專利名稱：甘露聚糖肽口服顆粒劑的制備及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種口服顆粒藥物，特別是關(guān)于一種甘露聚糖肽口服顆粒劑的制備及用途。
背景技術(shù)：
普通的α-溶血性鏈球菌33號(hào)生產(chǎn)的藥物甘露聚糖肽早在1986年在國內(nèi)上市，劑型有注射液，口服液，片劑，膠囊四種。并且它只作為一種免疫增強(qiáng)劑，藥理作用是激活淋巴細(xì)胞，促進(jìn)胸腺淋巴細(xì)胞分化增殖，促進(jìn)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能，激活巨噬細(xì)胞，使白細(xì)胞生成增加，促進(jìn)補(bǔ)體生成，促進(jìn)白細(xì)胞介素-1的生成，提高骨髓造血功能。原有技術(shù)發(fā)酵周期長，發(fā)酵單位低，生產(chǎn)成本高。注射給藥患者痛苦大，膠囊，口服液和片劑給藥患者服用后口感差，小兒服用不方便。因此有必要設(shè)計(jì)一種口服給藥的新劑型。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種甘露聚糖肽口服顆粒劑的制備及用途，它利用特殊環(huán)境使菌種遺傳性質(zhì)發(fā)生變異，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳性質(zhì)穩(wěn)定的菌種，作為生產(chǎn)菌種，它生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)量高，用途廣，有效率高。
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種甘露聚糖肽口服顆粒劑的制備，其特征是它將α-溶血鏈球菌菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導(dǎo)致α-溶血鏈球菌菌種遺傳特性發(fā)生變異，返回地面后優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，該菌種已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082，將該菌種作為生產(chǎn)菌種，再經(jīng)菌種制備、一級(jí)發(fā)酵和二級(jí)發(fā)酵、提純、加入載體干燥制粒，最終生產(chǎn)出口服顆粒劑。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療慢性胃炎。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療消化性潰瘍。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療潰瘍性結(jié)腸炎。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療帕金森氏綜合癥。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療哮喘。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療咽炎。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療神經(jīng)衰弱。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于改善睡眠。
所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療小兒厭食癥。
本發(fā)明的特點(diǎn)是由于本發(fā)明將α-溶血鏈球菌菌種搭載返回式太空飛行器(宇宙飛船或返回式衛(wèi)星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射線、交變磁場、高真空、高熱深冷等因素的綜合作用，使菌株的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)斷裂，基因組發(fā)生重排，從而產(chǎn)生新的菌株。返回地面后，對(duì)經(jīng)過太空搭載的菌株進(jìn)行培養(yǎng)和篩選，通過研究其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)、遺傳穩(wěn)定性、中試生產(chǎn)指標(biāo)等內(nèi)容，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵后得到治療各種疾病的藥物。該菌種已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。
特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經(jīng)太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化后，選育出發(fā)酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌株T33株。通過中國科學(xué)院微生物研究所對(duì)T33菌株及D33菌株的全細(xì)胞蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)分析和菌株的基因組DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比較，可以證明空間誘變及地面篩選出的T33菌株其基因有變異。該突變菌株在遺傳上穩(wěn)定，有較強(qiáng)的生產(chǎn)適應(yīng)性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標(biāo)準(zhǔn)(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗(yàn)所送樣測定達(dá)到271.6％，發(fā)酵含量比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上。該菌株經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、提純及精制等高科技手段制備而成的口服顆?？蓪?duì)治療各種疾病并具有增強(qiáng)免疫的作用。
(見附件附件材料1陜西省科學(xué)技術(shù)廳陜西省科學(xué)技術(shù)成果鑒定證書材料附件材料2太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株經(jīng)“神舟三號(hào)”飛船搭載公證書。
附件材料3太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株經(jīng)“神舟三號(hào)”飛船搭載返回地面篩選報(bào)告附件材料4中國科學(xué)院微生物所關(guān)于“神舟三號(hào)”飛船搭載太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株與地面對(duì)照菌的形態(tài)生理生化鑒定報(bào)告書附件材料5中國科學(xué)院微生物所關(guān)于“神舟三號(hào)”飛船搭載太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株與地面對(duì)照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鑒定報(bào)告書附件材料6陜西省藥品檢驗(yàn)所“神舟三號(hào)”太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽口服液檢測報(bào)告附件材料7科技查新報(bào)告復(fù)印件附件材料8中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏菌種保藏受理通知書復(fù)印件)新藥理作用試驗(yàn)分析驗(yàn)證潰瘍性結(jié)腸炎的病因與大腸桿菌的某些菌株釋放出損傷腸粘膜的有害物質(zhì)，人HLA-B27基因表達(dá)，結(jié)腸上皮40 KD抗原特異性抗體存在有關(guān)?；颊呓Y(jié)腸粘膜可能存在與遺傳有關(guān)的原發(fā)性的上皮細(xì)胞的異常，這種異常的上皮細(xì)胞分泌異常的粘液糖蛋白，改變了正常結(jié)腸粘膜的通透性，使一般不易通過正常腸粘膜、對(duì)正常人無害的腸道共生菌群及食物等抗原，可能進(jìn)入腸粘膜，從而激發(fā)一系列抗原特異性免疫反應(yīng)。有關(guān)治療潰瘍性結(jié)腸炎甘露聚糖肽新的藥理作用是空太誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽口服后在腸道內(nèi)分解為甘露聚糖和多肽，甘露聚糖的作用是維護(hù)人體腸道的正常環(huán)境，促進(jìn)雙歧桿菌等有益菌群的自然增殖，對(duì)食物中各項(xiàng)主成份均有提升其營養(yǎng)吸收效率。多肽經(jīng)消化上皮攝取進(jìn)入腸淋巴結(jié)群。被淋巴結(jié)內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬后發(fā)揮免疫活性。促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌堿性成纖維細(xì)胞生長因子bFGF使?jié)冃越Y(jié)腸炎創(chuàng)面修復(fù)并可維護(hù)腸屏障功能，降低腸道細(xì)菌向胰、肝、腎、脾和腸系膜淋巴結(jié)的移位率。它還具有激活淋巴細(xì)胞，促進(jìn)胸腺淋巴細(xì)胞分化增殖，促進(jìn)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能，激活巨噬細(xì)胞，使白細(xì)胞生成增加，促進(jìn)補(bǔ)體生成，促進(jìn)白細(xì)胞介素-1的生成，提高骨髓造血功能。適用范圍是1.反復(fù)呼吸道感染2.各種惡性腫瘤的輔助治療3.再生障礙性貧血及各種原因引起的WBC、血小板減少癥。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)口服甘露聚糖肽500微克/100克每天兩次共三周治療由同種動(dòng)物結(jié)腸黏膜均漿加Freund佐劑，制成1∶1乳劑，給大鼠足趾肉墊內(nèi)注射誘發(fā)的大鼠慢性潰瘍性結(jié)腸炎模型，可以明顯加速潰瘍的愈合。
新用途驗(yàn)證經(jīng)過對(duì)一千例使用“神舟三號(hào)”甘露聚糖肽口服顆?；颊叩恼{(diào)查發(fā)現(xiàn)56例潰瘍性結(jié)腸炎患者，在服藥四周后腹瀉，粘液膿血便，腹痛等癥狀消失。三個(gè)月后回訪無復(fù)發(fā)。其中19例經(jīng)服藥前后結(jié)腸鏡檢查對(duì)照潰瘍完全愈合。有效率96％新藥理作用試驗(yàn)分析驗(yàn)證慢性胃炎的感染因素可由太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽的增強(qiáng)免疫作用消除。但是慢性胃炎進(jìn)展中出現(xiàn)的腸上皮化生和不典型增生以及假幽門腺化生，與壁細(xì)胞受損自身抗原刺激集體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生壁細(xì)胞抗體和內(nèi)因子抗體有關(guān)。使用增強(qiáng)免疫治療無效。太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽治療慢性胃炎粘膜病變的機(jī)理是促進(jìn)胃粘膜再生修復(fù)，通過促進(jìn)胃粘膜上皮細(xì)胞增生分化成熟，再生加速。逆轉(zhuǎn)腸上皮化生和不典型增生以及假幽門腺化生而實(shí)現(xiàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)表皮生長因子EGF在服藥組中活性明顯增強(qiáng)。切除大鼠頜下腺誘發(fā)的典型慢性胃炎粘膜病變通過口服太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽可以消除。而表皮生長因子EGF在消化道中的生理作用是激活鳥氨酸脫羧酶ODC，促進(jìn)黏膜細(xì)胞DNA合成。抑制胃酸分泌。促進(jìn)上皮增生。增加胃粘膜血流量。促進(jìn)腸粘膜對(duì)谷氨酰胺的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用。
新用途驗(yàn)證經(jīng)過對(duì)一千例使用“神舟三號(hào)”太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽口服顆?；颊叩恼{(diào)查發(fā)現(xiàn)778例各種慢性炎癥患者合并消化道功能障礙者，在服藥一周后餐后上腹飽脹，無規(guī)律性隱痛，噯氣，反酸，燒灼感，食欲不振，惡心，嘔吐等癥狀消失。其中反復(fù)呼吸道感染合并慢性胃炎者543例，慢性膽囊炎膽囊切除術(shù)后綜合癥59例，老年性骨關(guān)節(jié)炎服用解熱鎮(zhèn)痛藥者96例，其他80例。既往有明確上消化道出血病史者26例，有酗酒史者4例。三個(gè)月后回訪堅(jiān)持服藥的681例患者癥狀無反復(fù)，其中服藥前有胃鏡明確診斷的66例，服藥后復(fù)查胃鏡胃粘膜病變消失粘膜恢復(fù)正常。
治療消化性潰瘍甘露聚糖肽新的藥理作用包括增強(qiáng)抗幽門螺桿菌感染的增強(qiáng)免疫作用，和促進(jìn)胃十二指腸粘膜再生修復(fù)作用。概括為提高防御修復(fù)能力。消化性潰瘍的感染因素以及幽門螺桿菌耐藥可由甘露聚糖肽的增強(qiáng)免疫作用消除。甘露聚糖肽治療消化性潰瘍粘膜病變的主要機(jī)理是促進(jìn)胃十二指腸粘膜再生修復(fù)，通過促進(jìn)潰瘍部位巨噬細(xì)胞分泌堿性成纖維細(xì)胞生長因子bFGF使消化性潰瘍創(chuàng)面修復(fù)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)口服甘露聚糖肽500微克/100克每天兩次共三周治療由半胱胺誘發(fā)的大鼠十二指腸潰瘍，可以明顯加速潰瘍的愈合，且療效優(yōu)于口服西米替丁10毫克/100克，每天兩次共三周。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)用250微克/100克每天兩次共三周治療大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍(乙酸誘發(fā))，潰瘍面積縮小到每平方毫米(2.0±0.6)，而用西米替丁10毫克/100克潰瘍面積為每平方毫米(7.5±2.1)，差別有顯著差異。組織學(xué)檢查還發(fā)現(xiàn)bFGF加西米替丁治療能明顯減輕潰瘍周圍的炎癥反應(yīng)和壞死程度。BFGF對(duì)ANP時(shí)腸粘膜損傷修復(fù)具有促進(jìn)作用，可維護(hù)腸屏障功能，降低腸道細(xì)菌向胰、肝、腎、脾和腸系膜淋巴結(jié)的移位率，并降低血漿內(nèi)毒素(LPS)和內(nèi)皮素-1(ET-1)水平，可預(yù)防ANP繼發(fā)感染，是一種減輕腸道損傷的有效生物活性物質(zhì)。其機(jī)制有①抑制脂質(zhì)過氧化過程，減輕腸道脂質(zhì)過氧化損傷；②促進(jìn)腸粘膜DNA表達(dá)和蛋白質(zhì)合成，有利于腸道損傷的修復(fù)；③減輕內(nèi)毒素血癥，阻止LPS介導(dǎo)炎癥反應(yīng)對(duì)腸道的進(jìn)一步損傷；④bFGF的舒血管作用有利于開放微小血管，改善腸道局部微循環(huán)，縮血管活性物質(zhì)(ET-1)生成減少，腸粘膜缺血性損害得以減輕；⑤腸粘膜上存在生長因子受體，當(dāng)bFGF與之作用后，通過其促分裂效應(yīng)而加速腸粘膜上皮細(xì)胞的整復(fù)和增殖，促進(jìn)已受損粘膜上皮修復(fù)。
>新用途驗(yàn)證經(jīng)過對(duì)一千例使用“神舟三號(hào)”甘露聚糖肽口服顆?；颊叩恼{(diào)查發(fā)現(xiàn)268例消化性潰瘍患者，在服藥一周后節(jié)律性上腹痛，噯氣，反酸，饑餓樣不適感，脹滿，厭食等癥狀消失。三個(gè)月后回訪無復(fù)發(fā)。其中56例經(jīng)服藥前后胃鏡檢查對(duì)照潰瘍完全愈合。有效率93％具體實(shí)施方案菌種選育在α-溶血鏈球菌生長規(guī)律的基礎(chǔ)上，選定較合適生長時(shí)期的菌種，采用平皿生長的菌落、浸入其它物質(zhì)中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭載“神舟三號(hào)”宇宙飛船。在太空軌道(近地點(diǎn)高度200公里、遠(yuǎn)地點(diǎn)高度350公里)進(jìn)行了6天零18小時(shí)的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現(xiàn)為微重力、高真空、高輻射、交變磁場等特殊環(huán)境。在外層空間飛行的菌種被置于一個(gè)與地球上的生態(tài)環(huán)境完全不同的環(huán)境中，主要包括來自磁場俘獲的電子、質(zhì)子及低能重粒子；來自銀河系的宇宙射線如質(zhì)子、粒子及更重的高能重粒子；來自太陽磁暴的質(zhì)子及重粒子等。這些粒子作用于微生物細(xì)胞核中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，可導(dǎo)致雙鏈斷裂。微重力、高真空環(huán)境可使DNA的堿基序列發(fā)生重組，即基因組的重組和變異。變異后產(chǎn)生的新菌株，其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)、中試生產(chǎn)指標(biāo)等均會(huì)發(fā)生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面后，經(jīng)過進(jìn)一步篩選，僅優(yōu)選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩(wěn)定的菌株，經(jīng)培育制成生產(chǎn)菌種。這種經(jīng)航天搭載誘變后選育出的菌種已經(jīng)在在2003年12月29日由中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。
實(shí)驗(yàn)及中試生產(chǎn)結(jié)果表明，經(jīng)空間誘變后的新型太空菌種在遺傳特性上穩(wěn)定，有較強(qiáng)的生產(chǎn)適應(yīng)性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國家標(biāo)準(zhǔn)(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗(yàn)所送樣測定達(dá)到271.6％，發(fā)酵含量比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上，發(fā)酵周期大大縮短。
制備方法太空誘變菌種生產(chǎn)甘露聚糖肽的制備過程本發(fā)明所述的太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽是由以下方法制備太空菌種制備---一級(jí)發(fā)酵---二級(jí)發(fā)酵----發(fā)酵液提純，最終生產(chǎn)出甘露聚糖肽。
①太空菌種制備以經(jīng)過空間誘變育種精心選育的α-溶血鏈球菌作為生產(chǎn)菌種。
A.斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％，瓊脂3％，綿羊血8％；pH 7.4。
斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養(yǎng)基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種后置38℃恒溫培養(yǎng)30小時(shí)。
B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％；pH 7.4。
肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
將培養(yǎng)好的斜面菌種在無菌條件下按9％接種量，接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，38℃恒溫培養(yǎng)30小時(shí)。
②發(fā)酵過程發(fā)酵培養(yǎng)基牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％。
發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
A.一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無菌條件下按10％接種量，接入一級(jí)種子罐，在29℃恒溫培養(yǎng)30小時(shí)，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢琛?br> B.二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無菌條件下按20％接種量，接入發(fā)酵罐，在29℃恒溫培養(yǎng)70小時(shí)，罐壓不0.02Mpa，滅活放罐。滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到100℃，保溫60分鐘，冷卻靜置。
③提取過程a、發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。
b、發(fā)酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH5.0，得到溶解液并將溶解液靜置。
c、再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量，調(diào)pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢?，靜置后離心去除上清液得到沉淀物。
d、沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH，離心，上清液再加乙醇沉淀。這樣的工藝反復(fù)操作至中間檢測合格為止，得到的沉淀物為太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽粗品。真空干燥3-8小時(shí)，即得到太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)品。
上述方法得到的產(chǎn)品的檢驗(yàn)[性狀]本品為白色或微黃色無定形粉末；無臭、無味。
本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。
比旋度取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋成每1ml中約含10mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄vIE)，比旋度為+70℃至+80℃。
1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，搖勻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，數(shù)分鐘后，界面呈紫紅色。
2、取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，取約10ul點(diǎn)于濾紙上，晾干，用無水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解后.加0.2mol/L醋酸鈉溶液1.5ml與乙醇100ml，混勻即得。置暗處保存，可使用數(shù)月)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液沖洗，置還原液(取碘化鉀5g，硫代硫酸鈉5g，加水100ml使溶解，再加乙醇1 50ml、2mol/L鹽酸液2.5ml，隨加隨攪拌，臨用時(shí)配)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液沖洗，置品紅業(yè)硫酸試液中浸泡約30分鐘，取出，用焦亞硫酸鈉溶液(取焦亞硫酸鈉0.4g，加鹽酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，沖洗，晾干，在濾紙片點(diǎn)樣處應(yīng)呈紫紅色。
3、取供試品和對(duì)照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每1ml中含1mg的溶液作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性測定法試驗(yàn)，供試品和對(duì)照品管應(yīng)均無溶血發(fā)生。
1、酸度取本品，加水制成每1ml中含I0mg的溶液，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIH)，pH值應(yīng)為3.0-5.0。
2、吸收度取本品，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄VIA)，在260nm的波長處，其吸收度不得大于0.25，在280nm的波長處，其吸收度不得大于0.20。
3、總氮量取本品，照氮測定法(中國藥典2000年版二部附錄VIID第二法)測定。按干燥品計(jì)算，含總氮量應(yīng)為0.8-2.0％。
4、免疫原性取供試品和對(duì)照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的溶液，再分別用磷酸鹽緩沖液制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀釋液作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，依法檢查(附甘露聚糖肽免疫原性測定法)，供試品不溶血管的最低濃度應(yīng)不得高于對(duì)照品相應(yīng)濃度的一倍以上。
5、干燥失重 取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過5.0％(中國藥典2000年版二部附錄VIIIL)。
6、重金屬 取本品，在1.0g，依法檢查(中國藥典2000年版VIIIH)含重金屬不得過百萬分之二十。
7、異常毒性取本品，加氯化鈉注射液制成每1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版附錄XIC)。按靜脈注射法給藥，應(yīng)符合規(guī)定(供注射用)。
1.對(duì)照品溶液的制備精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的D-甘露糖對(duì)照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。搖勻；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含甘露糖50ug。
2.供試品溶液備取本品適量，精密稱定，加水溶解制成每1ml中含40ug的溶液。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，搖勻，沖入硫酸4.5ml，搖勻，放置于室溫，以0管為空白.照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)在490nm的波長處測定吸收度。以甘露糖ug數(shù)對(duì)相應(yīng)的吸收度，計(jì)算回歸方程。
4.測定法精密量取供試品溶液1.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“再加3％苯酚溶液1.0ml”起，依法操作，測定吸收度，由回歸方程計(jì)算甘露糖的含量。甘露聚糖肽免疫原性測定法(補(bǔ)體結(jié)合法)；1、試液A.酸鹽緩沖液(pH7.2)取氯化鈉8.5g、磷酸氫二鈉0.565g及磷酸二氫鉀0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸鎂溶液1ml，搖勻。
B.1％羊紅細(xì)胞懸液羊血紅細(xì)胞的制備由綿羊頸靜脈無菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸鈉8.0g、氯化鈉4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000mI使溶解，100℃滅菌30分鐘)的無菌容器中，4C保存。
1％羊血紅細(xì)胞懸液的制備取上述羊血紅細(xì)胞適量，用氯化鈉注射液洗滌三次，每次離心5分鐘(2000轉(zhuǎn)/分)，取壓積羊血紅細(xì)胞，用氯化鈉注射液制成1％羊血紅細(xì)胞懸液。取懸液，用氯化鈉注射液稀釋20倍制成供試品溶液，另取等量懸液加水稀釋20倍作為空白溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在541nm的波長處測定，其吸收度應(yīng)為0.65-0.70，如超出限度應(yīng)調(diào)節(jié)1％羊紅細(xì)胞懸液的濃度。
C.溶血素及致敏羊血紅細(xì)胞溶血素的制備取上述壓積羊血紅細(xì)胞，用氯化鈉注射液制成25％羊血紅細(xì)胞懸液.取家兔1只，靜脈注射上述羊血紅細(xì)胞懸液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分離血清，56℃。30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存。
溶血素單位的測定取溶血素適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加1％羊血細(xì)胞懸液0.1ml，搖勻，加稀釋度為1∶30的豚鼠血清(補(bǔ)體)0.2ml及磷酸鹽緩沖液0.2ml，搖勻，37℃保溫30分鐘，完全溶血管的最高稀釋度為1單位溶血素。
致敏羊血紅細(xì)胞的制備臨用前，將2％的羊血紅細(xì)胞懸液與2單位溶血索等體積混合，37℃保溫15分鐘即得。
補(bǔ)體取三只以上的豚鼠，心臟采血，離心分離血清，0℃以下保存。
補(bǔ)體單位的測定取補(bǔ)體適量，加磷酸鹽緩沖液，分別制成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀釋液，各取0.2ml置試管中，加0.2ml磷酸鹽緩沖液，搖勻，37℃保溫30分鐘后，分別加致敏羊血紅細(xì)胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。完全溶血管的最高稀釋度為1單位的補(bǔ)體。
抗體取甘露聚糖肽對(duì)照品適量，加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的對(duì)照品溶液免疫家兔，隔日采用耳靜脈注射對(duì)照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射后三日采血，離心分離血清，56℃下30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存(臨用前，需56℃30分鐘再次滅活)。
抗體單位的測定取抗體適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32.1∶64、1∶128的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加甘露聚糖肽對(duì)照品溶液0.1ml及2單位補(bǔ)體0.2m]，搖勻，于4-8℃放置4小時(shí)以上，置37℃保溫30分鐘，不溶血管的最高稀釋度為1單位抗體。同時(shí)設(shè)抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、補(bǔ)體(不加抗原，抗體，以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管，以上三種對(duì)照管應(yīng)全溶血；另設(shè)的致敏羊血紅細(xì)胞(不加抗原、抗體和補(bǔ)體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管應(yīng)不溶血。
2、免疫原性測定法取甘露驟糖肽對(duì)照品與供試品適量，照藥品項(xiàng)下的規(guī)定制成不同濃度的對(duì)照品溶液和供試品溶液，各取0.1ml置試管中，加入2單位抗體0.1ml及2單位補(bǔ)體0.2ml。搖勻，于4-8℃放置4小時(shí)以上，置37℃保溫30分鐘，加入致敏羊血紅細(xì)胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。觀察各管的溶血情況，不溶血管的最低濃度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同時(shí)設(shè)抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、補(bǔ)體(不加抗原、抗體、以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管，以上三種對(duì)照管應(yīng)全溶血另設(shè)的致敏羊血紅細(xì)胞(不加抗原、抗體和補(bǔ)體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管應(yīng)不溶血。
甘露聚糖肽口服顆粒的制備方法是以甘露聚糖肽為原藥，加入適宜輔料制成的干燥顆粒，此顆粒既可吞服，也可溶解在水中服用，它的特點(diǎn)是飛散性、附著性、聚集性、吸濕性等均較小，有利于分劑量；服用方便，適當(dāng)加入芳香劑、矯味劑、著色劑等可制成色、香、味俱全的藥物。其制備過程是先將精粉粉碎、過篩，加入可溶性淀粉等混合，再加入有機(jī)溶劑、乙醇及色素，溶液在混合機(jī)上混合，再在制粒機(jī)上制粒烘干，或在沸騰制粒機(jī)上混合制粒，將芳香劑溶于乙醇中，均勻的噴入干顆粒中并密閉1-2小時(shí)，通過整粒最終制成一定粒度的均勻顆粒。
實(shí)施例1制備規(guī)格為5mg/袋的甘露聚糖肽顆粒，每袋重5克。
工藝方法先將甘露聚糖肽精粉及蔗糖粉碎過篩備用。
取經(jīng)粉碎過濾的甘露聚糖肽1克，蔗糖800克，可溶性淀粉200克在混合機(jī)上加入經(jīng)溶解檸檬黃0.05克的乙醇溶液適量，經(jīng)40-100分鐘混合后制成軟材，移至制粒機(jī)上過14目篩，制粒再移至烘干室(機(jī))烘干，烘干溫度在55-65℃制成甘露聚糖肽顆粒，將食用香精溶解于適量乙醇中，均勻的噴入顆粒中，并密閉1-2小時(shí)，顆粒再經(jīng)整粒，粒度要不能通過1號(hào)篩和能通過5號(hào)篩的總和不能超過15％，最終制得均勻顆粒，分裝制成200袋中即得。
實(shí)施例2制備規(guī)格為10mg/袋的甘露聚糖肽顆粒，每袋重5克。
工藝方法先將甘露聚糖肽精粉及蔗糖粉碎過篩備用。
將稱好的甘露聚糖肽2克，蔗糖800克，可溶性淀粉200克放入沸騰制粒機(jī)中，經(jīng)溶解檸檬黃0.05克的乙醇溶液適量作為黏合劑加入，烘干溫度在55-65℃，烘干40-100分鐘制成甘露聚糖肽顆粒，將食用香精溶解于適量乙醇中，均勻的噴入顆粒中，并密閉1-2小時(shí)，顆粒再經(jīng)整粒，粒度要不能通過1號(hào)篩和能通過5號(hào)篩的總和不能超過15％，最終制得均勻顆粒，分裝制成200袋中即得。
實(shí)施例3制備規(guī)格為0.25mg/袋的甘露聚糖肽顆粒，每袋重5克。
工藝方法先將甘露聚糖肽精粉及蔗糖粉碎過篩備用。
取經(jīng)粉碎過濾的甘露聚糖肽0.5克，蔗糖800克，可溶性淀粉200克在混合機(jī)上加入經(jīng)溶解檸檬黃0.05克的乙醇溶液適量，經(jīng)40-100分鐘混合后制成軟材，移至制粒機(jī)上過14目篩制粒，再移至烘干室(機(jī))烘干，烘干溫度在55-65℃，制成甘露聚糖肽顆粒，將食用香精溶解于適量乙醇中，均勻的噴入顆粒中，并密閉1-2小時(shí)，顆粒再經(jīng)整粒，粒度要不能通過1號(hào)篩和能通過5號(hào)篩的總和不能超過15％，最終制得均勻顆粒，分裝制成200袋中即得。
權(quán)利要求
1.甘露聚糖肽口服顆粒劑的制備，其特征是它將α-溶血鏈球菌菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導(dǎo)致α-溶血鏈球菌菌種遺傳特性發(fā)生變異，返回地面后優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，該菌種已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082，將該菌種作為生產(chǎn)菌種，再經(jīng)菌種制備、一級(jí)發(fā)酵和二級(jí)發(fā)酵、提純、加入載體干燥制粒，最終生產(chǎn)出口服顆粒劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療慢性胃炎。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療消化性潰瘍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療潰瘍性結(jié)腸炎。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療帕金森氏綜合癥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療哮喘。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療咽炎。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療神經(jīng)衰弱。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于改善睡眠。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘露聚糖肽口服顆粒劑的用途，其特征是所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療小兒厭食癥。
全文摘要
甘露聚糖肽口服顆粒劑的制備，其特征是它將α－溶血鏈球菌菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導(dǎo)致α－溶血鏈球菌菌種遺傳特性發(fā)生變異，返回地面后優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，該菌種已經(jīng)在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082，將該菌種作為生產(chǎn)菌種，再經(jīng)菌種制備、一級(jí)發(fā)酵和二級(jí)發(fā)酵、提純、加入載體干燥制粒，最終生產(chǎn)出口服顆粒劑。所述甘露聚糖肽口服顆粒劑用于治療慢性胃炎；也用于治療消化性潰瘍，還可以用于治療潰瘍性結(jié)腸炎。這種甘露聚糖肽口服顆粒劑，它生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)量高，用途廣，有效率高。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1634564SQ200310122260
公開日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2003年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月31日
發(fā)明者趙恒 , 劉恒 申請(qǐng)人:趙恒