專利名稱：用于治療神經(jīng)變性疾病的1－苯基烷羧酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及1-苯基烷羧酸類、在其羧酸部分上的前體藥物和生物等排物。本發(fā)明還涉及它們的制備方法及其在預(yù)防或治療神經(jīng)變性疾病，特別是阿爾茨海默病中的應(yīng)用。
引言阿爾茨海默病是一種神經(jīng)變性疾病，其特征在于大腦皮質(zhì)萎縮和皮質(zhì)神經(jīng)元大量缺失以及基底核膽堿能投射向皮質(zhì)。從組織病理學觀點來看，阿爾茨海默病患者彌散性存在細胞外和血管周圍神經(jīng)斑和大腦實質(zhì)中胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)。
神經(jīng)斑主要由帶有39-43位氨基酸殘基的稱作β-淀粉狀蛋白(βA)的蛋白質(zhì)聚集物組成且隨氨基酸數(shù)量的不同，所述的蛋白質(zhì)為Aβ39、Aβ40、Aβ42和Aβ43。
除這些組織病理學損害外，還缺乏某些神經(jīng)遞質(zhì)，特別是乙酰膽堿、5-羥色胺、去甲腎上腺素、多巴胺、谷氨酸和物質(zhì)P。目的在于主要通過乙酰膽堿酯酶抑制劑增加乙酰膽堿大腦水平的藥理學手段從臨床觀點來看獲得的效果較差或無論如何不能獲得顯著防止該病發(fā)展的效果。由于這一原因，在近年中的注意力已經(jīng)集中在患者大腦內(nèi)主要病理損害形成的機制上，即神經(jīng)斑和神經(jīng)原纖維纏結(jié)，且已經(jīng)尋求了更為有效的治療手段。
現(xiàn)有技術(shù)流行病學研究證實長期給予非類固醇消炎藥(NSAIDs)在定期服用這些藥物的人群中顯著減少了阿爾茨海默病的發(fā)作。這類NSAID預(yù)防作用的機制尚未得到完全闡明，但明顯與其抑制環(huán)加氧酶(COX)的能力相關(guān)。
近來已經(jīng)描述了某些非類固醇消炎藥(NSAIDs)的新藥理學作用吲哚美辛、舒林酸、布洛芬和氟比洛芬可以選擇性地減少細胞培養(yǎng)物中β-淀粉狀蛋白肽的大部分神經(jīng)毒性同種型產(chǎn)生，即含有42個氨基酸的形式(Aβ42)，由此有利于少量有害的同種型Aβ38釋放(Weggen等，《自然》(Nature)2001；414(6860)212-6)。然而，已經(jīng)在體外極高濃度下觀察到了Aβ42產(chǎn)生受到抑制，這可以歸因于這些藥物與γ-分泌酶(具有天冬氨酰蛋白酶活性的大分子/多蛋白酶復(fù)合物)的相互作用。相當于體外實驗中所用劑量的血漿和大腦濃度可以顯著增加所治療患者典型COX抑制劑副作用的危害，諸如胃腸道出血和穿孔性潰瘍。
WO01/78721中要求保護預(yù)防、延緩或逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默病發(fā)展的方法，通過在Aβ38水平增加而Aβ42水平保持不變的條件下給予降低Aβ42的活性劑來進行。此外，公開了用于鑒定和研發(fā)降低Aβ42的活性劑的方法和物質(zhì)以及用于鑒定增加阿爾茨海默病發(fā)展或快速發(fā)展的危害的活性劑的方法。報導(dǎo)了涉及吲哚美辛和氟芬那酸衍生物的實施例，但無涉及氟比洛芬衍生物的實施例。
Jantzen等在《神經(jīng)科學雜志》(J Neurosci)2002；222246-2254中描述了能夠釋放氧化氮的氟比洛芬衍生物。該文件一般性地描述了氟比洛芬衍生物顯然比NSAIDs在清除β-淀粉狀蛋白沉積物方面更為有效，但對任何降低Aβ42的選擇活性均沒有涉及。
在這種治療方案中并根據(jù)常用NSAIDs可能存在的問題，對肽Aβ42更具有選擇性和具有更有效的抑制活性、而對環(huán)加氧酶的抑制程度較低或完全沒有抑制作用的新衍生物可以成為目的在于預(yù)防阿爾茨海默病發(fā)作和/或延緩代表早期疾病階段的認知能力下降的療法中的明顯改進。
在GB 1,198,212、US 3,978,071、US 757,136、GB 1,352,723、JP49100089和JP 50046669中將取代的1-苯基-2，2-二烷基羧酸衍生物描述為抗炎藥、止痛藥和解熱藥。
JP-4,7047,375和FR-2,012,285中將3-鹵代-4-烷基-或環(huán)烷基-取代的1-苯基環(huán)烷羧酸衍生物描述為具有相同活性的物質(zhì)。
在來自涉及一系列苯乙酸衍生物的結(jié)構(gòu)-活性研究的Kuzuna S等的文件中(Takeda Kenkyushobo 1975，34，467-473)一般性地描述了在α碳原子位置上引入環(huán)丙烷基降低了抗炎和止痛活性。
在WO 99/41224中，要求保護用于治療許多疾病，包括阿爾茨海默病的具有抗炎活性的新雙芳基-乙酸衍生物作為環(huán)加氧酶-2抑制劑發(fā)明概述本發(fā)明涉及1-苯基烷羧酸類、在其羧酸部分上的前體藥物和生物等排物、其制備方法、含有它們的藥物組合物及其在預(yù)防或治療神經(jīng)變性疾病，特別是阿爾茨海默病中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物抑制Aβ42肽釋放，由此能夠調(diào)節(jié)γ-分泌酶活性而不影響其它重要的代謝過程。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及通式(I)的化合物、其藥物上可接受的鹽和其它酯類 其中R和R1相同且選自直鏈或支鏈C1-C4烷基；或它們與它們所連接的碳原子一起形成3-6個碳原子的環(huán)；G為-COOR″基團，其中R″為H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基或抗壞血酸基(ascorbyl)；-CONH2或CONHSO2R基團，其中R為直鏈或支鏈C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；-四唑殘基；
R2為H、CF3、OCF3或選自F、Cl、Br、I的組的鹵素，優(yōu)選氟；Ar為如下通式 其中R3表示一個或多個獨立地選自下列基團的基團-上述定義的鹵素；-CF3；-任選被一個或多個C1-C4烷基和/或氧代基取代的C3-C8環(huán)烷基；-CH＝CH2；-CN；-CH2OH；-亞甲二氧基或亞乙二氧基；-NO2；-任選被一個或多個如下基團取代的苯基鹵素；CF3；OCF3；OH；直鏈或支鏈C1-C4烷基；含有至少4個碳原子和至少1個雜原子的飽和雜環(huán)(eterocycle)；任選依次被下列基團中的一個或多個取代的C3-C8環(huán)烷基直鏈或支鏈C1-C4烷基、CF3或OH；OR4或NHCOR4，其中R4為CF3、直鏈或支鏈C2-C6鏈烯基或炔基；芐基；任選被如下基團中的一個或多個取代的苯基鹵素、CF3、OCF3、OH、直鏈或支鏈C1-C4烷基；含有至少4個碳原子和至少1個雜原子的飽和雜環(huán)(eterocycle)；任選依次被下列基團中的一個或多個取代的C3-C8環(huán)烷基直鏈或支鏈C1-C4烷基、CF3或OH；-SR5、SO2R5或COR5，其中R5為直鏈或支鏈C1-C6烷基；或Ar為選自如下的組的雜環(huán)(eterocycle)噻吩、苯并噻吩、二苯并噻吩、噻蒽、吡咯、吡唑、呋喃、苯并呋喃、二苯并呋喃、吲哚、異吲哚、苯并呋喃、咪唑、苯并咪唑、噁唑、異噁唑、苯并噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、噠嗪、喹啉、異喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噌啉、吡唑、吡喃、苯并吡喃、pyrrolizine、2，3-二氮雜萘、1，5-二氮雜萘、1，3-間二氧雜環(huán)戊烯、1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯，它們?nèi)芜x被一個或多個如上述定義的R3基團取代。
第一組優(yōu)選化合物為，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為COOR″基團，其中R″為H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基或抗壞血酸基；Ar為如上述所定義的苯基。
第二組優(yōu)選化合物為，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為CONH2或CONHSO2R，其中R為直鏈或支鏈C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；Ar為如上述所定義的苯基。
第三組優(yōu)選化合物為，其中R和R1均為甲基；R2為氟；G為COOR″，其中R″如上述所定義；Ar為如上述所定義的苯基。
第四組優(yōu)選化合物為，其中R和R1均為甲基；R2為氟；G為CONH2或CONHSO2R，其中R如上述所定義；Ar為如上述所定義的苯基。
第五組優(yōu)選化合物為，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為COOR″，其中R″如上述所定義；Ar為如上述所定義的雜環(huán)。
第六組優(yōu)選化合物為，其中R和R1均為甲基；R2為氟；G為COOR″，其中R″如上述所定義；Ar為如上述所定義的雜環(huán)。
特別優(yōu)選如下化合物2-甲基-2(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)丙酸(CHF 4810)；2-甲基-2(2-氟-4′環(huán)己基聯(lián)苯-4-基)丙酸(CHF 4961)；1-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5022)；1-(4′-環(huán)己基-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5023)；1-(4′-芐氧基-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5042)；1-(2-氟-4′-異丙氧基聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5044)；1-(2-氟-3′-三氟甲氧基聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5045)；1-(2-氟-4′-三氟甲氧基聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5046)；1-(2-氟-3′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5058)；1-(4′-環(huán)戊基-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5059)；1-(4′-環(huán)庚基-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5060)；1-(2′-環(huán)己基-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5061)；1-(2-氟-4′-羥基聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5070)；1-[2-氟-4′-(四氫吡喃-4-基氧基)聯(lián)苯-4-基]-環(huán)丙烷-羧酸(CHF5071)；1-(2，3′，4′-三氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5073)；1-(3′，4′-二氯-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5074)；1-(3′，5′-二氯-2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5075)；1-(3′-氯-2，4′-二氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5076)；1-(4-苯并[b]噻吩-3-基-3-氟苯基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5077)；1-(2-氟-4′-丙-2-炔氧基-聯(lián)苯-4-基)-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5078)；1-(4′-環(huán)己氧基-2-氟-聯(lián)苯-4-基)-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5079)；1-[2-氟-4′-(四氫吡喃-4-基)-聯(lián)苯-4-基]-環(huán)丙烷羧酸(CHF5080)；1-[2-氟-4′-(4-氧代-環(huán)己基)-聯(lián)苯-4-基]-環(huán)丙烷羧酸(CHF5081)；2-(2″-氟-4-羥基-[1，1′4′，1″]叔苯基-4″-基)-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5083)；1-[4′-(4，4-二甲基環(huán)己基)-2-氟[1，1′-聯(lián)苯基]-4-基]-環(huán)丙烷-羧酸(CHF 5084)；1-[2-氟-4′-[[4-(三氟甲基)苯甲?；鵠氨基][1，1′-聯(lián)苯基]-4-基]-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5094)；1-[2-氟-4′-[[4-(三氟甲基)環(huán)己基]氧基][1，1′-聯(lián)苯基]-4-基]-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5096)；1-[2-氟-4′-[(3，3，5，5-四甲基環(huán)己基)氧基][1，1′-聯(lián)苯基]-4-基]-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5102)；1-[4′-[(4，4-二甲基環(huán)己基)氧基]-2-氟[1，1′-聯(lián)苯基]-4-基]-環(huán)丙烷羧酸(CHF 5103)；1-(2，3′，4″-三氟[1，1′4′，1″-叔苯基]-4-基)-環(huán)丙烷羧酸(CHF5104)；1-(2，2′，4″-三氟[1，1′4′，l ″-叔苯基]-4-基)-環(huán)丙烷羧酸(CHF5105)；1-(2，3′-二氟-4″-羥基[1，1′4′，1″-叔苯基]-4-基)-環(huán)丙烷-羧酸(CHF 5106)；1-(2，2′-二氟-4″-羥基[1，1′4′，1″-叔苯基]-4-基)-環(huán)丙烷-羧酸(CHF 5107)；2-(2-氟-3′，5′-雙(氯)聯(lián)苯-4-基)丙酸酰胺(CHF 5125)。
更優(yōu)選的一組化合物為，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為COOH；Ar為被一個或多個基團取代的苯基，照此使得整個分子的logP(正辛醇與水之間的分配系數(shù))等于或大于4.5，正如通過使用軟件QikProp2.1版(Schrodinger Inc)所計算的。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)分子的log P越高，則對Aβ42肽釋放的抑制功效越大且特別有效的化合物為這類化合物，其log P等于或大于4.5，優(yōu)選大于5.0。
這些化合物的實例為CHF 5022、CHF 5074、CHF 5096、CHF 5105、CHF 5106和CHF 5107。
本發(fā)明還涉及為增加跨過血腦屏障而制備的藥物上可接受的鹽和酯類。
本發(fā)明的另一個目的在于通式(I)的化合物作為藥物的應(yīng)用，特別是它們在制備用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性疾病，諸如阿爾茨海默病的藥物組合物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一個目的在于優(yōu)選用于口服使用的固體或液體藥物組合物，包括至少一種通式(I)化合物與藥物上可接受的賦形劑和/或載體的混合物，所述的賦形劑和/或載體例如描述在《Remington氏藥物科學手冊》(Remington′s Pharmaceutical Sciences Handbook)XVIIEd.，Mack Pub.，N.Y.，U.S.A.中。
可以按照文獻方法，通過下列步驟制備一般通式(I)的化合物，其中R″為H在方案1中報導(dǎo)的條件下使通式(II)的芳基鹵與硼酸或酯ArB(OL)2之間進行鈀-催化的反應(yīng)，其中通式(II)的結(jié)構(gòu)式如下 其中R、R1和R2如上述所定義且X為溴或碘，優(yōu)選碘；在ArB(OL)2中，L為烷基鏈。
方案1通式(II)的化合物是商購的或可以按照下列合成途經(jīng)制備。
衍生物，其中R和R1為直鏈或支鏈C1-C4烷基(IIa)可以按照方案2中所示的合成途經(jīng)以通式(III)的芳基乙酸類作為原料制備所述的化合物，在通式(III)中，R和R2如上述所定義且X為溴或碘。
使通式(III)的酸酯化、烷基化且任選進行水解，條件是終產(chǎn)物上的基團G為COOH。
方案2衍生物，其中R和R1與它們所連接的碳原子形成3-6個碳的環(huán)(IIb)所述的化合物是商購的或可以按照方案3中報導(dǎo)的合成途經(jīng)制備，其中n為1-4的整數(shù)。
方案3硼酸或相應(yīng)的硼酸鹽是商購的或可以按照文獻中已知的方法由相應(yīng)的鹵化物制備。
可以通過酯化G為COOH的通式(I)的化合物制備通式(I)的化合物，其中G為COOR″，其中R″為直鏈或支鏈C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基或抗壞血酸基。
可以通過使相應(yīng)的酯類與NH3或胺NH2SO2R反應(yīng)制備通式(I)的化合物，其中G為CONH2或CONHSO2R，其中R為直鏈或支鏈C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基。
可以按照已知方法，例如將羧酸轉(zhuǎn)化成酰胺、使酰胺脫水得到腈并使后者與三丁基錫疊氮化物反應(yīng)制備通式(I)的化合物，其中G為四唑基。
實施例化學制備實施例實施例12-甲基-2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)丙酸(CHF4810)的制備[2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)]丙酸甲酯的制備向2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)丙酸(0.2g，0.64mmoles)在甲醇(3ml)中的溶液中加入98％硫酸(0.5g)并回流2.5小時。在真空中除去溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯(5ml)并用5％NaHCO3溶液(5ml)、然后用水洗滌。用Na2SO4干燥該溶液并在真空中濃縮而得到油狀物(0.2g，95％)。
HPLC-UV純度(215nm)99％[2-甲基-2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)丙酸甲酯的制備向在0℃下和氮氣環(huán)境中的[2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)]丙酸甲酯(0.2g，0.61mmoles)在無水THF(3ml)中的溶液中加入60％NaH(30mg，0.75mmoles)。將該混合物攪拌30分鐘并加入CH3I(70μl，0.91mmoles)。3小時后，在真空中濃縮該混合物并使用乙酸乙酯(5ml)溶解。用5％NaHCO3溶液(5ml)、然后用水洗滌所得溶液，用Na2SO4干燥該溶液，并真空中濃縮而得到油狀物(0.18g，87％)，不經(jīng)進一步純化將其用于隨后的反應(yīng)。
2-甲基-2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)丙酸的制備向[2-甲基-2-(2-氟-4′-三氟甲基聯(lián)苯-4-基)]丙酸甲酯(0.18g，0.53mmoles)在乙醇(5ml)中的溶液中加入KOH(60mg，1mmol)并在室溫下保持攪拌3小時。用H2O(5ml)稀釋該混合物并用乙醚(5ml)洗滌該溶液。棄去有機相。用HCl將水相酸化至pH＝2，然后用乙酸乙酯(10ml)提取。用Na2SO4干燥該有機相并在真空中濃縮而得到白色固體，將其通過快速SiO2色譜法純化(洗脫劑己烷/乙酸乙酯8/2v/v)而得到產(chǎn)物，為白色固體(16mg，10％)。
HPLC-UV純度(215nm)97％。
1H NMR(DMSO-d6)12.56(s br，1H)；7.84(d，2H)；7.78(d，2H)；7.57(dd，1H)；7.32(s，1H)；7.29(m，1H)；1.52(s，6H)；MS(EI)326m/z(M+.)，281，253。
按照相同步驟并使用合適的反應(yīng)劑制備化合物CHF 4961。
實施例21-(2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸(CHF 5041)的制備4-溴-3-氟芐基溴的制備向4-溴-3-氟甲苯(10g，0.053moles)在四氯化碳(100ml)中的溶液中加入N-溴琥珀酰亞胺(NBS；14g，0.08moles)?；亓髟摶旌衔?，向其中加入過氧化二苯酰(100mg，0.4mmoles)，回流1小時，然后在室溫下冷卻并用水提取。棄去水相，用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥并在真空中濃縮而得到油狀物(16g)，使其進行硅膠柱色譜(150g)，用己烷洗脫而得到產(chǎn)物。
4-溴-3-氟苯基乙腈的制備向4-溴-3-氟芐基溴(12.2g，0.03moles)在乙醇(100ml)中的溶液中加入NaCN(2g，0.04moles)并回流2小時。在真空中濃縮該混合物；用水溶解所得殘余物，然后用乙酸乙酯提取。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥并在真空中濃縮而得到深色油狀物(10g)，使其進行硅膠柱色譜(150g)，用己烷∶乙醚7∶3洗脫而得到固體形式的產(chǎn)物。
4-溴-3-氟苯基環(huán)丙腈的制備向4-溴-3-氟苯基乙腈(5g，23mmoles)在甲苯(20ml)中的溶液中加入35mmoles的1，2-二溴乙烷、50％NaOH水溶液(20ml)和溴化四丁基銨(1.6g，5mmoles)。將該混合物在室溫下保持攪拌5-12小時，然后用水稀釋并用乙酸乙酯提取。用1N HCl然后用鹽水洗滌有機相，最終干燥并在真空中濃縮而得到棕色固體，使其進行硅膠柱色譜(200g)，用己烷-乙醚1-1洗脫而得到固體形式的產(chǎn)物。
4-溴-3-氟苯基環(huán)丙烷羧酸的制備向4-溴-3-氟苯基環(huán)丙腈(21mmoles)在甲醇(10ml)中的混懸液中加入35％NaOH水溶液(40ml)和35％H2O2水溶液(3ml)，然后回流4小時，在室溫下冷卻并加入2N HCl(250ml)。通過過濾收集沉淀的固體并再溶于5％NaHCO3水溶液(300ml)。過濾出不溶性級分并用2N HCl將澄清濾液酸化至pH＝2。產(chǎn)物沉淀，為白色固體，將其通過過濾回收并在真空中干燥。
1-(2-氟聯(lián)苯-4-基)環(huán)丙烷羧酸的制備將800mg(3.1mmoles)的4-溴-3-氟苯基環(huán)丙烷羧酸和650mg(3.4mmoles)的苯基硼酸懸浮于8ml的2M K2CO3水溶液中。向該混合物中加入溴化四丁基銨(960mg，3mmoles)和乙酸鈀(II)(40mg，0.18mmoles)并在130℃下的封閉反應(yīng)器中加熱30分鐘。在室溫下冷卻后，向該混合物中加入2MHCl(25ml)并用乙酸乙酯提取。用1NHCl，然后用鹽水洗滌有機相，最終干燥并在真空中濃縮而得到油狀物(1.7g)，使其從異丙醚-己烷中結(jié)晶而得到產(chǎn)物，為白色固體(0.2g)。
HPLC(215nm)98％。
MS(EI；TSQ700；參數(shù)180C；70V；200uA)256(M+.)；210；196.
1H-NMR(DMSO)12.41(s br，1H)；7.56-7.35(m，6H)；7.27(m，1H)；7.24(s，1H)；1.48(m，2H)；1.22(m，2H)。
按照與實施例1中所述相同的步驟，以合適的4-溴苯基環(huán)烷羧酸類為原料并使用合適的反應(yīng)劑制備化合物CHF 5022、CHF 5023、CHF5042、CHF 5045、CHF 5046、CHF 5058、CHF 5059、CHF 5060、CHF 5061、CHF 5070、CHF 5071、CHF 5073、CHF 5074、CHF 5075、CHF 5076、CHF 5077、CHF 5078、CHF 5079、CHF 5080、CHF 5081、CHF 5083、CHF 5084、CHF 5094、CHF 5096、CHF 5102、CHF 5103、CHF 5104、CHF5105、CHF 5106、CHF 5107和CHF 5002。
實施例3-藥理活性H4-15x細胞上清液中Aβ42釋放的抑制在有潮霉素和殺稻瘟菌素存在下的燒瓶內(nèi)(在37℃下的保溫箱內(nèi)，在水蒸氣飽和的含有5％二氧化碳的氣體環(huán)境中)培養(yǎng)H4-15x細胞(用編碼β-淀粉狀蛋白APP695前體的人基因轉(zhuǎn)染的人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)，該體系對連續(xù)表達所關(guān)注基因的細胞維持選擇性壓力。
當細胞達到約90％融合率時，收集它們并重新接種在24孔平板(各2×105個細胞)上的0.5ml完整培養(yǎng)基內(nèi)。在約24小時后，當細胞與孔表面粘著并得到融合時，用0.5ml補充了至100微摩爾終濃度的化合物(I)的新鮮培養(yǎng)基取代各孔中的培養(yǎng)基。對每一測試濃度按照一式三份重復(fù)。預(yù)先將用于處理的分子溶于二甲亞砜(DMSO)或溶于二甲亞砜/水混合物，DMSO在孔中的終濃度不超過1％。因此，再次將制備的平板保溫過夜(14-16小時)；此后從各孔中取上清液并對Aβ42和Aβ40蛋白定量。使用用于微量培養(yǎng)板化學發(fā)光分析的儀器操作進行本試驗，它允許對兩種蛋白質(zhì)分別定量且基于分析物-抗體復(fù)合物在順磁微珠上的固定化。用釕化合物標記該復(fù)合物的抗體之一，在進行電化學激發(fā)時，這種化合物可以產(chǎn)生與存在的分析物的量成正比強度的光信號。
大鼠全血中環(huán)加氧酶-1(COX-1)的抑制從大鼠腹主動脈取全血并立即放入肝素化試管。用100μM濃度的測試化合物或僅用載體(DMSO)將肝素化全血的等分部分(500μl)在37℃下預(yù)保溫1小時。通過添加鈣離子載體A23187(終濃度5×10-5M)誘導(dǎo)類二十烷酸產(chǎn)生并在30分鐘后通過將樣品快速放入干冰中而中斷保溫。此后離心樣品(在4℃下12000g×3分鐘)并通過放射性免疫測定法計算TxB2血栓烷B2的產(chǎn)量。
將表示為在100μM下Aβ42釋放抑制百分比和在相同濃度下COX-1抑制活性百分比的結(jié)果報導(dǎo)在表1中。以相同濃度用作對比的氟比洛芬表現(xiàn)出約25％的Aβ42釋放抑制作用和100％的COX-1抑制活性。
表1本發(fā)明有代表性的化合物在100μM濃度下的Aβ42釋放抑制百分比和COX-1抑制活性百分比
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物、其藥物上可接受的鹽和其它酯類 其中R和R1相同且為直鏈或支鏈C1-C4烷基；或它們與它們所連接的碳原子一起形成3-6個碳原子的環(huán)；G為-COOR″基團，其中R″為H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基或抗壞血酸基；-CONH2或CONHSO2R基團，其中R為直鏈或支鏈C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；-四唑殘基；R2為H、CF3、OCF3或選自F、Cl、Br、I的鹵素，優(yōu)選氟；Ar為如下通式 其中R3表示一個或多個獨立地選自下列基團的基團-上述定義的鹵素；-CF3；-任選被一個或多個C1-C4烷基和/或氧代基取代的C3-C8環(huán)烷基；-CH＝CH2；-CN；-CH2OH；-亞甲二氧基或亞乙二氧基；-NO2；-任選被一個或多個如下基團取代的苯基鹵素；CF3；OCF3；OH；直鏈或支鏈C1-C4烷基；含有至少4個碳原子和至少1個雜原子的飽和雜環(huán)(eterocycle)；任選依次被下列基團中的一個或多個取代的C3-C8環(huán)烷基直鏈或支鏈C1-C4烷基、CF3或OH；OR4或NHCOR4，其中R4為CF3、直鏈或支鏈C2-C6鏈烯基或炔基；芐基；任選被如下基團中的一個或多個取代的苯基鹵素、CF3、OCF3、OH、直鏈或支鏈C1-C4烷基；含有至少4個碳原子和至少1個雜原子的飽和雜環(huán)(eterocycle)；任選依次被下列基團中的一個或多個取代的C3-C8環(huán)烷基直鏈或支鏈C1-C4烷基、CF3或OH；-SR5、SO2R5或COR5，其中R5為直鏈或支鏈C1-C6烷基；或Ar為選自如下的組的雜環(huán)(eterocycle)噻吩、苯并噻吩、二苯并噻吩、噻蒽、吡咯、吡唑、呋喃、苯并呋喃、二苯并呋喃、吲哚、異吲哚、苯并呋喃、咪唑、苯并咪唑、噁唑、異噁唑、苯并噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、噠嗪、喹啉、異喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噌啉、吡唑、吡喃、苯并吡喃、pyrrolizine、2，3-二氮雜萘、1，5-二氮雜萘、1，3-間二氧雜環(huán)戊烯、1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯，它們?nèi)芜x被一個或多個如上述定義的R3基團取代。
2.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為COOR″基團，其中R″為H、直鏈或支鏈C1-C4烷基、C3-C6環(huán)烷基或抗壞血酸基；Ar為如權(quán)利要求1中所定義的苯基。
3.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為CONH2或CONHSO2R，其中R為直鏈或支鏈C1-C4烷基或C3-C6環(huán)烷基；Ar為如權(quán)利要求1中所定義的苯基。
4.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1為CH3；R2為氟；G為COOR″，其中R″如權(quán)利要求1中所定義；Ar為如權(quán)利要求1中所定義的苯基。
5.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1為CH3；R2為氟；G為CONH2或CONHSO2R，其中R如上述所定義；Ar為被任選取代的苯基取代的苯基。
6.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；R2為氟；G為COOR″基團，其中R″如上述所定義；Ar為如權(quán)利要求1中所定義的雜環(huán)。
7.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1為CH3；G為COOR″基團，其中R″如上述所定義；R2為氟；Ar為如權(quán)利要求1中所定義的雜環(huán)。
8.如權(quán)利要求1中所述的化合物，其中R和R1與它們所連接的碳原子一起形成3個碳原子的環(huán)；G為COOH；R2為氟；Ar為被一個或多個基團取代的苯基，照此使得整個分子的log P等于或大于4.5，正如通過使用軟件QikProp2.1版(Schrodinger Inc)所計算的。
9.如權(quán)利要求8中所述的化合物，選自CHF 5022、CHF 5074、CHF5096、CHF 5105和CHF 5106和CHF 5107的組。
10.如權(quán)利要求1-9中所述的化合物，用作藥物。
11.藥物組合物，含有通式(I)化合物與藥物上可接受的載體和/或賦形劑的混合物。
12.如權(quán)利要求11中所述的藥物組合物，用于口服給藥。
13.如權(quán)利要求1-9中所述的通式(I)的化合物在制備用于治療與神經(jīng)毒性肽Aβ42產(chǎn)生增加相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
14.如權(quán)利要求1-9中所述的通式(I)的化合物在制備用于預(yù)防或治療神經(jīng)變性疾病的藥物中的應(yīng)用。
15.如權(quán)利要求14中所述的通式(I)的化合物在治療阿爾茨海默病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及1－苯基烷羧酸衍生物、其制備方法及其在治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性疾病，諸如阿爾茨海默病中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/185GK1751018SQ200480004729
公開日2006年3月22日 申請日期2004年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月21日
發(fā)明者L·拉維格里亞, I·佩勒托, S·拉達里, B·P·艾姆畢姆伯, A·里茲, G·維勒緹 申請人:奇斯藥制品公司