56(s，1H)，7.67(t，1H)，7.73(t，1H)，8.06(d，1H)，8.34(d，1H)。
實施例33 7-肉桂酰氧甲基高喜樹堿的合成按照實施例29的方法，以肉桂酸代替苯甲酸，得10mg淡黃色固體7-肉桂酰氧甲基高喜樹堿(19.2％)
1HNMR(DMSO)，δ0.87(t，3H)，2.05(q，2H)，3.23(d，1H)，3.60(d，1H)，5.34(d，1H)，5.52(s，2H)，5.58(d，1H)，5.70(s，2H)，5.86(s，1H)，6.52(d，1H)，7.05-7.26(m，5H)，7.35(d，1H)，7.41(s，1H)，7.57(t，1H)，7.63(t，1H)，7.90(d，1H)，8.11(d，1H)。
實施例34 7-苯氧乙酰氧甲基高喜樹堿的合成按照實施例29的方法，以苯氧乙酸代替苯甲酸，得12mg淡黃色固體7-苯氧乙酰氧甲基高喜樹堿(22.2％)1HNMR(DMSO)，δ0.88(t，3H)，2.05(q，2H)，2.35(t，2H)，3.60(d，1H)，3.93(d，1H)，4.16(t，2H)，5.35(d，1H)，5.50(s，2H)，5.60(d，1H)，5.71(s，2H)，5.82(s，1H)，7.04-7.26(m，5H)，7.35(s，1H)，7.59(t，1H)，7.83(t，1H)，8.09(d，1H)，8.32(d，1H)。
本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性試驗對本發(fā)明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法采用常規(guī)的MTT法。
細胞株選用A549(人肺癌細胞)、LOVO(人腸癌細胞)、MCF-7(人乳腺癌細胞)。培養(yǎng)液為DMEM+15％NBS+雙抗。
樣品液配制用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成100μg/mL的溶液或均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為10μg/mL、1μg/mL、0.1μg/mL、0.01μg/mL、0.001μg/mL、0.0001μg/mL。
將上市的抗腫瘤藥物拓撲替康以同樣的條件配成對照品溶液。
96孔板每孔加入濃度為3×104個/mL的細胞懸液100μL，即3000個細胞/孔，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。24小時后，分別加入樣品液和對照品液，10μL/孔，37℃作用72小時。每孔加入5mg/mL的MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑翁溴化物)溶液20μL，作用4小時后加入溶解液DMSO，100μL/孔，置培養(yǎng)箱內(nèi)，次日用MK-2全自動酶標(biāo)儀測570nm OD值。計算半數(shù)抑制濃度IC50。
試驗結(jié)果見表1，其中，樣品是指相應(yīng)實施例中制備的高喜樹堿類化合物。
表1測試化合物對腫瘤細胞的半數(shù)抑制濃度IC50(單位μg/mL)

以上實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，多個化合物高于上市藥物拓撲替康，因此本發(fā)明化合物及其鹽類可以用于制備抗腫瘤藥物。
權(quán)利要求
1.7-位取代高喜樹堿類化合物，包括外消旋體、對映異構(gòu)體形式以及其這些形式的任意混合物或其藥用鹽，結(jié)構(gòu)如通式(I) 其特征在于R1表示-C(R6)＝N-R7基團，其中R7表示苯基，并且至少具有一個或多個下列取代基團氫、羥基、鹵素、酮、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基、-NR8R9；或R1表示(CH2)mOCO(CH2)kR10，R10表示氫、低級烷基、低級鹵代烷基、取代或未取代的[N＝X]雜環(huán)基、低級芳烷基，其中取代基是羥基、鹵素、酮、低級烷基、低級烷氧基、苯基、氰基、硝基、-NR8R9；R2、R3、R4獨立地表示下列基團氫、鹵素、低級烷基、OR11、硝基、氨基，或者R2和R3一起形成3或4元的鏈，或R3和R4一起形成3或4元的鏈，其中該鏈的元素選自CH2、O；R5表示低級烷基；R6表示氫、低級烷基、低級烷氧基、含3至10個碳原子環(huán)烷基、低級芳烷基，其中取代基是鹵素、低級烷基或低級鹵代烷基；R8和R9獨立地表示氧或低級烷基；R11表示氫或低級烷基；[N＝X]表示4至7元雜環(huán)基，X表示構(gòu)成雜環(huán)基所需要的鏈并選自CH、CH2、O、S、N或NR12；R12表示氫或低級烷基；m、k分別表示0--6之間的整數(shù)；所謂低級烷基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷基；低級烷氧基為含1至6個碳原子直鏈或支鏈烷氧基；低級鹵代烷基為含1至3個鹵原子取代的低級烷基；低級芳烷基為連接有芳基的低級烷基。
2.權(quán)利要求1中的任一化合物，包括其外消旋體、對映異構(gòu)體形式以及這些形式的任意混合物或其藥用鹽在制備拓撲異構(gòu)酶抑制劑、抗腫瘤藥物、抗真菌藥物及抗病毒藥物中的應(yīng)用。
3.按權(quán)利要求1所述化合物，其特征在于R5為乙基。
4.按權(quán)利要求1或權(quán)利要求3所述化合物，其特征在于R1表示-CH＝N-R7基團，或R1表示(CH2)OCO(CH2)kR10，其中R7為芳基，R10為芳基；k為0至3之間的整數(shù)。
5.按權(quán)利要求4所述化合物，其特征在于R7為取代或未取代的苯基，R10為苯基。
6.按權(quán)利要求1或權(quán)利要求3所述化合物，其特征在于所述化合物選自--7-(4-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2-羥基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2-溴苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(4-溴苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3，5-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2-甲氧基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(4-氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2，4-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2，4-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(2，5-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3，4-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3-氯-4-甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-苯基亞甲氨基高喜樹堿--7-(4-乙?；交?亞甲氨基高喜樹堿--7-(4-叔丁基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3-氯-4-氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(4-氰基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3，4-二甲基苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3，4-二氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3-氟苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-(3，5-二氯苯基)亞甲氨基高喜樹堿--7-苯甲酰氧甲基高喜樹堿--7-乙酰氧甲基高喜樹堿--7-苯乙酰氧甲基高喜樹堿--7-苯丙酰氧甲基高喜樹堿--7-肉桂酰氧甲基高喜樹堿--7-苯氧乙酰氧甲基高喜樹堿。
7.按權(quán)利要求1所述7-位取代高喜樹堿類化合物在制備時的中間體化合物II 其中R2、R3、R4獨立地表示下列基團氫、鹵素、低級烷基、OR11、硝基、氨基，或者R2和R3一起形成3或4元的鏈，或R3和R4一起形成3或4元的鏈，其中該鏈的元素選自CH2、O；R5表示低級烷基。
8.按權(quán)利要求7所述化合物，其特征在于R5為乙基。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種新的具有抗腫瘤活性的7－位取代高喜樹堿類化合物及作為藥物的用途。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)如通式(I)所示，包括它們的外消旋混合物以及各自的對映異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物具有抑制拓撲異構(gòu)酶的作用，并具有抗腫瘤活性、抗真菌活性和抗病毒活性，可用作拓撲異構(gòu)酶抑制劑，以及用于制備抗腫瘤藥物、抗真菌藥物和抗病毒藥物。
文檔編號A61P31/12GK1793145SQ20051011090
公開日2006年6月28日 申請日期2005年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月29日
發(fā)明者張萬年, 繆震元, 姚建忠, 盛春泉, 宋云龍, 張珉, 張晶, 朱杰, 徐輝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)