專利名稱：澳洲茄胺有機(jī)酸鹽及其制備方法和在醫(yī)藥上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以澳洲茄胺為有機(jī)堿與有機(jī)酸形成的澳洲茄胺有機(jī)酸鹽及其制備方法和在醫(yī)藥上的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
國內(nèi)外已有龍葵、澳洲茄和黃果茄的化學(xué)成分，澳洲茄胺的檢測方法和具有抗S180、抗炎、升高血糖的作用的報(bào)導(dǎo)，但尚未發(fā)現(xiàn)澳洲茄胺有機(jī)酸鹽、澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備方法和在醫(yī)藥上的應(yīng)用的信息。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種抗癌、平喘、抗炎藥效活性強(qiáng)，長效毒副作用小，溶解性強(qiáng)，性質(zhì)穩(wěn)定，生產(chǎn)方法簡便，純度高、藥效活性強(qiáng)的澳洲茄胺有機(jī)酸鹽及其澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備方法，和將這類新的化合物做為一類抗癌、平喘、抗炎藥物的新藥源在醫(yī)藥上的應(yīng)用，以取代療效差、毒副作用大、生產(chǎn)方法復(fù)雜、產(chǎn)品質(zhì)量差不能進(jìn)入國際市場的現(xiàn)有醫(yī)藥，造福于人類。
本發(fā)明澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備原理是將無抗癌、平喘、抗炎活性化合物α-澳洲茄堿、β-澳洲茄堿、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿的混合物水解，將與糖結(jié)合的生物堿——澳洲茄堿分子中具有抗癌、抗炎作用的3-羥基由結(jié)合狀態(tài)變成游離狀態(tài)，并以藥效活性基團(tuán)的形式存在于分子之中，使分子產(chǎn)生抗癌、抗炎活性，達(dá)到將無藥效活性成分的混合物全部轉(zhuǎn)化成藥效活性單體澳洲茄胺的目的。但該單體的抗癌活性相對較弱，20μg/ml對HeLa細(xì)胞抑制率(離體實(shí)驗(yàn))僅40％～42％；對人體肝癌SMMC7701細(xì)胞、肺癌MCI446細(xì)胞、白血病HL60細(xì)胞幾乎無抑制作用，此外，也無平喘作用。本發(fā)明的突出特點(diǎn)在于用強(qiáng)極化分子藥效活性基團(tuán)，增強(qiáng)其分子藥效活性，將分子中第六環(huán)上的仲氨基與有機(jī)酸成鹽來強(qiáng)極化其分子母體結(jié)構(gòu)上的決定抗癌活性強(qiáng)弱的藥效活性基團(tuán)，使其分子保持并增強(qiáng)3-羥基的抗癌、抗炎的藥效活性；澳洲茄胺轉(zhuǎn)變成澳洲茄胺有機(jī)酸鹽后其藥效活性增強(qiáng)，20μg/ml對HeLa細(xì)胞抑制率(離體實(shí)驗(yàn))達(dá)100％；澳洲茄胺成鹽后，使之形成3-羥基和第六環(huán)上的仲氨鹽基兩個(gè)活性基團(tuán)共存于同一分子中，由于兩個(gè)活性基團(tuán)相互作用，使其分子又產(chǎn)生新的藥效活性，增強(qiáng)了對肝癌、肺癌、白血病的抗癌藥效活性，同時(shí)還增強(qiáng)了平喘作用5～20μg/ml對人體肝癌SMMC7701干細(xì)胞、肺癌NCI446干細(xì)胞、胃癌SGC7901干細(xì)胞抑制率為100％；10～20μg/ml對白血病HL60干細(xì)胞抑制率＞75％；注射給藥12～24mg/kg對小鼠移植性腫瘤抑制率54～72％；灌胃給藥100～200mg/kg對小鼠移植性腫瘤抑制率40～68％；50～75mg/kg灌胃給藥能明顯對抗組織胺誘發(fā)的豚鼠哮喘P＜0.05。
其反應(yīng)如下

1、本發(fā)明的目的是提供一種澳洲茄胺有機(jī)酸鹽澳洲茄胺有機(jī)酸鹽具有以下結(jié)構(gòu)特征澳洲茄胺有機(jī)酸鹽通式I 其中R＝H；-CH2(OH)；-CH(OH)CH3；-COCH3；-C6H5；-CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH2OH；-C6H2(OH)3； 澳洲茄胺有機(jī)酸鹽通式II
其中M＝-(CH2)0-；-CH(OH)CH(OH)-；-COCH(OH)-； 澳洲茄胺有機(jī)酸鹽通式III 其中M＝-CH2C(OH)CH2-。
2、本發(fā)明的另一目的是提供澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備方法本發(fā)明的澳洲茄胺有機(jī)酸鹽是以茄科植物龍葵(Solanum Nigrum L)、澳洲茄(Solanum aviculare parst)和黃果茄(Solanum xanthocar pum Schrad，etwendl)的生果或其全草為原料，提取澳洲茄胺，再以澳洲茄胺為原料制備澳洲茄胺有機(jī)酸鹽，其制備方法如下(1)原料處理及粗總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經(jīng)篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)加濃氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離，得膏狀粗總生物堿；(2)粗總生物堿的精制用2～6％醋酸水溶液溶解膏狀粗總生物堿，固液重量比1∶10～30，加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)，加濃氨水或堿的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離得膏狀總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿，其主要成分為α、β、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿四種生物堿的混合物；
(3)粗澳洲茄胺的提取用含3～10％鹽酸的80～95％乙醇溶液溶解總生物堿，固液重量比1∶30～40，水解加熱回流2～3小時(shí)，冷卻過濾，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時(shí)，熱過濾，冷卻吸濾洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；(4)澳洲茄胺的精制將粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至飽和溶液，用活化后的硅膠G與粗澳洲茄胺溶液混合，調(diào)成不流動(dòng)的膏狀物，在80～90℃下恒溫干燥，冷卻后裝入層析柱內(nèi)，振實(shí)，用氯仿、或氯仿∶甲醇體積比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮體積比3∶1∶2之一進(jìn)行洗脫得洗脫液，檢驗(yàn)洗脫結(jié)束后，對洗脫液常壓或減壓蒸餾濃縮，將濃縮液冷卻結(jié)晶過濾干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺；(5)澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備將澳洲茄胺溶于95％乙醇中加熱至沸，固液重量比1∶20-40，攪拌下向熱澳洲茄胺乙醇溶液中緩緩加入10～50％的有機(jī)酸水溶液，至溶液呈酸性，使其結(jié)晶完全，冷卻吸濾，用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽。
制備方法(5)中所述的有機(jī)酸可以是甲酸、乙酸、乙二酸、苯甲酸、沒食子酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、葡萄糖酸、葡萄糖二酸、氨基酸，分別得到澳洲茄胺甲酸鹽、澳洲茄胺乙酸鹽、澳洲茄胺乙二酸鹽、澳洲茄胺苯甲酸鹽、澳洲茄胺沒食子酸鹽、澳洲茄胺乳酸鹽、澳洲茄胺蘋果酸鹽、澳洲茄胺酒石酸鹽、澳洲茄胺檸檬酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖二酸鹽、澳洲茄胺氨基酸鹽。
制備方法(4)中檢驗(yàn)是否洗脫結(jié)束用1～5％SbCl3的無水乙醇或氯仿溶液為顯色劑，其判定是在濾紙上或硅膠G簿層層析板上檢驗(yàn)。具體操作為，用毛細(xì)管取一定時(shí)刻剛流出的洗脫液，點(diǎn)于濾紙或硅膠G板上，烘干，將1～5％SbCl3溶液均勻噴于點(diǎn)樣的濾紙或硅膠G板上，烘干，如出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)說明洗脫尚未結(jié)束，如無紅色斑點(diǎn)說明洗脫完全，應(yīng)停止洗脫。
澳洲茄胺有機(jī)酸鹽均為白色晶體，根據(jù)成鹽所用酸的不同，在不同溶劑中的溶解度、熔點(diǎn)、旋光度等物理性質(zhì)不同，用上述方法制得的澳洲茄胺有機(jī)酸鹽純度＞97％。本發(fā)明原料來源豐富廉價(jià)，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，制備工藝及設(shè)備簡便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高、藥效活性強(qiáng)。
3、本發(fā)明的又一目的是提供澳洲茄胺有機(jī)酸鹽在抗癌、平喘、抗炎醫(yī)藥上的應(yīng)用經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽具有如下作用(1)抗癌作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽8～30mg/kg腹腔注射給藥對小鼠移植性實(shí)體型腫瘤抑制率為60～72％；灌胃給藥對小鼠移植性實(shí)體型腫瘤抑制率為40～68％；澳洲茄胺有機(jī)酸鹽5～20μg/ml，對人體肝癌SMMC7701干細(xì)胞、肺癌NCI446干細(xì)胞、胃癌SGC7901干細(xì)胞、HeLa干細(xì)胞抑制率均為100％；10～20μg/ml時(shí)，對人體白血病HL60干細(xì)胞抑制率為60～80％?？拱C(jī)制實(shí)驗(yàn)證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的抗癌作用機(jī)理是，能顯著下調(diào)癌細(xì)胞C-myc基因和H-ras基因表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖誘導(dǎo)細(xì)胞分化；能顯著下調(diào)癌細(xì)胞hTRT基因的表達(dá)，抑制端粒酶活性，抑制癌細(xì)胞生長；能阻斷其DNA從G1期向S期轉(zhuǎn)化，抑制DNA合成從而起到抗癌作用。臨床試驗(yàn)結(jié)果證明，注射給藥澳洲茄胺有機(jī)酸鹽濃度為1.0mg/ml，20～30ml/次；口服用藥膠囊、片劑，劑量100mg/粒(片)，2粒(片)/日，對肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病用藥10日為一療程，有60％的患者在1～2個(gè)療程內(nèi)得到明顯療效，配合手術(shù)用藥效果更佳。
(2)平喘作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽腹腔注射10～30mg/kg，灌胃給藥50～100mg/kg能明顯對抗組織胺誘發(fā)的豚鼠哮喘P＜0.05，能顯著對抗卵清蛋白引起的豚鼠支氣管痙攣P＜0.01；1×10-6mol/ml能顯著擴(kuò)張豚鼠支氣管平滑肌P＜0.01。臨床試驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽注射給藥1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用藥膠囊、片劑，劑量100mg/粒(片)，2粒(片)/次，2次/日，有85～98％的重患在20～40分鐘內(nèi)哮喘癥狀消失或明顯減輕，肺活量增大，哮鳴音消失，呼吸趨于正常，7日/療程，用藥1～2個(gè)療程生活可自理，此外，對血壓、心臟也有所改善。
(3)抗炎作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽注射給藥10～30mg/kg，灌胃給藥60～200mg/kg能顯著對抗角叉菜膠引起的小鼠足腫脹P＜0.01；能顯著對抗大鼠棉球肉芽腫P＜0.001。臨床試驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺有機(jī)酸鹽注射給藥1.0mg/ml，30～50ml/次，2次/日；口服用藥膠囊或片劑，劑量100mg/粒(片)，2次/日，2粒(片)/次，對肺炎、肺結(jié)核、乳腺炎、扁桃體炎、咽炎、氣管炎用藥3日內(nèi)白細(xì)胞明顯減少，炎癥明顯消失，有85～98％的患者用藥1～3個(gè)療程各項(xiàng)檢測指標(biāo)趨向正常。
澳洲茄胺有機(jī)酸鹽是一種具有顯著抗癌、平喘、抗炎作用的中藥一類新藥源，其用途主要做為治療以下疾病的醫(yī)藥制造1、抗癌藥物的制造(1)治療肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病等針劑的制造。
(2)治療肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌、白血病等口服制劑的制造。
2、平喘藥物的制造(1)治療免疫性哮喘針劑的制造。
(2)治療免疫性哮喘口服制劑的制造。
3、抗炎藥物的制造(1)治療肺炎、肺結(jié)核、氣管炎、扁桃體炎、乳腺炎、咽炎等針劑的制造。
(2)治療肺炎、肺結(jié)核、氣管炎、扁桃體炎、乳腺炎、咽炎等口服制劑的制造。


圖1是本發(fā)明澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備工藝流程圖。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的紫外吸收光譜圖。
圖3是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的DSC圖。
圖4是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的紅外光譜圖。
圖5是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的質(zhì)子核磁共振譜圖。
圖6是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的重水交換質(zhì)子核磁共振譜圖。
圖7是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的二維1H-1H質(zhì)子相關(guān)核磁共振譜圖。
圖8是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的反轉(zhuǎn)門控去偶13C核磁共振譜圖。
圖9是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的13CDEPT核磁共振譜圖。
圖10是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的二維13C-1H異核相關(guān)核磁共振譜圖。
圖11是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的LCQ正、負(fù)離子電噴霧質(zhì)譜圖。
圖12是本發(fā)明實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的X-射線衍射圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例、試驗(yàn)例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明并不限于實(shí)施例，本專業(yè)的普通技術(shù)人員作某些修改，均在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1以龍葵為原料制備澳洲茄胺葡萄糖酸鹽參照圖1，以龍葵生果制備澳洲茄胺葡萄糖酸鹽的制備方法如下(1)稱取500kg10月中旬至10月下旬采收的龍葵生果去除雜物，用磨漿機(jī)粉碎固液分離得果汁、果渣，將龍葵果渣用3％醋酸水溶液浸取2次，固液重量比1∶1，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸，除去上浮綠色膠體物，過濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80℃時(shí)加濃氨水至pH8，冷卻沉降除去上清液，對下濁液經(jīng)離心固液分離得膏狀龍葵粗總生物堿。
(2)用3％的醋酸水溶液溶解膏狀龍葵粗總生物堿，固液重量比1∶30，加熱至沸除去上浮綠色膠體物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80℃時(shí)加濃氨水至pH8，冷卻沉降，使之沉淀完全除上清液，對下濁液沉淀物離心固液分離得膏狀龍葵總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵總生物堿。
(3)將龍葵總生物堿溶于含5％鹽酸的95％乙醇溶液中，固液重量比1∶40，加熱至全溶吸濾，濾液水浴加熱至沸，水解2小時(shí)，冷卻吸濾，對濾出的結(jié)晶水洗至中性，用80％乙醇洗滌3次后干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，將澳洲茄胺鹽酸鹽溶于含3％NaOH的95％乙醇溶液中，加熱至沸回流1小時(shí)，熱過濾，冷卻結(jié)晶，吸濾，水洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺片狀結(jié)晶。
(4)將粗澳洲茄胺用95％乙醇溶解至飽和溶液，向溶液中加入經(jīng)活化的硅膠G，時(shí)時(shí)攪拌至不流動(dòng)膏狀物止，經(jīng)80～90℃恒溫干燥冷卻后，振動(dòng)下裝于不銹鋼層析柱中，振實(shí)，用氯仿、甲醇10∶2混液洗脫，流速1ml/秒，用SbCl3無水乙醇溶液為顯色劑，用濾紙上斑點(diǎn)顯色反應(yīng)判斷洗脫是否結(jié)束，當(dāng)無紅色斑點(diǎn)反應(yīng)時(shí)，停止洗脫，對洗脫液常壓蒸餾濃縮至有少許結(jié)晶析出，放出濃縮液冷卻結(jié)晶吸濾，濾液再蒸餾濃縮冷卻結(jié)晶吸濾，反復(fù)操作，合并結(jié)晶干燥粉碎至0.1～1.0微米的粉末，得澳洲茄胺182g。
(5)將182g澳洲茄胺用95％乙醇將其全部溶解固液比1∶30，加熱至沸攪拌下緩緩加入50％葡萄糖酸水溶液500ml，放置充分冷卻，使結(jié)晶析出吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺葡萄糖酸鹽254g，用高效液相色譜法測定其純度為97.6％。
實(shí)施例2以黃果茄為原料制備澳洲茄胺甲酸鹽取500kg黃果茄生果，按實(shí)施例1(1)-(4)制備方法得澳洲茄胺，稱取澳洲茄胺100g，用3000ml 95％乙醇加熱溶解至沸，趁熱攪拌下緩緩加入40％甲酸水溶液，放置冷卻過夜吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺甲酸鹽103g，用高效液相色譜法測定其純度為98.2％。
實(shí)施例3以澳洲茄為原料制備澳洲茄胺乙二酸鹽取500kg澳洲茄生果，按實(shí)施例1(1)-(4)制備方法得澳洲茄胺，稱取澳洲茄胺100g，用3000ml 95％乙醇加熱使之溶解至沸，攪拌下緩緩加入50％乙二酸(草酸)水溶液，放置冷卻過夜吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺乙二酸鹽102.5g，用高效液相色譜法測定其純度為98.0％。
實(shí)施例4澳洲茄胺檸檬酸鹽的制備稱取實(shí)施例1-3中，步驟(1)-(4)制備所得的任一澳洲茄胺100g，用3000ml 95％乙醇加熱使之溶解至沸，攪拌下緩緩滴加50％檸檬酸水溶液60ml，冷卻結(jié)晶吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺檸檬酸鹽112g，用高效液相色譜法測定其純度為97.8％。
實(shí)施例5澳洲茄胺甘氨酸鹽的制備稱取實(shí)施例1-3中，步驟(1)-(4)制備所得的任一澳洲茄胺182g，用95％乙醇將其全部溶解固液比1∶30，加熱至沸攪拌下緩緩加入50％甘氨酸水溶液100ml，放置充分冷卻，使結(jié)晶析出完全，吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺甘氨酸鹽203g，用高效液相色譜法測定其純度為97.8％。
實(shí)施例6澳洲茄胺脯氨酸鹽的制備稱取實(shí)施例1-3中，步驟(1)-(4)制備所得的任一澳洲茄胺100g，用3000ml 95％乙醇加熱溶解至沸，趁熱攪拌下緩緩加入40％脯氨酸水溶液130ml，放置冷卻過夜吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺脯氨酸鹽103g，用高效液相色譜法測定其純度為97.1％。
實(shí)施例7澳洲茄胺半胱氨酸鹽的制備稱取實(shí)施例1-3中，步驟(1)-(4)制備所得的任一澳洲茄胺100g，用3000ml 95％乙醇加熱使之溶解至沸，攪拌下緩緩加入50％半胱氨酸水溶液120ml，放置冷卻過夜吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺半胱氨酸鹽102.5g，用高效液相色譜法測定其純度為98.4％。
實(shí)施例8澳洲茄胺天冬氨酸鹽的制備稱取實(shí)施例1-3中，步驟(1)-(4)制備所得的任一澳洲茄胺100g，用3000ml 95％乙醇加熱使之溶解至沸，攪拌下緩緩滴加40％天冬氨酸水溶液100ml，冷卻結(jié)晶完全，吸濾，用95％乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺天冬氨酸鹽103g，用高效液相色譜法測定其純度為98.0％。
試驗(yàn)例1用薄層層析法檢驗(yàn)實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽為同一種單體化合物將5％澳洲茄胺有機(jī)酸鹽甲醇溶液用毛細(xì)管分別點(diǎn)于硅膠GF254板原點(diǎn)上，干燥后可用三種展開劑將澳洲茄胺不同酸根的鹽展開苯∶甲醇(4∶3)；苯∶甲醇∶丙酮(2∶1∶2)；氯仿∶乙醇∶丙酮(3∶1∶2)，在紫外光下λ＝254nm均出現(xiàn)一個(gè)斑點(diǎn)，不同的鹽其Rf值不同，證明每個(gè)不同的鹽的樣品是一種化合物。
試驗(yàn)例2用高效液相色譜法測定實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的純度精確稱取一定量某一種澳洲茄胺有機(jī)酸鹽標(biāo)準(zhǔn)樣(含量已標(biāo)定的樣品)和本發(fā)明實(shí)施例的被測樣，用40倍重量體積比的3％NaOH95％乙醇溶液混合，加熱回流2小時(shí)，冷卻加2倍體積的水，用2倍總體積的氯仿萃取3次，合并萃取液，用苯定量稀釋至刻度，得不同濃度的澳洲茄胺一種鹽的標(biāo)準(zhǔn)溶液和相應(yīng)鹽的被測樣溶液，在wBondapaK18(30CM×3.9mmi.d.)用甲醇-0.01Mtris緩沖溶液(75∶25)柱流動(dòng)相，流速2ml/min，溫度25℃，在UV205檢測，在15min處有最大吸收，測得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽純度＞97％。
試驗(yàn)3澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析經(jīng)中國科學(xué)院長春分院分析測試中心應(yīng)化所測試部測試，實(shí)施例所得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的紫外吸收光譜圖、DSC圖、紅外光譜圖、質(zhì)子核磁共振譜圖、重水交換質(zhì)子核磁共振譜圖、二維1H-1H質(zhì)子相關(guān)核磁共振譜圖、反轉(zhuǎn)門控去偶13C核磁共振譜圖、13CDEPT核磁共振譜圖、二維13C-1H異核相關(guān)核磁共振譜圖、LCQ正負(fù)離子電噴霧質(zhì)譜圖、X-射線衍射圖，分別見圖2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)譜圖解析、全結(jié)構(gòu)歸屬證明其堿基具有相同的結(jié)構(gòu)，實(shí)施例所得均為澳洲茄胺不同的有機(jī)酸鹽。譜圖解析、全結(jié)構(gòu)歸屬“分析測試報(bào)告”見說明書后附件。
實(shí)施例9膠囊劑的制造分別精確稱取純度＞97％的澳洲茄胺甲酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽、澳洲茄胺草酸鹽、澳洲茄胺檸檬酸鹽、澳洲茄胺酒石酸鹽、澳洲茄胺沒食子酸鹽各43.0g，淀粉粒110.0g于容器中分別混均，得各1000粒一個(gè)處方量的膠囊內(nèi)含物，將2#藍(lán)白膠囊放于每次可進(jìn)行400粒的膠囊板上，各稱取60.0g膠囊內(nèi)含物，分別裝于固定在膠囊板上的膠囊中，封囊，按上述處方配料每種鹽生產(chǎn)3個(gè)處方量，其合格率在99.25～99.62％，得澳洲茄胺甲酸鹽膠囊、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽膠囊、澳洲茄胺草酸鹽膠囊、澳洲茄胺檸檬酸鹽膠囊、澳洲茄胺酒石酸鹽膠囊、澳洲茄胺沒食子酸鹽膠囊各3000粒，鋁塑封板，裝盒，各獲得300盒膠囊劑。
實(shí)施例10凍干粉針劑的制造將澳洲茄胺甲酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽、澳洲茄胺草酸鹽、澳洲茄胺檸檬酸鹽、澳洲茄胺酒石酸鹽、澳洲茄胺沒食子酸鹽在無菌下經(jīng)微粒處理至0.1～1.0微米的微粒，各精確稱取24.5g，加無菌注射蒸餾水溶解至24500ml為1000瓶的處方量(含工業(yè)損耗量)，將其分裝于1000個(gè)注射安瓶內(nèi)，每瓶24ml，經(jīng)凍干處理，封瓶，裝盒，得上述六種凍干粉注射劑各100盒(每盒10支)。
實(shí)施例11粉針劑的制造將澳洲茄胺甲酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽、澳洲茄胺草酸鹽、澳洲茄胺檸檬酸鹽、澳洲茄胺酒石酸鹽、澳洲茄胺沒食子酸鹽、澳洲茄胺乳酸鹽、澳洲茄胺蘋果酸鹽在無菌下經(jīng)微粒處理至0.1～1.0微米，各精確稱取24.5g為1000瓶1個(gè)處方量(含工業(yè)損耗量)，將其以每瓶24mg裝于1000個(gè)注射安瓶內(nèi)，無菌封瓶，裝盒，得澳洲茄胺甲酸鹽粉針劑、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽粉針劑、澳洲茄胺草酸鹽粉針劑、澳洲茄胺檸檬酸鹽粉針劑、澳洲茄胺酒石酸鹽粉針劑、澳洲茄胺沒食子酸鹽粉針劑、澳洲茄胺乳酸鹽粉針劑、澳洲茄胺蘋果酸鹽粉針劑各100盒，10瓶/盒，合格率≥99.84％。
附件中國科學(xué)院長春分院分析檢測中心應(yīng)化所測試部分析測試報(bào)告一、分子式、分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)式數(shù)據(jù)1(一)、對照品澳洲茄胺分子式C27H43NO2分子量413.64結(jié)構(gòu)式
(二)被測樣澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的堿基化學(xué)結(jié)構(gòu)式 二、紫外吸收光譜數(shù)據(jù)2儀器美國Cary 1E紫外-可見分光光度計(jì)溶劑甲醇條件試液濃度分別為11μg/ml、12μg/ml，掃描寬度190-600nm1.紫外吸收光譜a.對照品紫外吸收光譜b.檢測樣品紫外吸收光譜2.對照品測定數(shù)據(jù)λmax＝203nm，吸收系數(shù)為E1cm1%=412]]>3.檢測樣品測定數(shù)據(jù)λmax＝204nm，吸收系數(shù)為E1cm1%=418]]>4.解析UV中存在K帶吸收，表明化合物中含有雙鍵結(jié)構(gòu)。
三、DSC實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)3儀器型號PE公司DSC7型測試條件50～300℃，以5℃/min升溫1.對照品a.DSC圖b.熔點(diǎn)199.5℃2.檢測樣品a.DSC圖b.未觀察到明顯的熔點(diǎn)四、紅外吸收光譜(IR)數(shù)據(jù)4 儀器型號美國BIO-RAD公司FTS-135型付立葉變換紅外光譜儀測試條件采用KBr壓片法1.紅外光譜圖a.對照品紅外光譜圖b.檢測樣品紅外光譜圖2.檢測樣品紅外光譜測試數(shù)據(jù)表頻率(cm-1)強(qiáng)度 振動(dòng)類型 基團(tuán)歸屬3380，3302vs，br νOH-OH2943 vs νasCH3-CH32931 s，sh νasCH2-CH22872 s νsCH3-CH32846 s νsCH2-CH22759 s νNH2+＞NH2+1656 m νC-CC＝C1606，1594m-msδNH2+＞NH2+14641453 sh，s，ms δasCH3，δCH2-CH3，-CH2-14321378 ms δsCH3-CH31351 m δOH-OH1297，1181m ωCH2-CH2-1154，12521195 m νC-NC-N1132，1095νasC-O-Cms C-O-C，C3-OH1064，1054νOPC-O(H)1022，983 s 環(huán)振動(dòng)吸收 六元環(huán)，五元環(huán)961，921，900 m ρCH3，νsC-O-C-CH3，-C-O-C836 m νipC-O(H)C3-OH800 vw ΓNH2+＞NH2+795 w γ-CH＞C＝CH-739 vw ΓCH2-CH2CH2-619 m γOH-OH注強(qiáng)度vs極強(qiáng)，s強(qiáng)，m中等，w弱
3.解析結(jié)果a.3380和3302cm-1的極強(qiáng)寬吸收來源于氫鍵結(jié)合的羥基伸縮振動(dòng)，1351cm-1為其彎曲振動(dòng)吸收帶，以619cm-1開始的寬吸收區(qū)是OH面外彎曲振動(dòng)，1132～1054cm-1和836cm-1分別為C3-OH上的C-O異相和同相伸縮振動(dòng)，這些均證明甾環(huán)上C3-OH的存在。
b.2943和2872cm-1分別為CH3的反對稱和對稱伸縮振動(dòng)，2931和2846cm-1分別為CH2的反對稱和對稱伸縮振動(dòng)，而1464、1453和1432cm-1則是CH3的反對稱變角振動(dòng)和CH2剪式振動(dòng)，1378cm-1為CH3的對稱變角振動(dòng)，同時(shí)1297～1252cm-1區(qū)間的吸收峰可歸屬為CH2的非平面搖擺振動(dòng)，961～900cm-1范圍重疊著CH3的面內(nèi)搖擺振動(dòng)，這些都證實(shí)了-CH3，-CH2-的存在，而且由于739和783cm-1的極弱CH2平面搖擺振動(dòng)的出現(xiàn)進(jìn)一步說明-CH2-CH2-和孤立CH2的存在。
c.2759cm-1的強(qiáng)峰是NH2+的伸縮振動(dòng)特征峰，1606和1594cm-1為其變角振動(dòng)，再加上1195cm-1的C-N伸縮振動(dòng)和800cm-1的極弱NH2+非平面變角振動(dòng)的存在，表明樣品分子中存在＞NH2+。
d.1651cm-1的中等強(qiáng)度吸收帶是C＝C伸縮振動(dòng)，795cm-1的弱峰是雙鍵上CH非平面變角振動(dòng)，可以表示分子中有＞C＝CH-的存在。
e.在1132～1054cm-1和961～900cm-1兩個(gè)區(qū)間內(nèi)還分別存在C-O-C的反對稱和對稱伸縮振動(dòng)，1022和983cm-1的強(qiáng)吸收帶可能與五元環(huán)和六元環(huán)的環(huán)振動(dòng)吸收有關(guān)。
f.紅外光譜證實(shí)檢測樣品堿基與對照品結(jié)構(gòu)一致。
五、1H核磁共振(1H NMR)數(shù)據(jù)5儀器Unity-400核磁共振譜儀溶劑對照品氘代氯仿(CDCl3)，參考標(biāo)準(zhǔn)δTMS＝0.00檢測樣品氘代甲醇(CD3OD)，參考標(biāo)準(zhǔn)δTMS＝0.00(一)、一維1H核磁共振實(shí)驗(yàn)1.1H核磁共振實(shí)驗(yàn)a.對照品1H核磁共振譜及譜圖b.檢測樣品1H核磁共振譜及譜圖c.檢測樣品重水交換1H核磁共振譜圖2.檢測樣品1H核磁共振測定數(shù)據(jù)列表峰序號 化學(xué)位移(δ) 多重性偶合常數(shù)質(zhì)子數(shù) 相應(yīng)質(zhì)子1 5.35 d 5.2 1＝CH-2 4.88 br3NH，-OH，HCl3 4.62 dm6.0 1＞CH-4 3.39 m 1＞CH-5 3.30 m CH3OD6 3.05 dd12.4，2.9 1＞CH-7 2.87 t 12.41＞CH-8 2.36 m 1＞CH-9 2.30～1.19 m 21 ＞CH-，-CH2-10 1.17 d 7.2 3-CH311 1.15～1.05 m 2-CH2-12 1.04 s 3-CH313 0.98 d 6.8 3-CH314 0.86 s 3-CH3(二)、二維1H-1H相關(guān)核磁共振實(shí)驗(yàn)(1H-1H COSY)1.檢測樣品二維1H-1H相關(guān)NMR譜圖2.檢測樣品二維1H-1H相關(guān)NMR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列表序號 化學(xué)位移(δ) 相關(guān)峰位移(δ) 交叉峰強(qiáng)度1 5.35 2.00 m2 4.62 2.10，1.92 m，ms3 3.39 2.20，1.46 ms，w4 3.05 2.87 s5 2.87 3.05 s6 2.36 1.17 s7 2.20 3.39，1.14 ms，s8 2.08 1.40 s9 1.94 1.52 s101.80 1.45，1.22，1.08 s(三)、質(zhì)子NMR譜解析1.由一維質(zhì)子NMR譜峰相對積分面積計(jì)算，檢測樣品共有44個(gè)質(zhì)子組成，與澳洲茄胺鹽化學(xué)分子式中質(zhì)子數(shù)相符。
2.低場δ5.35為一個(gè)質(zhì)子貢獻(xiàn)，與高場δ2.00處存在交叉信息，δ5.35化學(xué)位移峰歸屬于烯碳質(zhì)子貢獻(xiàn)，與其相關(guān)峰δ2.00歸屬于H18。
3.δ4.62裂分為多重峰，且與δ2.10和δ1.92相偶合，又落在氧碳質(zhì)子區(qū)，對應(yīng)于1個(gè)質(zhì)子貢獻(xiàn)，因此，該質(zhì)子碳鄰接電負(fù)性較強(qiáng)的氧原子，又受鄰位質(zhì)子偶合，歸屬于Hs質(zhì)子貢獻(xiàn)。
4.高場δ0.86和δ1.04為強(qiáng)單峰，且分別對應(yīng)于3個(gè)質(zhì)子貢獻(xiàn)，分別歸屬于H29和H27甲基質(zhì)子貢獻(xiàn)。
5.高場δ1.17和δ0.98裂分為兩條譜線，且J值在7Hz左右，分別對應(yīng)于3個(gè)質(zhì)子，歸屬于H26、H28甲基質(zhì)子貢獻(xiàn)。
6.δ4.88強(qiáng)峰在重水交換譜中減弱、加寬、位移，歸屬為化合物中活潑質(zhì)子貢獻(xiàn)。
7.1H-1HCOSY譜中δ2.87和δ3.05存在強(qiáng)相關(guān)信息，而δ2.87裂分為三重峰，J＝12.4Hz，δ3.05則為dd裂分，兩峰分別對應(yīng)于1個(gè)質(zhì)子，且兩峰都落在中場區(qū)，分析質(zhì)子碳接于N原子，兩峰歸屬于潛手性碳兩同碳質(zhì)子貢獻(xiàn)。
8.檢測樣品受成鹽效應(yīng)的影響，除部分峰位置有移動(dòng)外，其他峰型與對照品基本一致。
六、13C核磁共振譜(13CNMR)數(shù)據(jù)6 儀器Unity-400核磁共振譜儀溶劑對照品氘代氯仿(CDCl3)，參考標(biāo)準(zhǔn)δCDCl3＝77.00檢測樣品氘代甲醇(CD3OD)，參考標(biāo)準(zhǔn)δCD3OD＝49.30(一)、一維13C核磁共振實(shí)驗(yàn)1.13C核磁共振實(shí)驗(yàn)a.對照品13CNNE(反轉(zhuǎn)門控去偶，以下同)核磁共振譜b.對照品13CDEPT核磁共振譜c.檢測樣品13CNNE核磁共振譜d.檢測樣品13CDEPT核磁共振譜2.檢測樣品13CNMR測定數(shù)據(jù)列表峰序化學(xué)位移(δ)多重性 C數(shù)目相應(yīng)C類型1 142.66 s 1＞C＝2 122.33 d 1-CH＝3 100.54 s 1＞C＜4 85.11 d 1＞CH-5 72.63 d 1＞CH-6 63.29 d 1＞CH-7 57.94 d 1＞CH-8 51.79 d 1＞CH-9 46.96 t 1-CH2-10 43.28 t 1-CH2-11 43.14 d 1＞CH-12 42.43 s 1＞C＜13 40.64 t 1-CH2-14 38.78 t 1-CH2-15 38.09 s 1＞C＜
1633.52 t1-CH2-1733.40 t1-CH2-1833.32 t1-CH2-1933.09 d1＞CH-2032.56 t1-CH2-2129.68 d1＞CH-2229.19 t1-CH2-2322.19 t1-CH2-2420.15 q1-CH32518.95 q1-CH32616.84 q1-CH32715.18 q1-CH3(二)、二維13C-1H相關(guān)核磁共振實(shí)驗(yàn)(13C-1H HETCOR)1.檢測樣品二維13C-1H相關(guān)NMR譜圖2.檢測樣品二維13C-1H相關(guān)NMR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)序號13C化學(xué)位移(δ)相關(guān)1H化學(xué)位移(δ)相關(guān)峰強(qiáng)度1 122.33 5.35 s2 85.11 4.62 s3 72.63 3.39 s4 63.29 1.91 s5 57.94 1.20 s6 51.79 0.99 s7 46.96 2.87，3.05 w8 43.28 2.21 s9 43.14 2.36 s10 40.64 1.80，1.21 w11 38.78 1.84 w12 33.52 1.87 ms13 33.40 2.00 s14 33.32 1.70 s15 33.09 1.80 w16 32.56 1.78 w17 29.68 1.87 s18 29.19 1.75 w19 22.19 1.58 w20 20.15 1.04 s21 18.95 0.98 s22 16.84 0.86 s23 15.18 1.17 s
(三)、13C核磁共振譜解析1.一維13NMR譜明晰27條譜線，無重疊現(xiàn)象，DEPT譜呈現(xiàn)23條質(zhì)子碳峰，甲基碳(CH3)4個(gè)，仲碳原子(-CH2-)10個(gè)，伯碳(CH)9個(gè)，與澳洲茄胺鹽酸鹽化學(xué)結(jié)構(gòu)式中C原子個(gè)數(shù)和類型一致。
2.低場烯碳區(qū)只有兩條譜線，δ142.66為一季碳，δ122.33為質(zhì)子烯碳貢獻(xiàn)，因此化合物中含有-CH＝C＜結(jié)構(gòu)。
3.最高場四條譜線，同為甲基碳貢獻(xiàn)，與質(zhì)子NMR譜分析一致，該化合物中含有4個(gè)甲基。
4.較低場δ100.54為季碳，由取代基效應(yīng)可知，該季碳鄰接兩個(gè)以上電負(fù)性較強(qiáng)的氮、氧原子，因此歸屬于C2碳貢獻(xiàn)。
5.δ42.43和δ38.09同為季碳，由化合物特性可知，這兩個(gè)季碳都為環(huán)節(jié)點(diǎn)碳，其節(jié)點(diǎn)碳質(zhì)子分別被-CH3取代，由于雙鍵對β位碳去屏蔽效應(yīng)，δ38.09應(yīng)歸屬于C21，δ42.43歸屬于C10碳貢獻(xiàn)。
6.δ72.63位移峰落在氧碳區(qū)，13C-1H異核二維相關(guān)譜中該峰與質(zhì)子δ3.39存在強(qiáng)偶合信息，由此可知，該碳鄰接氧原子，歸屬于C24碳貢獻(xiàn)。
7.δ63.29、δ57.94、δ51.79落在氧碳區(qū)，但13C-1H二維相關(guān)譜中上述三峰分別與較高場質(zhì)子δ1.91、δ1.20及δ0.99相關(guān)，且三個(gè)峰同為d裂分，因此上述三個(gè)峰應(yīng)為環(huán)節(jié)點(diǎn)碳貢獻(xiàn)。
8.δ85.11落在氧碳區(qū)較低場，且多重性為d，相關(guān)質(zhì)子峰為δ4.62，該峰應(yīng)歸屬于鄰接氧原子的環(huán)節(jié)點(diǎn)碳，即C8碳貢獻(xiàn)。
七、全結(jié)構(gòu)歸屬數(shù)據(jù)7 1.澳洲茄胺鹽堿基部分骨架原子標(biāo)號化學(xué)結(jié)構(gòu)式 2.化學(xué)結(jié)構(gòu)-NMR譜全歸屬序號13C化學(xué)位移(δ)1H相關(guān)化學(xué)位移(δ)結(jié)構(gòu)標(biāo)號1 142.66 202 122.33 5.35 193 100.54 24 85.11 4.62 85 72.63 3.39 246 63.29 1.91 97 57.94 1.20 118 51.79 0.99 139 46.96 2.87，3.05410 43.28 2.21 2511 43.14 2.36 1612 42.431013 40.64 1.80，1.212214 38.78 1.84 1515 38.092116 33.52 1.87 1717 33.40 2.00 1818 33.32 1.70 719 33.09 1.80 1220 32.56 1.78 2321 29.68 1.87 522 29.19 1.75 623 22.19 1.58 1424 20.15 1.04 2725 18.95 0.98 2826 16.84 0.86 2927 15.18 1.17 26八、質(zhì)譜數(shù)據(jù)8 儀器LCQ電噴霧質(zhì)譜儀條件LCQ電噴霧離子源，噴霧電壓2kV，霧化氣為氮?dú)釴2，金屬毛細(xì)管溫度200℃，甲醇溶解，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣，進(jìn)樣速度5μl。
1.LCQ質(zhì)譜圖a.對照品的LCQ電噴霧質(zhì)譜圖b.檢測樣品的LCQ電噴霧質(zhì)譜圖2.檢測樣品質(zhì)譜測定數(shù)據(jù)(EI-MS數(shù)據(jù))m/z相對豐度(％)414100.039616.527112.325311.4
3.裂解途徑 4.解析a.圖中樣品與對照品的準(zhǔn)分子離子峰相同，且其碎裂規(guī)律相一致。其中樣品的正離子電噴霧質(zhì)譜中的m/z414峰為樣品失去HCl的準(zhǔn)分子離子峰，與對照品的準(zhǔn)分子離子峰相同。
b.m/z396峰為準(zhǔn)分子離子峰的脫水峰，m/z 271峰為m/z396峰離子失去 得到的碎片峰，m/z 253離子為m/z271離子進(jìn)一步脫去一分子水的碎片峰。
九、X-射線衍射實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)9 儀器型號D/max-IIB-型X-射線衍射儀測試條件CuKα輻射源，工作電壓40kV，工作電流20mA。
1.X-射線衍射圖a.對照品X-射線衍射圖b.檢測樣品X-射線衍射圖2.2θ數(shù)據(jù)列表a.對照品數(shù)據(jù)表b.檢測樣品數(shù)據(jù)表十、綜合解析數(shù)據(jù)l0 1.由澳洲茄胺鹽化學(xué)分子式計(jì)算不飽和度為7。
2.澳洲茄胺鹽樣品與對照品的準(zhǔn)分子離子峰相同，且其碎裂規(guī)律相一致。其中樣品的正離子電噴霧質(zhì)譜中的m/z414峰為樣品失去HCl的準(zhǔn)分子離子峰，與對照品的準(zhǔn)分子離子峰相同。證明化合物中堿基部分的分子量為414。
3.一維1HNMR譜峰相對面積可得，檢測樣品共有44個(gè)質(zhì)子組成，與澳洲茄胺鹽化學(xué)分子式中質(zhì)子數(shù)相符。13CNMR定量實(shí)驗(yàn)和13CDEPT NMR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示，該化合物共有27個(gè)碳原子，吸收共振峰相互無重疊形象，其中-CH3碳峰4條，CH2碳峰10條，叔碳峰9條，季碳峰4條，證明該化合物由27個(gè)碳組成，與澳洲茄胺鹽中碳原子個(gè)數(shù)一致。
4.IR譜中2943和2872cm-1分別為CH3的反對稱和對稱伸縮振動(dòng)，2931和2846cm-1分別為CH2的反對稱和對稱伸縮振動(dòng)，而1464、1453和1432cm-1則是CH3的反對稱變角振動(dòng)和CH2剪式振動(dòng)，1378cm-1為CH3的對稱變角振動(dòng)，同時(shí)1297～1252cm-1區(qū)間的吸收峰可歸屬為CH2的非平面搖擺振動(dòng)，961～900cm-1范圍重疊著CH3的面內(nèi)搖擺振動(dòng)，這些都證實(shí)了-CH3，-CH2-的存在，而且由于739和783cm-1的極弱CH2平面搖擺振動(dòng)的出現(xiàn)進(jìn)一步說明-CH2-CH2-和孤立CH2的存在。
5.IR譜中3380和3302cm-1的極強(qiáng)寬吸收來源于氫鍵結(jié)合的羥基伸縮振動(dòng)，135lcm-1為其彎曲振動(dòng)吸收帶，以619cm-1開始的寬吸收區(qū)是OH而外彎曲振動(dòng)，l132～1054cm-1和836cm-1分別為C3-OH上的C-O異相和同相伸縮振動(dòng)，這些均證明甾環(huán)上C3-OH的存在。
6.質(zhì)子NMR譜中δ4.88強(qiáng)峰在重水交換譜中減弱、加寬、位移。證明該峰為＞NH、-OH以及HCl等活潑質(zhì)子貢獻(xiàn)。
7.質(zhì)子NMR譜中δ4.61裂分為多重峰，且與δ2.10和δ1.92相偶合，又落在氧碳質(zhì)子區(qū)，對應(yīng)于1個(gè)質(zhì)子貢獻(xiàn)，因此，該質(zhì)子碳鄰接電負(fù)性較強(qiáng)的氧原子，又受鄰位質(zhì)子偶合，歸屬于OCH質(zhì)子貢獻(xiàn)。
8.13CNMR實(shí)驗(yàn)表明本品中只含有兩條雙鍵碳峰，UV譜λmax為204nm，構(gòu)成單烯結(jié)構(gòu)。
9.13CNMR譜δ42.43和δ38.09同為季碳，由化合物特性可知，這兩個(gè)季碳都為環(huán)節(jié)點(diǎn)碳，其節(jié)點(diǎn)碳質(zhì)子分別被-CH3取代，由于雙鍵對β位碳去屏蔽效應(yīng)，δ38.09應(yīng)歸屬于C21，δ42.43歸屬于C10碳貢獻(xiàn)。
10.13CNMR譜最高場四條譜線，同為甲基碳貢獻(xiàn)，與質(zhì)子NMR譜分析一致，該化合物中含有4個(gè)甲基。較低場δ100.54為季碳，由取代基效應(yīng)可知，該季碳鄰接兩個(gè)以上電負(fù)性較強(qiáng)的氮、氧原子，因此歸屬于＞C-O碳貢獻(xiàn)。
11.IR譜中2759cm-1的強(qiáng)峰是NH2+的伸縮振動(dòng)特征峰，1606和1594cm-1為其變角振動(dòng)，再加上1195cm-1的C-N伸縮振動(dòng)和800cm-1的極弱NH2+非平面變角振動(dòng)的存在，表明樣品分子中存在NH2+。
12.綜合各譜分析，檢測樣品為對照品的鹽化合物。檢測樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種通式(I)(II)(III)的澳洲茄胺有機(jī)酸鹽， 其中通式(I)中，R＝H；-CH2(OH)；-CH(OH)CH3；-COCH3；-C6H5；-CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH2OH；-C6H2(OH)3； 通式(II)中，M＝-(CH2)0-；-CH(OH)CH(OH)-；-COCH(OH)-； 通式(III)中，M＝-CH2C(OH)CH2-。
2.權(quán)利要求1的化合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)原料處理及粗總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經(jīng)篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，固液重量比1∶1，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁及浸液，放置沉降，取上清液加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)加濃氨水或NaOH、Na2CO3、KOH的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離，得膏狀粗總生物堿；(2)粗總生物堿的精制用2～6％醋酸水溶液溶解膏狀粗總生物堿，固液重量比1∶10～30，加熱至沸除去上浮物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80～85℃時(shí)，加濃氨水或堿的水溶液至pH8～9，冷卻沉降除上清液，對下濁液離心固液分離得膏狀總生物堿，在80～100℃下恒溫干燥、粉碎得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿；(3)粗澳洲茄胺的提取用含3～10％鹽酸的80～95％乙醇溶液溶解總生物堿，固液重量比1∶30～40，水解加熱回流2～3小時(shí)，冷卻過濾，用95％乙醇、水，洗至中性，干燥得澳洲茄胺鹽酸鹽，用含3～10％NaOH的95％乙醇溶液溶解澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時(shí)，熱過濾，冷卻吸濾洗至中性，干燥得粗澳洲茄胺；(4)澳洲茄胺的精制將粗澳洲茄胺溶于甲醇、乙醇或氯仿中至飽和溶液，用活化后的硅膠G與粗澳洲茄胺溶液混合，調(diào)成不流動(dòng)的膏狀物，在80～90℃下恒溫干燥，冷卻后裝入層析柱內(nèi)，振實(shí)，用氯仿、或氯仿∶甲醇體積比10∶1～2、或氯仿∶乙醇∶丙酮體積比3∶1∶2之一進(jìn)行洗脫得洗脫液，檢驗(yàn)洗脫結(jié)束后，對洗脫液常壓或減壓蒸餾濃縮，將濃縮液冷卻結(jié)晶過濾干燥后，粉碎至0.1～1.0微米粉末得澳洲茄胺；(5)澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備將澳洲茄胺溶于95％乙醇中加熱至沸，攪拌下向熱澳洲茄胺乙醇溶液中分別緩緩加入10～50％的有機(jī)酸水溶液，至溶液呈酸性，使其結(jié)晶完全，冷卻吸濾，用乙醇洗至中性，干燥得澳洲茄胺有機(jī)酸鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物的制備方法，其特征在于有機(jī)酸可以是甲酸、乙酸、乙二酸、苯甲酸、沒食子酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、葡萄糖酸、葡萄糖二酸、氨基酸，分別得到澳洲茄胺甲酸鹽、澳洲茄胺乙酸鹽、澳洲茄胺乙二酸鹽、澳洲茄胺苯甲酸鹽、澳洲茄胺沒食子酸鹽、澳洲茄胺乳酸鹽、澳洲茄胺蘋果酸鹽、澳洲茄胺酒石酸鹽、澳洲茄胺檸檬酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖酸鹽、澳洲茄胺葡萄糖二酸鹽、澳洲茄胺氨基酸鹽。
4.權(quán)利要求1的化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1的化合物在制備平喘藥物中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1的化合物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一類具有顯著抗癌、平喘、抗炎活性的新的化合物澳洲茄胺有機(jī)酸鹽及其澳洲茄胺有機(jī)酸鹽的制備方法，該方法以龍葵、澳洲茄或黃果茄為原料來源豐富廉價(jià)，制備中采用醋酸作提取溶劑成本低，制備工藝及設(shè)備簡便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高、藥效活性強(qiáng)。本發(fā)明還涉及以該類化合物做為中藥一類新藥的新藥源，在抗癌、平喘、抗炎的醫(yī)藥上的應(yīng)用。
文檔編號A61P29/00GK1546518SQ20031011585
公開日2004年11月17日 申請日期2003年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月29日
發(fā)明者劉良, 劉芯辰, 崔淑華, 劉 良 申請人:劉良, 劉 良